本發(fā)明涉及中藥提取分離技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種天然大蒜阿霍烯的制備方法。

背景技術(shù)：

大蒜作為草藥和食品使用已近兩千多年。大蒜具有許多藥理作用，如殺菌、防治心血管疾病、防治腫瘤和癌癥等，在民間作為藥食兩用已經(jīng)有上千年。

大蒜中含有豐富的蒜氨酸(alliin)，其主要以穩(wěn)定、無臭的形式存在于大蒜細胞質(zhì)中。蒜氨酸為大蒜中主要功效成分的前體物質(zhì)，在切割、搗碎、咀嚼等情況下，蒜氨酸酶(alliinase)會迅速將蒜氨酸分解為硫代亞磺酸酯，其中的主要化合物為蒜素(allicin)。蒜素及其他硫代亞磺酸酯在室溫下很不穩(wěn)定，數(shù)小時即可分解為硫化物形式、乙烯基二硫雜苯(二噻烯dithiins)、阿霍烯類(ajoene)。阿霍烯是蒜辣素的第二降解產(chǎn)物，在油浸大蒜中可穩(wěn)定存在^[1]。

阿霍烯是一種高生物活性的硫化物，具有預(yù)防心血管疾病、抗氧化、抗血栓、降血壓、以及降低老年癡呆癥和癌癥的發(fā)生率、抗致病菌(包括耐藥菌)、抗病毒、提高免疫力等生理、藥理活性。

中國專利公布號“cn103525878a”，名為《一種富含阿霍烯的組合物的制備方法》，公開了如下技術(shù)方案：溶解在緩沖液中的蒜氨酸，在蒜酶的催化下發(fā)生反應(yīng)，將從大蒜中提取的天然蒜氨酸轉(zhuǎn)化成二烯丙基硫代亞磺酸酯，得到含有二烯丙基硫代亞磺酸酯的反應(yīng)液；將該反應(yīng)液通過膜濃縮，再使用有機溶劑萃取富集二烯丙基硫代亞磺酸酯，然后經(jīng)過多次的回收溶劑、萃取才得到阿霍烯組合物。該技術(shù)方案使用有機溶劑多、工序復(fù)雜容易導(dǎo)致產(chǎn)品所得率小。

到目前為止還未見報道有制備阿霍烯純度超過90％的方法，市場上未出現(xiàn)高含量的阿霍烯產(chǎn)品。因此，研究如何將大蒜中蒜氨酸盡可能轉(zhuǎn)化為阿霍烯并將阿霍烯提取分離，制備高純度的阿霍烯具有重要的意義，。

[1]yuth，wucm.stabilityofalliciningarlicjuice[j].jfoodsci，1989，54(4):977-981.

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種天然大蒜阿霍烯的制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)阿霍烯純度不高，提取過程中使用大量有機溶劑，提取過程復(fù)雜，難以實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)等問題。

為了達到上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種天然大蒜阿霍烯的制備方法，包括如下步驟：

(1)將大蒜粉碎、榨汁，去掉大蒜渣，分離得到大蒜汁即產(chǎn)物a；

(2)產(chǎn)物a與第一溶劑混合，自然發(fā)酵，去掉發(fā)酵物渣，分離得到產(chǎn)物b；

(3)產(chǎn)物b與植物油混合，得到產(chǎn)物c；

(4)產(chǎn)物c經(jīng)第二溶劑萃取，得萃取液為產(chǎn)物d；

(5)產(chǎn)物d減壓濃縮后經(jīng)柱層析分離，用含有洗脫劑的溶液洗脫，得到的洗脫劑為產(chǎn)物e；

(6)產(chǎn)物e減壓去掉溶劑，得到高含量的天然大蒜阿霍烯產(chǎn)品。

優(yōu)選地，步驟(2)中所述第一溶劑為1％醋酸溶液、0.2％稀鹽酸溶液、0.5％碳酸氫鈉溶液、0.1％氫氧化鈉溶液的一種或兩種以上，加入量為大蒜汁重量的0.2～2倍。

優(yōu)選地，步驟(2)中所述第一溶劑為0.5％碳酸氫鈉溶液，加入量為大蒜汁的1倍。

優(yōu)選地，步驟(2)中所述自然發(fā)酵溫度為10～50℃。

優(yōu)選地，步驟(2)中所述自然發(fā)酵溫度為30℃。

優(yōu)選地，步驟(2)中所述自然發(fā)酵時間為1～6d。

優(yōu)選地，步驟(2)中所述自然發(fā)酵時間為2d。

優(yōu)選地，步驟(3)中所述加入的植物油為芝麻油、茶油、橄欖油、菜子油、花生油、亞麻油中的一種或兩種以上。

優(yōu)選地，步驟(3)中所述加入的植物油為橄欖油。

優(yōu)選地，步驟(3)中所述加入的植物油加入量為產(chǎn)物b重量的1/4～2.0倍。

優(yōu)選地，步驟(3)中所述加入的植物油加入量為產(chǎn)物b重量的1倍。

優(yōu)選地，步驟(4)中所述萃取用的第二溶劑為乙醇，乙醇含量為50％～95％。

優(yōu)選地，步驟(4)中所述萃取用的第二溶劑為乙醇，乙醇含量為65％。

優(yōu)選地，步驟(4)中萃取1～5次。

優(yōu)選地，步驟(4)中萃取3次。

優(yōu)選地，所述萃取用的第二溶劑用量：植物油量＝1：1ml/g。

優(yōu)選地，步驟(5)中所述柱層析分離用的吸附劑為碳十八鍵合硅膠c18、unips10-300、unips10-100、ab-8、d4006、da201-b中的一種或兩種以上。

優(yōu)選地，產(chǎn)物d與所述吸附劑的體積之比是10：1。

優(yōu)選地，步驟(5)中所述柱層析分離用的吸附劑為為碳十八鍵合硅膠c18。

優(yōu)選地，步驟(5)中所述洗脫溶劑為乙醇、甲醇或乙腈中的一種或兩種以上。

優(yōu)選地，步驟(5)中所述洗脫溶劑為乙醇，經(jīng)濟易得，安全系數(shù)較高。

優(yōu)選地，步驟(5)中洗脫制備產(chǎn)物e時，先以10％～40％乙醇洗脫除雜，可以是30％乙醇洗脫除雜，再以60％～95％乙醇洗脫阿霍烯，可以是80％乙醇洗脫阿霍烯。

本發(fā)明技術(shù)方案中，若無特別說明，乙醇溶劑中乙醇含量是以體積分數(shù)計。

與現(xiàn)有工藝技術(shù)相比，本發(fā)明優(yōu)點在于：1、將大蒜粉碎榨汁，蒜氨酸和蒜酶充分接觸，促使發(fā)酵時蒜氨酸轉(zhuǎn)化為阿霍烯；

2、加入第一溶劑即食醋等溶液，能使蒜汁發(fā)酵時促使水分與脂溶性成分分層；

3、適當?shù)陌l(fā)酵溫度使蒜酶活性最佳；

4、加入植物油使阿霍烯富集到植物油中，能除去發(fā)酵脂溶性成分中的水分及極性雜質(zhì)。

5、采用乙醇萃取，將富集于植物油中的阿霍烯萃取至乙醇中，可以除去部分不容于乙醇中脂溶性雜質(zhì)，起到富集純化阿霍烯的作用。

大蒜經(jīng)發(fā)酵后，采用溶劑萃取、柱層析純化制備高含量的阿霍烯樣品，過程簡單、溶劑安全易得，阿霍烯純度高，可用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，具有很強的實用價值。

附圖說明

圖1是本實施例1中步驟3中橄欖油混合物的高效液相色譜圖；

圖2是本實施例1中步驟4中65％乙醇萃取濃縮物的高效液相色譜圖；

圖3是本實施例1中步驟8中最終阿霍烯樣品的高效液相色譜圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合附圖及具體實施例來詳細說明本發(fā)明，在此以本發(fā)明的示意性實施例及說明用來解釋本發(fā)明，但并不作為對本發(fā)明的限定。

實施例1

1、取產(chǎn)自山東的大蒜10kg、粉碎后用榨汁機榨汁，取大蒜汁，大蒜汁的收率是30％。

2、上述大蒜汁加3kg0.5％碳酸氫鈉溶液，混勻，置于可以控溫的發(fā)酵罐中，調(diào)節(jié)溫度至30℃，發(fā)酵2天。

3、待混合物發(fā)酵2天后，取混合物上層油狀物，加入橄欖油500g，混合均勻，備用。

4、用65％乙醇萃取上述橄欖油混合物，萃取3次，每次500ml，合并3次65％乙醇萃取液。萃取液在溫度55～75℃的條件下，減壓濃縮除去萃取液中的乙醇，得到阿霍烯油狀物。

5、取碳十八鍵合硅膠c181kg，裝入層析用玻璃柱，阿霍烯油狀物干法上樣。

6、取30％乙醇5kg洗脫層析柱，洗脫流速為1bv/h，以收集15分鐘為一份，經(jīng)高效液相色譜儀檢測不含阿霍烯，合并洗脫液另行處理。

7、取80％乙醇5kg洗脫層析柱，洗脫流速為1bv/h，以收集15分鐘為一份，直至經(jīng)高效液相色譜儀檢測洗脫液不含阿霍烯為止。

8、合并含有阿霍烯的80％乙醇洗脫液，在溫度55～75℃的條件下，減壓濃縮除去洗脫液中的乙醇，得到阿霍烯樣品。經(jīng)高效液相色譜檢測，阿霍烯純度為91.5％。

實施例2

1、取產(chǎn)自甘肅的大蒜10kg、粉碎后用榨汁機榨汁，取大蒜汁，大蒜汁的收率是30％。

2、上述大蒜汁加6kg0.1％氫氧化鈉溶液，混勻，置于可以控溫的發(fā)酵罐中，調(diào)節(jié)溫度至10℃，發(fā)酵6天。

3、待混合物發(fā)酵6天后，取混合物上層油狀物，加入菜子油1000g，混合均勻，備用。

4、用1000ml95％乙醇萃取上述菜子油混合物，萃取1次。萃取液在溫度55～75℃的條件下，減壓濃縮除去萃取液中的乙醇，得到阿霍烯油狀物。

5、取unips10-3001kg，裝入層析用玻璃柱，阿霍烯油狀物干法上樣。

6、取40％乙醇5kg洗脫層析柱，洗脫流速為1bv/h，以收集15分鐘為一份，經(jīng)高效液相色譜儀檢測不含阿霍烯，合并洗脫液另行處理。

7、取95％乙醇5kg洗脫層析柱，洗脫流速為1bv/h，以收集15分鐘為一份，直至經(jīng)高效液相色譜儀檢測洗脫液不含阿霍烯為止。

8、合并含有阿霍烯的95％乙醇洗脫液，在溫度55～75℃的條件下，減壓濃縮除去洗脫液中的乙醇，得到阿霍烯樣品。經(jīng)高效液相色譜檢測，阿霍烯純度為90.7％。

實施例3

1、取產(chǎn)自吉林的大蒜20kg、粉碎后用榨汁機榨汁，取大蒜汁，大蒜汁的收率是30％。

2、上述大蒜汁加1.2kg0.2％稀鹽酸溶液，混勻，置于可以控溫的發(fā)酵罐中，調(diào)節(jié)溫度至50℃，發(fā)酵1天。

3、待混合物發(fā)酵1天后，取混合物上層油狀物，加入亞麻油250g，混合均勻，備用。

4、用50％乙醇萃取上述亞麻油混合物，萃取5次，每次250ml，合并5次50％乙醇萃取液。萃取液在溫度55～75℃的條件下，減壓濃縮除去萃取液中的乙醇，得到阿霍烯油狀物。

5、取大孔樹脂ab-82kg，裝入層析用玻璃柱，阿霍烯油狀物干法上樣。

6、取10％乙醇10kg洗脫層析柱，洗脫流速為2bv/h，以收集15分鐘為一份，經(jīng)高效液相色譜儀檢測不含阿霍烯，合并洗脫液另行處理。

7、取60％乙醇10kg洗脫層析柱，洗脫流速為2bv/h，以收集15分鐘為一份，直至經(jīng)高效液相色譜儀檢測洗脫液不含阿霍烯為止。

8、合并含有阿霍烯的60％乙醇洗脫液，在溫度55～75℃的條件下，減壓濃縮除去洗脫液中的乙醇，得到阿霍烯樣品。經(jīng)高效液相色譜檢測，阿霍烯純度為90.1％。

以上對本發(fā)明實施例所提供的技術(shù)方案進行了詳細介紹，本文中應(yīng)用了具體個例對本發(fā)明實施例的原理以及實施方式進行了闡述，以上實施例的說明只適用于幫助理解本發(fā)明實施例的原理；同時，對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明實施例，在具體實施方式以及應(yīng)用范圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。