本申請是申請?zhí)枮?01280025797.x、申請日為2012年3月28日、發(fā)明名稱為“神經(jīng)叢蛋白b2活性的調(diào)節(jié)劑”的中國發(fā)明專利申請的分案申請，原申請為國際申請?zhí)枮閜ct/us2012/030923的國際申請的中國國家階段申請，該國際申請要求申請日分別為2011年3月28日、2011年10月6日，申請?zhí)柗謩e為61/468,271、61/543,992的美國臨時申請的優(yōu)先權(quán)。相關(guān)申請本申請要求于2011年3月28日提交的美國臨時專利申請系列號61/468,271，和于2011年10月6日提交的美國臨時專利申請系列號61/543,992的優(yōu)先權(quán)利益；所述專利申請各自通過引用在此全文并入。政府投資本發(fā)明在美國國立衛(wèi)生研究院授權(quán)ca105241下由政府支持進行。政府在本發(fā)明中擁有一定權(quán)利。
背景技術(shù)：
：：小分泌性蛋白血管生成素(“ang”)是血管生成的有力誘導物，其已牽涉多種腫瘤的建立、生長和轉(zhuǎn)移。ang活性的抑制因此是用于治療癌癥及其他血管生成相關(guān)疾病例如濕性老年性黃斑變性(“amd”)的有吸引力的治療策略。然而，盡管ang在血管形成和癌癥兩者中的重要作用，與血管生成素ang結(jié)合以介導其血管生成和腫瘤促進活性的受體仍是未知的。ang受體的鑒定和表征將提供用于治療癌癥和抑制ang介導的血管生成的新型治療靶。因此，存在鑒定和表征ang受體的極大需要，以便開發(fā)用于抑制ang活性、預防血管生成和治療癌癥的新型組合物和方法。技術(shù)實現(xiàn)要素：如本文證實的，神經(jīng)叢蛋白b2是介導ang的血管生成和腫瘤促進活性的的ang受體。本文還描述的是促成ang結(jié)合的神經(jīng)叢蛋白b2表位。因此，神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑包括破壞ang與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合的試劑(例如抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體)可用于例如治療癌癥(例如前列腺癌或腦癌)、抑制血管生成和治療血管生成相關(guān)疾病(例如濕性amd)。在某些實施例中，本發(fā)明涉及與神經(jīng)叢蛋白b2的表位特異性結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段，所述神經(jīng)叢蛋白b2的表位促成ang結(jié)合。例如，在某些實施例中，抗體或其抗原結(jié)合片段與具有seqidno:1、seqidno:2或seqidno:3的氨基酸序列的神經(jīng)叢蛋白b2的表位結(jié)合。在一些實施例中，抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆、多克隆、嵌合、人源化或人的。在某些實施例中，抗體或其抗原結(jié)合片段是全長免疫球蛋白分子；scfv；fab片段；fab’片段；f(ab’)2；fv；或二硫鍵連接的fv。在一些實施例中，抗體或其抗原結(jié)合片段以不超過約10-6m、10-7m、10-8m或10-9m的解離常數(shù)與神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合。在某些實施例中，抗體或其抗原結(jié)合片段抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合和/或抑制ang誘導的神經(jīng)叢蛋白b2表達細胞的增殖。在某些實施例中，本發(fā)明涉及包括seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3的氨基酸序列的分離可溶性多肽，其中所述多肽與ang結(jié)合。在一些實施例中，該多肽包含seqidno:4的不超過25、30、40、50、60、70、80、90或100個連續(xù)氨基酸。在某些實施例中，該多肽還包括免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域(例如人免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域)。在某些實施例中，該多肽以不超過約10-6m、10-7m、10-8m或10-9m的解離常數(shù)與ang結(jié)合。在某些實施例中，該多肽抑制ang誘導的神經(jīng)叢蛋白b2表達細胞的增殖。在一些實施例中，本發(fā)明涉及含有本文描述的抗體、其抗原結(jié)合片段或多肽的藥物組合物。在某些實施例中，本發(fā)明涉及治療受試者中(例如有此需要的受試者中)的癌癥(包括前列腺癌或腦癌)、抑制血管生成和/或治療濕性amd的方法，其包括給該受試者施用治療有效量的本文描述的抗體、其抗原結(jié)合片段或多肽的步驟。在一些實施例中，本發(fā)明涉及抑制ang誘導的神經(jīng)叢蛋白b2表達細胞的增殖的方法，其包括使該細胞與本文描述的抗體、其抗原結(jié)合片段或多肽接觸。在某些實施例中，本發(fā)明涉及生產(chǎn)本文描述的抗體的方法，其包括給哺乳動物(例如小鼠)施用含有seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3的氨基酸序列的多肽(例如可溶性多肽)。在一些實施例中，該多肽含有seqidno:4的不超過25、30、40、50、60、70、80、90或100個連續(xù)氨基酸。在一些實施例中，該方法包括從哺乳動物中分離抗體的步驟。在一些實施例中，哺乳動物具有人免疫球蛋白可變區(qū)。在一些實施例中，本發(fā)明涉及鑒定本文描述的抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其包括使抗體或其抗原結(jié)合片段與包含seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3.24的氨基酸序列的多肽接觸。在一些實施例中，抗體或其抗原結(jié)合片段是抗體或其抗原結(jié)合片段文庫的部分。在一些實施例中，本發(fā)明涉及治療受試者中(例如有此需要的受試者中)的前列腺癌、抑制血管生成和/或治療濕性amd的方法，其包括給該受試者施用治療有效量的神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑(例如抗體或其抗原結(jié)合片段，干擾核酸例如sirna、shrna或反義rna，或小分子)的步驟。在一些實施例中，神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合或神經(jīng)叢蛋白b2介導的ang核轉(zhuǎn)位。在一些實施例中，神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑抑制神經(jīng)叢蛋白b2蛋白質(zhì)表達。在一些實施例中，本發(fā)明涉及編碼本文描述的抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈可變區(qū)和/或親和力可變區(qū)的分離核酸。在一些實施例中，分離核酸包含在載體或細胞(例如表達本文描述的抗體或其抗原結(jié)合片段的細胞)內(nèi)。在一些實施例中，本發(fā)明涉及編碼本文描述的多肽的分離核酸。在一些實施例中，分離核酸包含在載體或細胞(例如表達本文描述的多肽的細胞)內(nèi)。在某些實施例中，本發(fā)明涉及含有本文描述的抗體、其抗原結(jié)合片段、多肽和/或藥物組合物的試劑盒。在一些實施例中，本發(fā)明涉及測定測試試劑是否是神經(jīng)叢蛋白b2活性的調(diào)節(jié)劑(例如抑制劑或增強劑)的方法。在某些實施例中，該方法包括形成包括神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段、ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段和測試試劑的測試反應(yīng)混合物。在一些實施例中，該方法包括在有助于神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段和ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段之間的復合物形成的條件下，溫育測試反應(yīng)混合物的步驟。在一些實施例中，該方法包括測定測試反應(yīng)混合物中的復合物的量的步驟。在一些實施例中，與對照反應(yīng)混合物中的復合物的量相比較，減少測試反應(yīng)混合物中的復合物的量的測試試劑是神經(jīng)叢蛋白b2活性的抑制劑。在某些實施例中，與對照反應(yīng)混合物中的復合物的量相比較，增加測試反應(yīng)混合物中的復合物的量的測試試劑是神經(jīng)叢蛋白b2活性的增強劑。在一些實施例中，神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段包含選自seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3的氨基酸序列。在一些實施例中，ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段包含seqidno:5的氨基酸序列。在一些實施例中，測試試劑是抗體、蛋白質(zhì)、肽或小分子。在某些實施例中，測試試劑是測試試劑文庫的成員。在一些實施例中，對照反應(yīng)混合物基本上等同于測試反應(yīng)混合物，除了對照反應(yīng)混合物不含測試試劑外。在某些實施例中，對照反應(yīng)混合物基本上等同于測試反應(yīng)混合物，除了對照反應(yīng)混合物包含安慰劑試劑代替測試試劑外。在一些實施例中，通過將測試試劑加入包含神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段和ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的混合物，形成測試反應(yīng)混合物。在某些實施例中，通過將神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段加入包含測試試劑和ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的混合物，形成測試反應(yīng)混合物。在某些實施例中，通過將ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段加入包含測試試劑和神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的混合物，形成測試反應(yīng)混合物。在某些實施例中，神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段錨定至測試反應(yīng)混合物中的固體載體。在一些實施例中，在有助于ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段與所錨定的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段結(jié)合的條件下，溫育測試反應(yīng)混合物。在一些實施例中，該方法還包括將結(jié)合神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段與未結(jié)合神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段相分離的步驟。在某些實施例中，通過檢測與神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段結(jié)合的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的量，測定測試反應(yīng)混合物中的復合物的量。在一些實施例中，ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段連接(例如直接或間接結(jié)合)至可檢測部分(例如熒光部分、發(fā)光部分、放射性部分等)。在一些實施例中，ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段錨定至測試反應(yīng)混合物中的固體載體。在一些實施例中，在有助于神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段與所錨定的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段結(jié)合的條件下，溫育測試反應(yīng)混合物。在某些實施例中，該方法還包括將結(jié)合ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段與未結(jié)合ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段相分離的步驟。在一些實施例中，通過檢測與ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段結(jié)合的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的量，測定測試反應(yīng)混合物中的復合物的量。在某些實施例中，神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段連接至可檢測部分。在一些實施例中，本發(fā)明涉及測定測試試劑是否是神經(jīng)叢蛋白b2活性的抑制劑的方法，其包括使包含具有選自seqidno:1、seqidno:2或seqidno:3的序列的表位的多肽與測試試劑接觸，且測定該測試試劑是否與該表位結(jié)合；其中與該表位結(jié)合的該測試試劑是神經(jīng)叢蛋白b2活性的抑制劑。在一些實施例中，測試試劑是抗體、蛋白質(zhì)、肽或小分子。在某些實施例中，測試試劑是測試試劑文庫的成員。在一些實施例中，多肽附接至固體基質(zhì)。在一些實施例中，該方法還包括將結(jié)合該表位的測試試劑與未結(jié)合該表位的測試試劑相分離的步驟。在一些實施例中，測試試劑連接至可檢測部分。在一些實施例中，測試試劑附接至固體基質(zhì)。在某些實施例中，該方法還包括將結(jié)合該測試試劑的多肽與未結(jié)合該測試試劑的多肽相分離的步驟。在一些實施例中，多肽連接至可檢測部分。在某些實施例中，測試試劑是測試試劑文庫的成員。附圖說明圖1顯示神經(jīng)叢蛋白b1的三個ang結(jié)合表位的氨基酸序列(分別鑒定為seqidno:1、2和3)。圖2顯示人神經(jīng)叢蛋白b2的氨基酸序列(seqidno:4)。圖3顯示人ang的氨基酸序列(seqidno:5)。圖4顯示ang在內(nèi)皮細胞中的核轉(zhuǎn)位是細胞密度依賴性的。(a)huve細胞在所示密度下培養(yǎng)且與0.1μg/mlang一起溫育2小時。核ang通過抗ang單克隆抗體26-2f和alexa488標記的兔抗小鼠igg抗體進行檢測。(b)125i-ang的核轉(zhuǎn)位。125i-ang與在不同密度下培養(yǎng)的huve細胞一起溫育2小時。分離核餾分，并且通過γ計數(shù)器測定125i-ang的量。(c).huve細胞在所示密度下培養(yǎng)且與1μg/mlang一起溫育48小時。細胞數(shù)目通過庫爾特計數(shù)器進行測定。圖5顯示ang對lncap細胞的作用。(a)huve和lncap細胞在所示密度下培養(yǎng)且與0.1μg/mlang一起溫育2小時。核ang通過使用26-2f和alex488標記的第二抗體的間接免疫熒光進行檢測。(b)lncap細胞在無酚紅和活性炭/右旋糖酐剝離(無類固醇)的fbs中培養(yǎng)2天，并且用dht(10nm)、ang(0.1μg/ml)或兩者的混合物刺激所示時間。(c)劑量依賴性。將ang加入細胞且培養(yǎng)4天。細胞數(shù)目通過庫爾特計數(shù)器進行測定。圖6顯示ang與lncap細胞的結(jié)合。(a)亞匯合的lncap細胞與125i-ang一起在4℃下溫育30分鐘，并且通過γ計數(shù)器測定結(jié)合的ang。(b)在(a)中所述的實驗中產(chǎn)生的結(jié)果的斯卡恰特作圖。圖7顯示神經(jīng)叢蛋白b2是ang結(jié)合分子。(a)制備來自總共2.5x108lncap細胞的質(zhì)膜，溶解且經(jīng)過rna酶a-瓊脂糖凝膠柱，以去除非特異性蛋白質(zhì)。將來自rna酶a柱的流通物餾分分成三個相等餾分，并且在與0.1mg游離ang一起溫育后分別施加于非親和瓊脂糖凝膠柱、ang-瓊脂糖凝膠柱和ang-瓊脂糖凝膠柱。將結(jié)合的材料用低ph緩沖液洗脫且在sds-page上分離。(b)將左圖中間泳道中的條帶切除，用胰蛋白酶消化且實施肽分子量的質(zhì)譜測定?？偣?6種肽顯示與神經(jīng)叢蛋白b2匹配。(c)通過使用山羊抗人神經(jīng)叢蛋白b2抗體(santacruzsc-34507,5μg/ml)的免疫熒光檢測神經(jīng)叢蛋白b2，并且通過dapi染色核(中間泳道)。(d)加上flag標簽(c末端)的ang與溶解的lncap細胞質(zhì)膜一起在rt下溫育30分鐘。ang-神經(jīng)叢蛋白b2復合物通過抗angmab26-2f或抗flagigg進行免疫沉淀，并且通過抗神經(jīng)叢蛋白b2igg進行檢測(上泳道)。在另一實驗中，復合物用抗神經(jīng)叢蛋白b2igg進行沉淀，且用抗angpabr113進行檢測(下泳道)。圖8顯示神經(jīng)叢蛋白b2特異性sirna抑制ang在lncap細胞中的核轉(zhuǎn)位。lncap細胞用對照或以60nm最終濃度的神經(jīng)叢蛋白b2特異性sirna(santacruz)進行轉(zhuǎn)染。(a)神經(jīng)叢蛋白b2mrna在對照和sirna轉(zhuǎn)染的細胞中的rt-pcr分析(轉(zhuǎn)染后48小時)。(b)神經(jīng)叢蛋白b2蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)印跡檢測(轉(zhuǎn)染后72小時)。(c-h)lncap細胞在陽離子脂質(zhì)體(lipofectamine)2000的存在下用對照和神經(jīng)叢蛋白b2sirna轉(zhuǎn)染72小時，并且隨后與1ug/mlang一起溫育2小時。通過免疫熒光檢測ang(c和f)，并且通過dapi染色核(d和g)。合并的圖像顯示于e和h中。圖9顯示在hela、lncap、huve和cos-7細胞中的神經(jīng)叢蛋白b2表達。(a)在以所示密度培養(yǎng)的hela、lncap和huve細胞中的神經(jīng)叢蛋白b2mrna的rt-pcr分析。(b)將全長人神經(jīng)叢蛋白b2cdna克隆到pci-neo載體內(nèi)，并且轉(zhuǎn)染到cos-7細胞內(nèi)。選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子且通過rt-pcr分析人(轉(zhuǎn)基因)和猴(內(nèi)源)神經(jīng)叢蛋白b2mrna。(c)用同樣識別猴蛋白質(zhì)的山羊抗人神經(jīng)叢蛋白b2抗體的神經(jīng)叢蛋白b2蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)印跡分析。圖10顯示ang在用神經(jīng)叢蛋白b2cdna轉(zhuǎn)染的cos-7細胞中的核轉(zhuǎn)位。載體(a-c)和神經(jīng)叢蛋白b2(d-f)轉(zhuǎn)染的cos-7細胞與1μg/mlang一起溫育2小時。通過免疫熒光檢測ang(a和d)。通過dapi染色核(b和e)。合并的圖像顯示于c和f中。(g)載體和神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子與所示濃度的ang一起溫育2小時。將細胞裂解，使用各自抗體就磷酸-akt和總akt對細胞裂解產(chǎn)物(60μg蛋白質(zhì))實施sds-page和蛋白質(zhì)印跡。圖11顯示新霉素抑制ang在神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染的cos-7細胞中的核轉(zhuǎn)位。神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子用新霉素以所示濃度處理10分鐘，并且隨后與1μg/mlang一起溫育2小時。通過免疫熒光檢測ang(上圖)。通過dapi染色核(中圖)。合并的圖像顯示于下圖中。圖12顯示ang結(jié)合結(jié)構(gòu)域的鑒定。(a)wt神經(jīng)叢蛋白b2和缺失突變體的基因結(jié)構(gòu)。(b)ang在cos-7細胞的多個神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子中的核轉(zhuǎn)位。wt神經(jīng)叢蛋白b2cdna或不同缺失突變體在pci-neo載體中構(gòu)建且轉(zhuǎn)染到cos-7細胞內(nèi)。使轉(zhuǎn)染子與1μg/mlang一起溫育2分鐘。通過免疫熒光檢測ang(上圖)。通過dapi染色核(中圖)。合并的圖像顯示于下圖中。ang的代表性核染色由箭頭指示。圖13顯示抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體抑制ang活性。(a)抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體抑制ang在lncap細胞中的核轉(zhuǎn)位。(b)抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體在huvec管形成測定中抑制ang誘導的血管生成。(c)抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體抑制ang誘導的lncap細胞增殖。圖14顯示前列腺癌中增強的神經(jīng)叢蛋白b2表達。(a)人前列腺癌(上2行)、bph(下2行)和正常前列腺(右)組織中的神經(jīng)叢蛋白b2的ihc染色。(b)正常和前列腺癌樣品中的人神經(jīng)叢蛋白b2染色的高倍放大圖像。(c和d)來自wt和mpakt小鼠的前列腺中的小鼠神經(jīng)叢蛋白b2的ihc和if染色。圖15顯示增強的抗神經(jīng)叢蛋白b2抑制小鼠中的腫瘤生長。(a)描述用60μg/小鼠的神經(jīng)叢蛋白b2多克隆抗體或pbs對照的s.c.注射每天處理的，用pc-3細胞腫瘤移植的無胸腺小鼠的無腫瘤存活的圖表。(b)描述(a)中所述的用pc-3移植的無胸腺小鼠的腫瘤大小的圖表。(c)(a)中所述的用pc-3移植的無胸腺小鼠的照片。(d)得自(a)中所述的用pc-3移植的無胸腺小鼠的切除腫瘤的照片。具體實施方式總體本文公開的是用于治療癌癥、抑制血管生成和治療血管生成相關(guān)疾病例如濕性amd的新型組合物和方法。血管生成素(“ang”)是血管形成的重要介質(zhì)，其已牽涉腫瘤的建立、生長和轉(zhuǎn)移。不幸的是，基于抑制ang的血管生成和腫瘤促進活性的療法的開發(fā)已受ang受體迄今未知的事實阻礙。如本文公開的，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)神經(jīng)叢蛋白b2是介導ang的血管生成和腫瘤促進效應(yīng)的ang受體。還如本文公開的，本發(fā)明人鑒定其中ang與神經(jīng)叢蛋白b2受體結(jié)合的位置，并且證實對這些結(jié)合位點特異性的抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體能夠抑制神經(jīng)叢蛋白b2/ang相互作用且抑制ang活性。因此，在某些實施例中，本發(fā)明涉及通過抑制神經(jīng)叢蛋白b2用于治療ang相關(guān)疾病或病癥(例如癌癥或濕性amd)的組合物和方法。在一些實施例中，抑制神經(jīng)叢蛋白b2的組合物包括例如與ang或神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合的抗體、其抗原結(jié)合片段或多肽。抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合的試劑包括例如與神經(jīng)叢蛋白b2的ang結(jié)合表位(例如含有seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3的氨基酸序列的表位)結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，和與ang結(jié)合的多肽(例如含有seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3的氨基酸序列的多肽)。定義為了方便起見，說明書、實例和附加權(quán)利要求中采用的某些術(shù)語在此處收集。如本文使用的，術(shù)語“施用”意指給受試者提供藥物試劑或組合物，并且包括但不限于通過醫(yī)學專業(yè)人員的施用和自施用。此類試劑可含有例如神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑，例如本文描述的抗體、其抗原結(jié)合片段或多肽。術(shù)語“試劑”在本文中用于指示化學化合物、小分子、化學化合物和/或生物大分子(例如核酸、抗體、抗體片段、蛋白質(zhì)或肽)的混合物。試劑可通過本文下文描述的篩選測定鑒定為具有特定活性。此類試劑的活性可使其適合作為在受試者中局部或全身起作用的“治療劑”，所述“治療劑”是一種或多種生物學、生理學或藥理學活性物質(zhì)。術(shù)語“氨基酸”意欲包含無論是天然還是合成的所有分子，所述分子包括氨基功能性和酸功能性，并且能夠包括在天然存在的氨基酸的聚合物中。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其類似物、衍生物和同源物；具有變體側(cè)鏈的氨基酸類似物；和前述任何的所有立體異構(gòu)體。如本文使用的，術(shù)語“抗體”可以是指完整抗體及其抗原結(jié)合片段。完整抗體是包括通過二硫鍵互聯(lián)的至少兩條重(h)鏈和兩條輕(l)鏈的糖蛋白。每條重鏈包括重鏈可變區(qū)(本文縮寫為vh)和重鏈恒定區(qū)。每條輕鏈包括輕鏈可變區(qū)(本文縮寫為vl)和輕鏈恒定區(qū)。vh和vl區(qū)還可再分成稱為互補決定區(qū)(cdr)的高變區(qū)，由稱為構(gòu)架區(qū)(fr)的更保守區(qū)域點綴。每個vh和vl由三個cdr和四個fr組成，從氨基末端到羧基末端以下述次序排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。重和輕鏈的可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)可介導免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，所述宿主組織或因子包括多種免疫系統(tǒng)細胞(例如效應(yīng)子細胞)和經(jīng)典補體系統(tǒng)的第一組分(clq)。術(shù)語“抗體”包括例如單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、單鏈抗體和抗原結(jié)合抗體片段。如本文使用的，“分離抗體”是指基本上不含具有不同抗原特異性的其他抗體的抗體。然而，分離抗體可與其他有關(guān)抗原具有一些交叉反應(yīng)性。如本文使用的，術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合片段”和“抗原結(jié)合部分”是指保留與抗原結(jié)合的能力的一個或多個抗體片段。在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合片段”內(nèi)包含的結(jié)合片段的例子包括fab、fab'、f(ab')2、fv、scfv、二硫鍵連接的fv、fd、雙抗體、單鏈抗體、分離的cdrh3及其他保留完整抗體可變區(qū)的至少部分的抗體片段。這些抗體片段可使用常規(guī)重組和/或酶促技術(shù)獲得，并且可以與完整抗體相同的方式篩選抗原結(jié)合。術(shù)語“cdr”及其復數(shù)“cdrs”是指抗體或抗體片段的互補決定區(qū)(cdr)，其決定抗體或抗體片段的結(jié)合特征。在大多數(shù)情況下，三個cdr存在于輕鏈可變區(qū)中(cdrl1、cdrl2和cdrl3)，并且三個cdr存在于重鏈可變區(qū)中(cdrh1、cdrh2和cdrh3)。cdr促成抗體分子的功能活性，并且通過包含支架或構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列分離。在多個cdr中，cdr3序列且特別是cdrh3是最多樣化的，并且因此對抗體特異性具有最大貢獻。存在至少兩種用于測定cdr的技術(shù)：(1)基于交叉物種序列變異性的方法(即通過引用全文并入的kabat等人，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(nationalinstituteofhealth,bethesda,md.(1987))；和(2)基于抗原-抗體復合物的結(jié)晶學研究的方法(通過引用全文并入的chothia等人，nature,342:877(1989))。術(shù)語“表位”意指能夠與抗體特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)決定簇。表位通常由分子的化學活性表面分組例如氨基酸或糖側(cè)鏈組成。某些表位可通過抗體能夠與之結(jié)合的特定氨基酸序列，例如seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3中提供的序列限定。如本文使用的，術(shù)語“人源化抗體”是指具有衍生自除人外的哺乳動物的至少一個cdr，和人抗體的fr區(qū)和恒定區(qū)的抗體。人源化抗體可用作根據(jù)本發(fā)明的治療劑中的有效組分，因為人源化抗體在人體中的抗原性是降低的。在某些實施例中，術(shù)語“分離多肽”是指由重組dna或rna制備，或具有合成起源或其一些組合的多肽，所述多肽(1)不與它在自然界中通常與之一起發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)結(jié)合，(2)從它通常存在于其中的細胞中分離，(3)不含來自相同細胞來源的其他蛋白質(zhì)分離，(4)通過來自不同物種的細胞表達，或(5)在自然界中不存在。術(shù)語“分離核酸”是指具有基因組、cdna、或合成起源或其一些組合的多核苷酸，所述多核苷酸(1)不與在自然界中在其中發(fā)現(xiàn)“分離核酸”的細胞結(jié)合，或(2)可操作地連接至它在自然界中不與之連接的多核苷酸。如本文使用的，術(shù)語“單克隆抗體”是指得自與相同表位特異性結(jié)合的基本上同質(zhì)抗體群體的抗體，即群體包含的個別抗體是相同的，除了可以少量存在的可能天然存在的突變外。修飾詞“單克隆的”指示如得自基本上同質(zhì)的抗體群體的抗體特征，并且不應(yīng)解釋為需要通過任何特定方法的抗體生產(chǎn)。術(shù)語“多核苷酸”和“核酸”可互換使用。它們指任何長度的聚合形式的核苷酸，脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其類似物。多核苷酸可具有任何三維結(jié)構(gòu)，并且可執(zhí)行任何已知或未知的功能。下述是多核苷酸的非限制性例子：基因或基因片段的編碼區(qū)或非編碼區(qū)、由連鎖分析確定的一個或多個基因座、外顯子、內(nèi)含子、信使rna(mrna)、轉(zhuǎn)移rna、核糖體rna、核酶、cdna、重組多核苷酸、分支多核苷酸、質(zhì)粒、載體、任何序列的分離dna、任何序列的分離rna、核酸探針和引物。多核苷酸可包含修飾過的核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸類似物。如果存在的話，對核苷酸結(jié)構(gòu)的修飾可在聚合物裝配前或后賦予。核苷酸序列可通過非核苷酸組分間斷。多核苷酸還可例如通過與標記組分綴合進行修飾。術(shù)語“重組”多核苷酸意指具有基因組、cdna、半合成或合成起源的多核苷酸，所述多核苷酸不存在于自然界中，或以非天然排列連接至另一多核苷酸。如本文使用的，短語“可藥用載體”意指可藥用的材料、組合物或媒介物，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑或溶劑封裝材料，涉及攜帶或轉(zhuǎn)運主題化合物從身體的一個器官或部分到身體的另一器官或部分。如本文使用的，“特異性結(jié)合”是指抗體與預定抗原結(jié)合的能力或多肽與其預定結(jié)合配偶體結(jié)合的能力。通常，抗體或多肽以對應(yīng)于約10-7m或更少的kd的親和力與其預定抗原或結(jié)合配偶體特異性結(jié)合，并且以這樣的親和力(如由kd表示的)與預定抗原/結(jié)合配偶體結(jié)合，所述親和力比其與非特異性和無關(guān)抗原/結(jié)合配偶體(例如bsa、酪蛋白)結(jié)合的親和力小至少10倍、小至少100倍或小至少1000倍。如本文使用的，術(shù)語“受試者”意指選擇用于處理或治療的人或非人動物。如本文使用的，短語“治療有效量”和“有效量”意指試劑的量，其對于以適用于任何醫(yī)學處理的合理利益/風險比在受試者中的至少細胞亞群中產(chǎn)生所需療效。“治療”受試者中的疾病或“治療”具有疾病的受試者是指對受試者實施藥物治療，例如藥物的施用，使得至少一種疾病癥狀被降低或被阻止惡化?？股窠?jīng)叢蛋白b2抗體在某些實施例中，本發(fā)明涉及與神經(jīng)叢蛋白b2特異性結(jié)合的抗體及其抗原結(jié)合片段及其用途。在某些實施例中，抗體與具有seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3的氨基酸序列的神經(jīng)叢蛋白b2表位結(jié)合，并且因此能夠抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合。此類抗體可以是多克隆或單克隆的，并且可以是例如鼠、嵌合、人源化或全人的。多克隆抗體可通過用多肽免疫原(例如具有seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3的序列的多肽)免疫接種合適受試者(例如小鼠)進行制備?？呻S著時間過去通過標準技術(shù)例如使用固定多肽的酶聯(lián)免疫吸附測定(elisa)，監(jiān)控免疫接種受試者中的多肽抗體滴度。需要時，可從哺乳動物中(例如從血液中)分離針對抗原的抗體，并且還通過眾所周知的技術(shù)例如蛋白a色譜法純化，以獲得igg餾分。在免疫接種后的合適時間，例如當抗體滴度最高時，可從受試者中獲得抗體生產(chǎn)細胞且用于使用標準技術(shù)制備單克隆抗體，所述標準技術(shù)例如最初由kohler和milstein描述的雜交瘤技術(shù)(1975)nature256:495-497)(還參見brown等人(1981)j.immunol.127:539-46；brown等人(1980)j.biol.chem.255:4980-83；yeh等人(1976)proc.natl.acad.sci.76:2927-31；和yeh等人(1982)int.j.cancer29:269-75)、更近期的人b細胞雜交瘤技術(shù)(kozbor等人(1983)immunol.today4:72)、ebv雜交瘤技術(shù)(cole等人(1985)monoclonalantibodiesandcancertherapy,alanr.liss,inc.,第77-96頁)或三源雜交瘤技術(shù)。用于生產(chǎn)單克隆抗體雜交瘤的技術(shù)是眾所周知的(一般參見kenneth,r.h.于monoclonalantibodies:anewdimensioninbiologicalanalyses,plenumpublishingcorp.,newyork,newyork(1980)；lerner,e.a.(1981)yalej.biol.med.54:387-402；gefter,m.l.等人(1977)somaticcellgenet.3:231-36)。簡言之，使永生細胞系(一般為骨髓瘤)融合至來自如上所述用免疫原免疫接種的哺乳動物的淋巴細胞(一般為脾細胞)，并且篩選所得的雜交瘤細胞的培養(yǎng)上清液，以鑒定產(chǎn)生與多肽抗原優(yōu)選特異性結(jié)合的單克隆抗體的雜交瘤。作為制備單克隆抗體分泌雜交瘤的替代物，通過用合適多肽(例如具有seqidno:1的序列的多肽)篩選重組組合免疫球蛋白文庫(例如抗體噬菌體展示文庫或抗體酵母展示文庫)，可鑒定且分離對于神經(jīng)叢蛋白b2特異性的單克隆抗體和/或具有seqidno:1的序列的多肽，從而分離結(jié)合該多肽的免疫球蛋白文庫成員。另外，可使用標準重組dna技術(shù)制備對于神經(jīng)叢蛋白b2特異性的重組抗體和/或具有seqidno:1的序列的多肽，例如嵌合或人源化單克隆抗體。此類嵌合和人源化單克隆抗體可通過本領(lǐng)域已知的重組dna技術(shù)進行生產(chǎn)，例如使用下述中描述的技術(shù)：美國專利號4,816,567；美國專利號5,565,332；better等人(1988)science240:1041-1043；liu等人(1987)proc.natl.acad.sci.usa84:3439-3443；liu等人(1987)j.immunol.139:3521-3526；sun等人(1987)proc.natl.acad.sci.84:214-218；nishimura等人(1987)cancerres.47:999-1005；wood等人(1985)nature314:446-449；和shaw等人(1988)j.natl.cancerinst.80:1553-1559)；morrison,s.l.(1985)science229:1202-1207；oi等人(1986)biotechniques4:214；winteru.s.patent5,225,539；jones等人(1986)nature321:552-525；verhoeyan等人(1988)science239:1534；和beidler等人(1988)j.immunol.141:4053-4060。使用攜帶人免疫系統(tǒng)而不是小鼠系統(tǒng)的部分的轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體小鼠，可生成對于神經(jīng)叢蛋白b2特異性的人單克隆抗體和/或具有seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3的序列的多肽。例如，“humab小鼠”含有編碼非重排的人重(μ和γ)和κ輕鏈免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因小基因座，連同滅活內(nèi)源μ和κ鏈基因座的靶向突變(lonberg,n.等人(1994)nature368(6474):856859)。因此，小鼠顯示出減少的小鼠igm或κ表達，并且響應(yīng)免疫接種，引入的人重和輕鏈轉(zhuǎn)基因經(jīng)歷類別轉(zhuǎn)換和體細胞突變，以生成高親和力的人iggκ單克隆抗體(lonberg,n.等人(1994)，同上；在lonberg,n.(1994)handbookofexperimentalpharmacology113:49101中綜述；lonberg,n.和huszar,d.(1995)intern.rev.immunol.第13卷:6593，以及harding,f.和lonberg,n.(1995)ann.n.yacad.sci764:536546)。humab小鼠的制備在下述中描述：taylor,l.等人(1992)nucleicacidsresearch20:62876295；chen,j.等人(1993)internationalimmunology5:647656；tuaillon等人(1993)proc.natl.acad.sciusa90:37203724；choi等人(1993)naturegenetics4:117123；chen,j.等人(1993)emboj.12:821830；tuaillon等人(1994)j.immunol.152:29122920；lonberg等人，(1994)nature368(6474):856859；lonberg,n.(1994)handbookofexperimentalpharmacology113:49101；taylor,l.等人(1994)internationalimmunology6:579591；lonberg,n.和huszar,d.(1995)intern.rev.immunol.第13卷:6593；harding,f.和lonberg,n.(1995)ann.n.y.acad.sci764:536546；fishwild,d.等人(1996)naturebiotechnology14:845851。還參見美國專利號5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,789,650；5,877,397；5,661,016；5,814,318；5,874,299；5,770,429；和5,545,807。在某些實施例中，本發(fā)明的抗體能夠以不超過10-6、10-7、10-8或10-9m的解離常數(shù)與具有seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3的氨基酸序列的神經(jīng)叢蛋白b2表位結(jié)合。評估抗體的結(jié)合能力的標準測定是本領(lǐng)域已知的，包括例如elisa、蛋白質(zhì)印跡和ria?？贵w的結(jié)合動力學(例如結(jié)合親和力)也可通過本領(lǐng)域已知的標準測定例如biacore分析進行評價。在一些實施例中，抗體與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合基本上抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。如本文使用的，當過量多肽使與配體結(jié)合的受體數(shù)量減少至少約20％、40％、60％或80％、85％或90％(如在體外競爭結(jié)合測定中測量的)時，抗體基本上抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。可溶性神經(jīng)叢蛋白b2受體多肽在某些實施例中，本發(fā)明涉及包含神經(jīng)叢蛋白b2的ang結(jié)合表位的分離多肽(即包含seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3的氨基酸序列)。此類多肽可用于例如抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合，和用于鑒定和/或生成與神經(jīng)叢蛋白b2的ang結(jié)合表位特異性結(jié)合的抗體。在某些實施例中，本發(fā)明的多肽不是神經(jīng)叢蛋白b2。在一些實施例中，本發(fā)明的多肽包含天然神經(jīng)叢蛋白b2蛋白質(zhì)(例如具有seqidno:4的氨基酸序列的蛋白質(zhì))的小于100、90、80、70、60、50、40、30、25或20個連續(xù)氨基酸。在一些實施例中，本發(fā)明的多肽由seqidno:1、seqidno:2或seqidno:3組成。在一些實施例中，本發(fā)明的多肽包含如seqidno:4中所示的神經(jīng)叢蛋白b2氨基酸序列的氨基酸165-441。在一些實施例中，本發(fā)明的多肽能夠與ang結(jié)合。在一些實施例中，多肽以不超過10-5m、10-6m、10-7m、10-8m或10-9m的解離常數(shù)與ang結(jié)合。評估多肽的結(jié)合能力的標準測定是本領(lǐng)域已知的，包括例如elisa、蛋白質(zhì)印跡和ria，并且合適的測定在實例中描述。多肽的結(jié)合動力學(例如結(jié)合親和力)也可通過本領(lǐng)域已知的標準測定例如biacore分析進行評價。在一些實施例中，多肽與ang的結(jié)合基本上抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。如本文使用的，當過量多肽使與配體結(jié)合的受體數(shù)量減少至少約20％、40％、60％或80％、85％或90％(如在體外競爭結(jié)合測定中測量的)時，多肽基本上抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。在一些實施例中，可通過合適的純化方案使用標準蛋白質(zhì)純化技術(shù)，從細胞或組織來源中分離本發(fā)明的多肽。在另一個實施例中，本發(fā)明的多肽通過重組dna技術(shù)產(chǎn)生。作為另外一種選擇，本發(fā)明的多肽可使用標準肽合成技術(shù)化學合成。在一些實施例中，本發(fā)明的多肽包含與seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3基本上等同的氨基酸序列。因此，在另一個實施例中，本發(fā)明的多肽包含與seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:3至少約80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％或更多等同的氨基酸序列。在某些實施例中，該多肽包含與seqidno:4的氨基酸165-441至少約80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％等同的氨基酸序列。在某些實施例中，本發(fā)明的多肽包含與seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:2等同的氨基酸，除了1個或更多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個)保守序列修飾外。如本文使用的，術(shù)語“保守序列修飾”意指基本上不影響或不改變含有氨基酸序列的抗體的結(jié)合特征的氨基酸修飾。此類保守修飾包括氨基酸置換、添加和缺失。修飾可通過本領(lǐng)域已知的標準技術(shù)引入抗體內(nèi)，所述標準技術(shù)例如定點誘變和pcr介導的誘變。保守氨基酸置換是其中氨基酸殘基替換為具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基的置換。具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基家族已在本領(lǐng)域中得到限定。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈(例如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如天冬氨酸、谷氨酸)、非荷電極性側(cè)鏈(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非極性側(cè)鏈(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支側(cè)鏈(例如蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳香族側(cè)鏈(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。因此，本文描述的多肽的一個或多個氨基酸殘基可替換為來自相同側(cè)鏈家族的其他氨基酸殘基，并且改變的抗體可使用本文描述的功能測定就保留的功能進行測試。為了測定兩個氨基酸序列或兩個核酸序列的同一性百分比，序列就最佳比較目的進行比對(例如可在第一和第二氨基酸或核酸序列之一或兩者中引入缺口用于最佳比對，并且可忽視非等同序列用于比較目的)。隨后比較在相應(yīng)氨基酸位置或核苷酸位置上的氨基酸殘基或核苷酸。當?shù)谝恍蛄兄械奈恢糜膳c第二序列中的相應(yīng)位置相同的氨基酸殘基或核苷酸占據(jù)時，那么該分子在該位置上是等同的。兩個序列之間的同一性百分比是由序列共享的等同位置數(shù)目的函數(shù)，考慮缺口數(shù)目和每個缺口的長度，所述缺口需要引入用于兩個序列的最佳比對。本發(fā)明還提供了嵌合或融合蛋白。如本文使用的，“嵌合蛋白”或“融合蛋白”包含連接至它在自然界中不與之連接的不同多肽的本發(fā)明的多肽(例如包含seqidno:1、seqidno:2或seqidno:3的多肽)。例如，不同多肽可直接、通過肽鍵或通過化學接頭間接融合至多肽的n末端或c末端。在一些實施例中，本發(fā)明的多肽連接至免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域(例如igg恒定結(jié)構(gòu)域例如人igg恒定結(jié)構(gòu)域)。本發(fā)明的嵌合或融合多肽可通過標準重組dna技術(shù)產(chǎn)生。例如，依照常規(guī)技術(shù)，例如通過采用平末端或交錯末端用于連接、限制性酶消化以提供合適末端、適當時粘性末端的填入、堿性磷酸酶以避免不希望的連接和酶促連接，編碼不同多肽序列的dna片段在框內(nèi)連接在一起。在另一個實施例中，融合基因可通過常規(guī)技術(shù)包括自動化dna合成儀進行合成。作為另外一種選擇，基因片段的pcr擴增可使用錨定引物執(zhí)行，所述錨定引物產(chǎn)生在兩個連續(xù)基因片段之間的互補突出端，所述互補突出端隨后可退火且再擴增，以生成嵌合基因序列(參見例如，currentprotocolsinmolecularbiology,ausubel等人，編輯，johnwiley&sons:1992)。此外，已編碼融合部分的許多表達載體是商購可得的。本文描述的多肽可通過表達編碼本發(fā)明多肽的多核苷酸在原核或真核宿主細胞中產(chǎn)生。作為另外一種選擇，此類多肽可通過化學方法合成。用于在重組宿主中表達異源多肽、多肽的化學合成和體外翻譯的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，并且還在下述中描述：maniatis等人，molecularcloning:alaboratorymanual(1989),第2版，coldspringharbor,n.y.；berger和kimmel,methodsinenzymology,第152卷，guidetomolecularcloningtechniques(1987),academicpress,inc.,sandiego,calif.；merrifield,j.(1969)j.am.chem.soc.91:501；chaikeni.m.(1981)crccrit.rev.biochem.11:255；kaiser等人(1989)science243:187；merrifield,b.(1986)science232:342；kent,s.b.h.(1988)annu.rev.biochem.57:957；和offord,r.e.(1980)semisyntheticproteins,wileypublishing，所述參考文獻通過引用并入本文。抑制性rna分子在某些實施例中，特異性靶向神經(jīng)叢蛋白b2mrna的抑制性rna分子(例如反義分子、sirna或shrna分子、核酶或三螺旋分子)用于本發(fā)明的方法中。此類分子可用于例如抑制血管生成、治療濕性amd和/或治療癌癥包括前列腺癌的方法中。本發(fā)明的抑制性rna分子可與細胞接觸或施用于生物體。作為另外一種選擇，編碼這些的構(gòu)建體可與細胞或生物體接觸或引入細胞或生物體內(nèi)。反義構(gòu)建體、反義寡核苷酸、rna干擾構(gòu)建體或sirna雙鏈體rna分子可用于干擾目的蛋白質(zhì)例如神經(jīng)叢蛋白b2蛋白質(zhì)的表達。一般地，神經(jīng)叢蛋白b2mrna序列(例如seqidno:4)的互補體的至少15、17、19或21個核苷酸對于反義分子是足夠的。一般地，靶序列的至少19、21、22或23個核苷酸對于rna干擾分子是足夠的。rna干擾分子可具有2核苷酸3'突出端。如果rna干擾分子由構(gòu)建體例如所需神經(jīng)叢蛋白b2序列的發(fā)夾分子或反向重復在細胞中表達，則內(nèi)源細胞機制將產(chǎn)生突出端。抑制性rna分子可通過化學合成、體外轉(zhuǎn)錄或通過rna酶iii或切酶消化長dsrna進行制備。這些可通過轉(zhuǎn)染、電穿孔或本領(lǐng)域已知的其他方法引入細胞內(nèi)。參見hannon,gj,2002,rnainterference,nature418:244-251；bernsteine等人，2002,therestissilence.rna7:1509-1521；hutvagnerg等人，rnai:natureabhorsadouble-strand.curr.opin.genetics&development12:225-232；brummelkamp,2002,asystemforstableexpressionofshortinterferingrnasinmammaliancells.science296:550-553；leens,dohjimat,bauerg,lih,lim-j,ehsania,salvaterrap和rossij.(2002).expressionofsmallinterferingrnastargetedagainsthiv-1revtranscriptsinhumancells.naturebiotechnol.20:500-505；miyagishim和tairak.(2002).u6-promoter-drivensirnaswithfoururidine3'overhangsefficientlysuppresstargetedgeneexpressioninmammaliancells.naturebiotechnol.20:497-500；paddisonpj,caudyaa,bernsteine,hannongj和conklinds.(2002).shorthairpinrnas(shrnas)inducesequence-specificsilencinginmammaliancells.genes&dev.16:948-958；paulcp,goodpd,wineri和engelkedr.(2002).effectiveexpressionofsmallinterferingrnainhumancells.naturebiotechnol.20:505-508；suig,soohooc,affare-b,gayf,shiy,forresterwc和shiy.(2002).adnavector-basedrnaitechnologytosuppressgeneexpressioninmammaliancells.proc.natl.acad.sci.usa99(6):5515-5520；yuj-y,deruitersl和turnerdl.(2002).rnainterferencebyexpressionofshort-interferingrnasandhairpinrnasinmammaliancells.proc.natl.acad.sci.usa99(9):6047-6052。反義或rna干擾分子可在體外遞送至細胞或在體內(nèi)遞送至例如哺乳動物的腫瘤或缺氧組織?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的一般遞送方法。例如，干擾rna可使用例如下述pct申請?zhí)栔兴龅姆椒ê徒M合物進行全身遞送：pct/us09/036223、pct/us09/061381pct/us09/063927、pct/us09/063931和pct/us09/063933，所述專利各自通過引用在此全文并入。在某些實施例中，sirna局部遞送。例如，當本文描述的sirna用于治療癌癥時，對腫瘤的遞送可通過瘤內(nèi)注射完成，如例如takahashi等人，journalofcontrolledrelease116:90-95(2006)和kim等人，journalofcontrolledrelease129:107-116(2008)中所述，所述參考文獻各自通過引用全文并入。作為另外一種選擇，當本文描述的干擾rna用于治療濕性amd時，干擾rna可直接遞送至眼，如例如通過引用全文并入的reich等人，molvis.,9:210-216(2003)中所述。核酸分子本發(fā)明的另一個方面涉及編碼本文描述的抗體、其抗原結(jié)合片段和/或多肽的核酸分子。核酸可例如以全細胞、細胞裂解產(chǎn)物或部分純化或基本上純的形式存在。本發(fā)明的核酸可使用標準分子生物學技術(shù)獲得。例如，本文描述的核酸分子可使用標準pcr技術(shù)進行克隆或化學合成。對于通過雜交瘤表達的編碼抗體的核酸，通過雜交瘤制備的編碼抗體的輕和/或重鏈的cdna可通過標準pcr擴增或cdna克隆技術(shù)獲得。對于得自免疫球蛋白基因文庫的抗體(例如使用噬菌體或酵母展示技術(shù))，可從文庫中回收編碼抗體的核酸。一旦獲得編碼vh和vl區(qū)段的dna片段，這些dna片段就還可通過標準重組dna技術(shù)進行操作，例如以將可變區(qū)基因轉(zhuǎn)換為全長抗體鏈基因、fab片段基因或scfv基因。在這些操作中，編碼vl-或vh-的dna片段可操作地連接至編碼另一蛋白質(zhì)例如抗體恒定區(qū)或彈性接頭的另一dna片段。如這個背景下使用的，術(shù)語“可操作地連接的”意指兩個dna片段這樣連接，使得由兩個dna片段編碼的氨基酸序列保留在框內(nèi)。通過將編碼vh的dna可操作地連接至編碼重鏈恒定區(qū)(ch1、ch2和ch3)的另一dna分子，編碼vh區(qū)的分離dna可轉(zhuǎn)換為全長重鏈基因。人重鏈恒定區(qū)基因的序列是本領(lǐng)域已知的(參見例如，kabat,e.a.,等人(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第五版，u.s.departmentofhealthandhumanservices,nih公開號91-3242)，并且包含這些區(qū)域的dna片段可通過標準pcr擴增獲得。重鏈恒定區(qū)可以是igg1、igg2、igg3、igg4、iga、ige、igm或igd恒定區(qū)，但最優(yōu)選是igg1或igg4恒定區(qū)。對于fab片段重鏈基因，編碼vh的dna可操作地連接至僅編碼重鏈ch1恒定區(qū)的另一dna分子。通過將編碼vl的dna可操作地連接至編碼輕鏈恒定區(qū)cl的另一dna分子，編碼vl區(qū)的分離dna可轉(zhuǎn)換為全長輕鏈基因(以及fab輕鏈基因)。人輕鏈恒定區(qū)基因的序列是本領(lǐng)域已知的(參見例如kabat,e.a.,等人(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第五版，u.s.departmentofhealthandhumanservices,nih公開號91-3242)，并且包含這些區(qū)域的dna片段可通過標準pcr擴增獲得。輕鏈恒定區(qū)可以是κ或λ恒定區(qū)，但最優(yōu)選是κ恒定區(qū)。在某些實施例中，本發(fā)明涉及含有本文描述的分離核酸分子的載體。如本文描述的，術(shù)語“載體”是指能夠轉(zhuǎn)運它已與之連接的另一核酸的核酸分子。一類載體是“質(zhì)?！?，其是指另外的dna區(qū)段可連接到其內(nèi)的環(huán)狀雙鏈dna環(huán)。另一類載體是病毒載體，其中另外的dna區(qū)段可連接到病毒基因組內(nèi)。某些載體能夠在它們引入其內(nèi)的宿主細胞中自主復制(例如具有細菌復制起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)。其他載體(例如非附加型哺乳動物載體)可在引入宿主細胞內(nèi)之后整合到宿主細胞的基因組內(nèi)，并且從而可連同宿主基因組一起復制。此外，某些載體能夠指導基因的表達。此類載體在本文中被稱為“重組表達載體”(或簡單的，“表達載體”)。在某些實施例中，本發(fā)明涉及含有本文描述的核酸(例如編碼本文描述的抗體、其抗原結(jié)合片段或多肽的核酸)的細胞。細胞可以是例如原核、真核、哺乳動物、禽類、鼠和/或人的。在某些實施例中，細胞是雜交瘤。在某些實施例中，本發(fā)明的核酸可操作地連接至轉(zhuǎn)錄控制元件例如啟動子。在一些實施例中，細胞轉(zhuǎn)錄本發(fā)明的核酸，并且從而表達本文描述的抗體、其抗原結(jié)合片段或多肽。核酸分子可整合到細胞的基因組內(nèi)，或它可以是染色體外的。其他神經(jīng)叢蛋白b2抑制劑本發(fā)明的某些實施例涉及抑制血管生成和/或預防或治療前列腺癌或濕性amd的方法。這些方法包括施用降低神經(jīng)叢蛋白b2的活性和/或表達，和/或預防神經(jīng)叢蛋白b2與ang的結(jié)合的試劑?？捎糜谡{(diào)節(jié)神經(jīng)叢蛋白b2活性的試劑包括對于神經(jīng)叢蛋白b2特異性的抗體(例如與seqidno:1、seqidno:2或seqidno:3結(jié)合的抗體)、蛋白質(zhì)、肽、小分子和抑制性rna分子例如sirna分子、shrna、核酶和反義寡核苷酸。在一些實施例中，調(diào)節(jié)神經(jīng)叢蛋白b2的任何試劑均可用于實踐本發(fā)明的方法。此類試劑可以是本文描述的那些、本領(lǐng)域已知的那些、或通過常規(guī)篩選測定(例如本文描述的篩選測定)鑒定的那些。在一些實施例中，用于鑒定在本發(fā)明的方法中有用的試劑的測定包括在神經(jīng)叢蛋白b2和一種或多種測定組分之間的反應(yīng)。其他組分可以是測試化合物(例如潛在試劑)、或測試化合物和ang的組合。經(jīng)由此類測定鑒定的試劑可例如用于預防或治療前列腺癌或濕性amd和/或抑制血管生成。在本發(fā)明的方法中有用的試劑可得自任何可用來源，包括天然和/或合成化合物的系統(tǒng)文庫。試劑還可通過本領(lǐng)域已知的組合文庫法中的眾多方法中的任何獲得，所述方法包括：生物文庫；類肽文庫(具有肽功能性但具有新型非肽主鏈的分子文庫，所述分子對酶促降解是抗性的，但仍保持生物活性；參見例如，zuckermann等人，1994,j.med.chem.37:2678-85)；可空間尋址的平行固相或液相文庫；需要重疊合法的合成文庫法；‘一珠一化合物’文庫法；和使用親和色譜法選擇的合成文庫法。生物文庫和類肽文庫方法限制于肽文庫，而其他四種方法可應(yīng)用于肽、非肽寡聚物或化合物的小分子文庫(lam,1997,anticancerdrugdes.12:145)。用于合成分子文庫的方法的例子可在本領(lǐng)域中找到，例如：dewitt等人(1993)proc.natl.acad.sci.u.s.a.90:6909；erb等人(1994)proc.natl.acad.sci.usa91:11422；zuckermann等人(1994).j.med.chem.37:2678；cho等人(1993)science261:1303；carrell等人(1994)angew.chem.int.ed.engl.33:2059；carell等人(1994)angew.chem.int.ed.engl.33:2061；和gallop等人(1994)j.med.chem.37:1233。試劑的文庫可存在于溶液中(例如houghten,1992,biotechniques13:412-421)，或珠(lam,1991,nature354:82-84)、芯片(fodor,1993,nature364:555-556)、細菌和/或孢子(ladner,usp5,223,409)、質(zhì)粒上(cull等人，1992,procnatlacadsciusa89:1865-1869)，或噬菌體上(scott和smith,1990,science249:386-390；devlin,1990,science249:404-406；cwirla等人，1990,proc.natl.acad.sci.87:6378-6382；felici,1991,j.mol.biol.222:301-310；ladner，同上)?？衫缡褂糜糜诤Y選調(diào)節(jié)神經(jīng)叢蛋白b2活性的候選或測試化合物的測定，鑒定在本發(fā)明的方法中有用的試劑。例如，可就抑制神經(jīng)叢蛋白b2與ang結(jié)合的能力篩選候選或測試化合物。用于鑒定調(diào)節(jié)神經(jīng)叢蛋白b2活性的化合物的測定系統(tǒng)的基本原理涉及在足以允許神經(jīng)叢蛋白b2與ang結(jié)合的條件和時間下，制備含有神經(jīng)叢蛋白b2和ang的反應(yīng)混合物。為了就調(diào)節(jié)活性測試試劑，在測試化合物的存在和不存在下制備反應(yīng)混合物。測試化合物可起初包括在反應(yīng)混合物中，或可在神經(jīng)叢蛋白b2和ang添加以后的時間加入。對照反應(yīng)混合物不與測試化合物一起或與安慰劑一起溫育。隨后檢測在神經(jīng)叢蛋白b2和ang之間的任何復合物形成。在對照反應(yīng)中的復合物形成，但在含有測試化合物的反應(yīng)混合物中更少的此類形成或無此類形成，指示該化合物干擾神經(jīng)叢蛋白b2和ang的相互作用。用于調(diào)節(jié)神經(jīng)叢蛋白b2與ang的相互作用的化合物的測定可以異質(zhì)或同質(zhì)形式進行。異質(zhì)測定涉及將神經(jīng)叢蛋白b2或ang錨定到固相上，并且在反應(yīng)結(jié)束時檢測錨定至固相的復合物。在同質(zhì)測定中，整個反應(yīng)在液相中執(zhí)行。在任一方法中，可改變反應(yīng)物的添加次序，以獲得關(guān)于待測試化合物的不同信息。例如，可通過在測試物質(zhì)的存在下執(zhí)行反應(yīng)，即通過在神經(jīng)叢蛋白b2和ang之前或同時將測試物質(zhì)加入反應(yīng)混合物，來鑒定干擾神經(jīng)叢蛋白b2和ang之間的相互作用(例如通過競爭)的測試化合物。作為另外一種選擇，可通過在復合物已形成后將測試化合物加入反應(yīng)混合物，來測試破壞預先形成的復合物的測試化合物，例如以更高結(jié)合常數(shù)置換來自復合物的組分之一的化合物。多種形式在下文簡要描述。在異質(zhì)測定系統(tǒng)中，將神經(jīng)叢蛋白b2或ang錨定到固體表面或基質(zhì)上，而其他相應(yīng)非錨定組分可直接或間接標記。在實踐中，微量滴定板通常用于這種方法。錨定種類可通過許多非共價或共價方法進行固定，所述方法一般是實踐該技術(shù)的人員眾所周知的。非共價附接通?？赏ㄟ^用神經(jīng)叢蛋白b2或ang溶液包被固體表面且干燥而簡單地完成。作為另外一種選擇，對于待錨定的抗體組分特異性的固定抗體可用于這個目的。在有關(guān)測定中，可提供添加結(jié)構(gòu)域的融合蛋白，所述結(jié)構(gòu)域允許測定組分中的一種或兩種錨定至基質(zhì)。例如，谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶/標記融合蛋白或谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶/結(jié)合配偶體可吸附到谷胱甘肽瓊脂糖凝膠珠(sigmachemical,st.louis,mo)或谷胱甘肽衍生的微量滴定板上，所述珠或微量滴定板隨后與測試化合物或測試化合物和非吸附的神經(jīng)叢蛋白b2或ang組合，并且混合物在有助于復合物形成的條件(例如生理條件)下溫育。在溫育后，例如如上所述，將珠或微量滴定板孔洗滌以去除任何未結(jié)合的測定組分，直接或間接評價固定復合物。作為另外一種選擇，復合物可與基質(zhì)解離，并且使用標準技術(shù)測定神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合或活性水平。同質(zhì)測定也可用于鑒定神經(jīng)叢蛋白b2的抑制劑。這一般是類似于上文提及那些的反應(yīng)，其在測試化合物的存在或不存在下在液相中進行。隨后分離所形成的復合物與未反應(yīng)的組分，并且測定形成的復合物的量。如對于異質(zhì)測定系統(tǒng)提及的，反應(yīng)物加入液相的次序可獲得關(guān)于哪種測試化合物調(diào)節(jié)(抑制或增強)復合物形成且破壞預先形成的復合物的信息。在此類同質(zhì)測定中，反應(yīng)產(chǎn)物可通過許多標準技術(shù)中的任何與未反應(yīng)的測定組分分離，所述標準技術(shù)包括但不限于：差異離心、色譜法、電泳和免疫沉淀。在差異離心中，由于復合物基于其不同大小和密度的不同沉降平衡，分子的復合物可通過一系列離心步驟與未復合的分子分離(參見例如rivas,g.和minton,a.p.,trendsbiochemsci1993aug；18(8):284-7)。標準色譜技術(shù)也可用于分離復合分子與未復合分子。例如，凝膠過濾色譜法基于大小而分離分子，并且通過利用以柱形式的合適凝膠過濾樹脂，例如，相對更大的復合物可與相對更小的未復合組分分離。類似地，與未復合分子相比較，復合物相對不同的電荷性質(zhì)可例如通過使用離子交換色譜樹脂用于差異分離復合物與剩余的個別反應(yīng)物。此類樹脂和色譜技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的(參見例如，heegaard,1998,jmol.recognit.11:141-148；hage和tweed,1997,j.chromatogr.b.biomed.sci.appl.,699:499-525)。凝膠電泳也可用于分離復合分子與未結(jié)合的種類(參見例如ausubel等人(編輯)，于：currentprotocolsinmolecularbiology,j.wiley&sons,newyork.1999)。在這種技術(shù)中，例如蛋白質(zhì)或核酸復合物基于大小或電荷進行分離。為了維持電泳過程期間的結(jié)合相互作用，在不存在還原劑的情況下的非變性凝膠一般是優(yōu)選的，但對于特定相互作用物合適的條件將是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。免疫沉淀是用于從溶液中分離蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復合物的另一常見技術(shù)(參見例如，ausubel等人(編輯)，于：currentprotocolsinmolecularbiology,j.wiley&sons,newyork.1999)。在這種技術(shù)中，通過使抗體綴合至可通過離心容易地收集的聚合物珠，從溶液中沉淀與對于結(jié)合分子之一特異性的抗體結(jié)合的所有蛋白質(zhì)。結(jié)合的測定組分從珠中釋放(通過特異性蛋白分解事件或本領(lǐng)域眾所周知的不擾亂復合物中的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的其他技術(shù))，并且執(zhí)行第二免疫沉淀步驟，這次利用對于相應(yīng)的不同相互作用測定組分特異性的抗體。以這種方式，僅形成的復合物應(yīng)保持附接至珠?？杀容^在測試化合物的存在和不存在下的復合物形成中的變化，從而提供關(guān)于化合物調(diào)節(jié)神經(jīng)叢蛋白b2和ang之間的相互作用的能力的信息。還可例如使用其中使細胞與候選化合物接觸且測定神經(jīng)叢蛋白b2mrna或蛋白質(zhì)表達的方法，鑒定神經(jīng)叢蛋白b2表達的調(diào)節(jié)劑。在候選化合物的存在下mrna或蛋白質(zhì)的表達水平與在不存在候選化合物的情況下mrna或蛋白質(zhì)的表達水平相比較。候選化合物隨后可基于這種比較鑒定為神經(jīng)叢蛋白b2表達的抑制劑。藥物組合物在某些實施例中，本發(fā)明涉及含有連同可藥用載體一起配制的本文描述的至少一種抗體、其抗原結(jié)合片段或ang結(jié)合多肽的組合物，例如藥物組合物。在一個實施例中，該組合物包括本發(fā)明的多種(例如兩種或更多種)試劑的組合。本發(fā)明的藥物組合物還可在聯(lián)合治療中施用，即與其他試劑組合施用。例如，本發(fā)明的藥物組合物還可包括另外的血管生成抑制劑，例如貝伐珠單抗雷珠單抗和阿柏西普(vegf肼)。如下文詳細描述的，本發(fā)明的藥物組合物可特別配制用于以固體或液體形式施用，包括適合于下述的那些：(1)經(jīng)口施用，例如一服藥劑(drenches)(水或非水溶液或懸浮液)，片劑例如靶向用于經(jīng)頰、舌下和全身吸收的那些，彈丸，粉末，顆粒劑，用于應(yīng)用于舌的糊劑；或(2)腸胃外施用，例如通過皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或硬膜外注射，如例如無菌溶液或懸浮液，或持續(xù)釋放制劑。制備這些制劑或組合物的方法包括使本文描述的試劑與載體和任選的一種或多種輔助成分結(jié)合的步驟。一般而言，制劑的制備方法包括：使本文描述的試劑與液體載體、或精細分開的固體載體或兩者均勻且親密地結(jié)合，且隨后需要時，使產(chǎn)物成形。本發(fā)明適合于腸胃外施用的藥物組合物包含與一種或多種可藥用的無菌等滲水或非水溶液、分散體、懸浮液或乳狀液或無菌粉末組合的一種或多種本文描述的試劑，所述粉末可緊在使用前重構(gòu)成無菌可注射溶液或分散體，其可含有糖、醇、抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑、使得該制劑與預期接受者的血液等滲的溶質(zhì)、或懸浮劑或增稠劑?？捎糜诒景l(fā)明的藥物組合物中的合適水和非水載體的例子包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合適混合物、植物油例如橄欖油、和可注射的有機酯例如油酸乙酯。例如可通過使用包衣材料例如卵磷脂、通過在分散體的情況下維持所需粒度和通過使用表面活性劑，維持合適的流動性。與選擇的施用途徑無關(guān)，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法，將可以合適的水合形式使用的本發(fā)明的試劑和/或本發(fā)明的藥物組合物配制成可藥用的劑型。治療方法本文公開的是治療或預防ang相關(guān)狀況和/或抑制血管生成的新型治療方法，所述ang相關(guān)狀況包括癌癥(例如前列腺癌或腦癌，例如成膠質(zhì)細胞瘤)和濕性amd。在一些實施例中，本發(fā)明提供了治療癌癥包括癌性腫瘤(例如實體瘤)的治療方法，其包括給受試者(例如有此需要的受試者)施用有效量的試劑，所述試劑抑制神經(jīng)叢蛋白b2表達或活性或者抑制ang與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。在一些實施例中，本發(fā)明提供了抑制血管生成或治療血管生成介導的疾病包括濕性amd或癌癥的治療方法。本發(fā)明的藥物組合物可通過任何合適的施用途徑遞送，所述施用途徑包括經(jīng)口、如通過例如噴霧劑經(jīng)鼻、經(jīng)直腸、陰道內(nèi)、腸胃外、腦池內(nèi)和如通過粉末、軟膏或滴劑局部，包括經(jīng)頰和舌下。在某些實施例中，藥物組合物一般遞送(例如經(jīng)由經(jīng)口或腸胃外施用)。在某些其他實施例中，藥物組合物通過直接注射到腫瘤內(nèi)(在癌癥治療的情況下)或直接注射到眼內(nèi)(在濕性amd治療的情況下)局部遞送。當用于治療癌癥時，此類方法可包括施用與一種或多種治療劑和/或血管生成抑制劑結(jié)合的本文描述的藥物組合物，所述血管生成抑制劑包括例如貝伐珠單抗雷珠單抗和阿柏西普(vegf肼)。聯(lián)合療法包括序貫、同時和分離的和/或活性化合物以此類方式的共施用，使得當施用后續(xù)試劑時，施用的第一試劑的療效仍未完全消失。在某些實施例中，第二試劑可與第一試劑共配制，或在分離的藥物組合物中配制。在某些實施例中，本發(fā)明涉及治療濕性amd的治療方法，其包括給受試者(例如有此需要的受試者)施用有效量的本文描述的試劑。有此需要的受試者可包括例如已診斷有濕性amd的受試者、易受濕性amd影響的受試者或已就濕性amd治療的受試者，包括已對先前治療抗拒的受試者。在某些實施例中，本發(fā)明提供了治療癌癥包括癌性腫瘤(例如實體瘤)的治療方法，其包括給受試者(例如有此需要的受試者)施用有效量的本文描述的試劑。有此需要的受試者可包括例如已診斷有腫瘤包括癌前腫瘤、癌癥的受試者，或已治療的受試者，包括已對先前治療抗拒的受試者。本發(fā)明的方法可用于治療任何癌性或癌前腫瘤。在某些實施例中，癌性腫瘤是前列腺癌或腦癌(例如成膠質(zhì)細胞瘤)?？赏ㄟ^本發(fā)明的方法和組合物治療的癌癥還包括但不限于來自膀胱、血液、骨、骨髓、腦、乳腺、結(jié)腸、食管、胃腸、齒齦、頭、腎、肝、肺、鼻咽、頸、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睪丸、舌或子宮的癌細胞。此外，癌癥可特別具有下述組織學類型，盡管它并不限于這些：贅生物，惡性；癌；癌，未分化的；巨細胞和梭形細胞癌；小細胞癌；乳頭狀癌；鱗狀細胞癌；淋巴上皮癌；基底細胞癌；毛基質(zhì)癌；移行細胞癌；乳頭狀移行細胞癌；腺癌；胃泌素瘤，惡性；膽管上皮癌；肝細胞癌；結(jié)合性肝細胞癌和膽管癌；小梁性腺癌；腺樣囊性癌；腺瘤性息肉內(nèi)腺癌；腺癌，家族性結(jié)腸息肉??；實體癌；類癌瘤，惡性；支氣管-肺泡癌；乳頭狀腺癌；嫌色性癌；嗜酸性細胞癌；嗜酸性腺癌；嗜堿性細胞癌；透明細胞腺癌；粒細胞癌；濾泡性腺癌；乳頭狀和濾泡狀腺癌；無包膜形成的硬化性癌；腎上腺皮質(zhì)癌；子宮內(nèi)膜癌；皮膚附件癌；大汗腺腺癌；皮脂性腺癌；耵聹腺腺癌；粘液表皮樣癌；囊腺癌；乳頭狀囊腺癌；乳頭狀漿液性囊腺癌；粘液囊腺癌；粘液腺癌；印戒細胞癌；浸潤性導管癌；髓樣癌；小葉癌；炎性癌；佩吉特氏病，乳房的；腺泡細胞癌；腺鱗狀癌；腺癌/鱗狀化生；胸腺瘤，惡性；卵巢間質(zhì)腫瘤，惡性；泡膜細胞瘤，惡性；粒層細胞瘤，惡性；和成神經(jīng)細胞瘤(roblastoma)，惡性；塞爾托利細胞癌；萊迪希細胞瘤，惡性；脂質(zhì)細胞瘤，惡性；副神經(jīng)節(jié)瘤，惡性；乳房外副神經(jīng)節(jié)瘤，惡性；嗜鉻細胞瘤；血管球肉瘤；惡性黑素瘤；無色素性黑素瘤；淺表擴散性黑素瘤；巨大色素痣內(nèi)惡性黑素瘤；上皮樣細胞黑素瘤；藍痣，惡性；肉瘤；纖維肉瘤；纖維組織細胞瘤，惡性；粘液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；橫紋肌肉瘤；胚胎型橫紋肌肉瘤；小泡型橫紋肌肉瘤；間質(zhì)肉瘤；混合瘤，惡性；苗勒混合瘤；腎母細胞瘤；肝母細胞瘤；癌肉瘤；間葉瘤，惡性；勃勒納腫瘤(brennertumor)，惡性；葉狀瘤，惡性；滑膜肉瘤；間皮瘤，惡性；無性細胞瘤；胚胎性癌；畸胎瘤，惡性；卵巢甲狀腺腫，惡性；絨毛膜癌；中腎瘤，惡性；血管肉瘤；血管內(nèi)皮瘤，惡性；卡波濟氏肉瘤；血管外皮細胞瘤，惡性；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；近皮質(zhì)骨肉瘤；軟骨肉瘤；軟骨母細胞瘤，惡性；間質(zhì)性軟骨肉瘤；骨巨細胞瘤；尤文氏肉瘤；牙源性腫瘤，惡性；成釉細胞牙肉瘤；成釉細胞瘤，惡性；成釉細胞纖維肉瘤；松果體瘤，惡性；脊索瘤；神經(jīng)膠質(zhì)瘤，惡性；室管膜瘤；星形細胞瘤；原漿性星形細胞瘤；纖維性星形細胞瘤；成星形細胞瘤；成膠質(zhì)細胞瘤；少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤；成少突神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤；原始神經(jīng)外胚層；小腦肉瘤；神經(jīng)節(jié)成神經(jīng)細胞瘤；成神經(jīng)細胞瘤；成視網(wǎng)膜細胞瘤；嗅神經(jīng)源性腫瘤；腦膜瘤，惡性；神經(jīng)纖維肉瘤；神經(jīng)鞘瘤，惡性；顆粒細胞瘤，惡性；惡性淋巴瘤；何杰金氏?。缓谓芙鹗狭馨土?；類肉芽腫；惡性淋巴瘤，小淋巴細胞性；惡性淋巴瘤，大細胞、彌散性；惡性淋巴瘤，濾泡性；蕈樣肉芽腫病；其他指定的非何杰金氏淋巴瘤；惡性組織細胞增多癥；多發(fā)性骨髓瘤；肥大細胞肉瘤；免疫增生性小腸病；白血病；淋巴樣白血病；漿細胞白血?。患t白血?。涣馨腿饬黾毎园籽。凰铇影籽。皇葔A細胞性白血病；嗜酸細胞性白血病；單核細胞性白血??；肥大細胞白血??；成巨核細胞性白血病；髓樣肉瘤；和多毛細胞白血病。在本發(fā)明的藥物組合物中活性成分的實際劑量水平可這樣改變，以便獲得活性成分的量，所述量有效實現(xiàn)對于特定患者、組合物和施用模式的所需治療應(yīng)答，而對該患者無毒。所選劑量水平將取決于多種因素，包括采用的特定試劑的活性，施用途徑，施用時間，待采用的特定化合物的排泄或代謝率，治療持續(xù)時間，與采用的特定化合物組合使用的其他藥物、化合物和/或材料，待治療患者的年齡、性別、重量、狀況、一般健康和先前醫(yī)療史，和醫(yī)學領(lǐng)域中眾所周知的類似因素。具有本領(lǐng)域普通技術(shù)的醫(yī)生或獸醫(yī)可容易地決定且開出所需藥物組合物的有效量。例如，醫(yī)生或獸醫(yī)可以低于為了實現(xiàn)所需療效需要那種的水平開出和/或施用在藥物組合物中采用的本發(fā)明化合物的劑量，且逐步增加劑量直至達到所需效應(yīng)。本發(fā)明還提供了以下實施方式：實施方式1.一種與神經(jīng)叢蛋白b2的ang結(jié)合表位特異性結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述ang結(jié)合表位具有seqidno:1、seqidno:2或seqidno:3的氨基酸序列。實施方式2.根據(jù)實施方式1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆或多克隆的。實施方式3.根據(jù)實施方式1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體是嵌合、人源化或全人的。實施方式4.根據(jù)實施方式1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段是選自下述的抗體片段：全長免疫球蛋白分子；scfv；fab片段；fab’片段；f(ab’)2；fv；和二硫鍵連接的fv。實施方式5.根據(jù)實施方式1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段以不超過約10-7m的解離常數(shù)與神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合。實施方式6.根據(jù)實施方式1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段抑制血管生成素與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。實施方式7.一種治療受試者中的癌癥的方法，所述方法包括給所述受試者施用治療有效量的根據(jù)實施方式1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的步驟。實施方式8.根據(jù)實施方式7所述的方法，其中所述癌癥是前列腺癌或腦癌。實施方式9.根據(jù)實施方式8所述的方法，其中所述癌癥是成膠質(zhì)細胞瘤。實施方式10.一種抑制受試者中的血管生成的方法，所述方法包括給所述受試者施用治療有效量的根據(jù)實施方式1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的步驟。實施方式11.根據(jù)實施方式10所述的方法，其中所述受試者具有癌癥。實施方式12.根據(jù)實施方式10所述的方法，其中所述受試者具有濕性老年性黃斑變性(濕性amd)。實施方式13.一種治療受試者中的濕性amd的方法，所述方法包括給所述受試者施用治療有效量的根據(jù)實施方式1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的步驟。實施方式14.一種包含seqidno:1、seqidno:2或seqidno:3的氨基酸序列的分離可溶性多肽，其中所述多肽與血管生成素結(jié)合。實施方式15.根據(jù)實施方式14所述的多肽，其中所述多肽包含seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3的氨基酸序列。實施方式16.根據(jù)實施方式14所述的多肽，其中所述多肽包含seqidno:4的不超過50個連續(xù)氨基酸。實施方式17.根據(jù)實施方式14所述的多肽，其中所述多肽以不超過約10-7m的解離常數(shù)與血管生成素結(jié)合。實施方式18.根據(jù)實施方式14所述的多肽，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段抑制血管生成素與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。實施方式19.一種治療受試者中的癌癥的方法，所述方法包括給所述受試者施用治療有效量的根據(jù)實施方式14所述的多肽的步驟。實施方式20.根據(jù)實施方式19所述的方法，其中所述癌癥是前列腺癌或腦癌。實施方式21.根據(jù)實施方式20所述的方法，其中所述癌癥是成膠質(zhì)細胞瘤。實施方式22.一種抑制受試者中的血管生成的方法，所述方法包括給所述受試者施用治療有效量的根據(jù)實施方式14所述的多肽的步驟。實施方式23.根據(jù)實施方式22所述的方法，其中所述受試者具有癌癥。實施方式24.根據(jù)實施方式22所述的方法，其中所述受試者具有濕性老年性黃斑變性(濕性amd)。實施方式25.一種治療受試者中的濕性amd的方法，所述方法包括給所述受試者施用治療有效量的根據(jù)實施方式14所述的多肽的步驟。實施方式26.一種治療受試者中的前列腺癌的方法，所述方法包括給所述受試者施用治療有效量的神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑的步驟。實施方式27.根據(jù)實施方式26所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑抑制血管生成素與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。實施方式28.根據(jù)實施方式27所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑是與神經(jīng)叢蛋白b2特異性結(jié)合的抗體。實施方式29.根據(jù)實施方式26所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑是對于神經(jīng)叢蛋白b2mrna特異性的干擾核酸。實施方式30.一種抑制受試者中的血管生成的方法，所述方法包括給所述受試者施用治療有效量的神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑的步驟。實施方式31.根據(jù)實施方式30所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑抑制血管生成素與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。實施方式32.根據(jù)實施方式31所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑是與神經(jīng)叢蛋白b2特異性結(jié)合的抗體。實施方式33.根據(jù)實施方式30所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑抑制神經(jīng)叢蛋白b2蛋白質(zhì)表達。實施方式34.根據(jù)實施方式30所述的方法，其中所述受試者具有癌癥。實施方式35.根據(jù)實施方式34所述的方法，其中所述癌癥是前列腺癌或腦癌。實施方式36.根據(jù)實施方式30所述的方法，其中所述受試者具有濕性amd。實施方式37.一種治療受試者中的濕性amd的方法，所述方法包括給所述受試者施用治療有效量的神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑的步驟。實施方式38.根據(jù)實施方式37所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑抑制血管生成素與神經(jīng)叢蛋白b2的結(jié)合。實施方式39.根據(jù)實施方式38所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑是與神經(jīng)叢蛋白b2特異性結(jié)合的抗體。實施方式40.根據(jù)實施方式37所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2拮抗劑是對于神經(jīng)叢蛋白b2mrna特異性的干擾核酸。實施方式41.一種測定測試試劑是否是神經(jīng)叢蛋白b2活性的抑制劑的方法，所述方法包括：a)形成包含下述的測試反應(yīng)混合物：神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段；ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段；和測試試劑；b)在有助于所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段和所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段之間的復合物形成的條件下，溫育所述測試反應(yīng)混合物；和c)測定所述測試反應(yīng)混合物中的所述復合物的量；其中與對照反應(yīng)混合物中的所述復合物的量相比較，減少所述測試反應(yīng)混合物中的所述復合物的量的測試試劑是神經(jīng)叢蛋白b2活性的抑制劑。實施方式42.根據(jù)實施方式41所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段包含選自seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3的氨基酸序列。實施方式43.根據(jù)實施方式41或42所述的方法，其中所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段包含seqidno:5的氨基酸序列。實施方式44.根據(jù)實施方式41-43中任一項所述的方法，其中所述測試試劑是抗體、蛋白質(zhì)、肽或小分子。實施方式45.根據(jù)實施方式41-44中任一項所述的方法，其中所述對照反應(yīng)混合物基本上等同于所述測試反應(yīng)混合物，除了所述對照反應(yīng)混合物不含測試試劑外。實施方式46.根據(jù)實施方式41-44中任一項所述的方法，其中所述對照反應(yīng)混合物基本上等同于所述測試反應(yīng)混合物，除了所述對照反應(yīng)混合物包含安慰劑試劑代替測試試劑外。實施方式47.根據(jù)實施方式41-46中任一項所述的方法，其中通過將所述測試試劑加入包含所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段和所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的混合物，形成所述測試反應(yīng)混合物。實施方式48.根據(jù)實施方式41-46中任一項所述的方法，其中通過將所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段加入包含所述測試試劑和所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的混合物，形成所述測試反應(yīng)混合物。實施方式49.根據(jù)實施方式41-46中任一項所述的方法，其中通過將所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段加入包含所述測試試劑和所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的混合物，形成所述測試反應(yīng)混合物。實施方式50.根據(jù)實施方式41-49中任一項所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段錨定至所述測試反應(yīng)混合物中的固體載體。實施方式51.根據(jù)實施方式50所述的方法，其中在有助于所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段與所錨定的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段結(jié)合的條件下，溫育所述測試反應(yīng)混合物。實施方式52.根據(jù)實施方式51所述的方法，其還包括將結(jié)合所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段與未結(jié)合所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段相分離的步驟。實施方式53.根據(jù)實施方式52所述的方法，其中通過檢測與所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段結(jié)合的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的量，測定所述測試反應(yīng)混合物中的所述復合物的量。實施方式54.根據(jù)實施方式50-53中任一項所述的方法，其中所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段連接至可檢測部分。實施方式55.根據(jù)實施方式41-49中任一項所述的方法，其中所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段錨定至所述測試反應(yīng)混合物中的固體載體。實施方式56.根據(jù)實施方式55所述的方法，其中在有助于所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段與所錨定的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段結(jié)合的條件下，溫育所述測試反應(yīng)混合物。實施方式57.根據(jù)實施方式56所述的方法，其還包括將結(jié)合所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段與未結(jié)合所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段相分離的步驟。實施方式58.根據(jù)實施方式57所述的方法，其中通過檢測與所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段結(jié)合的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的量，測定所述測試反應(yīng)混合物中的復合物的量。實施方式59.根據(jù)實施方式55-58中任一項所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段連接至可檢測部分。實施方式60.根據(jù)實施方式41-59中任一項所述的方法，其中所述測試試劑是測試試劑文庫的成員。實施方式61.一種測定測試試劑是否是神經(jīng)叢蛋白b2活性的增強劑的方法，所述方法包括：a)形成包含下述的測試反應(yīng)混合物：神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段；ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段；和測試試劑；b)在有助于所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段和所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段之間的復合物形成的條件下，溫育所述測試反應(yīng)混合物；和c)測定所述測試反應(yīng)混合物中的所述復合物的量；其中與對照反應(yīng)混合物中的所述復合物的量相比較，增加所述測試反應(yīng)混合物中的所述復合物的量的測試試劑是神經(jīng)叢蛋白b2活性的增強劑。實施方式62.根據(jù)實施方式61所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段包含選自seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3的氨基酸序列。實施方式63.根據(jù)實施方式61或62所述的方法，其中所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段包含seqidno:5的氨基酸序列。實施方式64.根據(jù)實施方式61-63中任一項所述的方法，其中所述測試試劑是抗體、蛋白質(zhì)、肽或小分子。實施方式65.根據(jù)實施方式61-64中任一項所述的方法，其中所述對照反應(yīng)混合物基本上等同于所述測試反應(yīng)混合物，除了所述對照反應(yīng)混合物不含測試試劑外。實施方式66.根據(jù)實施方式61-64中任一項所述的方法，其中所述對照反應(yīng)混合物基本上等同于所述測試反應(yīng)混合物，除了所述對照反應(yīng)混合物包含安慰劑試劑代替測試試劑外。實施方式67.根據(jù)實施方式61-66中任一項所述的方法，其中通過將所述測試試劑加入包含所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段和所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的混合物，形成所述測試反應(yīng)混合物。實施方式68.根據(jù)實施方式61-66中任一項所述的方法，其中通過將所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段加入包含所述測試試劑和所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的混合物，形成所述測試反應(yīng)混合物。實施方式69.根據(jù)實施方式61-66中任一項所述的方法，其中通過將所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段加入包含所述測試試劑和所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的混合物，形成所述測試反應(yīng)混合物。實施方式70.根據(jù)實施方式61-69中任一項所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段錨定至所述測試反應(yīng)混合物中的固體載體。實施方式71.根據(jù)實施方式70所述的方法，其中在有助于所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段與所錨定的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段結(jié)合的條件下，溫育所述測試反應(yīng)混合物。實施方式72.根據(jù)實施方式71所述的方法，其還包括將結(jié)合所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段與未結(jié)合所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段相分離的步驟。實施方式73.根據(jù)實施方式72所述的方法，其中通過檢測與所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段結(jié)合的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的量，測定所述測試反應(yīng)混合物中的所述復合物的量。實施方式74.根據(jù)實施方式70-73中任一項所述的方法，其中所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段連接至可檢測部分。實施方式75.根據(jù)實施方式61-69中任一項所述的方法，其中所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段錨定至所述測試反應(yīng)混合物中的固體載體。實施方式76.根據(jù)實施方式75所述的方法，其中在有助于所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段與所錨定的ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段結(jié)合的條件下，溫育所述測試反應(yīng)混合物。實施方式77.根據(jù)實施方式76所述的方法，其還包括將結(jié)合所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段與未結(jié)合所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段相分離的步驟。實施方式78.根據(jù)實施方式77所述的方法，其中通過檢測與所述ang多肽或其神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合片段結(jié)合的神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段的量，測定所述測試反應(yīng)混合物中的復合物的量。實施方式79.根據(jù)實施方式75-78中任一項所述的方法，其中所述神經(jīng)叢蛋白b2多肽或其ang結(jié)合片段連接至可檢測部分。實施方式80.根據(jù)實施方式61-79中任一項所述的方法，其中所述測試試劑是測試試劑文庫的成員。實施方式81.一種測定測試試劑是否是神經(jīng)叢蛋白b2活性的抑制劑的方法，所述方法包括：a)使包含具有選自seqidno:1、seqidno:2或seqidno:3的序列的表位的多肽與測試試劑接觸；和b)測定所述測試試劑是否與所述表位結(jié)合；其中與所述表位結(jié)合的測試試劑是神經(jīng)叢蛋白b2活性的抑制劑。實施方式82.根據(jù)實施方式81所述的方法，其中所述測試試劑是抗體、蛋白質(zhì)、肽或小分子。實施方式83.根據(jù)實施方式81或82所述的方法，其中所述多肽附接至固體基質(zhì)。實施方式84.根據(jù)實施方式83所述的方法，其還包括將結(jié)合所述表位的測試試劑與未結(jié)合所述表位的測試試劑相分離的步驟。實施方式85.根據(jù)實施方式83或84所述的方法，其中所述測試試劑連接至可檢測部分。實施方式86.根據(jù)實施方式81或82所述的方法，其中所述測試試劑附接至固體基質(zhì)。實施方式87.根據(jù)實施方式86所述的方法，其還包括將結(jié)合所述測試試劑的多肽與未結(jié)合所述測試試劑的多肽相分離的步驟。實施方式88.根據(jù)實施方式87所述的方法，其中所述多肽連接至可檢測部分。實施方式89.根據(jù)實施方式81-88中任一項所述的方法，其中所述測試試劑是測試試劑文庫的成員。例證目前一般描述的本發(fā)明通過參考下述實例將更容易理解，所述實例僅包括用于舉例說明本發(fā)明的某些方面和實施例的目的，并且不預期以任何方式限制本發(fā)明。實例1.ang受體在內(nèi)皮細胞而不是前列腺癌細胞中的細胞密度依賴性表達。因為ang最初鑒定為血管生成蛋白質(zhì)，所以先前努力已集中于內(nèi)皮細胞。然而，如本文描述的，ang對內(nèi)皮細胞的活性嚴格依賴于細胞密度(圖4)。免疫熒光顯示外源ang在人臍靜脈內(nèi)皮(huve)細胞中的核轉(zhuǎn)位僅在稀疏培養(yǎng)的細胞中發(fā)生(圖4a)。核轉(zhuǎn)位隨著細胞密度增加而降低，并且在匯合細胞中停止。如圖4b中所示，使用125i標記的ang證實ang在huve細胞中的細胞密度依賴性核轉(zhuǎn)位。一致地，ang誘導的huve細胞增殖也依賴于細胞密度(圖4c)。針對內(nèi)皮細胞的ang活性與細胞密度的反相關(guān)指示當細胞密度增加時，ang受體在內(nèi)皮細胞中是下調(diào)的。人ang在人前列腺癌尤其是非雄激素依賴型前列腺癌中是上調(diào)的。小鼠ang是在鼠前列腺限制性akt激酶轉(zhuǎn)基因(mpakt)小鼠中akt誘導的前列腺上皮內(nèi)瘤(pin)組織中最高上調(diào)的基因。ang在前列腺癌進展中發(fā)揮雙重作用。它不僅介導腫瘤血管生成，還直接刺激癌細胞增殖。如本文描述的，與內(nèi)皮細胞形成對比，ang在lncap人前列腺癌細胞中的核轉(zhuǎn)位不依賴于細胞密度(圖5a)。通常，當在無酚紅和無類固醇培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，lncap細胞將存活但不增殖(圖5b)。如圖5b中所示，雙氫睪酮(dht)刺激lncap細胞增殖。ang還在不存在雄激素的情況下刺激lncap細胞增殖，指示ang可補償雄激素剝奪。當ang和dht同時添加時，未觀察到附加或協(xié)同效應(yīng)，指示ang和dht在刺激lncap細胞增殖中共享相同機制。圖5c顯示ang以劑量依賴性方式刺激lncap細胞增殖。這些結(jié)果指示ang受體在lncap細胞中表達，并且當細胞密度增加時，ang受體的表達在lncap細胞中不是下調(diào)的。實例2.神經(jīng)叢蛋白b2作為ang結(jié)合蛋白的鑒定。通過標準放射受體測定來測定ang與lncap細胞結(jié)合的熱力學。ang用碘-125進行標記，并且與表達ang受體的lncap細胞一起在4℃下溫育。圖6a顯示125i-ang與lncap細胞的結(jié)合是可飽和的。斯卡恰特分析鑒定分別具有0.45nm和170nm的表觀kd的兩個ang結(jié)合位點(圖6b)。在ang-瓊脂糖凝膠柱上的親和色譜法用于分離假定的ang受體。制備來自總共2.5x108lncap細胞的質(zhì)膜，溶解且經(jīng)過rna酶a-瓊脂糖凝膠柱，以去除非特異性蛋白質(zhì)(rna酶a和ang具有35％氨基酸同一性，伴隨總體56％的同源性。然而，rna酶a不是生成血管的，并且不與lncap細胞表面結(jié)合)。將來自rna酶a柱的流通物餾分分成三個相等餾分，并且在與0.1mg游離ang一起溫育后分別施加于非親和瓊脂糖凝膠柱、ang-瓊脂糖凝膠柱和ang-瓊脂糖凝膠柱。將結(jié)合的材料用低ph緩沖液洗脫且在sds-page上分離。如圖7a中所示，從ang-瓊脂糖凝膠柱中洗脫具有～200kda的表觀mw的顯著條帶(中間泳道)。這個條帶在來自非親和瓊脂糖凝膠柱的洗脫物中未出現(xiàn)(左泳道)，并且當樣品與游離ang一起預溫育時，它的豐度極大減少(右泳道)，指示它對于ang是特異性的。從凝膠中切除這個條帶，并且將胰蛋白酶肽提交用于質(zhì)譜法分析。ncbinr數(shù)據(jù)庫的mascot搜索揭示與人神經(jīng)叢蛋白b2的肽的總共16個匹配(圖7b)。神經(jīng)叢蛋白b2是主要在神經(jīng)元起源的細胞中表達的細胞表面蛋白質(zhì)。神經(jīng)叢蛋白家族蛋白質(zhì)與信號素(semaphorin)相互作用，以調(diào)節(jié)神經(jīng)元遷移和模式形成，以及血管生成、侵襲性生長和細胞凋亡。通過免疫熒光檢查神經(jīng)叢蛋白b2在lncap細胞中的表達。如圖7c中所示，神經(jīng)叢蛋白b2主要在細胞表面上檢測到，與其為跨膜蛋白質(zhì)一致。為了了解ang是否在體內(nèi)與神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合，執(zhí)行共免疫沉淀實驗。為了這個目的，將flag標簽加入ang的c末端，并且由大腸桿菌表達系統(tǒng)制備且純化融合蛋白。使ang-flag與溶解的lncap細胞質(zhì)膜餾分一起溫育，并且實施ip-蛋白質(zhì)分析。神經(jīng)叢蛋白b2可通過抗ang單克隆抗體以及抗flag抗體進行沉淀(圖7d，上圖)。類似地，ang可通過抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體進行沉淀(圖7d，下圖)。這些結(jié)果證實ang事實上可與神經(jīng)叢蛋白b2結(jié)合。實例3.神經(jīng)叢蛋白b2介導ang的核轉(zhuǎn)位。合成sirna用于擊倒lncap細胞中的神經(jīng)叢蛋白b2表達(圖8)。擊倒效率通過rt-pcr(圖8a)和蛋白質(zhì)印跡(圖8b)分析進行測定。圖8c顯示ang在lncap細胞中的核轉(zhuǎn)位在神經(jīng)叢蛋白b2擊倒細胞中被抑制(圖8f)。這些結(jié)果證實神經(jīng)叢蛋白b2對于ang的核轉(zhuǎn)位是必需的。如上所述，ang的核轉(zhuǎn)位在內(nèi)皮細胞中是細胞密度依賴性的，但在癌細胞中是組成性的(圖4)。因此檢查在不同密度下培養(yǎng)的huve細胞中的神經(jīng)叢蛋白b2表達水平。圖9a顯示當細胞處于10％匯合時，神經(jīng)叢蛋白b2mrna在huve細胞中是可檢測的。該表達在30％匯合細胞中降低，并且當匯合達到60％時減小。相比之下，神經(jīng)叢蛋白b2mrna在90％匯合的hela和lncap細胞中仍是可檢測的(圖9a)。這些結(jié)果與神經(jīng)叢蛋白b2是關(guān)于ang的功能受體一致。為了進一步表征神經(jīng)叢蛋白b2在介導ang活性中的作用，將全長神經(jīng)叢蛋白b2cdna克隆到pci-neo載體內(nèi)，將所述pci-neo載體轉(zhuǎn)染到cos-7細胞內(nèi)。選擇載體對照(pci-neo)和神經(jīng)叢蛋白b2(pci-神經(jīng)叢蛋白b2)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子，并且通過rt-pcr分析使用對于人神經(jīng)叢蛋白b2特異性的引物組檢測轉(zhuǎn)基因表達(圖9b)。在載體和神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子中均檢測到低水平的猴神經(jīng)叢蛋白b2mrna(圖9b)。使用抗神經(jīng)叢蛋白b2igg的蛋白質(zhì)印跡顯示在cos-7細胞的載體轉(zhuǎn)染子中低水平的神經(jīng)叢蛋白b2蛋白質(zhì)和在神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子中增加的水平(圖9c)。神經(jīng)叢蛋白b2蛋白質(zhì)也在90％匯合的hela和lncap細胞與30％匯合的huve細胞檢測到(圖9c)。接下來，檢查ang在cos-7細胞中的載體和神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子中的核轉(zhuǎn)位。圖10顯示強核轉(zhuǎn)位在神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子中出現(xiàn)，但在載體轉(zhuǎn)染子中僅檢測到最小量的核ang。因此，人神經(jīng)叢蛋白b2在cos-7細胞中的表達允許ang的核轉(zhuǎn)位，指示神經(jīng)叢蛋白b2足以介導ang的核轉(zhuǎn)位。ang還已顯示活化內(nèi)皮細胞中的akt。檢查在cos-7細胞的神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子中的akt磷酸化狀態(tài)。圖10g顯示ang處理誘導cos-7細胞的神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子而不是在載體對照轉(zhuǎn)染子中的akt磷酸化。這些結(jié)果暗示神經(jīng)叢蛋白b2是關(guān)于ang的功能受體，并且負責介導ang的核轉(zhuǎn)位和akt磷酸化。新霉素已顯示阻斷ang在內(nèi)皮細胞和癌細胞中的核轉(zhuǎn)位。檢查新霉素對cos-7細胞的神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子的作用。圖11顯示新霉素以劑量依賴性方式抑制ang在cos-7細胞的神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子中的核轉(zhuǎn)位。因此，人神經(jīng)叢蛋白b2cdna的轉(zhuǎn)染將cos-7細胞轉(zhuǎn)換為ang響應(yīng)細胞。就ang生物活性必需的ang的核轉(zhuǎn)位而言，cos-7細胞的神經(jīng)叢蛋白b2轉(zhuǎn)染子以與lncap細胞和稀疏培養(yǎng)的huve細胞(兩種已知的ang響應(yīng)細胞系)相似的方式起作用。實例4.ang結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)ι窠?jīng)叢蛋白b2的作圖。神經(jīng)叢蛋白b2是具有大細胞外部分和相對小的細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的單次跨膜蛋白質(zhì)(圖12a)。細胞外部分由sema結(jié)構(gòu)域、3個psi結(jié)構(gòu)域和3個tig結(jié)構(gòu)域組成。為了測定ang結(jié)合位點，制備一系列其中sema結(jié)構(gòu)域或3個psi結(jié)構(gòu)域之一已被缺失的缺失突變型(圖12a)。將這些缺失突變型轉(zhuǎn)染到cos-7細胞內(nèi)，并且通過免疫熒光測定ang在這些轉(zhuǎn)染子中的核轉(zhuǎn)位。如圖12b中所示，ang的核轉(zhuǎn)位仍在用突變體2、3和4轉(zhuǎn)染的cos-7細胞而不是突變體1轉(zhuǎn)染的細胞中發(fā)生，指示ang與神經(jīng)叢蛋白b2的sema結(jié)構(gòu)域結(jié)合。通過這種方法，關(guān)于ang的假定結(jié)合位點位于神經(jīng)叢蛋白b2氨基酸序列的殘基316和449之間?；瘜W合成覆蓋這個區(qū)域的一系列18個氨基酸的肽，并且通過elisa以及通過平衡分析檢查它們與ang蛋白質(zhì)的結(jié)合親和力。發(fā)現(xiàn)具有氨基酸序列g(shù)tsseydsilveinkrvk(seqidno:1)、ldkvhakmeanrnac(seqidno:2)和rdglrgtavlqrgglnl(seqidno:3)的肽能夠與ang結(jié)合，指示這些氨基酸序列是神經(jīng)叢蛋白b2的ang結(jié)合表位。實例5.對于神經(jīng)叢蛋白b2的ang結(jié)合表位特異性的抗體抑制ang活性。以0.2μm的表觀kd結(jié)合ang，由seqidno:1表示的這個ang結(jié)合肽用于生成如本文描述的多克隆抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體。圖10a顯示用這個親和力純化的抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體處理lncap細胞阻斷ang的核轉(zhuǎn)位，而非免疫igg對ang的核轉(zhuǎn)位無作用(圖13a)。類似地，抗神經(jīng)叢蛋白b2抗體抑制ang誘導的內(nèi)皮管形成(圖13b)以及l(fā)ncap細胞增殖(圖13c)。實例6.在前列腺癌組織中增強的神經(jīng)叢蛋白b2表達。在人和小鼠癌組織中檢查神經(jīng)叢蛋白b2的表達水平。圖14a描述神經(jīng)叢蛋白b2在人前列腺組織陣列中的ihc染色。癌組織(上2行)具有比良性前列腺增生(bph)(下2行)顯著更強的染色。該陣列上的2個正常前列腺組織樣品(最右側(cè))不具有染色或具有極弱的染色。圖14b描述正常和前列腺癌組織的高倍放大圖像。神經(jīng)叢蛋白b2位于癌細胞的細胞表面上(箭頭)。神經(jīng)叢蛋白b2也在mpakt小鼠的pin組織中過表達(圖14c和14d)。ihc和if兩者均顯示神經(jīng)叢蛋白b2在腺間血管的內(nèi)皮細胞(圖14c和圖14d中的箭頭)以及pin組織的腺上皮細胞中強烈表達，但在wt小鼠中極弱表達。實例7.針對神經(jīng)叢蛋白b2的ang結(jié)合表位的抗體抑制小鼠中的腫瘤生長研究上文描述的神經(jīng)叢蛋白b2抗體針對在無胸腺小鼠中的pc-3細胞腫瘤的異種移植物生長的抑制活性。60μg/小鼠的神經(jīng)叢蛋白b2抗體的s.c.注射的每天處理使pc-3細胞腫瘤的建立減少50％(含有33μl基質(zhì)膠的100μl體積中的1x106細胞)(圖15a)。對照組(pbs處理)中的所有小鼠(n＝6)到第18天時發(fā)展可觸摸腫瘤。然而，一半神經(jīng)叢蛋白b2抗體處理的小鼠在實驗結(jié)束時(第40天)從未發(fā)展腫瘤。在的確發(fā)展腫瘤的小鼠中，它們的生長率顯著減慢(圖15b-d)。pbs處理和神經(jīng)叢蛋白b2抗體處理的動物中的平均腫瘤重量分別為0.96±0.24g和0.2±0.16g。因此，神經(jīng)叢蛋白b2igg使無胸腺小鼠中的pc-3細胞腫瘤生長減少79％。通過引用并入本文提及的所有出版物、專利和專利申請均通過引用在此全文并入，如同每個個別出版物、專利或?qū)＠暾執(zhí)貏e且個別指出通過引用并入相同。在沖突的情況下，以本申請包括本文的任何定義為準。等價方案本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到或能夠使用不超過例行實驗確定與本文描述的本發(fā)明的具體實施例的許多等價方案。此類等價方案預期由下述權(quán)利要求包含。序列表<110>哈佛大學校長及研究員協(xié)會<120>神經(jīng)叢蛋白b2活性的調(diào)節(jié)劑<130>hmv-211.25<140>pct/us2012/030923<141>2012-03-28<150>61/543,992<151>2011-10-06<150>61/468,271<151>2011-03-28<160>21<170>patentinversion3.5<210>1<211>18<212>prt<213>智人<400>1glythrserserglutyraspserileleuvalgluileasnlysarg151015vallys<210>2<211>15<212>prt<213>智人<400>2leuasplysvalhisalalysmetglualaasnargasnalacys151015<210>3<211>17<212>prt<213>智人<400>3argaspglyleuargglythralavalleuglnargglyglyleuasn151015leu<210>4<211>1838<212>prt<213>智人<400>4metalaleuglnleutrpalaleuthrleuleuglyleuleuglyala151015glyalaserleuargproarglysleuaspphepheargserglulys202530gluleuasnhisleualavalaspglualaserglyvalvaltyrleu354045glyalavalasnalaleutyrglnleuaspalalysleuglnleuglu505560glnglnvalalathrglyproalaleuaspasnlyslyscysthrpro65707580proileglualaserglncyshisglualaglumetthraspasnval859095asnglnleuleuleuleuaspproproarglysargleuvalglucys100105110glyserleuphelysglyilecysalaleuargalaleuserasnile115120125serleuargleuphetyrgluaspglyserglyglulysserpheval130135140alaserasnaspgluglyvalalathrvalglyleuvalserserthr145150155160glyproglyglyaspargvalleuphevalglylysglyasnglypro165170175hisaspasnglyileilevalserthrargleuleuaspargthrasp180185190serargglualapheglualatyrthrasphisalathrtyrlysala195200205glytyrleuserthrasnthrglnglnphevalalaalaphegluasp210215220glyprotyrvalphephevalpheasnglnglnasplyshisproala225230235240argasnargthrleuleualaargmetcysarggluaspproasntyr245250255tyrsertyrleuglumetaspleuglncysargaspproaspilehis260265270alaalaalapheglythrcysleualaalaservalalaalaprogly275280285serglyargvalleutyralavalpheserargaspserargserser290295300glyglyproglyalaglyleucysleupheproleuasplysvalhis305310315320alalysmetglualaasnargasnalacystyrthrglythrargglu325330335alaargaspilephetyrlysprophehisglyaspileglncysgly340345350glyhisalaproglyserserlysserpheprocysglysergluhis355360365leuprotyrproleuglyserargaspglyleuargglythralaval370375380leuglnargglyglyleuasnleuthralavalthrvalalaalaglu385390395400asnasnhisthrvalalapheleuglythrseraspglyargileleu405410415lysvaltyrleuthrproaspglythrserserglutyraspserile420425430leuvalgluileasnlysargvallysargaspleuvalleusergly435440445aspleuglyserleutyralametthrglnasplysvalpheargleu450455460provalglnglucysleusertyrprothrcysthrglncysargasp465470475480serglnaspprotyrcysglytrpcysvalvalgluglyargcysthr485490495arglysalaglucysproargalagluglualaserhistrpleutrp500505510serargserlyssercysvalalavalthrseralaglnproglnasn515520525metserargargalaglnglygluvalglnleuthrvalserproleu530535540proalaleuserglugluaspgluleuleucysleupheglygluser545550555560proprohisproalaargvalgluglyglualavalilecysasnser565570575proserserileprovalthrproproglyglnasphisvalalaval580585590thrileglnleuleuleuargargglyasnilepheleuthrsertyr595600605glntyrprophetyraspcysargglnalametserleuglugluasn610615620leuprocysilesercysvalserasnargtrpthrcysglntrpasp625630635640leuargtyrhisglucysargglualaserproasnprogluaspgly645650655ilevalargalahismetgluaspsercysproglnpheleuglypro660665670serproleuvalileprometasnhisgluthraspvalasnphegln675680685glylysasnleuaspthrvallysglyserserleuhisvalglyser690695700aspleuleulysphemetgluprovalthrmetglngluserglythr705710715720phealapheargthrprolysleuserhisaspalaasngluthrleu725730735proleuhisleutyrvallyssertyrglylysasnileaspserlys740745750leuhisvalthrleutyrasncysserpheglyargseraspcysser755760765leucysargalaalaasnproasptyrargcysalatrpcysglygly770775780glnserargcysvaltyrglualaleucysasnthrthrserglucys785790795800proproprovalilethrargileglnprogluthrglyproleugly805810815glyglyileargilethrileleuglyserasnleuglyvalglnala820825830glyaspileglnargileservalalaglyargasncysserphegln835840845progluargtyrservalserthrargilevalcysvalilegluala850855860alagluthrprophethrglyglyvalgluvalaspvalpheglylys865870875880leuglyargserproproasnvalglnphethrpheglnglnprolys885890895proleuservalgluproglnglnglyproglnalaglyglythrthr900905910leuthrilehisglythrhisleuaspthrglyserglngluaspval915920925argvalthrleuasnglyvalprocyslysvalthrlyspheglyala930935940glnleuglncysvalthrglyproglnalathrargglyglnmetleu945950955960leugluvalsertyrglyglyserprovalproasnproglyilephe965970975phethrtyrarggluasnprovalleuargalaphegluproleuarg980985990serphealaserglyglyargserileasnvalthrglyglnglyphe99510001005serleuileglnargphealametvalvalilealagluproleu101010151020glnsertrpglnproproargglualagluserleuglnpromet102510301035thrvalvalglythrasptyrvalphehisasnaspthrlysval104010451050valpheleuserproalavalproglugluproglualatyrasn105510601065leuthrvalleuileglumetaspglyhisargalaleuleuarg107010751080thrglualaglyalapheglutyrvalproaspprothrpheglu108510901095asnphethrglyglyvallyslysglnvalasnlysleuilehis110011051110alaargglythrasnleuasnlysalametthrleuglngluala111511201125glualaphevalglyalagluargcysthrmetlysthrleuthr113011351140gluthraspleutyrcysgluproprogluvalglnpropropro114511501155lysargargglnlysargaspthrthrhisasnleuprogluphe116011651170ilevallyspheglyserargglutrpvalleuglyargvalglu117511801185tyraspthrargvalseraspvalproleuserleuileleupro119011951200leuvalilevalprometvalvalvalilealavalservaltyr120512101215cystyrtrparglysserglnglnalagluargglutyrglulys122012251230ilelysserglnleugluglyleuglugluservalargasparg123512401245cyslyslysgluphethraspleumetileglumetgluaspgln125012551260thrasnaspvalhisglualaglyileprovalleuasptyrlys126512701275thrtyrthraspargvalphepheleuproserlysaspglyasp128012851290lysaspvalmetilethrglylysleuaspileprogluproarg129513001305argprovalvalgluglnalaleutyrglnpheserasnleuleu131013151320asnserlysserpheleuileasnpheilehisthrleugluasn132513301335glnargglupheseralaargalalysvaltyrphealaserleu134013451350leuthrvalalaleuhisglylysleuglutyrtyrthraspile135513601365methisthrleupheleugluleuleugluglntyrvalvalala137013751380lysasnprolysleumetleuargargsergluthrvalvalglu138513901395argmetleuserasntrpmetserilecysleutyrglntyrleu140014051410lysaspseralaglygluproleutyrlysleuphelysalaile141514201425lyshisglnvalglulysglyprovalaspalavalglnlyslys143014351440alalystyrthrleuasnaspthrglyleuleuglyaspaspval144514501455glutyralaproleuthrvalservalilevalglnaspglugly146014651470valaspalaileprovallysvalleuasncysaspthrileser147514801485glnvallysglulysileileaspglnvaltyrargglyglnpro149014951500cyssercystrpproargproaspservalvalleuglutrparg150515101515proglyserthralaglnileleuseraspleuaspleuthrser152015251530glnarggluglyargtrplysargvalasnthrleumethistyr153515401545asnvalargaspglyalathrleuileleuserlysvalglyval155015551560serglnglnprogluaspserglnglnaspleuproglygluarg156515701575hisalaleuleugluglugluasnargvaltrphisleuvalarg158015851590prothraspgluvalaspgluglylysserlysargglyserval159516001605lysglulysgluargthrlysalailethrgluiletyrleuthr161016151620argleuleuservallysglythrleuglnglnphevalaspasn162516301635phepheglnservalleualaproglyhisalavalproproala164016451650vallystyrphepheasppheleuaspgluglnalaglulyshis165516601665asnileglnaspgluaspthrilehisiletrplysthrasnser167016751680leuproleuargphetrpvalasnileleulysasnprohisphe168516901695ilepheaspvalhisvalhisgluvalvalaspalaserleuser170017051710valilealaglnthrphemetaspalacysthrargthrgluhis171517201725lysleuserargaspserproserasnlysleuleutyralalys173017351740gluileserthrtyrlyslysmetvalgluasptyrtyrlysgly174517501755ileargglnmetvalglnvalseraspglnaspmetasnthrhis176017651770leualagluileserargalahisthraspserleuasnthrleu177517801785valalaleuhisglnleutyrglntyrthrglnlystyrtyrasp179017951800gluileileasnalaleuglugluaspproalaalaglnlysmet180518101815glnleualapheargleuglnglnilealaalaalaleugluasn182018251830lysvalthraspleu1835<210>5<211>147<212>prt<213>智人<400>5metvalmetglyleuglyvalleuleuleuvalphevalleuglyleu151015glyleuthrproprothrleualaglnaspasnserargtyrthrhis202530pheleuthrglnhistyraspalalysproglnglyargaspasparg354045tyrcysgluserilemetargargargglyleuthrserprocyslys505560aspileasnthrpheilehisglyasnlysargserilelysalaile65707580cysgluasnlysasnglyasnprohisarggluasnleuargileser859095lysserserpheglnvalthrthrcyslysleuhisglyglyserpro100105110trpproprocysglntyrargalathralaglypheargasnvalval115120125valalacysgluasnglyleuprovalhisleuaspglnserilephe130135140argargpro145<210>6<211>25<212>prt<213>智人<400>6serphevalalaserasnaspgluglyvalalathrvalglyleuval151015serserthrglyproglyglyasparg2025<210>7<211>18<212>prt<213>智人<400>7valaspvalserglnglnprogluaspserglnglnaspleuprogly151015gluarg<210>8<211>16<212>prt<213>智人<400>8leuglnleugluglnglnvalalathrglyproalaleuaspasnlys151015<210>9<211>15<212>prt<213>智人<220><221>mod_res<222>(2)..(2)<223>氧化的甲硫氨酸<400>9alametthrleuglnglualaglualaphevalglyalagluarg151015<210>10<211>16<212>prt<213>智人<400>10leuprovalglnglucysleusertyrprothrcysthrglncysarg151015<210>11<211>15<212>prt<213>智人<400>11aspserglnaspprotyrcysglytrpcysvalvalgluglyarg151015<210>12<211>15<212>prt<213>智人<400>12alametthrleuglnglualaglualaphevalglyalagluarg151015<210>13<211>13<212>prt<213>智人<400>13serproproasnvalglnphethrpheglnglnprolys1510<210>14<211>13<212>prt<213>智人<400>14glualapheglualatyrthrasphisalathrtyrlys1510<210>15<211>12<212>prt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