本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及藥物化學(xué)合成領(lǐng)域，具體是指知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物、其藥物組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥是目前危害人類健康最主要的疾病之一，全球約有15％的人類死亡都是由癌癥引起的?，F(xiàn)在癌癥的治療手段主要有手術(shù)切除、放射性療法、化學(xué)療法或這些方法的并用，但在很大程度上仍以化學(xué)療法為主。癌癥的產(chǎn)生和發(fā)展是外界環(huán)境因素與遺傳物質(zhì)相互作用的結(jié)果。惡性腫瘤的形成與發(fā)展的重要基礎(chǔ)是細(xì)胞的失控增殖與轉(zhuǎn)移擴散，因此可以通過控制細(xì)胞凋亡的途徑與發(fā)放從而達(dá)到治療腫瘤疾病的目的，這也是目前治療癌癥的一種重要手段。隨著眾多學(xué)科的發(fā)展，抗癌藥物的種類明顯增多，有細(xì)胞毒類藥物、激素類藥物、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、單克隆抗體藥物等。尋找高效、高選擇性、低毒、無耐藥性并且急需的新型抗癌藥物仍然極具挑戰(zhàn)性，且相當(dāng)迫切。中國具有豐富的中藥資源，一些天然產(chǎn)物也有被用于抗腫瘤治療的，比如喜樹堿。螺甾烷皂苷已被證明具有多種活性，比如：抗菌、抗病毒、抗真菌、抗炎活性，還能抗血小板聚集、抗糖尿病和良好的細(xì)胞毒性。

知母是我國常見的中藥之一，它是百合科植物知母anemarrhenaasphodeloidesbunge的干燥塊莖，具有消渴熱中、除邪氣、消除肢體浮腫之功效，為常用的滋陰藥之一。它的提取物已經(jīng)被證明具有利尿、抗糖尿病、抗血小板凝集、抗真菌等生物活性，而且也表現(xiàn)出對環(huán)腺苷酸磷酸二酯酶的抑制作用。

知母皂苷aiii是一種特殊的螺甾烷皂苷，它具有相當(dāng)?shù)目拱┗钚?。yinyuan的文章(steroids93(2015))中提出，知母皂苷aiii的細(xì)胞毒性機理與腫瘤細(xì)胞的應(yīng)答有關(guān)，比如：mtorc1和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(erstress)的抑制，自體吞噬的引發(fā)。知母皂苷aiii引起的自體吞噬對腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞都有保護作用，而在腫瘤細(xì)胞中，mtorc1抑制和erstress介導(dǎo)的促凋亡作用占優(yōu)勢。這些研究結(jié)果表明知母皂苷aiii可能成為具有良好前景的選擇性抗癌藥物。

也有研究表明知母皂苷元能明顯抑制肝癌細(xì)胞hepg2的增殖，促進細(xì)胞凋亡，并且凋亡率的增加呈劑量和時間依賴性。這說明知母皂苷元能誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡。

誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞向正常表型分化是腫瘤治療的新途徑之一，尋找低毒高效的分化誘導(dǎo)劑是誘導(dǎo)分化治療的關(guān)鍵。一些天然產(chǎn)物如人參皂苷等能誘導(dǎo)多種惡性細(xì)胞的表型逆轉(zhuǎn)，包括白血病細(xì)胞、畸胎瘤細(xì)胞、肝癌細(xì)胞等。這說明天然產(chǎn)物在對癌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化方面具有一定的應(yīng)用前景。

線粒體是產(chǎn)生活性氧簇(ros)的場所，而高濃度的ros會引起諸如脂類、蛋白質(zhì)和核酸等大分子的氧化，造成基因組的不穩(wěn)定，促進細(xì)胞癌變。知母皂苷元具有抗氧化能力，可以維持ros在一個平衡的狀態(tài)，因此可以通過抗氧化的途徑的來達(dá)到抗腫瘤的目的。

所以，用于制備抗癌藥物的知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物是十分具有實用價值的。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺失，提供可用于制備抗癌藥物的知母皂苷元衍生物，并提供了知母皂苷元衍生物的合成路線，本發(fā)明還提供了知母皂苷元衍生物在抗癌抗腫瘤方面的實驗數(shù)據(jù)。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明第一方面提供了一種知母皂苷元衍生物，其中所述知母皂苷元衍生物是具有下述通式(1)的化合物：

當(dāng)x＝o時，y是下述代表性的基團的任意一種：

其中r1、r2各自獨立地為h、取代或未取代的c1-8的直鏈或支鏈的烷基、取代或未取代的芐基、取代或未取代的芳基中的一種；r3為h、取代或未取代的c1-8的直鏈或支鏈的烷基、取代或未取代的芐基、取代或未取代的芳基、中的一種，

當(dāng)x＝nh時，y是其中r4、r5各自獨立地為h、取代或未取代的c1-8的直鏈或支鏈的烷基、取代或未取代的芐基、取代或未取代的芳基中的一種。

較佳地，當(dāng)r1、r2、r3為取代的c1-8的直鏈或支鏈的烷基時，所述的c1-8的直鏈或支鏈的烷基的取代基為胺基、芳基或氰基中的一種；當(dāng)r1、r2、r3為取代的芳基時，所述的取代的芳基的取代基為鹵素、胺基或烷氧基中的一種；當(dāng)r1、r2、r3為取代的芐基時，所述的取代的芐基的取代基為c1-4不飽和烷基、烷氧基、氰基、羥基、鹵素或胺基中的一種或多種。

較佳地，當(dāng)r4、r5為取代的c1-8的直鏈或支鏈的烷基時，所述的c1-8的直鏈或支鏈的烷基的取代基為芳基、氨基或雜環(huán)中的一種；當(dāng)r4、r5為取代的芳基時，所述的取代的芳基的取代基為鹵素、胺基或烷氧基中的一種；當(dāng)r4、r5為取代的芐基時，所述的取代的芐基的取代基為烷氧基、烷基、羥基、鹵素或胺基中的一種或多種。

當(dāng)r3是中的一種時，其中r6、r7各自獨立地為取代或未取代的c1-8的直鏈或支鏈的烷基、取代或未取代的芳基中的一種。

本專利所用“一個”或“一種”或“一類”意指最少一個/種/類或一個/種/類或一個/種/類以上。

本發(fā)明所用的“烷基”意指各種飽和的直鏈的、帶側(cè)鏈的或環(huán)狀的碳?xì)浠鶊F，特包括含有十個或十個碳以下的小烷基。

本發(fā)明所用的“芳基”為環(huán)狀共軛芳香系統(tǒng)并可在環(huán)中含有一個或一個以上的非碳原子(除碳以外的其他雜原子如氮)，如苯基、萘基和吡啶基。

特別值得進一步說明的是，上述所定義的各種取代基還包括它們被進一步取代而構(gòu)成的基團，其中這些新的取代基也可含有其他的基團。例如烷基和芳香基上的氫原子被氨基、鹵素或其他基團取代即成為新的屬于上述各定義中的基團。

本發(fā)明的具有代表性的知母皂苷元衍生物的結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明第二方面提供了一種藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物包含根據(jù)權(quán)利要求任一項所述的知母皂苷元衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及任選的藥學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明第三方面提供了上述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

采用本發(fā)明的知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物，其藥物組合物及其應(yīng)用，首次對該先導(dǎo)化合物進行了系統(tǒng)的針對3位的羥基的結(jié)構(gòu)修飾，合成了一系列的新化合物，這些新合成的化合物通過相關(guān)靶點的活性測試，很多顯示出優(yōu)于先導(dǎo)化合物的活性，對于治療癌癥十分具有價值。彌補了現(xiàn)有技術(shù)中知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物的不足，十分具有意義。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物化合物cm2對荷瘤裸鼠體重變化的影響曲線示意圖。

圖2為本發(fā)明的知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物化合物cm2對腫瘤體積變化的影響曲線示意圖。

圖3為本發(fā)明的知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物化合物am2對荷瘤裸鼠體重變化的影響曲線示意圖。

圖4為本發(fā)明的知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物化合物am2對腫瘤體積變化的影響曲線示意圖。

具體實施方式

為了能夠更清楚地理解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，下面對本發(fā)明的具體實施方法作進一步說明。

實施例1

知母皂苷元sa的制備的方法如下：

按知母根莖藥于50％-90％的乙醇的重量份數(shù)1:2-1:4回流提取三次，過濾，揮干乙醇。乙醇粗提物分散于5％的h2so4中，加熱水解4-10小時，酸水解產(chǎn)物用dcm萃取多次，除去dcm得到知母皂苷元的粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物用石油醚-丙酮(20:1)洗脫，得到知母皂苷元sa。

知母皂苷元sa

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.42(m,1h,h-20),4.12(s,1h,h-3),3.97(d,j＝11.0hz,1h,h-26),3.31(d,j＝11.0hz,1h,h-26),2.07–0.98(m,37h),0.77(s,3h).13cnmr(101mhz,cdcl3)δ109.75,81.02,67.08,65.14,62.08,56.47,42.11,40.67,40.31,39.85,36.52,35.27(2c),33.53,31.74,29.95,27.81,27.08,26.56,26.54,25.94,25.77,23.92,20.90,16.50,16.05,14.34.ms(esi):m/z416.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc27h44o3:416.3312；found:416.3308.

實施例2

知母皂苷元氨基甲酸酯類衍生物cm1-cm15的制備

中間體s1的制備

在氬氣保護下，將知母皂苷元sa(1.664g，40mmol)和吡啶(0.5ml)溶于20ml的二氯甲烷中，冰浴中緩慢加入對硝基苯基氯甲酸酯(60mmol)然后升至室溫繼續(xù)反應(yīng)4小時。反應(yīng)完畢后，用100ml水淬滅，用二氯甲烷萃取(3*100ml)、合并有機相、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮后經(jīng)柱層析(丙酮/石油醚＝1:30)得到化合物s12.19g(95％)。

化合物cm1-cm15的制備

在氬氣保護下，將s1(58.1mg，1mmol)和三乙胺(0.05ml)溶于4ml的二氯甲烷中，冰浴中緩慢加入相應(yīng)的胺(1.5mmol)然后升至室溫繼續(xù)反應(yīng)3小時。反應(yīng)完畢后，用30ml水淬滅，用二氯甲烷萃取(3*30ml)、合并有機相、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮后經(jīng)柱層析(乙酸乙酯/石油醚＝1:30)得到化合物cm1-cm15(45％-85％)。

化合物cm1，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.99(s,1h),4.66(s,1h,nh),4.43(dd,j＝14.1,7.4hz,1h),3.97(dd,j＝11.1,2.4hz,1h),3.32(d,j＝11.1hz,1h),3.15(m,2h),0.97–2.02(m,38h),0.95(t,j＝7.4hz,3h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z502.35[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc31h52no4:502.1101；found:502.1104。

化合物cm2，白色固體¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.99(s,1h),4.70(s,1h),4.43(dd,j＝14.3,7.3hz,1h),3.97(d,j＝10.6hz,1h),3.32(d,j＝10.9hz,1h),3.02(t,j＝6.3hz,2h),1.12-2.12(m,27h),1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.01(m,6h),0.94(s,3h),0.93(s,3h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z516.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc32h53no4:516.1301；found:516.1308。

化合物cm3，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34(m,5h),5.05(s,1h,h-3),4.97(s,1h,nh),4.46–4.33(m,3h),3.97(dd,j＝11.0,2.4hz,1h),3.32(d,j＝11.0hz,1h),0.84-2.12(m,35h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z550.41[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc35h51no4:550.3810；found:550.3806。

化合物cm4，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.30(d,j＝7.4hz,2h),7.25(d,j＝7.4hz,2h),5.04(s,1h,h-3),4.93(s,1h,nh),4.44(dd,j＝14.2,7.0hz,1h),4.33(d,j＝4.7hz,2h,ch3ar-ch2-),3.97(d,j＝11.1hz,1h),3.32(d,j＝11.1hz,1h),2.37(s,3h),1.15-2.05(m,27h)1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.01(d,j＝6.5hz,3h),0.97(s,3h),0.79(s,3h).ms(esi):m/z584.40[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc35h51clno4:584.3411；found:584.3408。

化合物cm5，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.42(s,1h),7.30(m,1h),7.25(d,j＝7.4hz,1h),7.12(d,j＝7.5hz,1h)5.03(s,1h,h-3),4.93(s,1h,nh),4.44(dd,j＝14.2,7.0hz,1h),4.33(d,j＝4.7hz,2h,ch3ar-ch2-),3.97(d,j＝11.1hz,1h),3.32(d,j＝11.1hz,1h),2.37(s,3h),1.15-2.05(m,27h)1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.02(d,j＝6.5hz,3h),0.97(s,3h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z584.50[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc35h51clno4:584.3413；found:584.3409。

化合物cm6，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.21(d,j＝7.2hz,2h),7.16(d,j＝7.2hz,2h),5.04(s,1h,h-3),4.93(s,1h,nh),4.43(dd,j＝14.2,7.0hz,1h),4.34(d,j＝4.7hz,2h,ch3ar-ch2-),3.97(d,j＝11.0hz,1h),3.32(d,j＝11.0hz,1h),2.37(s,3h),1.15-2.05(m,27h)1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.01(d,j＝6.5hz,3h),0.97(s,3h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z564.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc36h54no4:564.4010；found:564.4008。

化合物cm7，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.19(d,j＝7.8hz,2h),6.81(d,j＝7.8hz,2h),5.04(s,1h.h-3),4.92(s,1h,nh),4.43(d,j＝7.2hz,1h),4.30(s,2h),3.98(d,j＝10.5hz,1h),3.33(d,j＝10.5hz,1h),1.12-2.12(m,27h),1.10(d,j＝7.2hz,3h),1.01(d,j＝6.4hz,3h),0.97(s,3h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z566.44[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc35h52no4:566.3810；found:566.3808。

化合物cm8，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.21(d,j＝7.6hz,2h),6.82(d,j＝7.6hz,2h),5.01(s,1h.h-3),4.94(s,1h,nh),4.44(d,j＝7.2hz,1h),4.31(s,2h),3.97(d,j＝10.4hz,1h),3.81(s,3h),3.32(d,j＝10.4hz,1h),1.13-2.15(m,27h),1.11(d,j＝7.2hz,3h),1.02(d,j＝6.4hz,3h),0.96(s,3h),0.77(s,3h).ms(esi):m/z580.41[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc36h54no4:580.3913；found:566.3808。

化合物cm9，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.99(s,1h),4.54(s,1h),4.43(d,j＝6.6hz,1h),3.98(d,j＝10.9hz,1h),3.49(s,1h),3.32(d,j＝10.9hz,1h),1.23-2.20(m,37h),1.10(d,j＝6.6hz,3h),1.01(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z542.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc34h56no4:542.4111；found:542.4104。

化合物cm10，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.99(s,1h),4.41(m,1h),3.95(dd,j＝11.0,2.3hz,1h),3.42(m,4h),3.30(d,j＝11.0hz,1h),1.23-2.20(m,33h),1.08(d,j＝7.0hz,3h),0.99(m,6h),0.76(s,3h).ms(esi):m/z528.44[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc33h54no4:528.4014；found:528.4015。

化合物cm11，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.02(s,1h),4.43(dd,j＝14.1,7.6hz,1h),3.97(dd,j＝10.9,2.4hz,1h),3.39(dd,j＝13.8,7.2hz,4h),3.32(d,j＝10.9hz,1h),1.23-2.21(m,31h),1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.04–0.97(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z514.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc32h52no4:514.3811；found:514.3815。

化合物cm12，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.01(s,1h),4.41(dd,j＝14.2,7.4hz,1h),3.95(dd,j＝11.0,2.3hz,1h),3.51–3.41(m,4h),3.30(d,j＝11.0hz,1h),2.90–2.73(m,4h),1.23-2.15(m,27h),1.08(d,j＝7.0hz,3h),1.01–0.93(m,6h),0.76(s,3h).ms(esi):m/z529.44[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc32h53n2o4:529.3905；found:529.3903。

化合物cm13，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.45(s,1h,nh),5.12(s,1h),4.41(dd,j＝14.2,7.2hz,1h),3.95(dd,j＝11.0,2.3hz,1h),3.30(d,j＝11.0hz,1h),2.05(s,2h),1.15-2.02(m,27h),1.08(d,j＝7.2hz,3h),0.99(d,j＝5.7hz,6h),0.76(s,3h).ms(esi):m/z475.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc28h47n2o4:475.3504；found:475.3508。

化合物cm14，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.46(s,1h),4.96(s,1h),4.40(dd,j＝14.6,7.3hz,1h),3.95(d,j＝11.0hz,1h),3.34(m,2h),3.30(d,j＝11.3hz,1h),3.09–2.92(m,2h),1.15-2.03(m,27h),1.08(d,j＝7.1hz,3h),1.02–0.91(m,6h),0.76(s,3h).ms(esi):m/z503.50[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc30h50n2o4:503.3801；found:503.3806。

化合物cm15，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.00(s,1h),4.41(dd,j＝14.3,7.3hz,1h),3.95(d,j＝11.0hz,1h),3.30(m,3h),1.11-2.01(m,27h),1.08(d,j＝7.0hz,3),0.99(d,j＝8.3hz,6h),0.76(s,3h).ms(esi):m/z527.40[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc30h47n4o4:527.3505；found:527.3501。

實施例3

知母皂苷元氨基甲酸酯類衍生物cm16-cm27的制備

在氬氣保護下，將cm12(53.2mg，1mmol)和相應(yīng)的醛溶于4ml的二氯乙烷中，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.5mmol)，一分鐘后加入三乙胺(0.05ml)。反應(yīng)完畢后，用30ml水淬滅，用二氯甲烷萃取(3*30ml)、合并有機相、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮后經(jīng)柱層析(丙酮:石油醚＝1:30)得到化合物cm16-cm27(50％-90％)。

化合物cm16，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.03(s,1h),4.52–4.36(m,1h),3.97(d,j＝10.5hz,1h),3.51(m,4h),3.32(d,j＝10.5hz,1h),2.42(m,4h),2.39–2.32(m,2h),1.12-2.08(m,29h)1.10(d,j＝6.9hz,3h),1.01(d,j＝7.2hz,3h),0.94-1.01(m,6h),0.78(s,4h).ms(esi):m/z571.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc35h59n2o4:571.4405；found:571.4401。

化合物cm17，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34-7.40(m,5h),6.55(d,j＝16.1hz,1h),6.35–6.23(m,1h),4.43(d,j＝7.8hz,1h),3.97(d,j＝11.0hz,1h),3.54(s,4h),3.32(d,j＝11.0hz,1h),3.20(d,j＝6.6hz,2h),2.50(s,4h),1.23-2.05(m,27h),1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.01(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z645.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc41h61n2o4:645.4401；found:645..4407。

化合物cm18，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.25-7.38(m,5h),5.02(s,1h),4.42(d,j＝7.3hz,1h),3.95(d,j＝10.1hz,1h),3.43-3.47(m,6h),3.33(d,j＝10.1hz,1h),2.42(s,4h),1.23-2.05(m,27h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),1.05–0.96(m,6h),0.79(s,3h).ms(esi):m/z620.50[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc39h59n2o4:620.4411；found:620.4412。

化合物cm19，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.23(d,j＝7.4hz,2h),7.18(d,j＝7.4hz,2h),5.03(s,1h),4.43(d,j＝7.3hz,1h),3.96(d,j＝10.1hz,1h),3.44-3.48(m,6h),3.32(d,j＝10.1hz,1h),2.41(s,4h),2.36(s,3h),1.23-2.05(m,27h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),1.05–0.96(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z633.54[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc40h61n2o4:633.4604；found:633.4612。

化合物cm20，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7,32(m,2h),7.13(d,j＝8.3hz,2h),5.01(s,1h),4.44(d,j＝7.3hz,1h),3.96(d,j＝10.1hz,1h),3.46-3.49(s,6h),3.32(d,j＝10.1hz,1h),2.41(m,4h),1.23-2.05(m,27h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),1.05–0.96(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z653.50[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc39h58cln2o4:653.4516；found:653.4512。

化合物cm21，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7,32(m,2h),7.03(m,2h),5.02(s,1h),4.43(d,j＝7.2hz,1h),3.98(d,j＝10.0hz,1h),3.50(m,6h),3.32(d,j＝10.0hz,1h),2.41(m,4h),1.23-2.03(m,27h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),1.05–0.96(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z636.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc39h58fn2o4:636.4306；found:636.4301。

化合物cm22，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.16(d,j＝8.2hz,2h),6.77(d,j＝8.2hz,2h),4.41(dd,j＝14.4,7.2hz,1h),3.95(d,j＝8.7hz,1h),3.53–3.38(m,6h),3.30(d,j＝10.3hz,1h),2.39(m,4h),1.17-2.07(m,27h),1.06(t,j＝10.3hz,3h),1.01–0.92(m,6h),0.77(d,j＝10.0hz,3h).ms(esi):m/z634.55[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc39h59n2o5:636.4306；found:636.4301。

化合物cm23，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.21(t,j＝7.8hz,1h),7.00(d,j＝7.3hz,1h),6.83(m,2h),5.04(s,1h),4.43(d,j＝7.5hz,1h),3.97(d,j＝10.7hz,1h),3.75(m,2h),3.52-3.55(m,4h),3.32(d,j＝10.7hz,1h),2.55-2.58(m,4h),1,18-2.07(m,27h),1.10(d,j＝6.9hz,4h),1.05–0.96(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z634.53[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc39h59n2o5:636.4303；found:636.4304。

化合物cm24，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝8.0hz,2h),6.88(d,j＝8.0hz,2h),5.02(s,1h),4.43(dd,j＝13.8,6.8hz,1h),3.97(d,j＝10.6hz,1h),3.83(s,3h),3.48(m,6h),3.32(d,j＝10.6hz,1h),2.41(m,4h),1.16-2.05(m,27h),1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.05–0.93(m,6h),0.79(s,3h).ms(esi):m/z649.50[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc40h61n2o5:649.4513；found:649.4512。

化合物cm25，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.85-6.89(m,2h),6.80(d,j＝8.0hz,1h),5.58(s,1h,ar-oh),5.02(s,1h),4.43(d,j＝7.0hz,1h),3.98(d,j＝11.3hz,1h),3.92(s,3h),3.46-3.50(m,6h),3.32(d,j＝11.3hz,1h),2.41(m,4h),1.15-2.06(m,27h),1.10(d,j＝6.7hz,3h),1.04–0.96(m,5h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z665.50[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc40h61n2o6:664.4518；found:664.4515。

化合物cm26，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.19(d,j＝8.0hz,2h),6.73(d,j＝8.0hz,2h),5.02(s,1h),4.43(d,j＝7.0hz,1h),3.97(d,j＝10.6hz,1h),3.47(m,6h),3.38–3.27(m,1h),2.96(s,6h),2.41(m,4h),1.13-2.03(m,27h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),1.04–0.97(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z661.60[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc41h64n3o4:661.4613；found:661.4615。

化合物cm27，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24.7.28(m,2h),7.03(d,j＝8.1hz,2h),5.02(s,1h),4.43(d,j＝7.2hz,1h),3.98(d,j＝10.0hz,1h),3.50(s,6h),3.32(d,j＝10.0hz,1h),2.41(s,4h),1.12-2.05(m,27h),1.09(t,j＝9.6hz,3h),1.06–0.96(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z643.50[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc40h58n3o4:643.4316；found:643.43。

實施例4

知母皂苷元氨基甲酸酯類衍生物cm28-cm34的制備

在氬氣保護下，將cm12(53.2mg，1mmol)、edci(1.3ml)以及相應(yīng)的酸(2mmol)溶于5ml的二氯甲烷中，然后加入催化當(dāng)量的dmap(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應(yīng)3小時。反應(yīng)完畢后，用30ml水淬滅，用二氯甲烷萃取(3*30ml)、合并有機相、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮后經(jīng)柱層析(丙酮/石油醚＝1:30)得到化合物cm28-cm34(50％-96％)。

化合物cm28，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.45-7.62(m,5h),5.06(s,1h),4.43(dd,j＝14.5,7.4hz,1h),3.97(d,j＝11.0hz,1h),3.34-3.75(m,8h),3.32(d,j＝11.0hz,1h),1.23-2.07(m,27h),1.10(d,j＝7.1hz,3h),1.09–0.95(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z633.55[m+h]⁺；hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc39h57n2o5:633.4213；found:633.4210。

化合物cm29，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.43(d,j＝8.3hz,2h),7.38(d,j＝8.3hz,2h),5.06(s,1h),4.43(d,j＝6.8hz,1h),3.98(d,j＝11.1hz,1h),3.45-3.75(m,8h),3.32(d,j＝11.1hz,1h),1.23-2.05(m,27h),1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.02(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z667.45[m+h]⁺；hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc39h56cln2o5:667.3816；found:667.3814。

化合物cm30，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.25(m,2h),6.68(d,j＝7.4hz,2h),5.05(s,1h),4.43(d,j＝7.4hz,1h),3.98(d,j＝10.7hz,1h),3.90(s,2h),3.64(m,4h),3.53(m,4h),3.32(d,j＝10.7hz,1h),1.15-2.05(m,27h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),1.01(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z648.45[m+h]⁺；hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc39h58n3o5:648.4416；found:648.4412。

化合物cm31，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.41(d,j＝8.6hz,2h),6.95(d,j＝8.6hz,2h),5.06(s,1h),4.46–4.39(m,1h),3.97(d,j＝11.1hz,1h),3.86(s,3h),3.45-3.3.59(m,8h),3.32(d,j＝11.1hz,1h),1.16-2.06(m,27h),1.09(t,j＝9.4hz,3h),1.01-1.03(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z662.45[m+h]⁺；hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc40h59n2o6:662.4312；found:662.4310。

化合物cm32，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.06(s,1h),4.41(m,1h),3.95(d,j＝10.9hz,1h),3.73-3.80(m,5h),3.61–3.49(m,4h),3.42(m,2h),3.30(d,j＝10.9hz,1h),1.15-2.06(m,31h),1.07(d,j＝7.1hz,3h),1.03–0.93(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z513.55[m+h]⁺；hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc32h53n2o3:513.4014；found:513.4019。

化合物cm33，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.64(d,j＝15.3hz,1h),7.10(d,j＝8.2hz,1h),7.00(s,1h),6.92(d,j＝8.2hz,1h),6.70(d,j＝15.3hz,1h),5.85(s,1h,-oh),5.04(s,1h),4.41(dd,j＝14.2,7.3hz,1h),3.95(d,j＝11.0hz,3h),3.70(s,4h),3.54(s,4h),3.30(d,j＝11.0hz,1h),1.15-2.10(m,27h),1.08(d,j＝7.0hz,3h),0.96-0.98(m,6h),0.76(s,3h).ms(esi):m/z704.50[m+h]⁺；hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc42h61n2o7:705.4403；found:704.4401。

化合物cm34，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.05(s,1h),4.43(d,j＝6.8hz,1h),3.97(d,j＝10.2hz,1h),3.64(s,2h),3.48-3.52(m,8h),3.33(d,j＝10.2hz,1h),1.15-2.10(m,27h),1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.05–0.96(m,6h),0.79(s,3h).ms(esi):m/z615.45[m+h]⁺；hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc35h55n2o7:615.4003；found:615.4011。

實施例5

知母皂苷元氨基甲酸酯類衍生物cm35-cm41的制備

在氬氣保護下，將知母皂苷元cm12(53.2mg，0.1mmol)和三乙胺(0.1ml)溶于3ml的二氯甲烷中，冰浴中慢慢加入相應(yīng)的黃酰氯(0.15mmol)然后升至室溫繼續(xù)反應(yīng)3小時。反應(yīng)完畢后，用20ml水淬滅，用二氯甲烷萃取(3*20ml)、合并有機相、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮后經(jīng)柱層析(丙酮/石油醚＝1:20)得到化合物cm35-cm41。

化合物cm35，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.20-7.55(m,5h),4.98(s,1h),4.42(d,j＝7.5hz,1h),3.97(d,j＝10.4hz,1h),3.58(s,4h),3.32(d,j＝10.4hz,1h),3.00(s,4h),2.46(s,3h),1.10(d,j＝6.8hz,3h),1.15-2.05(m,26h),1.03–0.96(m,6h),0.96–0.95(m,1h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z669.53[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc38h57n2o6s:669.3912；found:669.3910。

化合物cm36，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.66(d,j＝7.8hz,2h),7.36(d,j＝7.8hz,2h),4.97(s,1h),4.42(d,j＝7.5hz,1h),3.97(d,j＝10.4hz,1h),3.58(s,4h),3.32(d,j＝10.4hz,1h),3.00(s,4h),2.46(s,3h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),1.15-2.05(m,26h),1.03–0.96(m,6h),0.96–0.95(m,1h),0.77(s,3h).ms(esi):m/z683.50[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc39h59n2o6s:683.4017；found:683.4015。

化合物cm37，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.81(s,1h),7.64(d,j＝7.7hz,1h),7.56(m,1h),7.23(d,j＝7.5hz),4.99(s,1h),4.42(d,j＝7.5hz,1h),3.97(d,j＝10.4hz,1h),3.58(s,4h),3.32(d,j＝10.4hz,1h),3.00(s,4h),2.46(s,3h),1.11(d,j＝6.9hz,3h),1.15-2.05(m,26h),1.03–0.96(m,6h),0.96–0.95(m,1h),0.79(s,3h).ms(esi):m/z683.50[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc39h59n2o6s:683.4017；found:683.4015。

化合物cm38，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(dd,j＝7.1,5.1hz,2h),7.25(m,2h),4.98(s,1h),4.42(d,j＝7.4hz,1h),3.97(d,j＝10.5hz,1h),3.59(s,4h),3.32(d,j＝10.5hz,1h),3.02(s,4h),1.15-2.05(m,27h),1.09(t,j＝7.7hz,3h),1.04–0.93(m,7h),0.79(d,j＝10.7hz,3h).ms(esi):m/z687.40[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc38h56fn2o6s:687.3817；found:687.3813。

化合物cm39，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.57(s,2h),7.49(d,j＝8.1hz,1h),7.36(s,1h),4.98(s,1h),4.42(d,j＝7.2hz,1h),3.97(d,j＝10.4hz,1h),3.60(s,4h),3.32(d,j＝10.4hz,1h),3.05(s,4h),1.15-2.05(m,27h),1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.00(d,j＝10.3hz,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z687.40[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc38h56fn2o6s:687.3816；found:687.3812。

化合物cm40，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.08(s,1h),7.88(d,j＝8.5hz,1h),7.73(d,j＝8.5hz,1h),4.99(s,1h),4.42(d,j＝7.6hz,1h),3.97(d,j＝10.5hz,1h),3.61(m,4h),3.32(d,j＝11.4hz,1h),3.07(m,4h),1.14-2.04(m,27h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),1.00(d,j＝10.4hz,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z771.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc39h55clf3n2o6s:771.3310；found:771.3314。

化合物cm41，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.05(s,1h),4.43(dd,j＝14.4,7.1hz,1h),3.97(d,j＝11.1hz,1h),3.57-3.59(m,4h),3.30-3.35(m,5h),2.99(q,j＝7.3hz,2h),1.12-2.05(m,27h),1.10(d,j＝7.0hz,3h),1.05–0.97(m,6h),0.78(s,3h).ms(esi):m/z621.45[m+h]+；hrms(esi):m/z[m+h]+calcdforc34h57fn2o6s:621.3913；found:621.3911。

實施例6

知母皂苷元氨基甲酸酯類衍生物cm42的制備

在氬氣保護下，將s1(58.1mg，0.1mmol)和三乙胺(0.05ml)溶于4ml的二氯甲烷中，冰浴中緩慢加入n-甲基異丁胺(0.15mmol)然后升至室溫繼續(xù)反應(yīng)3小時。反應(yīng)完畢后，用30ml水淬滅，用二氯甲烷萃取(3*30ml)、合并有機相、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮后經(jīng)柱層析(乙酸乙酯/石油醚＝1:30)得到化合物cm42。

化合物cm42，白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.99(s,1h),4.41(dd,j＝14.3,7.6hz,1h),3.95(dd,j＝11.0,2.7hz,1h),3.30(d,j＝11.1hz,1h),3.04(dd,j＝17.6,10.7hz,2h),2.90(s,3h),1.08(d,j＝7.1hz,3h),1.02–0.94(m,6h),0.88(t,j＝7.0hz,6h),0.76(s,3h).

實施例7

知母皂苷元胺類衍生物的合成

nbs和aibn溶于dcm中，緩慢滴加ph3p的dcm溶液，待懸濁液后加入知母皂苷元，30℃下反應(yīng)4h。加水淬滅，萃取，旋干過硅膠柱。得到的產(chǎn)物和k2co3溶于dmf中，滴加相應(yīng)的胺。反應(yīng)完全后加水淬滅，過濾，干燥，硅膠柱純化。得到化合物am1-am13。

化合物am1，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.20(d,j＝7.9hz,2h),7.13(d,j＝7.8hz,2h),4.41(m,1h),3.95(m,1h),3.77(s,2h),3.32(t,j＝11.6hz,1h),2.54(t,j＝10.9hz,1h),2.35(s,j＝19.9hz,3h),1.08(d,j＝7.0hz,3h),0.98(d,3h),0.93(s,3h),0.74(s,3h).

化合物am2，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.89(s,1h),7.15(d,2h),6.73(d,2h),4.40(m,1h),4.04(t,2h),3.95(m,1h),3.31(t,j＝11.6hz,1h),2.57(t,j＝10.9hz,1h),2.45(m,2h),1.07(d,j＝7.0hz,3h),0.98(d,3h),0.93(s,3h),0.74(s,3h).

化合物am3，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.40(dd,j＝14.4,7.7hz,1h),3.95(dd,j＝10.9,2.4hz,1h),3.30(d,j＝11.1hz,1h),2.72(m,1h),2.68(m,2h),1.08(d,j＝7.1hz,3h),0.90-1.01(m,9h),0.75(d,j＝4.4hz,3h).

化合物am4，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34–7.28(m,4h),4.41(dd,j＝13.9,7.5hz,1h),3.95(d,1h),3.58(s,2h),3.30(d,j＝11.0hz,1h),2.46(t,j＝11.6hz,1h),1.08(d,j＝7.1hz,3h),0.99(d,j＝6.5hz,3h),0.94(s,3h),0.75(s,3h).

化合物am5，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.56(s,1h),8.49(d,j＝3.5hz,1h),7.69(d,j＝7.8hz,1h),7.24(d,j＝5.1hz,2h),4.41(dd,j＝14.1,7.7hz,1h),3.95(d,j＝10.8hz,1h),3.75(s,2h),3.30(d,j＝11.3hz,1h),2.94(s,1h),1.08(d,j＝7.0hz,3h),0.99(d,j＝6.7hz,3h),0.96(s,3h),0.76(s,3h).

化合物am6，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24(d,2h),6.86(d,j＝8.6hz,2h),4.40(dd,j＝14.2,7.7hz,1h),3.95(d,1h),3.80(s,3h),3.67(m,2h),3.30(d,j＝11.2hz,1h),2.93(s,1h),1.08(d,j＝7.0hz,3h),0.98(d,3h),0.95(s,3h),0.75(s,3h).

化合物am7，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.39(m,2h),7.15(t,2h),4.41(dd,j＝13.9,7.5hz,1h),3.96(d,1h),3.60(s,2h),3.30(d,j＝11.0hz,1h),2.49(t,j＝11.6hz,1h),1.08(d,j＝7.1hz,3h),0.99(d,j＝6.5hz,3h),0.94(s,3h),0.75(s,3h).

化合物am8，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.40(dd,j＝14.4,7.8hz,1h),3.95(dd,j＝11.1,2.6hz,1h),3.30(d,j＝10.9hz,1h),2.63(t,j＝10.9hz,1h),2.54(td,j＝10.4,5.4hz,1h),1.08(d,j＝7.0hz,3h),0.98(d,j＝6.7hz,3h),0.93(s,3h),0.74(s,3h).

化合物am9，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37(d,j＝4.4hz,1h),7.32(d,j＝5.6hz,4h),4.40(dd,j＝14.3,7.6hz,1h),3.94(d,j＝9.8,4.9hz,1h),3.81(s,2h),3.30(d,j＝11.2hz,1h),2.55(t,j＝11.1hz,1h),1.08(d,j＝7.1hz,3h),0.99(d,j＝6.7hz,3h),0.91(s,j＝14.3hz,3h),0.75(s,j＝7.7hz,3h).

化合物am10，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33–7.18(m,5h),4.40(d,j＝6.9hz,1h),3.95(d,j＝10.6hz,1h),3.30(d,j＝11.0hz,1h),2.89(d,j＝6.9hz,2h),2.80(m,2h),2.48(s,1h),1.08(d,j＝7.1hz,3h),0.98(d,j＝6.7hz,3h),0.93(s,3h),0.74(s,3h).

化合物am11，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.39–7.23(m,5h),4.41(d,j＝6.9hz,1h),3.95(d,j＝10.6hz,1h),3.30(d,j＝11.0hz,1h),2.62(d,j＝6.9hz,2h),2.57(s,1h),2.55(m,2h),1.08(d,j＝7.1hz,3h),0.98(d,j＝6.7hz,3h),0.91(s,3h),0.75(s,3h).

化合物am12，淡米黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.41(dd,j＝14.4,7.6hz,1h),3.95(d,j＝8.5hz,1h),3.30(d,j＝10.7hz,1h),2.85(s,1h),2.34(d,j＝6.8hz,2h),1.08(d,j＝7.0hz,3h),0.99(d,j＝6.7hz,3h),0.95(s,3h),0.90(d,j＝5.6hz,6h),0.75(s,3h).

實施例8

知母皂苷元衍生物對不同人體癌癥細(xì)胞株的活性實驗

試劑材料

各種癌細(xì)胞株購于americantypeculturecollection；dmem培養(yǎng)基、胎牛血清fbs、青霉素/鏈霉素、胰酶購于gibco。

實驗儀器

移液器購于thermoscientific；熒光顯微鏡購于nikonti-s,nikon；二氧化碳培養(yǎng)箱購于thermoscientific；96孔板購于jetbiofil；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱購于上海一恒科學(xué)儀器儀表有限公司。

癌細(xì)胞株接種于96孔微量滴定板，板在37℃、5％co2、飽和濕度的條件下培養(yǎng)24小時，細(xì)胞分別用不同的化合物(0.1-100μm)給藥48小時。24小時后加入5mg/ml的mtt溶液20μl，4小時后吸去培養(yǎng)基，各孔加入二甲基亞砜(dmso)200μl，吹打均勻后，全自動酶標(biāo)儀測定490nm處吸光值。

下表列舉知母皂苷元衍生物抑制不同腫瘤細(xì)胞的生物活性。

上述試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的知母皂苷元衍生物對腫瘤細(xì)胞具有抑制作用。

實施例9

化合物cm2和am2體內(nèi)抗腫瘤活性評價

無菌條件下，收集對數(shù)生長期的a549腫瘤細(xì)胞，用無血清培養(yǎng)液洗滌，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10⁷/ml，將腫瘤細(xì)胞重懸于pbs中制成細(xì)胞懸液。裸鼠右上肢腋下皮膚消毒，皮下接種5×10⁶個腫瘤細(xì)胞。接種后2周左右，可觀察到裸鼠右上肢處長出瘤塊。待裸鼠腫瘤體積長至150mm³左右，隨機分組進行實驗?；衔颿m2和am2給藥濃度為(5mg/kg，30mg/kg)，給藥方式為口服。給藥期間，記錄裸鼠體重，每兩天利用游標(biāo)卡尺測量1次腫瘤大小，繪制腫瘤生長曲線，通過曲線可觀察到化合物的體內(nèi)抗腫瘤藥效。荷瘤體積由以下公式計算得到：v＝(d²×d)/2。其中d和d分別為腫瘤的短徑和長徑，單位為mm。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用anova及student’s-t檢驗進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)處理，p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

根據(jù)瘤體積隨時間變化曲線及動物體重的變化曲線(圖1～4)，正常對照組動物在實驗過程中生長正常，體重逐漸增加(圖1和圖3)；荷瘤模型組，移植瘤隨時間逐漸增大，并于接種后24天后迅速增加；隨著腫瘤體積的增大，動物體重明顯下降，p<0.05-0.01(圖1和圖3)。不同劑量化合物給藥處理后，a549皮下瘤的生長均受到顯著抑制，顯示劑量依賴性；荷瘤動物的體重降低較模型組明顯減少，p<0.05-0.01(圖2和圖4)。結(jié)果表明化合物具有可靠的體內(nèi)抗腫瘤活性。

采用本發(fā)明的知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物，其藥物組合物及其應(yīng)用，首次對該先導(dǎo)化合物進行了系統(tǒng)的針對3位的羥基的結(jié)構(gòu)修飾，合成了一系列的新化合物，這些新合成的化合物通過相關(guān)靶點的活性測試，很多顯示出優(yōu)于先導(dǎo)化合物的活性，對于治療癌癥十分具有價值。彌補了現(xiàn)有技術(shù)中知母皂苷元結(jié)構(gòu)修飾的衍生物的不足，十分具有意義。

在此說明書中，本發(fā)明已參照其特定的實施例作了描述。但是，很顯然仍可以做出各種修改和變換而不背離本發(fā)明的精神和范圍。因此，說明書和附圖應(yīng)被認(rèn)為是說明性的而非限制性的。