1.一種用于合成阿莫西林的青霉素?;傅姆蛛x純化與固定化耦合方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:
(1)制備含有青霉素?;复置敢汉蜔o機(jī)鹽的無機(jī)鹽混合溶液,所述無機(jī)鹽混合溶液中無機(jī)鹽的濃度為0.05-0.3g/mL;
(2)將步驟(1)所得無機(jī)鹽混合溶液與叔丁醇混合,然后進(jìn)行分相,得到富含叔丁醇的上相溶液、中相固體以及富含鹽和青霉素?;傅南孪嗳芤航M成的三相分配體系;
(3)向步驟(2)所得下相溶液中加入載體進(jìn)行青霉素?;傅墓潭ɑ?。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,在步驟(1)中,所述無機(jī)鹽混合溶液的pH為5-9,所述無機(jī)鹽混合溶液中無機(jī)鹽的濃度為0.05-0.2g/mL;
優(yōu)選地,所述無機(jī)鹽混合溶液的pH為6.5-9,所述無機(jī)鹽混合溶液中無機(jī)鹽的濃度為0.1-0.2g/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其中,在步驟(1)中,所述無機(jī)鹽為水溶性磷酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽和鹵化物中的一種或多種;優(yōu)選為水溶性磷酸鹽和/或硫酸鹽,最優(yōu)選為水溶性磷酸鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其中,在步驟(1)中,所述青霉素?;复置敢簽榻?jīng)細(xì)胞破碎后未處理的用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶粗酶液,或者為經(jīng)細(xì)胞破碎后去除菌體等固體雜質(zhì)后的用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶粗酶液;
優(yōu)選地,所述青霉素酰化酶粗酶液的酶活為5-50IU/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,在步驟(2)中,所述無機(jī)鹽混合溶液與叔丁醇的體積比為1:0.2-2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法,其中,在步驟(2)中,所述分相的方式為離心分相,該分相溫度為0-40℃、離心力為500-5000g、時(shí)間為2-60min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法,其中,在步驟(2)中,所述分相的方式為靜置分相,該分相溫度為4-30℃、時(shí)間為0.1-4h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述步驟(2)的過程還包括:從所述上相溶液中回收叔丁醇并循環(huán)用于與無機(jī)鹽混合溶液相混合的過程中。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,在步驟(3)中,所述下相溶液的酶活為5-20IU/mL,若高于20IU/mL用水稀釋至上述范圍。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或9所述的方法,其中,在步驟(3)中,所述載體的加入量為總酶活與載體重量之比為30-60IU/g;
優(yōu)選地,所述載體為環(huán)氧基載體或活化的氨基載體。