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一種用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶的分離純化與固定化耦合方法與流程

文檔序號:12778884閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于合成阿莫西林的青霉素?;傅姆蛛x純化與固定化耦合方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:

(1)制備含有青霉素?;复置敢汉蜔o機(jī)鹽的無機(jī)鹽混合溶液,所述無機(jī)鹽混合溶液中無機(jī)鹽的濃度為0.05-0.3g/mL;

(2)將步驟(1)所得無機(jī)鹽混合溶液與叔丁醇混合,然后進(jìn)行分相,得到富含叔丁醇的上相溶液、中相固體以及富含鹽和青霉素?;傅南孪嗳芤航M成的三相分配體系;

(3)向步驟(2)所得下相溶液中加入載體進(jìn)行青霉素?;傅墓潭ɑ?。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,在步驟(1)中,所述無機(jī)鹽混合溶液的pH為5-9,所述無機(jī)鹽混合溶液中無機(jī)鹽的濃度為0.05-0.2g/mL;

優(yōu)選地,所述無機(jī)鹽混合溶液的pH為6.5-9,所述無機(jī)鹽混合溶液中無機(jī)鹽的濃度為0.1-0.2g/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其中,在步驟(1)中,所述無機(jī)鹽為水溶性磷酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽和鹵化物中的一種或多種;優(yōu)選為水溶性磷酸鹽和/或硫酸鹽,最優(yōu)選為水溶性磷酸鹽。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其中,在步驟(1)中,所述青霉素?;复置敢簽榻?jīng)細(xì)胞破碎后未處理的用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶粗酶液,或者為經(jīng)細(xì)胞破碎后去除菌體等固體雜質(zhì)后的用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶粗酶液;

優(yōu)選地,所述青霉素酰化酶粗酶液的酶活為5-50IU/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,在步驟(2)中,所述無機(jī)鹽混合溶液與叔丁醇的體積比為1:0.2-2。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法,其中,在步驟(2)中,所述分相的方式為離心分相,該分相溫度為0-40℃、離心力為500-5000g、時(shí)間為2-60min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法,其中,在步驟(2)中,所述分相的方式為靜置分相,該分相溫度為4-30℃、時(shí)間為0.1-4h。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述步驟(2)的過程還包括:從所述上相溶液中回收叔丁醇并循環(huán)用于與無機(jī)鹽混合溶液相混合的過程中。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,在步驟(3)中,所述下相溶液的酶活為5-20IU/mL,若高于20IU/mL用水稀釋至上述范圍。

10.根據(jù)權(quán)利要求1或9所述的方法,其中,在步驟(3)中,所述載體的加入量為總酶活與載體重量之比為30-60IU/g;

優(yōu)選地,所述載體為環(huán)氧基載體或活化的氨基載體。

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