技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
一株可以高效分泌納豆激酶的枯草芽孢桿菌菌株，利用PCR技術(shù)擴增納豆枯草芽孢桿菌NK的aprN基因，并依據(jù)枯草芽孢桿菌的密碼子偏愛性優(yōu)化了起始30個氨基酸的密碼子，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pHT01?aprN，經(jīng)限制性酶切、PCR擴增和測序驗證其正確性。通過電擊法將pHT01?aprN導入枯草芽孢桿菌168(Bacillus?subtilis?168)，利用氯霉素抗性篩選獲得工程菌。優(yōu)化發(fā)酵條件后，經(jīng)IPTG誘導表達，搖床培養(yǎng)發(fā)酵液中最高酶活為289U/ml，高密度發(fā)酵發(fā)酵液中最高酶活達到7778U/ml，經(jīng)親和柱層析制備高純納豆激酶酶制劑最高酶活為981731U/g。

技術(shù)研發(fā)人員：張建華;崔青;龔文秀;錢丙俊;李希強;姚曉敏;王杰;劉華奇
受保護的技術(shù)使用者：上海諾金科生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：2017.04.06
技術(shù)公布日：2017.08.18