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一種新的殺蟲蛋白及其核苷酸序列的制作方法

文檔序號(hào):12776952閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種殺蟲蛋白,其具有如(I)和(II)中的至少一種的氨基酸序列:

(I)SEQ ID No.2所示的氨基酸序列;

(II)與如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的一致性在95%以上,且與如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列;與如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的一致性在98%以上,且與如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列;優(yōu)選其氨基酸序列為與如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的一致性在99.5%以上,且與如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。

2.一種核苷酸序列,所述核苷酸序列為編碼如權(quán)利要求1所述的殺蟲蛋白的核苷酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核苷酸序列,其特征在于,當(dāng)所述殺蟲蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示時(shí),編碼所述殺蟲蛋白的所述核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.一種組合物,其包括如權(quán)利要求1所述的殺蟲蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物,其特征在于,當(dāng)所述殺蟲蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示時(shí),編碼所述殺蟲蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

6.一種含有根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的核苷酸序列,且能產(chǎn)生如權(quán)利要求1所述的殺蟲蛋白的轉(zhuǎn)基因微生物;

優(yōu)選所述轉(zhuǎn)基因微生物包括芽胞桿菌(Bacillus)、假單胞菌(Pseudomonas)、腸桿菌(Escherichia)和酵母(Saccharomyces)中的至少一種;

優(yōu)選所述芽胞桿菌包括蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)、枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)、萎縮芽胞桿菌(Bacillus atrophaeus)和蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus)中的至少一種;所述假單胞菌包括熒光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens);所述腸桿菌包括大腸桿菌(Escherichia coli)。

7.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的核苷酸序列在制備轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用,其中,所述轉(zhuǎn)基因植物能夠產(chǎn)生如權(quán)利要求1所述的殺蟲蛋白;所述轉(zhuǎn)基因植物包括十字花科(Cruciferae)、茄科(Solanaceae)、傘形科(Umbelliferae)、葫蘆科(Cucurbitaceae)、天南星科(Araceae)、禾本科(Liliaceae)、豆科(Leguminosae)、蝶形花科(Papilionaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、菊科(Compositae)和錦葵科(Malvaceae)中的至少一種;

優(yōu)選所述轉(zhuǎn)基因植物包括蕓薹屬(Brassica)、蘿卜屬(Raphanus)、煙草屬(Nicotiana)、蕃茄屬(Lycopersicon)、茄屬(Solanum)、辣椒屬(Capsicum)、胡蘿卜屬(Daucus)、芹屬(Apium)、歐芹屬(Petroselinum)、茴香屬(Foeniculum)、南瓜屬(Cucurbita)、黃瓜屬(Cucumis)、冬瓜屬(Benincasa)、絲瓜屬(Luffa)、西瓜屬(Citrullus)、甜瓜屬(Cucumis)、磨芋屬(Amorphophallus)蜀黍?qū)?Zea)、高梁屬(Sorghum)、狗尾巴草屬(Setaria)、稻屬(Oryza)、甘蔗屬(Saccharum)、小麥屬(Triticum)、大豆屬(Glycine)、苜蓿屬(Medicago)、甜菜屬(Beta)、萵苣屬(Lactuca)、向日葵屬(Helianthus)和秋葵屬(Abelmoschus esculentus)中的至少一種;

優(yōu)選所述轉(zhuǎn)基因植物包括油菜(Brassica campestris)、大白菜(Brassica rapa)、小白菜(Brassica chinensis)、甘藍(lán)(Brassica oleracea)、蘿卜(Raphanus sativus)、番茄(Lycopersicon esculentum)、馬鈴薯(Solanum tuberosum)、茄子(Solanum melongena)、旱芹(Apium graveolens)、歐芹(Petroselinum crispum)、小茴香(Foeniculum vulgare)、西葫蘆(Cucurbita pepo)、南瓜(Cucurbita moschata)、黃瓜(Cucumis sativus)、冬瓜(Benincasa hispida)、絲瓜(Luffa acutangula)、西瓜(Citrullus lanatus)、甜瓜(Cucumis melo)、磨芋(Amorphophallus rivieri)、玉米(Zea mays)、高粱(Sorghum bicolor)、谷子(Setaria italica)、水稻(Oryza sativa)、甘蔗(Saccharum officinarum)、小麥(Triticum aestivum)、大豆(Glycine max)、苜蓿(Medicago sativa)、甜菜(Beta vulgaris)、萵苣(Lactuca sativa)、向日葵(Helianthus)和秋葵(Abelmoschus esculentus)中的至少一種。

8.一種制備如權(quán)利要求1所述的殺蟲蛋白的方法,其包括利用根據(jù)權(quán)利要求6所述的轉(zhuǎn)基因微生物,和/或利用根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用中的轉(zhuǎn)基因植物來生產(chǎn)所述殺蟲蛋白;優(yōu)選還包括在利用所述轉(zhuǎn)基因微生物和/或轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)所述殺蟲蛋白后,純化所述殺蟲蛋白使所述殺蟲蛋白的純度達(dá)到80%以上,更優(yōu)選使所述殺蟲蛋白的純度達(dá)到90%以上,甚至是使所述殺蟲蛋白的純度達(dá)到99%以上。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺蟲蛋白,根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的組合物,根據(jù)權(quán)利要求6所述的轉(zhuǎn)基因微生物,以及根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用中的轉(zhuǎn)基因植物中的至少一種在防鞘翅目(Coleoptera)中的至少一種害蟲中的應(yīng)用;優(yōu)選在防治鰓金龜科(Melolonthidae)中的至少一種害蟲中的應(yīng)用;特別優(yōu)選在防治鰓金龜屬(Holotrichia)中的至少一種害蟲中的應(yīng)用;最優(yōu)選在防治華北大黑鰓金龜(Holotrichia oblita)中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺蟲蛋白的單克隆抗體,優(yōu)選所述單克隆抗體為僅特異識(shí)別所述殺蟲蛋白的單克隆抗體。

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