本發(fā)明涉及化合物分析，具體地，涉及ucnps-ab1和gnrs-ab2及其制備方法、甲胎蛋白的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

甲胎蛋白(afp)是一種癌胚糖蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量約為68000，由胎兒肝臟和卵黃囊合成，其在血清中的濃度長(zhǎng)期升高被認(rèn)為與肝癌、鼻咽癌和卵巢上皮性腫瘤有著一定的關(guān)系。目前，afp被認(rèn)為是較好的腫瘤標(biāo)記物，因此，早期檢測(cè)afp對(duì)上述疾病的預(yù)防、診斷和治療有著非常重要的臨床意義。

在已創(chuàng)建的眾多afp的檢測(cè)方法中，電化學(xué)檢測(cè)法是檢測(cè)afp的主要方法。但是，現(xiàn)有的檢測(cè)方法存在：檢出限高，靈敏度低，實(shí)驗(yàn)步驟復(fù)雜，耗時(shí)耗力，儀器價(jià)格昂貴等問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種ucnps-ab1和gnrs-ab2及其制備方法、甲胎蛋白的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法通過利用ucnps-ab1和gnrs-ab2檢測(cè)甲胎蛋白使得其具有靈敏度高，檢出限低，穩(wěn)定性與選擇性優(yōu)良等優(yōu)點(diǎn)，并且ucnps-ab1和gnrs-ab2的制備方法具有條件溫和原料易得的優(yōu)點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種ucnps-ab1的制備方法，該制備方法包括：

1)將堿、水、油酸、c1-c3的醇、錳源、鐿源、釔源、鉺源和naf進(jìn)行攪拌，接著水熱反應(yīng)、離心分離得到oa-ucnps(oa-nayf4:yb，er/mnucnps)；

2)將oa-ucnps分散于溶劑中，接著加入paa(聚丙烯酸)水溶液進(jìn)行配位體交換反應(yīng)、離心分離得到paa-ucnps(羧基修飾的ucnps)；

3)在edc(碳二亞胺)和nhs(n-羥基琥珀酰亞胺)的存在下，將paa-ucnps分散于mes緩沖溶液(乙磺酸緩沖溶液)中并振蕩孵育、分離和水洗，接著溶于pbs緩沖溶液，再加入抗體1二次振蕩，隨后加入bsa(牛血清白蛋白)三次振蕩以封閉活性位點(diǎn)，離心水洗后得到ucnps-ab1(nayf4:yb，er/mnucnps-抗體1偶聯(lián)體)。

本發(fā)明還提供了一種ucnps-ab1，該ucnps-ab1通過上述的制備方法制備而得。

本發(fā)明也提供了一種gnrs-ab2的制備方法，該制備方法包括：

1)將ctab(十六烷基三甲基溴化銨)、金源、nabh4和水進(jìn)行接觸反應(yīng)以得到gnrs種子液；

2)將將ctab、金源、抗壞血酸和agno3進(jìn)行接觸反應(yīng)得到生長(zhǎng)液；

3)將gnrs種子液與生長(zhǎng)液進(jìn)行接觸反應(yīng)、離心分離得到ctab-gnrs；

4)將ctab-gnrs溶于水形成ctab-gnrs水溶液，接著將muda-乙醇溶液與ctab-gnrs水溶液進(jìn)行羧基修飾處理，然后離心、處理以制得muda-gnrs(羧基化的gnrs)；

5)在edc和nhs的存在下，將muda-gnrs分散于mes緩沖溶液中并振蕩孵育、分離和水洗，接著溶于pbs緩沖溶液，再加入抗體2二次振蕩，隨后加入bsa三次振蕩以封閉活性位點(diǎn)，離心水洗后得到gnrs-ab2(gnrs-抗體2偶聯(lián)體)。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種gnrs-ab2的制備方法，該gnrs-ab2通過上述的制備方法制備而得。

本發(fā)明更進(jìn)一步提供了一種甲胎蛋白的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法包括：

1)將pbs緩沖溶液、ucnps-ab1以及gnrs-ab2形成混合液，接著將混合液加入已知濃度的afp溶液進(jìn)行反應(yīng)以得到樣品溶液，然后將樣品溶液加入含有過硫酸鉀的pbs緩沖溶液中進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光能量轉(zhuǎn)移反應(yīng)并檢測(cè)電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，最后以afp溶液的濃度為橫坐標(biāo)，電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制工作曲線或者計(jì)算工作曲線方程；

2)將待檢afp溶液按照步驟1)的方法測(cè)得電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，然后根據(jù)工作曲線或者工作曲線方程計(jì)算出待檢afp溶液的濃度。

在上述技術(shù)方案中，具體的原理如圖11所示，本發(fā)明制備ucnps-ab1過程中：首先制備oa-nayf4:yb，er/mnucnps上轉(zhuǎn)納米粒子(oa代表油酸)，接著用paa與oa-nayf4:yb，er/mnucnps通過配位體交換法修飾上羧基改善其水溶性和生物相容性，隨后，加入抗體1，利用羧基-氨基之間的反應(yīng)形成nayf4:yb，er/mnucnps-抗體1偶聯(lián)體作為能量供體。

同時(shí)，本發(fā)明制備gnrs-ab2(gnrs代表金納米棒)過程中：首先通過gnrs種子液與生長(zhǎng)液制得ctab-gnrs(ctab修飾的金納米棒)，接著用muda修飾gnrs，然后連接抗體2制得gnrs-ab2作為能量受體。

最后，將向含有ucnps-ab1和gnrs-ab2的體系中加入afp后，通過抗原抗體的特異性結(jié)合，拉近二者之間的距離，發(fā)生電化學(xué)發(fā)光能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，同時(shí)，nayf4:yb，er/mnucnps的ecl淬滅程度與加入的afp濃度相關(guān)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)afp的定量檢測(cè)。

本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說明。

附圖說明

附圖是用來提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具體實(shí)施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1a是檢測(cè)例1中的上轉(zhuǎn)換材料發(fā)光強(qiáng)度的統(tǒng)計(jì)圖；

圖1b是檢測(cè)例1中的ecl發(fā)光-電壓曲線圖；

圖2a是檢測(cè)例2中未摻雜mn²⁺的oa-nayf4:yb，erucnps上轉(zhuǎn)換材料的tem圖；

圖2b是檢測(cè)例2中oa-ucnps的tem圖；

圖3是檢測(cè)例3中oa-ucnps的元素分析圖；

圖4是檢測(cè)例4中ctab-gnrs的tem圖；

圖5是檢測(cè)例5中吸收光譜以及電化學(xué)發(fā)光光譜圖；

圖6a是檢測(cè)例6中ucnps-ab1偶聯(lián)體溶液的濃度改變的體系的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)圖；

圖6b是檢測(cè)例6中g(shù)nrs-ab2偶聯(lián)體溶液的濃度改變的體系的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)圖；

圖6c是檢測(cè)例6中振蕩孵育時(shí)間改變的體系的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)圖；

圖7a是檢測(cè)例6中ecl檢測(cè)體系的成分的改變后體系的ecl強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)圖；

圖7b是檢測(cè)例6中ecl強(qiáng)度對(duì)afp濃度的統(tǒng)計(jì)圖；

圖8是檢測(cè)例7中oa-ucnps進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度分析的統(tǒng)計(jì)圖；

圖9a是檢測(cè)例8中實(shí)施例1中的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖；

圖9b是在圖9a的基礎(chǔ)上的ecl強(qiáng)度對(duì)afp濃度的統(tǒng)計(jì)圖；

圖10是應(yīng)用例2的干擾檢測(cè)檢測(cè)的結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖；

圖11是本發(fā)明電化學(xué)發(fā)光體系的原理圖。

具體實(shí)施方式

以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。

本發(fā)明提供了一種ucnps-ab1的制備方法，該制備方法包括：

1)將堿、水、油酸、c1-c3的醇、錳源、鐿源、釔源、鉺源和naf(各物料的添加順序可以更改)進(jìn)行攪拌，接著水熱反應(yīng)、離心分離得到oa-ucnps(oa-nayf4:yb，er/mnucnps)；

2)將oa-ucnps分散于溶劑中，接著加入paa(聚丙烯酸)水溶液進(jìn)行配位體交換反應(yīng)、離心分離得到paa-ucnps(羧基修飾的ucnps)；

3)在edc(碳二亞胺)和nhs(n-羥基琥珀酰亞胺)的存在下，將paa-ucnps分散于mes緩沖溶液(乙磺酸緩沖溶液)中并振蕩孵育、分離和水洗，接著溶于pbs緩沖溶液，再加入抗體1二次振蕩，隨后加入bsa(牛血清白蛋白)三次振蕩以封閉活性位點(diǎn)，離心水洗后得到ucnps-ab1(nayf4:yb，er/mnucnps-抗體1偶聯(lián)體)。

在上述制備方法的步驟1)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟1)中，相對(duì)于0.3g的堿，水的用量為5-15ml，油酸的用量為2-8ml，醇的用量為5-15ml，錳源的用量為0.01-0.1g，釔源的用量為0.1-0.3g，鐿源的用量為0.05-0.11g，鉺源的用量為5-10mg，naf用量為0.05-0.3g。

在上述制備方法的步驟1)中，攪拌的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟1)中，攪拌至少滿足以下條件：攪拌溫度為15-35℃，攪拌時(shí)間為5-20min。

在上述制備方法的步驟1)中，接觸反應(yīng)的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟1)中，接觸反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度為180-220℃，反應(yīng)時(shí)間為6-10h。

在上述制備方法的步驟1)中，鉺源、錳源、鐿源、釔源和醇的種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，鉺源選自五水合硝酸鉺、氧化鉺、無水氯化鉺和八水合硫酸鉺中的至少一者，錳源選自四水合氯化錳、無水氯化錳、無水硫酸錳、一水合硫酸錳中的至少一者，鐿源選自氯化鐿、五水硝酸鐿、氧化鐿和碳酸鐿中的至少一者，釔源選自硝酸釔、氧化釔、六水合氧化釔和硝酸釔中的至少一者，醇選自甲醇、乙醇和丙醇中的至少一者。

在上述制備方法的步驟2)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟2)中，相對(duì)于30mg的oa-ucnps，paa水溶液中聚丙烯酸的用量為0.1-0.3g，paa水溶液的體積為5-10ml，溶劑的容量為3-5ml。

在上述制備方法的步驟2)中，配位體交換反應(yīng)的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟2)中，配位體交換反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度為20-40℃，反應(yīng)時(shí)間為18-30h。

在上述制備方法的步驟2)中，溶劑的種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟2)中，溶劑選自三氯甲烷、二氯甲烷、環(huán)己烷和苯中的至少一者。

在上述制備方法的步驟2)中，聚丙烯酸的的重均分子量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，聚丙烯酸的的重均分子量為1000-3000。

在上述制備方法的步驟3)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟3)中，相對(duì)于2.5mg的paa-ucnps，抗體1的用量為0.05-0.2μg，bsa的用量為1-5mg，edc的用量為1-5mg，nhs的用量為1-5mg。

在上述制備方法的步驟3)中，mes緩沖溶液與pbs緩沖溶液的用量以及ph可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟3)中，相對(duì)于2.5mg的paa-ucnps，mes緩沖溶液與pbs緩沖溶液的用量各自獨(dú)立為1.5-3ml；并且，mes緩沖溶液的ph各自獨(dú)立地為6.4-8.4。

在上述制備方法的步驟3)中，振蕩孵育、二次振蕩以及三次振蕩的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟3)中，振蕩孵育至少滿足以下條件：振蕩溫度為15-35℃，振蕩時(shí)間為1.5-2.5h；二次振蕩至少滿足以下條件：振蕩溫度為15-35℃，振蕩時(shí)間為12-30h；三次振蕩至少滿足以下條件：振蕩溫度為15-35℃，振蕩時(shí)間為0.5-3h。

在上述制備方法的步驟3)中，抗體1的具體種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的ucnps-ab1能夠作為更優(yōu)異的能量供體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟3)中，抗體1為牌號(hào)1a6的抗體。

本發(fā)明還提供了一種ucnps-ab1，該ucnps-ab1通過上述的制備方法制備而得。

本發(fā)明也提供了一種gnrs-ab2的制備方法，該制備方法包括：

1)將ctab、金源、nabh4和水進(jìn)行接觸反應(yīng)以得到gnrs種子液；

2)將將ctab、金源、抗壞血酸和agno3進(jìn)行接觸反應(yīng)得到生長(zhǎng)液；

3)將gnrs種子液與生長(zhǎng)液進(jìn)行接觸反應(yīng)、離心分離得到ctab-gnrs；

4)將ctab-gnrs溶于水形成ctab-gnrs水溶液，接著將muda-乙醇溶液(muda與乙醇溶液的混合溶液)與ctab-gnrs水溶液進(jìn)行羧基修飾處理，然后離心、處理以制得muda-gnrs(羧基化的gnrs)；

5)在edc和nhs的存在下，將muda-gnrs分散于mes緩沖溶液中并振蕩孵育、分離和水洗，接著溶于pbs緩沖溶液，再加入抗體2二次振蕩，隨后加入bsa三次振蕩以封閉活性位點(diǎn)，離心水洗后得到gnrs-ab2(gnrs-抗體2偶聯(lián)體)。

在上述制備方法的步驟1)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟1)中，相對(duì)于0.36g的ctab，金源的用量為0.5-1.5mg，nabh4的用量為0.1-0.5mg，水的用量為9-12g。

在上述制備方法的步驟1)中，金源的具體種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，金源為氯金酸。

在上述制備方法的步驟1)中，接觸反應(yīng)的具體條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟1)中，接觸反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度為20-40℃，反應(yīng)時(shí)間為1-5min。

在上述制備方法的步驟2)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟2)中，相對(duì)于0.36g的ctab，金源的用量為1-3mg，抗壞血酸的用量為0.5-1.5mg，agno3的用量為0.033-0.048g，水的用量為9-12g。

在上述制備方法的步驟2)中，接觸反應(yīng)的具體條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟2)中，接觸反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度為20-40℃，反應(yīng)時(shí)間為1-5min。

在上述制備方法的步驟3)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟3)中，相對(duì)于11ml的生長(zhǎng)液，種子液的用量為5-20μl。

在上述制備方法的步驟3)中，接觸反應(yīng)的具體條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟3)中，接觸反應(yīng)至少滿足以下條件反應(yīng)溫度為20-30℃，反應(yīng)時(shí)間為20-60min。

在上述制備方法的步驟4)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟4)中，相對(duì)于2.4pmol的ctab-gnrs，muda-乙醇溶液中muda的用量為2-7mg，水的用量為5-10ml，muda-乙醇溶液的體積為100-1000μl。

在上述制備方法的步驟4)中，羧基修飾處理的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟4)中，羧基修飾處理的條件為：在20-60℃下超聲處理1-3h。

在上述制備方法的步驟5)中，原料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟5)中，相對(duì)于24pmol的muda-gnrs，抗體2的用量為0.05-0.2μg，bsa的用量為1-5mg，edc的用量為1-5mg，nhs的用量為1-5mg。

在上述制備方法的步驟5)中，mes緩沖溶液與pbs緩沖溶液的用量以及ph可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟5)中，相對(duì)于24pmol的muda-gnrs，mes緩沖溶液與pbs緩沖溶液的用量各自獨(dú)立為1.5-3ml；并且，mes緩沖溶液的ph各自獨(dú)立地為6.4-8.4。

在上述制備方法的步驟5)中，振蕩孵育、二次振蕩以及三次振蕩的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟5)中，振蕩孵育至少滿足以下條件：振蕩溫度為15-35℃，振蕩時(shí)間為1.5-2.5h；二次振蕩至少滿足以下條件：振蕩溫度為15-35℃，振蕩時(shí)間為12-30h；三次振蕩至少滿足以下條件：振蕩溫度為15-35℃，振蕩時(shí)間為0.5-3h。

在上述制備方法的步驟5)中，抗體2的具體種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得制得的gnrs-ab2能夠作為更優(yōu)異的能量受體，進(jìn)而使得ucnps-ab1和gnrs-ab2作為的體系具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，在步驟5)中，抗體2為牌號(hào)2a5的抗體。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種gnrs-ab2的制備方法，該gnrs-ab2通過上述的制備方法制備而得。

本發(fā)明更進(jìn)一步提供了一種甲胎蛋白的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法包括：

1)將pbs緩沖溶液、ucnps-ab1以及gnrs-ab2形成混合液，接著將混合液加入已知濃度的afp溶液進(jìn)行反應(yīng)以得到樣品溶液，然后將樣品溶液加入含有過硫酸鉀的pbs緩沖溶液中進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光能量轉(zhuǎn)移反應(yīng)并檢測(cè)電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，最后以afp溶液的濃度為橫坐標(biāo)，電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制工作曲線或者計(jì)算工作曲線方程；

2)將待檢afp溶液按照步驟1)的方法測(cè)得電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，然后根據(jù)工作曲線或者工作曲線方程計(jì)算出待檢afp溶液的濃度。

在上述檢測(cè)方法中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得該檢測(cè)方法具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，相對(duì)于6.54μg的ucnps-ab1，gnrs-ab2的用量為5×10^-3-1.0×10^-3pmol，檢測(cè)樣品的用量為10-30μl且檢測(cè)樣品的中afp的濃度為2-5000ng/ml。

在上述檢測(cè)方法中，pbs緩沖溶液的用量以及硫酸鉀的濃度可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得該檢測(cè)方法具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，相對(duì)于20-50μl的樣品溶液，含有過硫酸鉀的pbs緩沖溶液的用量為3-8ml，過硫酸鉀的濃度為0.05-0.2mol/l；

在上述檢測(cè)方法中，電化學(xué)發(fā)光能量轉(zhuǎn)移反應(yīng)的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得該檢測(cè)方法具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，電化學(xué)發(fā)光能量轉(zhuǎn)移反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度20-30℃，反應(yīng)時(shí)間為100-120min。

在上述基礎(chǔ)上，在不同的檢測(cè)波長(zhǎng)下工作曲線方程存在差異，但是為了使得具有更優(yōu)異的線性關(guān)系，優(yōu)選地，工作曲線方程為y＝2.88×10³lgx-2.17×10³，其中，y為電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度猝滅值，x為afp的濃度。

在上述檢測(cè)方法中，pbs緩沖溶液的ph可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得該檢測(cè)方法具有更優(yōu)異的靈敏度，檢出限，穩(wěn)定性與選擇性，優(yōu)選地，pbs緩沖溶液的ph為6.4-8.4。

此外，在上述檢測(cè)方法中，待檢afp溶液的來源可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是從實(shí)用性上考慮，優(yōu)選地，待檢afp溶液為人體血清。

最后，在待檢afp溶液為人體血清的情況下，關(guān)于人體血清的來源方式也可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了簡(jiǎn)化處理過程，優(yōu)選地，在步驟2)之前，檢測(cè)方法還包括：將人體血液離心，取上層以得到純化后的人體血清。

以下將通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。以下實(shí)施例中，抗體1為北方生物科技研究所市售的牌號(hào)1a6的抗體，抗體2為北方生物科技研究所市售的牌號(hào)2a5的抗體。

實(shí)施例1

1)oa-ucnps(oa-nayf4:yb，er/mnucnps)的制備：

首先，稱量300mg的naoh置于50ml小燒杯中，加入1.50ml超純水、5.00ml油酸、10.0ml乙醇，攪拌均勻后依次加入0.500mlmncl2溶液(0.600mol/l)，1.00mly(no3)3溶液(0.500mol/l)，0.900mlybcl3溶液(0.200mol/l)和0.100mler(no3)3溶液(0.200mol/l)。接著，逐滴加入2.00mlnaf溶液(2.00mol/l)并在25℃下溫和攪拌15min，轉(zhuǎn)移至50ml反應(yīng)釜中，在200℃下反應(yīng)8h。自然冷卻至25℃后，離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min)，用超純水和乙醇反復(fù)洗滌幾次后分離得到oa-nayf4:yb，er/mnucnps。

2)oa-nayf4:yb，er/mnucnps的羧基修飾制得paa-ucnps：

將30.0mgoa-ucnps溶于4.00ml三氯甲烷中制得oa-ucnps溶液，將200mg聚丙烯酸(聚丙烯酸重均分子量為1800)溶于8.00ml)超純水中制得聚丙烯酸溶液；然后，將oa-ucnps三氯甲烷溶液逐滴滴加到聚丙烯酸溶液中，在37℃條件下攪拌24h，通過聚丙烯酸的吸附，oa-ucnps從三氯甲烷層進(jìn)入水層；最后，離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min)分離出產(chǎn)品，并用超純水和乙醇洗滌得到paa-ucnps。

3)將2.50mgpaa-ucnps溶于2.00mlmes緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為6.4)中，超聲形成均勻的溶液，接著加入3mgedc和3mgnhs，在25℃下振蕩孵育2h，離心，水洗；將得到的產(chǎn)品加入2.00mlpbs緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為7.4)中，再加入0.1μg抗體1在25℃下振蕩24h，然后加入bsa封閉體系(200μl，0.300重量％目的是封閉ucnps表面未被抗體1結(jié)合的位點(diǎn))，繼續(xù)在25℃振蕩0.5h后離心，水洗得到ucnps-ab1。

4)ctab-gnrs的制備：

首先，將5.00mlctab溶液(0.200mol/l)溶液和5.00mlhaucl4溶液(5.00×10^-4mol/l)溶液在不停攪拌下混合，快速加入0.600ml新制的nabh4溶液(1.00×10^-2mol/l)溶液，溶液由無色變成黃褐色，于27℃下攪拌2min后得到gnrs種子液，存放于27℃水浴鍋中。

接著，將5.00mlctab溶液(0.200mol/l)，0.260mlagno3溶液(4.00×10^-3mol/l)，5.00mlhaucl4溶液(1.00×10^-3mol/l)依次混合，70.0μl抗壞血酸溶液(7.88×10^-2mol/l)在攪拌下逐滴加入，溶液由黃色變成無色得到生長(zhǎng)液，生長(zhǎng)液也置于27℃水浴鍋中反應(yīng)0.5h。

在gnrs種子液與生長(zhǎng)液制備完成后，用移液槍吸取12.0μl種子液加入11ml生長(zhǎng)液中，搖晃均勻，繼續(xù)在27℃下水浴45min，溶液呈藍(lán)紫色，離心，洗滌得到ctab-gnrs。

5)gnrs的修飾以得到muda-gnrs：

取10.0mlctab-gnrs溶液離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min，含有2.40pmol的ctab-gnrs)，棄去上清液，重新溶于10.0ml超純水，接著緩慢加入1.00mlmuda-乙醇溶液(20.0mmol/l)得到混合液，將該混合物在50℃下超聲0.5h，接著在25℃下持續(xù)超聲2h；最后離心得到muda-gnrs，并將muda-gnrs重新溶于10.0ml超純水中。

6)gnrs-ab2偶聯(lián)體的制備：

將3mgedc和3mgnhs加入2mlgnrs-mes溶液(2.40pmolmuda-gnrs與mes緩沖溶液的混合液)，在30℃下振蕩2h，離心，水洗；接著將產(chǎn)物溶于2.00mlpbs緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為7.4)，加入0.1μg抗體2在30℃下振蕩24h；最后，加入bsa封閉體系(200μl，0.300重量％，目的是封閉gnrs表面未被抗體2結(jié)合的位點(diǎn))繼續(xù)在30℃下振蕩0.5h，離心，洗滌得到gnrs-抗體2偶聯(lián)體。

7)afp的檢測(cè)：玻碳電極(gce)依次用0.30μm和0.05μm的鋁粉打磨，在乙醇和超純水中超聲后在空氣中自然晾干作為工作電極。

將1.25mg/mlucnps-ab1偶聯(lián)體溶液(2-10μlml，含有6.54μgμgucnps-ab1)與1200pmol/lgnrs-ab2偶聯(lián)體溶液(6μlml)加入2.00mlpbs緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為7.4)中，混合均勻，加入同體積不同濃度的afp溶液，在30℃下振蕩孵育102min作為樣品溶液。

ecl檢測(cè)：采用三電極系統(tǒng)，緩沖溶液為含6.00mlpbs緩沖溶液(0.100mol/l，ph為7.4，含有0.100mol/lk2s2o8)，向內(nèi)加入30.0μl樣品溶液，用電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀對(duì)其進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，繪制工作曲線，結(jié)果見圖9，其中，工作曲線方程為y＝2.88×10³lgx-2.17×10³，其中y是電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度淬滅值，x是afp的濃度。

實(shí)施例2

1)oa-ucnps(oa-nayf4:yb，er/mnucnps)的制備：

首先，稱量300mg的naoh置于50ml小燒杯中，加入5ml超純水、2.00ml油酸、5.0ml乙醇，攪拌均勻后依次加入0.500mlmncl2溶液(含有0.01gmncl2)，1.00mly(no3)3溶液(含有0.1gy(no3)3)，0.900mlybcl3溶液(含有0.05ybcl3)和0.100mler(no3)3溶液(含有5mger(no3)3)。接著，逐滴加入2.00mlnaf溶液(含有0.05gnaf)并在25℃下溫和攪拌15min，轉(zhuǎn)移至50ml反應(yīng)釜中，在180℃下反應(yīng)6h。自然冷卻至25℃后，離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min)，用超純水和乙醇反復(fù)洗滌幾次后分離得到oa-nayf4:yb，er/mnucnps。

2)oa-nayf4:yb，er/mnucnps的羧基修飾制得paa-ucnps：

將30.0mgoa-ucnps溶于3.00ml三氯甲烷中制得oa-ucnps溶液，將100mg聚丙烯酸(聚丙烯酸重均分子量為1800)溶于5.00ml超純水中制得聚丙烯酸溶液；然后，將oa-ucnps三氯甲烷溶液逐滴滴加到聚丙烯酸溶液中，在37℃條件下攪拌18h，通過聚丙烯酸的吸附，oa-ucnps從三氯甲烷層進(jìn)入水層；最后，離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min)分離出產(chǎn)品，并用超純水和乙醇洗滌得到paa-ucnps。

3)將2.50mgpaa-ucnps溶于2.00mlmes緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為6.4)中，超聲形成均勻的溶液，接著加入1mgedc和1mgnhs，在25℃下振蕩孵育2h，離心，水洗；將得到的產(chǎn)品加入2.00mlpbs緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為7.4)中，再加入0.1μg抗體1在25℃下振蕩24h，然后加入bsa封閉體系(200μl，含有1mgbsa，目的是封閉ucnps表面未被抗體1結(jié)合的位點(diǎn))，繼續(xù)在25℃振蕩0.5h后離心，水洗得到ucnps-ab1。

4)ctab-gnrs的制備：

首先，將5.00mlctab溶液(0.200mol/l，含有0.36gctab)溶液和5.00mlhaucl4溶液(含有0.5mghaucl4)溶液在不停攪拌下混合，快速加入0.600ml新制的nabh4溶液(含有0.1mgnabh4)溶液，溶液由無色變成黃褐色，于27℃下攪拌2min后得到gnrs種子液，存放于27℃水浴鍋中。

接著，將5.00mlctab溶液(0.200mol/l，含有0.36gctab)，0.260mlagno3溶液(含有0.033-0.048gagno3)，5.00mlhaucl4溶液(含有1mg的haucl4)依次混合，70.0μl抗壞血酸溶液(含有0.5mg抗壞血酸)在攪拌下逐滴加入，溶液由黃色變成無色得到生長(zhǎng)液，生長(zhǎng)液也置于27℃水浴鍋中反應(yīng)0.5h。

在gnrs種子液與生長(zhǎng)液制備完成后，用移液槍吸取5.0μl種子液加入11ml生長(zhǎng)液中，搖晃均勻，繼續(xù)在20℃下水浴20min，溶液呈藍(lán)紫色，離心，洗滌得到ctab-gnrs。

5)gnrs的修飾以得到muda-gnrs：

取10.0mlctab-gnrs溶液離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min，含有2.40pmol的ctab-gnrs)，棄去上清液，重新溶于10.0ml超純水，接著緩慢加入1.00mlmuda-乙醇溶液(含有2mgmuda)得到混合液，將該混合物在50℃下超聲0.5h，接著在25℃下持續(xù)超聲2h；最后離心得到muda-gnrs，并將muda-gnrs重新溶于10.0ml超純水中。

6)gnrs-ab2偶聯(lián)體的制備：

將1mgedc和1mgnhs加入1.5mlgnrs-mes溶液(2.40pmolmuda-gnrs與mes緩沖溶液的混合液)，在30℃下振蕩2h，離心，水洗；接著將產(chǎn)物溶于2.00mlpbs緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為7.4)，加入0.05μg抗體2在30℃下振蕩24h；最后，加入bsa封閉體系(0.300重量％，含有1mgbsa，目的是封閉gnrs表面未被抗體2結(jié)合的位點(diǎn))，繼續(xù)在30℃下振蕩0.5h，離心，洗滌得到gnrs-抗體2偶聯(lián)體。

7)afp的檢測(cè)：玻碳電極(gce)依次用0.30μm和0.05μm的鋁粉打磨，在乙醇和超純水中超聲后在空氣中自然晾干作為工作電極。

將1.25mg/mlucnps-ab1偶聯(lián)體溶液(含有6.54μgucnps-ab1)與1200pmol/lgnrs-ab2偶聯(lián)體溶液(6μl)加入2.00mlpbs緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為7.4)中，混合均勻，加入同體積不同濃度的afp溶液，在30℃下振蕩孵育102min作為樣品溶液。

ecl檢測(cè)：采用三電極系統(tǒng)，緩沖溶液為含6.00mlpbs緩沖溶液(0.100mol/l，ph為7.4，含有0.100mol/lk2s2o8)，向內(nèi)加入30.0μl樣品溶液，用電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀對(duì)其進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，繪制工作曲線，結(jié)果顯示工作曲與實(shí)施例1得到的工作曲線基本保持一致。

實(shí)施例3

1)oa-ucnps(oa-nayf4:yb，er/mnucnps)的制備：

首先，稱量300mg的naoh置于50ml小燒杯中，加入15ml超純水、8.00ml油酸、15.0ml乙醇，攪拌均勻后依次加入0.500mlmncl2溶液(含有0.1gmncl2)，1.00mly(no3)3溶液(含有0.3gy(no3)3)，0.900mlybcl3溶液(含有0.11gybcl3)和0.100mler(no3)3溶液(含有10mger(no3)3)。接著，逐滴加入2.00mlnaf溶液(含有0.3gnaf)并在25℃下溫和攪拌15min，轉(zhuǎn)移至50ml反應(yīng)釜中，在220℃下反應(yīng)10h。自然冷卻至25℃后，離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min)，用超純水和乙醇反復(fù)洗滌幾次后分離得到oa-nayf4:yb，er/mnucnps。

2)oa-nayf4:yb，er/mnucnps的羧基修飾制得paa-ucnps：

將30.0mgoa-ucnps溶于5ml三氯甲烷中制得oa-ucnps溶液，將0.3g聚丙烯酸(聚丙烯酸重均分子量為1800)溶于10ml超純水中制得聚丙烯酸溶液；然后，將oa-ucnps三氯甲烷溶液逐滴滴加到聚丙烯酸溶液中，在37℃條件下攪拌30h，通過聚丙烯酸的吸附，oa-ucnps從三氯甲烷層進(jìn)入水層；最后，離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min)分離出產(chǎn)品，并用超純水和乙醇洗滌得到paa-ucnps。

3)將2.50mgpaa-ucnps溶于2.00mlmes緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為6.4)中，超聲形成均勻的溶液，接著加入5mgedc和5mgnhs，在25℃下振蕩孵育2h，離心，水洗；將得到的產(chǎn)品加入2.00mlpbs緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為7.4)中，再加入0.2μg抗體1在25℃下振蕩24h，然后加入bsa封閉體系(200μl，含有5mgbsa，目的是封閉ucnps表面未被抗體1結(jié)合的位點(diǎn))，繼續(xù)在25℃振蕩0.5h后離心，水洗得到ucnps-ab1。

4)ctab-gnrs的制備：

首先，將5.00mlctab溶液(0.200mol/l，含有0.36gctab)溶液和5.00mlhaucl4溶液(含有1.5mghaucl4)溶液在不停攪拌下混合，快速加入0.600ml新制的nabh4溶液(含有0.5mgnabh4)溶液，溶液由無色變成黃褐色，于27℃下攪拌2min后得到gnrs種子液，存放于27℃水浴鍋中。

接著，將5.00mlctab溶液(0.200mol/l，含有0.36gctab)，0.260mlagno3溶液(含有0.033-0.048gagno3)，5.00mlhaucl4溶液(含有3mg的haucl4)依次混合，70.0μl抗壞血酸溶液(含有1.5mg抗壞血酸)在攪拌下逐滴加入，溶液由黃色變成無色得到生長(zhǎng)液，生長(zhǎng)液也置于27℃水浴鍋中反應(yīng)0.5h。

在gnrs種子液與生長(zhǎng)液制備完成后，用移液槍吸取20μl種子液加入11ml生長(zhǎng)液中，搖晃均勻，繼續(xù)在30℃下水浴60min，溶液呈藍(lán)紫色，離心，洗滌得到ctab-gnrs。

5)gnrs的修飾以得到muda-gnrs：

取10.0mlctab-gnrs溶液離心(10000rmp轉(zhuǎn)速，離心5min，含有2.4pmol的ctab-gnrs)，棄去上清液，重新溶于10.0ml超純水，接著緩慢加入1.00mlmuda-乙醇溶液(含有7mgmuda)得到混合液，將該混合物在50℃下超聲0.5h，接著在25℃下持續(xù)超聲2h；最后離心得到muda-gnrs，并將muda-gnrs重新溶于10.0ml超純水中。

6)gnrs-ab2偶聯(lián)體的制備：

將5mgedc和5mgnhs加入3mlgnrs-mes溶液(2.4pmol/l，muda-gnrs與mes緩沖溶液的混合液)，在30℃下振蕩2h，離心，水洗；接著將產(chǎn)物溶于2.00mlpbs緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為7.4)，加入0.2μg抗體2在30℃下振蕩24h；最后，加入bsa封閉體系(200μl，含有5mgbsa，目的是封閉gnrs表面未被抗體2結(jié)合的位點(diǎn))，繼續(xù)在30℃下振蕩0.5h，離心，洗滌得到gnrs-抗體2偶聯(lián)體。

7)afp的檢測(cè)：玻碳電極(gce)依次用0.30μm和0.05μm的鋁粉打磨，在乙醇和超純水中超聲后在空氣中自然晾干作為工作電極。

將1.25mg/mlucnps-ab1偶聯(lián)體溶液(含有6.54μgucnps-ab1)與1200pmol/lgnrs-ab2偶聯(lián)體溶液(6μl)加入2.00mlpbs緩沖溶液(10.0mmol/l，ph為7.4)中，混合均勻，加入同體積不同濃度的afp溶液，在30℃下振蕩孵育102min作為樣品溶液。

ecl檢測(cè)：采用三電極系統(tǒng)，緩沖溶液為含6.00mlpbs緩沖溶液(0.100mol/l，ph為7.4，含有0.100mol/lk2s2o8)，向內(nèi)加入30.0μl樣品溶液，用電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀對(duì)其進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，繪制工作曲線，結(jié)果顯示工作曲與實(shí)施例1得到的工作曲線基本保持一致。

實(shí)施例4

按照實(shí)施例1的步驟1)制得oa-ucnps，所不同的是mncl2溶液中錳離子的濃度為0.4mol/l。

實(shí)施例5

按照實(shí)施例1的步驟1)制得oa-ucnps，所不同的是mncl2溶液中錳離子的濃度為0.5mol/l。

實(shí)施例6

按照實(shí)施例1的步驟1)制得oa-ucnps，所不同的是mncl2溶液中錳離子的濃度為0.7mol/l。

實(shí)施例8

按照實(shí)施例1的步驟1)制得oa-ucnps，所不同的是mncl2溶液中錳離子的濃度為0.8mol/l。

檢測(cè)例1

上轉(zhuǎn)換材料發(fā)光強(qiáng)度的檢測(cè)：通過牌號(hào)為chi660a的電化學(xué)工作站對(duì)實(shí)施例1、實(shí)施例4-8中oa-ucnps進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，具體結(jié)果見圖1a，由該圖可知當(dāng)mn²⁺濃度為0.600mol/l，上轉(zhuǎn)換材料發(fā)光強(qiáng)度達(dá)到最大值。

ecl發(fā)光-電壓曲線的檢測(cè)：檢測(cè)結(jié)果見圖1b，其中，a曲線是實(shí)施例1中未摻雜mn²⁺的nayf4:yb，er的ecl發(fā)光-電壓曲線(未摻雜mn²⁺的nayf4:yb按照實(shí)施例1的步驟1)的方法制備，不同的是未使用mncl2溶液)，b曲線是實(shí)施例1中oa-nayf4:yb，er/mnucnps的ecl發(fā)光-電壓曲線，從圖中可以看出，電壓從0v掃描到-1.9v之間時(shí)，上述兩種ucnps無ecl信號(hào)，而電壓從-1.9v掃描到-2.5v時(shí)，a、b曲線的ecl峰都急速上升，在-2.5v時(shí)達(dá)到最高。

檢測(cè)例2

通過牌號(hào)為jeol2010的透射電子顯微鏡對(duì)實(shí)施例1中oa-ucnps以及未摻雜mn²⁺的oa-nayf4:yb，erucnps上轉(zhuǎn)換材料(按照實(shí)施例1的步驟1)制得oa-ucnps，所不同的未使用mncl2溶液)的形貌檢測(cè)，具體見圖2a和圖2b，其中，圖2a未摻雜mn²⁺的oa-nayf4:yb，erucnps上轉(zhuǎn)換材料的tem圖，圖2b是實(shí)施例1中oa-ucnps的tem圖；由圖2a可知，沒有摻雜mn²⁺時(shí)，上轉(zhuǎn)換材料呈現(xiàn)兩種形態(tài)，既有立方體又存在六方相的納米棒，但隨著30％mn²⁺的摻雜，ucnps全都變成了立方體。

檢測(cè)例3

利用牌號(hào)為hitachis-4800的掃描電子顯微鏡對(duì)實(shí)施例1中oa-ucnps進(jìn)行元素分析(eds)，結(jié)果如圖3。由圖3可知，nayf4:yb，er/mnucnps成功制備。

檢測(cè)例4

通過牌號(hào)為ht-7700的透射電子顯微鏡對(duì)實(shí)施例1中的ctab-gnrs進(jìn)行形貌檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖4。由圖4可知，制得的gnrs粒徑較均一。

檢測(cè)例5

通過牌號(hào)為uv-4100的紫外-可見分光光度計(jì)實(shí)施例1中的ctab-gnrs進(jìn)行吸收光譜測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果如圖5中a曲線。

通過牌號(hào)為(bpcl-t(-2-i-c))的微弱發(fā)光測(cè)量?jī)x對(duì)實(shí)施例1中oa-ucnps進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光光譜測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果如圖5中b曲線。

由圖5可知，實(shí)施例1中的ctab-gnrs的最大吸收峰在635nm處，與實(shí)施例1中oa-ucnps的發(fā)射峰有很大程度的重疊，是發(fā)生ecl-ret的必要條件之一。

檢測(cè)例6

利用牌號(hào)mpi-a型的多功能電化學(xué)和電致化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)記錄對(duì)電化學(xué)發(fā)光能量轉(zhuǎn)移反應(yīng)條件的優(yōu)化和對(duì)比，結(jié)果如圖6a-6b、圖7a-7b。

其中，圖6a中采用實(shí)施例1的方式進(jìn)行，所不同的是改變步驟7)中ucnps-ab1偶聯(lián)體溶液的濃度，結(jié)果顯示1.09μg/ml為ucnps-ab1偶聯(lián)體的最佳濃度。

圖6b中采用實(shí)施例1的方式進(jìn)行，所不同的是改變步驟7)中g(shù)nrs-ab2偶聯(lián)體溶液，結(jié)果顯示1.20pmol/l為gnrs-ab2偶聯(lián)體溶液的最佳濃度。

圖6c中采用實(shí)施例1的方式進(jìn)行，所不同的是改變步驟7)中振蕩孵育時(shí)間，結(jié)果顯示100min以上為最佳的振蕩孵育時(shí)間。

圖7a中采用實(shí)施例1的方式進(jìn)行，所不同的是改變步驟7)的ecl檢測(cè)體系的成分，結(jié)果顯示ucnps-ab1在含k2s2o8的pbs緩沖溶液(0.100mol/l的k2s2o8，ph為7.4)中有很強(qiáng)的ecl(a曲線)。但是，當(dāng)緩沖溶液中不含k2s2o8時(shí)，卻觀察不到發(fā)光(g曲線)，這說明k2s2o8是共反應(yīng)劑。而當(dāng)緩沖溶液中只含k2s2o8時(shí)(f曲線)，只觀察到有微弱的發(fā)光，說明本發(fā)明中ucnps作為ecl體發(fā)光。向ucnps-ab1+k2s2o8體系中單獨(dú)加入適量gnrs時(shí)，由于內(nèi)濾效應(yīng)ecl有少量猝滅(b曲線)，單獨(dú)加入afp時(shí)，由于加入的封閉活性位點(diǎn)的bsa電阻較大，ecl也有微量猝滅(c曲線)。而向其中同時(shí)加入afp和gnrs-ab2時(shí)，產(chǎn)生發(fā)光猝滅現(xiàn)象(d曲線，e曲線)；這是由于抗原抗體的特異性結(jié)合，拉近了ucnps與gnrs之間的距離，發(fā)生ecl-ret，ecl發(fā)光得以猝滅，

圖7b中采用實(shí)施例1的方式進(jìn)行，所不同的是改變步驟7)中afp濃度，分析ucnps-ab1在620nm處的發(fā)光強(qiáng)度與afp濃度之間的關(guān)系，結(jié)果說明了隨著afp濃度的增大，△iecl(△iecl＝i0–i，i0是當(dāng)體系中不含afp時(shí)的ecl強(qiáng)度，i是體系當(dāng)中加入afp時(shí)的ecl強(qiáng)度)逐漸增大，進(jìn)一步證明了ecl-ret的發(fā)生。

檢測(cè)例7

利用牌號(hào)mpi-a型的多功能電化學(xué)和電致化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)記錄對(duì)實(shí)施例1中oa-ucnps進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度分析，結(jié)果如圖8。由圖8可知，oa-ucnps在連續(xù)18圈的循環(huán)電壓掃描下信號(hào)仍然穩(wěn)定。

檢測(cè)例8

利用牌號(hào)mpi-a型的多功能電化學(xué)和電致化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)記錄實(shí)施例1中的電化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移反應(yīng)進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖9a和圖9b所示。由圖9a和圖9b可知，afp濃度的對(duì)數(shù)值與ecl強(qiáng)度淬滅△iecl(△iecl＝i0-i，i0與i分別為體系中不加afp抗原和加afp抗原的ecl強(qiáng)度)之間具有較好的線性關(guān)系。

應(yīng)用例1

電化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)實(shí)際樣：

血清純化，然后按照實(shí)施例1的方法對(duì)對(duì)血清中的afp進(jìn)行了檢測(cè)，再向血清中加入已知濃度的afp，再次測(cè)定。加入表示通過標(biāo)準(zhǔn)加入法向體系中加入標(biāo)準(zhǔn)afp樣品，發(fā)現(xiàn)表示在afp加入后，測(cè)得的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度值，根據(jù)工作曲線，得出的濃度值。具體結(jié)果見表1，其中rsd為相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表1

應(yīng)用例2

干擾檢測(cè)：

按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行，所不同的是向電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)體系中加入干擾物質(zhì)(hpo4^2-:5.32×10⁶pg/ml，fe³⁺:3.04×10⁵pg/ml，ni²⁺:2.91×10⁵pg/ml，甘氨酸:1.42×10⁴pg/ml，脯氨酸:4.32×10³pg/ml，半胱氨酸:2.27×10⁴pg/ml，半乳糖:3.38×10⁵pg/ml，葡萄糖:3.38×10⁷pg/ml，尿素:1.13×10⁷pg/ml，檸檬酸:3.60×10⁷pg/ml，牛血清蛋白：6.23×10⁶pg/ml，鐵蛋白:1.88×10²pg/ml，人體前列腺抗原:1.88×10²pg/ml)。根據(jù)所得的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度值，繪制柱狀圖，結(jié)果見圖10，其中，圖中的各英文分別表示glycine：甘氨酸；pro：脯氨酸；cys：半胱氨酸；galactose：半乳糖；glucose：葡萄糖；urea：尿素；citricacid：檸檬酸；bsa:牛血清蛋白；sf:鐵蛋白；psa：人體前列腺抗原；afp:甲胎蛋白。由圖可以看出，各種干擾物對(duì)體系均無影響。最后一條柱狀圖為標(biāo)準(zhǔn)afp樣品，可以看出電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度淬滅效果良好。

按照上述檢測(cè)例和應(yīng)用例對(duì)實(shí)施例2-8中的方法或者其中的ucnps-ab1偶聯(lián)體、gnrs-ab2偶聯(lián)體或oa-ucnps進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)的結(jié)果與實(shí)施例1的檢測(cè)結(jié)果基本保持一致。

以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn)單變型，這些簡(jiǎn)單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

另外需要說明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說明。

此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。