1.一種具有抗腫瘤活性的向日葵莖芯多糖的提取分離方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)取于秋季采收的向日葵的稈,將向日葵莖芯剝離出來,置于陰涼處自然風(fēng)干,再放入40℃烘箱中干燥8h。將干燥的向日葵莖芯用粉碎機(jī)粉碎后備用。
(2)取一定量干燥的向日葵莖芯粉末,過篩,用95%乙醇回流提取兩次,以去除脂溶性成分;再用80%乙醇回流提取兩次,以除去單糖和低聚糖。所得殘渣烘干,揮發(fā)去除有機(jī)溶劑后,在一定的料液比、浸提時間和浸提溫度下,對向日葵莖芯多糖進(jìn)行多次浸煮提取。
(3)收集合并多次浸煮提取所得提取液,將提取液過濾后減壓濃縮后加入95%乙醇,靜置24h,3000r/min離心15min得沉淀,將所得沉淀用丙酮、乙醇洗滌并烘干,即得到向日葵莖芯多糖粗產(chǎn)品。
(4)根據(jù)苯酚-硫酸法測定上述多糖粗產(chǎn)品在490nm波長處的吸光度,并以多糖提取率為考察指標(biāo),測定得到的多糖粗產(chǎn)品中多糖的含量為85.37%。
(5)取上述多糖粗產(chǎn)品,經(jīng)過除蛋白后,溶解于純化水中,過DEAE纖維素DE-52離子交換柱進(jìn)行分離,以一定的流速,依次用4種不同濃度的NaCI溶液梯度洗脫,收集四種洗脫組分,經(jīng)透析、濃縮、冷凍干燥,得到四種不同的洗脫組分HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3和HALWP-4,分別測定各不同洗脫組分的體內(nèi)抗腫瘤活性,其中抗腫瘤活性最好的為HALWP-4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的向日葵莖芯多糖的提取分離方法,其特征在于:步驟(2)中向日葵莖芯粉末所過篩目數(shù)為20-100目,與純化水的比例為1:30-1:70,。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的向日葵莖芯多糖的提取分離方法,其特征在于:步驟(2)中向日葵莖芯粉末的浸提時間為1.0-4.0h,浸提溫度為50-100℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的向日葵莖芯多糖的提取分離方法,其特征在于:步驟(3)中所得的向日葵莖芯多糖,在細(xì)胞培養(yǎng)液中,向日葵莖芯多糖以3.0-5.0mg/mL的濃度能對人胃癌細(xì)胞SGC-7901的生長抑制率可達(dá)50%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的向日葵莖芯多糖的提取分離方法,其特征在于:步驟(3)中所得的向日葵莖芯多糖,在細(xì)胞培養(yǎng)液中,向日葵莖芯多糖以4.0-6.0mg/mL的濃度能對人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8的生長抑制率可達(dá)50%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的向日葵莖芯多糖的提取分離方法,其特征在于:步驟(3)中所得的向日葵莖芯多糖,在細(xì)胞培養(yǎng)液中,向日葵莖芯多糖以1.5-3.5mg/mL的濃度能對人類口腔上皮癌細(xì)胞KB的生長抑制率可達(dá)50%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的向日葵莖芯多糖的提取分離方法,其特征在于:步驟(5)中NaCI溶液的流速為0.5-2.0mL/min,濃度為0.1-0.4mol/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的向日葵莖芯多糖的提取分離方法,其特征在于:步驟(5)所述的具有抗腫瘤活性的向日葵莖芯多糖及其四種分級組分在制備治療腫瘤藥物或制劑中的應(yīng)用。