本發(fā)明屬于基因工程應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及利用擬南芥AtYchF1基因植物除草的方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

隨著世界人口的不斷增長，人類對糧食及其他農(nóng)作物的需求越來越大。為了促進(jìn)糧食及其他農(nóng)作物的生長，實現(xiàn)糧食及其他農(nóng)作物的增產(chǎn)，防止作物附近的雜草與糧食及其他農(nóng)作物競爭營養(yǎng)成分，常常需要將糧食及其他農(nóng)作物附近的雜草除去，傳統(tǒng)的除草方式是人工除草(割草或拔草)，但是人工除草勞動強(qiáng)度大、效率低且人力成本高；采用除草劑(百草枯)能大大提高除草效率，有效降低勞動強(qiáng)度及人力成本，百草枯(1-1-二甲基-4-4-聯(lián)吡啶陽離子鹽)是一種快速滅殺性除草劑，其除草的機(jī)理是作為電子受體，作用于植物線粒體，參與氧化還原調(diào)控，產(chǎn)生大量的活性氧自由基，包括超氧化陰離子自由基(O＝)及過氧化氫(H₂O₂)，最終導(dǎo)致植物的死亡，由于百草枯對糧食及其他農(nóng)作物與雜草并無選擇性，同時，糧食及其他農(nóng)作物對百草枯的耐受性不夠高，因此，當(dāng)雜草與將糧食及其他農(nóng)作物夾雜生長在一起的時候，使用除草劑(百草枯)除草很容易傷害甚至殺死糧食與其他農(nóng)作物。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服了上述缺陷，提供利用擬南芥AtYchF1基因植物除草的方法及應(yīng)用，為培育出耐除草劑作物新品種提供新的可能。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

本發(fā)明提供利用擬南芥AtYchF1基因植物除草的方法，包括以下步驟：

步驟1：培育缺失AtYchF1同源基因的作物植物；

步驟2：在田間種植步驟1培育的缺失AtYchF1同源基因的作物植物；

步驟3：在田間施加作物植物耐受的、有效量的除草劑至雜草和作物植物以控制雜草。

本發(fā)明還提供利用擬南芥AtYchF1基因植物除草的應(yīng)用，所述AtYchF1基因在Genebank中的編號為AT1G30580，其DNA序列如序列表中序列1所示，其編碼的氨基酸序列如序列表中序列2所示；

所述AtYchF1基因與植物抵抗除草劑功能相關(guān)，在將AtYchF1基因缺失后，突變體植株對于除草劑的耐受性得到增強(qiáng)；

而在將AtYchF1基因過表達(dá)后，突變體植株對于除草劑的敏感度提升。

本發(fā)明的有益效果在于：由于除草劑(百草枯)作用于植物線粒體，參與氧化還原調(diào)控，產(chǎn)生大量的活性氧自由基，而發(fā)明人通過一系列實驗證明，擬南芥AtYchF1基因也參與植物內(nèi)部的氧化還原調(diào)控，并在翻譯水平參與了植物對于除草劑(百草枯)的抵抗，且由于YchF家族成員在不同物種間的蛋白質(zhì)序列保守性極強(qiáng)(同源性>90％)，因此，針對AtYchF1基因的突變體，為培育新的耐除草劑(百草枯)的經(jīng)濟(jì)作物新品種提供了新的可能，進(jìn)而達(dá)到利用除草劑(百草枯)清除雜草，但不傷害農(nóng)作物的目的；本除草方法通過提高作物植物對除草劑的耐受性再利用除草劑除去植物作物附近雜草，既保持了化學(xué)除草的高效性，又有效避免了除草劑(百草枯)對作物的傷害，可操作性強(qiáng)，具有一定的推廣性。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例1中缺失突變體AtYchF1和野生型Col-2擬南芥生長在含有百草枯培養(yǎng)基上的表型。

圖2是本發(fā)明實施例2中缺失突變體AtYchF1和野生型Col-2擬南芥的半定量PCR試驗結(jié)果。

圖3是本發(fā)明實施例3中百草枯處理后缺失突變體AtYchF1的葉綠素含量與野生型Col-2擬南芥的葉綠素含量。

圖4是本發(fā)明實施例4中不同植物YchF蛋白質(zhì)氨基酸序列的比對，同源性>90％，其中水稻OsYchF1基因與擬南芥AtYchF1基因同源性≥96％。

具體實施方式

為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、構(gòu)造特征、所實現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實施方式并配合附圖詳予說明。

請參照圖1至圖4，本發(fā)明提供一種利用擬南芥AtYchF1基因植物除草的方法，包括以下步驟：

步驟1：培育缺失AtYchF1同源基因的作物植物；

步驟2：在田間種植步驟1培育的缺失AtYchF1同源基因的作物植物；

步驟3：在田間施加作物植物耐受的、有效量的除草劑至雜草和作物植物以控制雜草。

從上述描述可知，本發(fā)明的有益效果在于：由于除草劑(百草枯)作用于植物線粒體，參與氧化還原調(diào)控，產(chǎn)生大量的活性氧自由基，而發(fā)明人通過一系列實驗證明，擬南芥AtYchF1基因也參與植物內(nèi)部的氧化還原調(diào)控，并在翻譯水平參與了植物對于除草劑(百草枯)的抵抗，且由于YchF家族成員在不同物種間的蛋白質(zhì)序列保守性極強(qiáng)(同源性>90％)，因此，針對AtYchF1基因的突變體，為培育新的耐除草劑(百草枯)的經(jīng)濟(jì)作物新品種提供了新的可能，進(jìn)而達(dá)到利用除草劑(百草枯)清除雜草，但不傷害農(nóng)作物的目的；本除草方法通過提高作物植物對除草劑的耐受性再利用除草劑除去植物作物附近雜草，既保持了化學(xué)除草的高效性，又有效避免了除草劑(百草枯)對作物的傷害，可操作性強(qiáng)，具有一定的推廣性。

進(jìn)一步的，所述除草劑為百草枯。

由上述描述可知，采用百草枯為除草劑除草效果更佳。

進(jìn)一步的，得到所述AtYchF1同源基因的作物植物突變體的手段包括RNAi干擾及CRISPR-Cas6基因編輯技術(shù)。

本發(fā)明還提供擬南芥AtYchF1基因在植物除草方面的應(yīng)用，所述AtYchF1基因在Genebank中的編號為AT1G30580；

所述AtYchF1基因與植物抵抗除草劑功能相關(guān)，在將AtYchF1基因缺失后，突變體植株對于除草劑的耐受性得到增強(qiáng)；

而在將AtYchF1基因過表達(dá)后，突變體植株對于除草劑的敏感度提升。

本發(fā)明的工作過程及原理為：G蛋白是一個重要的調(diào)控因子，廣泛參與植物不同的信號傳導(dǎo)通路。G蛋白分為三類：異三聚體G蛋白、小G蛋白及非傳統(tǒng)G蛋白。與異三聚體G蛋白和小G蛋白一樣，非傳統(tǒng)G蛋白可以水解三磷酸鳥苷(GTP)為二磷酸鳥苷(GDP)，因此有兩種存在形態(tài)，結(jié)合GTP的激活形態(tài)和結(jié)合GDP的非激活形態(tài)。水稻OsYchF1屬于非傳統(tǒng)G蛋白，為G蛋白TRAFAC超家族Obg家族YchF亞家族的一員。

非傳統(tǒng)G蛋白OsYchF1由三個結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，從N端到C端依次為，雙螺旋結(jié)構(gòu)域、G蛋白核心結(jié)構(gòu)域和TGS(ThrRS，GTPase，SpoT)結(jié)構(gòu)域。核心結(jié)構(gòu)域又由五個保守的區(qū)域構(gòu)成，G1，G2，G3，G4和G5。G1(GxxxxGK(S/T))區(qū)域通過形成氫鍵可以結(jié)合GTP或者腺苷三磷酸(ATP)的磷酸根；G2(x(T/S)x)和G3(hhhDxxG)區(qū)域可以結(jié)合一個鎂離子，并且起到水解GTP為GDP的作用；G5((T/G)(C/S)A)區(qū)域協(xié)助了鳥嘌呤或者腺嘌呤基團(tuán)的識別；TGS結(jié)構(gòu)域的功能還不是很清楚，由于它富集堿性氨基酸，可能參與結(jié)合核糖體RNA；G4區(qū)域識別GTP的鳥嘌呤基團(tuán)，決定了G蛋白結(jié)合GTP或者ATP。非傳統(tǒng)G蛋白YchF亞家族成員的G4區(qū)域((N/T)(M/L)xE)區(qū)別于其它G蛋白G4區(qū)域((N/T)KxD)，這種G4區(qū)域的差異使OsYchF1既可以結(jié)合GTP，又可以結(jié)合ATP，而其它類型的G蛋白只能結(jié)合GTP或者ATP其中的一種。

目前的研究結(jié)果表明，非傳統(tǒng)G蛋白YchF亞家族成員在非轉(zhuǎn)錄水平上參與了氧化還原調(diào)控，并且起到了負(fù)調(diào)控因子的作用。Osychf1人體同系物hola1突變體細(xì)胞系表現(xiàn)了對三丁基氫過氧化物和二酰胺引起的氧壓的耐受性，并且在翻譯水平參與了人體的氧化還原調(diào)控過程。最新的體外生化研究結(jié)果表明，大腸桿菌YchF蛋白質(zhì)表面保守的半胱氨酸(Cys-35)參與了由氧化還原調(diào)控的蛋白質(zhì)單體和同源二聚體的循環(huán)平衡，并且對其生理功能起到了關(guān)鍵性的調(diào)控作用。二聚體型態(tài)的大腸桿菌YchF失去了ATPase活性，而硫氧還蛋白可以與二聚體型態(tài)的大腸桿菌YchF相互作用，并且恢復(fù)了其ATPase活性。

水稻OsYchF1基因的前期研究結(jié)果表明，與野生型相比較，水稻OsYchF1基因的擬南芥過量表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系對病原體(Pseudomonas syringae pv.tomato strain DC3000(Pst DC3000))響應(yīng)為敏感；同時，對150mM NaCl處理的響應(yīng)也為敏感；與野生型(Col-2)相比較，申請人的研究發(fā)現(xiàn)AtYchF1的突變體表現(xiàn)了對除草劑(百草枯)引起的活性氧壓的耐受性?，F(xiàn)有證據(jù)表明，YchF家族成員作為負(fù)調(diào)控因子參與了生物體應(yīng)對外界脅迫的調(diào)控過程，并且在應(yīng)答脅迫的氧化還原過程中扮演重要角色。

本發(fā)明在對野生型(Col-2)、AT1G30580所代表基因AtYchF1功能缺失突變體atychf1植株在對除草劑的系列生理研究發(fā)現(xiàn)，AtYchF1基因在翻譯水平參與了植物對于除草劑的抵抗。由于YchF家族成員在不同物種間的蛋白質(zhì)序列保守性極強(qiáng)(同源性>90％)，針對AtYchF1基因的突變體，可為培育新的耐除草劑的經(jīng)濟(jì)作物新品種提供新的可能，從而達(dá)到應(yīng)用除草劑清除雜草，但不傷害農(nóng)作物的目的。

從上述描述可知，本發(fā)明的有益效果在于：由于除草劑(百草枯)作用于植物線粒體，參與氧化還原調(diào)控，產(chǎn)生大量的活性氧自由基，而發(fā)明人通過一系列實驗證明，擬南芥AtYchF1基因也參與植物內(nèi)部的氧化還原調(diào)控，并在翻譯水平參與了植物對于除草劑(百草枯)的抵抗，且由于YchF家族成員在不同物種間的蛋白質(zhì)序列保守性極強(qiáng)(同源性>90％)，因此，針對AtYchF1基因的突變體，為培育新的耐除草劑(百草枯)的經(jīng)濟(jì)作物新品種提供了新的可能，進(jìn)而達(dá)到利用除草劑(百草枯)清除雜草，但不傷害農(nóng)作物的目的；本除草方法通過提高作物植物對除草劑的耐受性再利用除草劑除去植物作物附近雜草，既保持了化學(xué)除草的高效性，又有效避免了除草劑(百草枯)對作物的傷害，可操作性強(qiáng)，具有一定的推廣性。

進(jìn)一步的，所述除草劑為百草枯。

進(jìn)一步的，所述將AtYchF1基因缺失的手段包括RNAi干擾及CRISPR-Cas6基因編輯技術(shù)。

進(jìn)一步的，所述RNAi干擾為將全長AtYchF1基因的sense和anti-sense鏈分別連接到RNAi載體中，運(yùn)用花絮侵染法侵染擬南芥，篩選獲得RNAi干擾株系。

進(jìn)一步的所述RNAi載體為pKANNIBAL；

進(jìn)一步的，所述RNAi干擾的具體操作包括以下步驟：

步驟1：植物培養(yǎng)；

植物培養(yǎng)包括打頂與澆水，所述打頂為從底部剪去第一個花序；打頂一周后，浸染前一天進(jìn)行澆水；

其中最適宜的浸染時間為：主花序結(jié)莢，次花序約2-10cm長，有少量花開；

步驟2：農(nóng)桿菌侵染；

所述農(nóng)桿菌浸染所采用的農(nóng)桿菌培養(yǎng)基包括以下原料制備而成：YEP(10g蛋白胨，5g酵母提取物，5g氯化鈉)及50μg/mL抗生素(卡那霉素)；

農(nóng)桿菌培養(yǎng)條件：在28度環(huán)境中，于250rpm轉(zhuǎn)速下振蕩培養(yǎng)；

a)接種并挑選單克隆接種于10ml YEP培養(yǎng)基中，在28～30度環(huán)境中，于250rpm轉(zhuǎn)速下振蕩培養(yǎng)過夜；

b)按比例1:100接種到200ml YEP，搖菌18-24小時，使得OD600為1.8-2.0；

c)配制新鮮侵染液：包括1/2MS，5.0％蔗糖；0.05％Silwet L-77(表面活性劑)，pH＝5.7；

d)5500rpm(轉(zhuǎn)每分鐘)離心沉淀，20min收集菌體，用侵染液重懸，使得OD600為0.8；

e)侵染，將植物上部分組織浸入侵染液3-5秒，并輕輕晃動；

f)套筒，保持濕度和避光，過夜；

g)第二日移入正常生長培養(yǎng)箱中，直到收種；

步驟3：篩選

a)種子消毒

i.75％乙醇浸泡，劇烈震動，2-3分鐘，去離子水沖洗

ii.次氯酸鈉浸泡，劇烈震動，3分鐘，去離子沖洗五次

b)播種

i.播種于含抗性的1/2MS(Sigma#M-5519)，0.8％agar培養(yǎng)基上

進(jìn)一步的，所述CRISPR-Cas6基因編輯技術(shù)為將選定的AtYchF1基因片段轉(zhuǎn)入CRISPR-Cas6載體(bgk01)中，運(yùn)用花絮侵染法侵染擬南芥。

實施例1

請參照圖1，將在1/2MS培養(yǎng)基上萌發(fā)五天的缺失突變體AtYchF1和野生型Col-2擬南芥轉(zhuǎn)到含有0.1mM百草枯的1/2MS培養(yǎng)基上繼續(xù)生長五天，并觀察其表型。

由圖1可知，在含有百草枯的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)的缺失突變體AtYchF1明顯比野生型Col-2擬南芥長得茂盛，表明缺失突變體AtYchF1對百草枯的耐受性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于野生型Col-2擬南芥，即缺失AtYchF1基因的擬南芥對百草枯的耐受性得到提高。

實施例2

請參照圖2，運(yùn)用半定量RT PCR技術(shù)，以缺失突變體AtYchF1和野生型Col-2擬南芥轉(zhuǎn)的cDNA為模版，鑒定缺失突變體AtYchF1和野生型Col-2擬南芥AtYchF1基因RNA的轉(zhuǎn)錄情況。

由圖2可知，RT-PCR結(jié)果顯示，缺失突變體AtYchF1中沒有AtYchF1基因RNA的轉(zhuǎn)錄，而野生型Col-2擬南芥有AtYchF1基因RNA的轉(zhuǎn)錄，即AtYchF1的突變體沒有表達(dá)AtYchF1的mRNA。

實施例3

請參照圖3，將在含有0.1mM百草枯的1/2MS培養(yǎng)基上生長五天的缺失突變體AtYchF1和野生型Col-2擬南芥葉片分別剪下，在4℃用0.8ml N,N-dimehylformamide(DMF)浸泡過夜，用紫外分光光度計測量葉綠素a，葉綠素b，葉綠素p的含量，并計算葉綠素的總含量(縱坐標(biāo)為熒光強(qiáng)度)。

由圖3可知，缺失突變體AtYchF1的葉綠素含量高于野生型Col-2擬南芥的葉綠素含量，表明AtYchF1突變體受百草枯引起的活性氧壓的影響小于野生型Col-2擬南芥。

實施例4

一種利用擬南芥AtYchF1基因植物除草的方法，包括以下步驟：

步驟1：培育缺失AtYchF1同源基因的作物植物，如缺失水稻OsYchF1基因(同源性≥96％)的水稻突變體；

步驟2：在田間種植步驟1培育的缺失AtYchF1同源基因的作物植物，如在田間種植步驟1培育的水稻(缺失OsYchF1基因)突變體；

步驟3：在田間施加作物植物耐受的、有效量的除草劑至雜草和作物植物以控制雜草。

綜上所述，本發(fā)明提供的擬南芥AtYchF1基因在植物除草方面的應(yīng)用，由于除草劑(百草枯)作用于植物線粒體，參與氧化還原調(diào)控，產(chǎn)生大量的活性氧自由基，而發(fā)明人通過一系列實驗證明，擬南芥AtYchF1基因也參與植物內(nèi)部的氧化還原調(diào)控，并在翻譯水平參與了植物對于除草劑(百草枯)的抵抗，且由于YchF家族成員在不同物種間的蛋白質(zhì)序列保守性極強(qiáng)(同源性>90％)，因此，針對AtYchF1基因的突變體，為培育新的耐除草劑(百草枯)的經(jīng)濟(jì)作物新品種提供了新的可能，進(jìn)而達(dá)到利用除草劑(百草枯)清除雜草，但不傷害農(nóng)作物的目的；本除草方法通過提高作物植物對除草劑的耐受性再利用除草劑除去植物作物附近雜草，既保持了化學(xué)除草的高效性，又有效避免了除草劑(百草枯)對作物的傷害，可操作性強(qiáng)，具有一定的推廣性。

以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。

SEQUENCE LISTING

<110> 福建農(nóng)林大學(xué)

<120> 利用擬南芥AtYchF1基因植物除草的方法及應(yīng)用

<130> 2017

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1185

<212> DNA

<213> 擬南芥（Arabidopsis thaliana L.）

<400> 1

atgcctccga aagccaaagc taaagatgca ggtcccgtag agaggcctat tcttggccgt 60

ttctcttctc acctcaagat cggaattgtt gggttaccaa atgttggaaa atctactctt 120

ttcaacactc ttacaaagct ttcaattcca gctgagaatt tccccttttg taccattgag 180

cctaatgagg cacgtgtgaa tatccccgat gagaggttcg attggctttg ccaaacttac 240

aagcctaaga gtgagattcc agctttcttg gaaattcatg acattgctgg gcttgttaga 300

ggagctcatg aaggacaggg tcttggaaac aacttcttgt cccatattcg tgcagttgat 360

ggaattttcc atgttttacg tgcttttgaa gatgctgata ttatccatgt cgacgatatc 420

gtggatcctg ttagagattt ggagaccatt actgaagagt tgcggctaaa ggatattgaa 480

tttgttggaa agaagattga tgatgtcgag aagagcatga agaggagcaa tgacaagcag 540

ctgaaaatag aacttgagct cttgcaaaag gtaaaagctt ggctagaaga tggtaaggat 600

gtccgttttg gggactggaa aacagctgat atcgagattt tgaacacttt ccaattgctt 660

tctgcaaagc ccgttgttta cttgattaac ctgaatgaga gagactatca gaggaagaaa 720

aacaagttct tgccaaagat tcatgcctgg gttcaagaac acggtggtga tactatgatt 780

cctttcagtg gtgtgtttga aaggagtctc gctgatatgg ccccagatga agcagcaaag 840

tattgtgagg agaacaaact gcaaagtgct cttccgagga tcatcaaaac tggattttca 900

gcaattaacc tcatatactt ctttacagca gggcctgatg aggtgaagtg ctggcaaata 960

agacggcagt caaaggctcc tcaagctgca ggggccattc atactgattt tgagagagga 1020

tttatttgtg ctgaggtcat gaaattcgag gatctcaagg aacttggcaa tgaacctgca 1080

gtcaaggccg caggaaaata cagacaggag ggtaaaacat atgttgttca ggatggagat 1140

atcattttct tcaagttcaa tgtttccggt ggtgggaaga aatga 1185

<210> 2

<211> 394

<212> PRT

<213> 擬南芥（Arabidopsis thaliana L.）

<400> 2

Met Pro Pro Lys Ala Lys Ala Lys Asp Ala Gly Pro Val Glu Arg Pro

1 5 10 15

Ile Leu Gly Arg Phe Ser Ser His Leu Lys Ile Gly Ile Val Gly Leu

20 25 30

Pro Asn Val Gly Lys Ser Thr Leu Phe Asn Thr Leu Thr Lys Leu Ser

35 40 45

Ile Pro Ala Glu Asn Phe Pro Phe Cys Thr Ile Glu Pro Asn Glu Ala

50 55 60

Arg Val Asn Ile Pro Asp Glu Arg Phe Asp Trp Leu Cys Gln Thr Tyr

65 70 75 80

Lys Pro Lys Ser Glu Ile Pro Ala Phe Leu Glu Ile His Asp Ile Ala

85 90 95

Gly Leu Val Arg Gly Ala His Glu Gly Gln Gly Leu Gly Asn Asn Phe

100 105 110

Leu Ser His Ile Arg Ala Val Asp Gly Ile Phe His Val Leu Arg Ala

115 120 125

Phe Glu Asp Ala Asp Ile Ile His Val Asp Asp Ile Val Asp Pro Val

130 135 140

Arg Asp Leu Glu Thr Ile Thr Glu Glu Leu Arg Leu Lys Asp Ile Glu

145 150 155 160

Phe Val Gly Lys Lys Ile Asp Asp Val Glu Lys Ser Met Lys Arg Ser

165 170 175

Asn Asp Lys Gln Leu Lys Ile Glu Leu Glu Leu Leu Gln Lys Val Lys

180 185 190

Ala Trp Leu Glu Asp Gly Lys Asp Val Arg Phe Gly Asp Trp Lys Thr

195 200 205

Ala Asp Ile Glu Ile Leu Asn Thr Phe Gln Leu Leu Ser Ala Lys Pro

210 215 220

Val Val Tyr Leu Ile Asn Leu Asn Glu Arg Asp Tyr Gln Arg Lys Lys

225 230 235 240

Asn Lys Phe Leu Pro Lys Ile His Ala Trp Val Gln Glu His Gly Gly

245 250 255

Asp Thr Met Ile Pro Phe Ser Gly Val Phe Glu Arg Ser Leu Ala Asp

260 265 270

Met Ala Pro Asp Glu Ala Ala Lys Tyr Cys Glu Glu Asn Lys Leu Gln

275 280 285

Ser Ala Leu Pro Arg Ile Ile Lys Thr Gly Phe Ser Ala Ile Asn Leu

290 295 300

Ile Tyr Phe Phe Thr Ala Gly Pro Asp Glu Val Lys Cys Trp Gln Ile

305 310 315 320

Arg Arg Gln Ser Lys Ala Pro Gln Ala Ala Gly Ala Ile His Thr Asp

325 330 335

Phe Glu Arg Gly Phe Ile Cys Ala Glu Val Met Lys Phe Glu Asp Leu

340 345 350

Lys Glu Leu Gly Asn Glu Pro Ala Val Lys Ala Ala Gly Lys Tyr Arg

355 360 365

Gln Glu Gly Lys Thr Tyr Val Val Gln Asp Gly Asp Ile Ile Phe Phe

370 375 380

Lys Phe Asn Val Ser Gly Gly Gly Lys Lys

385 390