本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種芳香甲酰胺類化合物及其在制備抗甲型流感病毒藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：流行性感冒(以下簡稱流感)是由流感病毒引起的嚴(yán)重上呼吸道疾病。流感病毒能造成人、豬、馬、狗和禽類等各類生物產(chǎn)生流感。流感病毒是rna病毒，屬于正粘病毒科。根據(jù)核蛋白和基質(zhì)蛋白可將流感病毒分為三個亞型：甲型、乙型和丙型。甲型流感病毒(influenzaavirus，iav)又可根據(jù)血細(xì)胞凝聚素(hemagglutinin，ha)和神經(jīng)氨酸苷酶(neuraminidase，na)這兩種表面糖蛋白的抗原性差異，將甲型流感病毒分為多種亞型，例如h1n1、h2n2、h5n1亞型等。1918年西班牙的h1n1流感奪去了兩千多萬人的生命，2005年的h5n1流感導(dǎo)致了上百人死亡，且死亡率高達(dá)60％。2013年，我國首次發(fā)現(xiàn)了h7n9病例；據(jù)國家衛(wèi)計(jì)委疾病預(yù)防控制局報(bào)道，2017年1月份因感染禽流感h7n9而死亡的人數(shù)為79人。此外每年禽流感(h5n1、h7n9等)使我國家禽行業(yè)蒙受了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)前，臨床上治療流感的藥物主要有兩大類：m2離子通道抑制劑，通過阻止胞內(nèi)病毒的酸化進(jìn)而抑制病毒的脫殼過程，被fda批準(zhǔn)的藥物有金剛烷胺和金剛烷乙胺；神經(jīng)氨酸苷酶抑制劑，通過抑制子代病毒從宿主細(xì)胞的釋放過程進(jìn)而達(dá)到抗流感病毒的作用，被fda批準(zhǔn)的藥物有奧司他韋和扎那米韋。近年來，m2離子通道抑制劑和神經(jīng)氨酸苷酶抑制劑耐藥突變株的頻繁出現(xiàn)使得研發(fā)新型結(jié)構(gòu)骨架或新靶點(diǎn)的抗流感病毒藥物顯得尤為重要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一類通式i所示的芳香甲酰胺類化合物或其藥理或生理上可接受的鹽，其中，r1為h、4-f、4-cl、4-br、4-cn、4-cf3、4-ch3、4-och3、2-no2、3-no2、4-no2或3-cl；r2為x為c或s；n為0或3。優(yōu)選地，本發(fā)明提供了如下表1所示的化合物：本發(fā)明通過體外抗甲型流感病毒活性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)上述芳香甲酰胺類化合物可以用于制備抗甲型流感病毒藥物。更優(yōu)選地，尤其是下列化合物：n-(2-(芐硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-氯芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-氰基芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((3-硝基芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-硝基芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-氯芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基噻吩-3-甲酰胺、n-(2-((4-氟芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-溴芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、2，5-二甲基-n-(2-((4-硝基芐基)硫基)乙基)噻吩-3-甲酰胺、n-(2-((4-氰基芐基)硫基)乙基)-2，5-二甲基噻吩-3-甲酰胺、n-芐基2，5二甲基呋喃-3-甲酰胺。本發(fā)明還提供上述結(jié)構(gòu)式所表示的芳香甲酰胺類化合物的制備方法。通過下式i所示反應(yīng)合成得到帶r的芳香雜環(huán)羧酸衍生物。具體操作步驟可以為：將次氯酸鈣(3.1g，21.71mmol)溶解在6ml溫水中,然后將溶有碳酸鉀(2.6g，18.82mmol)和氫氧化鉀(727.5mg，30.39mmol)的3ml溫?zé)岬乃芤壕徛渭拥缴鲜鋈芤褐?，并充分?jǐn)嚢柚钡桨牍腆w凝膠變成液體。懸浮液過濾并用10ml沖洗固體得濾液，并將濾液加熱至55℃,然后邊攪拌邊緩慢滴加3-乙?；?2,5-二甲基呋喃(5d)(1g，7.237mmol)，加畢，將反應(yīng)溫度保持在60-70℃。反應(yīng)1個小時后，tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢加入亞硫酸鈉除掉過量的次氯酸，冷卻溶液并酸化，然后用乙酸乙酯萃取(3×30ml)，飽和食鹽水和無水硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析分離得到2,5-二甲基-3-呋喃酸(6d)作為反應(yīng)iv的原料。其他帶r的芳香雜環(huán)羧酸衍生物的制備方法同上。通過下式ii所示反應(yīng)合成得到1-(溴甲基)-2-硝基苯(2a)和1-(溴甲基)-3-硝基苯(2b)。具體操作步驟可以為：在冰浴條件下，將pbr3(494.8mg，1.828mmol)緩慢滴加到(2-硝基苯基)甲醇或(3-硝基苯基)甲醇(400mg，2.612mmol)的乙醚溶液中，然后冰浴攪拌2到4個小時。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢，用10ml水淬滅反應(yīng)并用乙酸乙酯萃取(3×30ml)，飽和食鹽水和無水硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析分離得到1-(溴甲基)-2-硝基苯(2a)或1-(溴甲基)-3-硝基苯(2b)作為反應(yīng)iii的原料。通過下式iii所示反應(yīng)合成得到帶r1的2-(芐硫基)乙胺衍生物。具體操作步驟可以為：將氫氧化鋰(105.4mg，4.40mmol)溶于3ml水，然后加入9ml乙醇，將上述溶液滴加到盛有半胱胺鹽酸鹽(200mg，1.76mmol)的25ml的圓底燒瓶中，最后加入氯化芐(234.2mg，1.85mmol)，35℃油浴攪拌40min。tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完畢，濃縮反應(yīng)液，然后乙酸乙酯萃取(3×30ml)，飽和食鹽水和無水硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析分離得到2-(芐硫基)乙胺(2i)作為反應(yīng)iv的原料。其他帶r1的2-(芐硫基)乙胺衍生物的制備方法同上。通過合成，獲得帶r的芳香雜環(huán)羧酸衍生物，然后取1.05當(dāng)量的帶r1的2-(芐硫基)乙胺衍生物，hobt和edci于5ml的圓底燒瓶中，通入氬氣，最后加入3mldmf室溫反應(yīng)過夜，tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完全后，柱層析分離即為目標(biāo)化合物。反應(yīng)式如下面iv式所示。其中，r1為h、4-f、4-cl、4-br、4-cn、4-cf3、4-ch3、4-och3、2-no2、3-no2、4-no2或3-cl；r2為x為c或s；n為0或3。具體操作過程可以如下：取0.4mmol反應(yīng)i的羧酸衍生物和0.42mmol(1.05eq.)反應(yīng)iii的帶r1的2-(芐硫基)乙胺衍生物以及hobt(0.4mmol)和edci(0.4mmol)加入到含有磁子的5ml單口圓底燒瓶中，通入氬氣，最后加入3mldmf使其溶解，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行，原料基本反應(yīng)完全后，柱層析分離得到純的芳香甲酰胺類化合物。本發(fā)明的再一目的是提供一種抗甲型流感病毒的藥用組合物，包含上述芳香甲酰胺類化合物或其藥理或生理上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑組成。本發(fā)明涉及的芳香甲酰胺類化合物，可以有效抑制甲型流感病毒的活性，其對細(xì)胞的毒性小，可用于制備抗甲型流感病毒的藥物。具體實(shí)施方式通過以下詳細(xì)說明可以進(jìn)一步理解本發(fā)明的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)。所提供的實(shí)施例僅是對本發(fā)明方法的說明，而不以任何方式限制本發(fā)明揭示的其余內(nèi)容?！緦?shí)施例1】：n-(2-(芐硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys1)的制備取2,5-二甲基-3-呋喃酸(56mg，0.4mmol)、2-(芐硫基)乙-1-胺(70.3mg，0.42mmol)、hobt(54mg，0.4mmol)和edci(76.7mg，0.4mmol)，加入到含有磁子的5ml單口圓底燒瓶中，通入氬氣，最后加入3mldmf使其溶解，室溫?cái)嚢柽^夜，tlc監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行，原料基本反應(yīng)完全后，柱層析分離得到純凈的目標(biāo)化合物yys-1，產(chǎn)物為無色液體，產(chǎn)率為78％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32–7.27(m,4h),7.26–7.20(m,1h),6.19(s,1h),6.00(d,j＝0.7hz,1h),3.72(s,2h),3.49(dd,j＝12.5,6.2hz,2h),2.62(t,j＝6.4hz,2h),2.52(s,3h),2.22(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.19,155.09,149.92,138.09,128.86,128.62,127.17,115.95,104.14,37.75,35.76,31.22,13.51,13.30.hrms(esi)calcdforc16h19no2s[m+h]+290.1215,found290.1208.【實(shí)施例2】：n-(2-((3-氯芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys2)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為無色液體，產(chǎn)率為39％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33(s,1h),7.26–7.15(m,3h),6.11(s,1h),5.99(s,1h),3.69(s,2h),3.51(q,j＝6.2hz,2h),2.64(t,j＝6.4hz,2h),2.53(d,j＝2.8hz,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.24,155.25,150.02,140.22,134.41,129.84,128.90,127.39,127.03,115.80,104.01,37.73,35.30,31.33,13.51,13.29.hrms(esi)calcdforc16h18clno2s[m+h]+324.0825,found324.0818.【實(shí)施例3】：n-(2-((4-氯芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys3)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為無色液體，產(chǎn)率為11％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.31–7.21(m,4h),6.07(s,1h),5.98(d,j＝0.5hz,1h),3.69(s,2h),3.51(dd,j＝12.4,6.3hz,2h),2.62(t,j＝6.4hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.19,155.22,150.04,136.60,132.93,130.20,128.76,115.79,103.98,37.72,35.09,31.19,13.51,13.31.hrms(esi)calcdforc16h18clno2s[m+h]+324.0825,found324.0818.【實(shí)施例4】：n-(2-((4-氰基芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys4)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為無色液體，產(chǎn)率為56％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.66–7.55(m,2h),7.45(d,j＝8.4hz,2h),6.12(s,1h),5.99(s,1h),3.77(s,2h),3.52(q,j＝6.5hz,2h),2.62(t,j＝6.6hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.24,155.29,150.07,143.90,132.40,129.65,118.75,115.73,110.91,103.94,37.89,35.54,31.28,13.50,13.30.hrms(esi)calcdforc17h18n2o2s[m+h]+315.1167,found315.1160.【實(shí)施例5】：n-(2-((3-硝基芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys5)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率為47％，熔點(diǎn)為113–115℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.21(d,j＝1.5hz,1h),8.09(d,j＝8.2hz,1h),7.67(d,j＝7.5hz,1h),7.56–7.43(m,1h),6.28–6.13(m,1h),6.01(s,1h),3.83(s,2h),3.54(q,j＝6.2hz,2h),2.65(t,j＝6.4hz,2h),2.53(s,3h),2.23(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.27,155.31,150.06,148.33,140.49,135.07,129.53,123.70,122.22,115.71,103.95,37.96,35.23,31.38,13.48,13.26.hrms(esi)calcdforc16h18n2o4s[m+h]+335.1066,found335.1057.【實(shí)施例6】：n-(2-((4-硝基芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys6)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率為19％，熔點(diǎn)為105–106℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.19–8.15(m,2h),7.51(d,j＝8.7hz,2h),6.72(d,j＝0.8hz,1h),6.10(s,1h),3.82(s,2h),3.55(q,j＝6.4hz,2h),2.65(t,j＝6.5hz,2h),2.63(s,3h),2.39(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.60,147.03,145.95,142.80,136.18,131.01,129.74,123.99,123.88,38.02,35.24,31.34,15.03,14.87.hrms(esi)calcdforc16h18n2o4s[m+h]+335.1066,found335.1058.【實(shí)施例7】：n-(2-((4-氯芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基噻吩-3-甲酰胺(yys7)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為無色液體，產(chǎn)率為29％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35–7.14(m,4h),6.72(d,j＝0.9hz,1h),6.15(s,1h),3.69(s,2h),3.52(dd,j＝12.5,6.1hz,2h),2.66–2.60(m,5h),2.39(s,3h).13cnmr(100,cdcl3)δ164.62,142.59,136.59,136.04,132.95,131.22,130.21,128.77,124.15,37.90,35.06,31.17,15.04,14.85.hrms(esi)calcdforc16h18clnos2[m+h]+340.0597,found340.0590.【實(shí)施例8】：n-(2-((4-氟芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys8)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為黃色固體，產(chǎn)率為21％，熔點(diǎn)為79–80℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35–7.22(m,2h),7.02–6.95(m,2h),6.73(d,j＝0.9hz,1h),6.18(s,1h),3.71(s,2h),3.53(dd,j＝12.5,6.1hz,2h),2.68–2.60(m,5h),2.38(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.61,142.57,136.03,133.77,133.74,131.23,130.44,130.36,124.15,115.59,115.38,37.88,34.98,31.16,15.02,14.84.hrms(esi)calcdforc16h18fno2s[m+h]+308.1121,found308.1115.【實(shí)施例9】：n-(2-((4-溴芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys9)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為無色液體，產(chǎn)率為37％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.47–7.37(m,2h),7.24–7.14(m,2h),6.06(s,1h),5.98(d,j＝0.6hz,1h),3.67(s,2h),3.51(dd,j＝12.5,6.2hz,2h),2.62(t,j＝6.5hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.20,155.19,150.02,137.15,131.70,130.56,121.00,115.82,104.01,77.44,77.12,76.80,37.77,35.15,31.19,13.51,13.31.hrms(esi)calcdforc16h18brno2s[m+h]+370.0299,found370.0291.【實(shí)施例10】：2,5-二甲基-n-(2-((4-(三氟甲基)芐基)硫基)乙基)呋喃-3-甲酰胺(yys10)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率為36％，熔點(diǎn)為62–63℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.57(d,j＝8.1hz,2h),7.44(d,j＝8.0hz,2h),6.06(s,1h),5.98(s,1h),3.77(s,2h),3.53(q,j＝6.3hz,2h),2.63(t,j＝6.5hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.22,155.27,150.07,142.28,129.19,125.58,125.54,115.76,103.93,37.75,35.30,31.27,13.48,13.25.hrms(esi)calcdforc17h18f3no2s[m+h]+358.1089,found358.1082.【實(shí)施例11】：2，5-二甲基-n-(2-((4-甲基芐基)硫基)乙基)呋喃-3-甲酰胺(yys11)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為無色液體，產(chǎn)率為61％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.20(d,j＝8.0hz,2h),7.11(d,j＝7.8hz,2h),6.12(s,1h),5.99(s,1h),3.69(s,2h),3.49(dd,j＝12.4,6.0hz,2h),2.62(t,j＝6.4hz,2h),2.52(s,3h),2.32(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.16,155.10,149.94,136.84,134.94,129.32,128.74,115.92,104.10,37.64,35.42,31.18,21.12,13.50,13.31.hrms(esi)calcdforc17h21no2s[m+h]+304.1371,found304.1364.【實(shí)施例12】：n-(2-((4-甲氧基芐基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys12)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率為49％，熔點(diǎn)為79–81℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.26–7.15(m,2h),6.89–6.74(m,2h),6.23(s,1h),6.00(s,1h),3.77(s,3h),3.68(s,2h),3.49(q,j＝6.2hz,2h),2.61(t,j＝6.4hz,2h),2.52(s,3h),2.22(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.22,158.67,155.08,149.90,129.99,129.93,115.95,113.97,104.14,55.24,37.81,35.13,31.07,13.49,13.27.hrms(esi)calcdforc17h21no3s[m+h]+320.1320,found320.1311.【實(shí)施例13】：2，5-二甲基-n-(2-((2-硝基芐基)硫基)乙基)呋喃-3-甲酰胺(yys13)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為黃色液體，產(chǎn)率為67％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.97(dd,j＝8.1,1.2hz,1h),7.56(m,1h),7.50–7.37(m,2h),6.19(s,1h),6.04(d,j＝0.7hz,1h),4.10(s,2h),3.52(q,j＝6.2hz,2h),2.68(t,j＝6.4hz,2h),2.53(d,j＝3.0hz,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.21,155.19,150.00,148.60,133.83,133.24,132.12,128.44,125.49,115.81,104.07,37.84,33.20,32.03,13.50,13.30.hrms(esi)calcdforc16h18n2o4s[m+h]+335.1066,found335.1058.【實(shí)施例14】：n-(2-((4-氯芐基)硫基)乙基)呋喃-3-甲酰胺(yys14)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率為60％，熔點(diǎn)為126–128℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.93(s,1h),7.43(s,1h),7.32–7.22(m,4h),6.61(s,1h),6.39(s,1h),3.69(s,2h),3.53(q,j＝6.3hz,2h),2.62(t,j＝6.5hz,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ162.72,144.84,143.85,136.55,132.97,130.20,128.79,122.38,108.25,38.03,35.13,31.00.hrms(esi)calcdforc14h14clno2s[m+h]+296.0512,found296.0505.【實(shí)施例15】：n-(2-((4-氯芐基)硫基)乙基)呋喃-2-甲酰胺(yys15)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率為34％，熔點(diǎn)為91–93℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.45(dd,j＝1.7,0.8hz,1h),7.31–7.24(m,4h),7.11(dd,j＝3.5,0.8hz,1h),6.70(s,1h),6.50(dd,j＝3.5,1.8hz,1h),3.72(s,2h),3.57(q,j＝6.4hz,2h),2.64(t,j＝6.5hz,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ158.41,147.76,144.02,136.55,132.95,130.22,128.77,114.40,112.22,37.75,35.17,31.02.hrms(esi)calcdforc14h14clno2s[m+h]+296.0512,found296.0505.【實(shí)施例16】：n-(2-((4-氯芐基)硫基)乙基)-5-甲基呋喃-2-甲酰胺(yys16)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為黃色液體，產(chǎn)率為55％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.45(dd,j＝1.7,0.8hz,1h),7.27(s,4h),7.11(dd,j＝3.5,0.8hz,1h),6.70(s,1h),6.50(dd,j＝3.5,1.8hz,1h),3.72(s,2h),3.57(q,j＝6.4hz,2h),2.64(t,j＝6.5hz,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ158.69,154.70,146.04,136.59,132.90,130.23,128.74,115.79,108.64,37.81,35.16,31.05,13.88.hrms(esi)calcdforc15h16clno2s[m+h]+310.0669,found310.0662.【實(shí)施例17】：n-(2-((4-氯芐基)硫基)乙基)-2-甲基噻唑-4-甲酰胺(yys17)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率為61％，熔點(diǎn)為190–191℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.74(t,j＝5.6hz,1h),8.17(s,1h),7.43–7.32(m,4h),3.78(s,2h),3.44–3.37(m,2h),2.66(s,3h),2.58–2.53(m,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ169.50,159.84,142.63,137.71,134.82,131.35,130.67,128.31,38.67,33.91,29.89,19.12.hrms(esi)calcdforc15h17cln2os2[m+h]+341.0549,found341.0542.【實(shí)施例18】：n-(2-((4-氯芐基)硫基)乙基)-2-甲基苯甲酰胺(yys18)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率為21％，熔點(diǎn)為104–105℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.36–7.28(m,2h),7.25(d,j＝5.5hz,4h),7.19(m,2h),6.22(s,1h),3.70(s,2h),3.54(dd,j＝12.6,6.2hz,2h),2.63(t,j＝6.4hz,2h),2.41(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ170.21,136.59,136.17,136.06,132.95,131.05,130.25,129.99,128.78,126.76,125.77,38.11,35.04,31.10,19.85.hrms(esi)calcdforc17h18clnos[m+h]+320.0876,found320.0867.【實(shí)施例19】：2，5-二甲基-n-(2-((4-硝基芐基)硫基)乙基)噻吩-3-甲酰胺(yys19)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為黃色固體，產(chǎn)率為67％，熔點(diǎn)為103–106℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.21–8.13(m,2h),7.50(d,j＝8.7hz,2h),6.04(s,1h),5.97(s,1h),3.81(s,2h),3.53(q,j＝6.4hz,2h),2.64(t,j＝6.6hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.15,155.33,150.12,147.04,145.98,129.71,123.86,115.68,103.85,37.90,35.32,31.42,13.47,13.26.hrms(esi)calcdforc16h18n2o3s2[m+h]+351.0837,found351.0830.【實(shí)施例20】：n-(2-((4-氰基芐基)硫基)乙基)-2，5-二甲基噻吩-3-甲酰胺(yys20)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為無色液體，產(chǎn)率為64％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.60(m,2h),7.45(d,j＝8.2hz,2h),6.05(s,1h),5.98(s,1h),3.77(s,2h),3.52(q,j＝6.4hz,2h),2.62(t,j＝6.6hz,2h),2.53(s,3h),2.25(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.17,155.29,150.08,143.85,132.39,129.63,118.69,115.74,110.99,103.89,37.87,35.57,31.35,13.47,13.27.hrms(esi)calcdforc17h18n2os2[m+h]+331.0939,found331.0932.【實(shí)施例21】：2，5-二甲基-n-(4-苯基丁基)呋喃-3-甲酰胺(yys21)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為無色液體，產(chǎn)率為51％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33–7.24(m,2h),7.19(m,3h),6.70(d,j＝0.9hz,1h),5.77(s,1h),3.39(dd,j＝12.9,6.9hz,2h),2.67–2.61(m,5h),2.37(s,3h),1.76–1.55(m,4h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.73,142.13,135.96,131.60,128.44,128.37,125.85,124.09,39.41,35.52,29.35,28.79,15.03,14.78.hrms(esi)calcdforc17h21no2[m+h]+272.1651,found272.1642【實(shí)施例22】：n-芐基2，5二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys22)的制備制備方法如實(shí)施例1，產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率為59％，熔點(diǎn)為109–112℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34–7.18(m,5h),6.29(s,1h),6.02(s,1h),4.50(d,j＝5.8hz,2h),2.52(s,3h),2.20(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.25,155.38,149.89,138.65,128.64,127.71,127.35,115.87,104.15,43.22,13.52,13.28.hrms(esi)calcdforc14h15no2[m+h]+30.1181,found230.1175.表1本發(fā)明方法合成的目標(biāo)化合物yys1-22的化學(xué)結(jié)構(gòu)【實(shí)驗(yàn)例23】：芳香甲酰胺類化合物藥理實(shí)驗(yàn)(1)芳香甲酰胺類化合物細(xì)胞毒性測定：黃色的噻唑蘭，簡稱mtt，可透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，活細(xì)胞線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性mtt還原為難溶于水的藍(lán)紫色的針狀formazan結(jié)晶并沉積在細(xì)胞中，結(jié)晶物可被20％(質(zhì)量比體積)sds溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀在575nm波長處測定其光吸收值，可間接反映細(xì)胞數(shù)量。實(shí)驗(yàn)時，將mdck細(xì)胞以每孔2×104的密度傳至96孔板中，在37℃培養(yǎng)24小時后，吸走培養(yǎng)基，將含有各種濃度梯度化合物的細(xì)胞培養(yǎng)基加到每個孔。24小時后，每孔加入5mg/ml的mtt溶液，細(xì)胞板在37℃的co2孵化器中培養(yǎng)4h。接著將助溶液加入到溶血細(xì)胞，在37℃孵化3h，酶標(biāo)儀測定575nm波長下的od值?；衔锏囊种坡?％)＝[1-(e-n)/(p-n)]×100，其中“e”代表給藥組的od值，“p”代表未給藥組的od值，“n”代表空白組od值?；衔锏陌霐?shù)抑制濃度(cc50)作為該化合物細(xì)胞毒性的指標(biāo)。(2)芳香甲酰胺類化合物體外抗h5n1活性：通過病毒蝕斑數(shù)減少分析來評估化合物的抗病毒活性。鋪滿mdck細(xì)胞的6孔板按照70pfu/孔接入流感病毒(h5n1)，40分鐘后除去含病毒培養(yǎng)基并加入含有特定濃度待測藥物的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含有終濃度為0.001％deae-dextran、2ug/mltpck-trypsin和0.5％agarose。在37℃5％co2條件下培養(yǎng)48-72小時后，用3％的福爾馬林固定細(xì)胞，用0.5％結(jié)晶紫對細(xì)胞進(jìn)行染色并計(jì)算病毒蝕斑數(shù)。ec50是指特定藥物有效抑制病毒產(chǎn)生蝕斑數(shù)至對照孔的50％所需的濃度。本發(fā)明以金剛烷胺對照，對合成的22個化合物進(jìn)行細(xì)胞毒性和抗甲型流感病毒h5n1活性檢查，并計(jì)算了化合物的選擇性指數(shù)si，結(jié)果見表2.表2本發(fā)明合成的目標(biāo)化合物yys1-22抗h5n1活性和細(xì)胞毒性的結(jié)果compoundsec50(μm)cc50(μm)si(cc50/ic50)yys17.716±2.909115.173±30.20114.9yys254.545±16.44053.514±13.2470.9yys38.541±3.15351.476±10.5616.0yys45.302±1.450>100>18.9yys59.970±2.548109.662±27.42311.0yys61.247±0.335>100>80.2yys71.639±0.40068.638±23.97841.9yys813.771±5.09586.766±15.2256.3yys915.113±4.74994.029±19.7136.2yys1044.763±11.696113.069±15.8372.5yys1127.460±8.477>100>3.6yys1234.431±10.804>100>2.9yys13na91.749±21.621-yys1456.342±15.866>100>1.8yys1531.550±9.28168.192±21.0972.2yys1660.243±17.00150.418±10.3610.8yys17na>100-yys1835.429±12.11578.724±24.1682.2yys192.519±0.763>100>48.3yys201.338±0.318>100>93.0yys21na104.400±19.494-yys2225.148±8.92881.429±16.8793.2金剛烷胺0.551±0.161>100>181.5上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：合成的化合物大多數(shù)都具有很好抗h5n1活性，例如化合物yys1(ec50＝7.716±2.909μm,si＝14.9)、yys4(ec50＝5.302±1.450μm,si>18.9)、yys5(ec50＝9.970±2.548μm,si＝11.0)、yys6(ec50＝1.247±0.335μm,si>80.2)、yys7(ec50＝1.639±0.400μm,si＝41.9)、yys19(ec50＝2.519±0.763μm,si>48.3)、yys20(ec50＝1.338±0.318μm,si＝93.0)等，尤其是化合物yys6和yys20顯示了接近亞微摩爾水平的生物活性。當(dāng)前第1頁12