本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種采用膜分離技術(shù)制備高純度雷公藤甲素的方法。

背景技術(shù)：

雷公藤（拉丁學(xué)名Tripterygium wilfordii Hook. f.），又叫黃藤、黃臘藤、菜蟲藥等，是一個有著悠久、廣泛應(yīng)用歷史的中藥。為衛(wèi)矛科雷公藤屬植物雷公藤的根。本品味苦、辛，性涼，大毒。歸肝、腎經(jīng)。功效祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛、消腫止痛、解毒殺蟲。用于濕熱結(jié)節(jié)、癌瘤積毒，臨床上用其治療麻風(fēng)反應(yīng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等，有抗腫瘤、抗炎等作用。雷公藤的主要成分為二萜類、三萜類及生物堿類。

雷公藤甲素又稱雷公藤內(nèi)酯、雷公藤內(nèi)酯醇，是從衛(wèi)矛科植物雷公藤中提取的一種環(huán)氧二萜內(nèi)酯化合物，為雷公藤提取物的主要活性成分，研究表明它具有抗氧化，抗類風(fēng)濕，抗老年性癡呆癥、抗癌等功效。雷公藤甲素作為單一成分可以很好控制劑量，也可作為結(jié)構(gòu)改造的嵌體，其需求量越來越大。

但是雷公藤甲素在雷公藤中的含量極低，目前主要采用藥材經(jīng)多次萃取，常壓反復(fù)過硅膠柱層析進(jìn)行分離，得率也很低，據(jù)文獻(xiàn)報道，植物分離得率僅為0.001%，而且提取分離過程中有毒溶劑消耗大，對操作人員毒性也很大。目前的工藝普遍存在工藝復(fù)雜、耗時長、成本高、對環(huán)境污染大等缺陷。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明提供一種采用膜分離技術(shù)制備高純度雷公藤甲素的方法，該方法能快速分離且可提高雷公藤甲素收率，而且工藝簡單，便于實施，降低了生產(chǎn)成本，對環(huán)境的污染非常少，能保護(hù)操作人員的人身安全，提高了提取效率和收率，具有很強(qiáng)的經(jīng)濟(jì)競爭力。

實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是：

一種采用膜分離技術(shù)制備高純度雷公藤甲素的方法，包括如下步驟：

1）醇提：將雷公藤藥材粉碎成30～50目，按質(zhì)量比加入5～10倍的濃度為70%～85%乙醇溶液，回流提取2～3次，每次3～5小時，過濾，合并提取液，得到雷公藤提取液；

2）濃縮：將步驟2）中的雷公藤提取液濃縮至原有體積的1/3～1/5得到相對密度為1.05～1.08的雷公藤濃縮液；

3）離心：將步驟3）中獲得的雷公藤濃縮液放置在轉(zhuǎn)速為3000～4000轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)上離心，收集上清液；

4）精濾：將步驟3）中獲得的上清液，使用濾芯為200nm陶瓷膜進(jìn)行過濾，獲得精濾液，

超濾：將步驟4）中獲得的精濾液，用壓力為0.50～1.0MPa的泵打循環(huán)，再經(jīng)1000分子量的超濾膜過濾并截留，得雷公藤透析液。

5）柱層析：將步驟5）中獲得的雷公藤透析液濃縮至干，獲得雷公藤透析液浸膏，在浸膏中加入有機(jī)溶劑溶解，干法拌樣后，在常壓的情況下，使用目數(shù)為200～300目的硅膠柱進(jìn)行柱層析，采用濕法裝柱的方式，用乙酸乙酯/石油醚混合溶劑洗脫，收集洗脫液；

所述的步驟6）中的有機(jī)溶劑為二氯甲烷或者乙酸乙酯，

所述的乙酸乙酯/石油醚混合溶劑的體積比為1～5∶1；

6）結(jié)晶：將步驟6）中的洗脫液濃縮至干，得到雷公藤甲素粗品，在雷公藤甲素粗品中，加入有機(jī)溶劑溶解，（充分?jǐn)嚢韬螅?，在溫?～8℃的環(huán)境中靜置析晶，靜置析晶的時間為8～14小時，所得無色針狀結(jié)晶的雷公藤甲素，以此方法獲得的雷公藤甲素的純度為99%；

所述的步驟7）中的有機(jī)溶劑優(yōu)選以下體系：甲醇、石油醚/乙酸乙酯、二氯甲烷/石油醚、環(huán)己烷/乙酸乙酯，

有益效果

本發(fā)明提供了一種采用膜分離技術(shù)制備高純度雷公藤甲素的方法，該方法從雷公藤中分離出高純雷公藤甲素，工藝簡單，易于操作；直接用膜進(jìn)行預(yù)處理，避免使用大量有機(jī)溶劑多次萃取，不僅降低了生產(chǎn)成本，而且對環(huán)境的污染非常少，保護(hù)了操作人員的人身安全；提高了提取效率和收率，具有很強(qiáng)的經(jīng)濟(jì)競爭力。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明內(nèi)容做進(jìn)一步的闡述，但不是對本發(fā)明內(nèi)容的限定，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。

實施例

一種采用膜分離技術(shù)制備高純度雷公藤甲素的方法，包括如下步驟：

1）醇提：將雷公藤藥材粉碎成30～50目，最佳為40目，按質(zhì)量比加入5～10倍的，最佳為8倍的，濃度為70%～85%乙醇溶液，最佳的乙醇溶液的濃度為80%，回流提取2～4次，最佳為3次，每次3～5小時，最佳時間為4小時過濾，合并提取液，得到雷公藤提取液；

2）濃縮：將步驟2）中的雷公藤提取液濃縮至原有體積的1/3～1/5得到相對密度為1.05～1.08的雷公藤濃縮液，最佳相對密度為1.07；

3）離心：將步驟3）中獲得的雷公藤濃縮液放置在轉(zhuǎn)速為3000～4000轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)上離心，最佳轉(zhuǎn)速為3500轉(zhuǎn)/分，收集上清液；

4）精濾：將步驟3）中獲得的上清液，使用濾芯為200nm陶瓷膜進(jìn)行過濾，獲得精濾液；

超濾：將步驟4）中獲得的精濾液，用壓力為0.50～1.0MPa的泵打循環(huán)，泵的最佳壓力為0.75MPa，再經(jīng)1000分子量的超濾膜過濾并截留，得雷公藤透析液。

5）柱層析：將步驟5）中獲得的雷公藤透析液濃縮至干，獲得雷公藤透析液浸膏，在浸膏中加入有機(jī)溶劑溶解，干法拌樣后，在常壓的情況下，使用目數(shù)為200～300目的硅膠柱進(jìn)行柱層析，采用濕法裝柱的方式，用體積比為1～5∶1乙酸乙酯/石油醚混合溶劑洗脫，收集洗脫液，乙酸乙酯/石油醚混合溶劑的最佳體積比為1∶1；

所述的步驟6）中的有機(jī)溶劑為二氯甲烷或者乙酸乙酯；

6）結(jié)晶：將步驟6）中的洗脫液濃縮至干，得到雷公藤甲素粗品，在雷公藤甲素粗品中，加入有機(jī)溶劑溶解，（充分?jǐn)嚢韬螅?，在溫?～8℃的環(huán)境中靜置析晶，最佳環(huán)境溫度為5°C，靜置析晶的時間為8-14小時，最佳靜置析晶的時間為12小時，所得無色針狀結(jié)晶的雷公藤甲素，以此方法獲得的雷公藤甲素的純度為99%；

所述的步驟7）中的有機(jī)溶劑優(yōu)選以下體系：甲醇、石油醚/乙酸乙酯、二氯甲烷/石油醚、環(huán)己烷/乙酸乙酯。

實施例1

將雷公藤藥材250Kg（雷公藤甲素的含量為0.0036%），粉碎成30～50目，裝入提取容器中，按質(zhì)量比加入2000Kg 80%乙醇溶液，回流提取3次，每次4小時，過濾，合并提取液；

將雷公藤提取液打入濃縮罐，濃縮至相對密度為1.07；

將濃縮后的溶液離心，收集上清液；

用200nm陶瓷膜濾芯過濾；

經(jīng)精濾后的雷公藤提取液用泵打入膜過濾系統(tǒng)，在0.50～1.0MPa的條件下，經(jīng)分子量為1000的超濾膜過濾，得雷公藤透析液；

將雷公藤透析液濃縮至干，得浸膏0.51Kg，用二氯甲烷溶解，干法拌樣后進(jìn)行常壓過硅膠柱（硅膠為200～300目，13 Kg，濕法裝直徑為300mm的柱），用乙酸乙酯/石油醚混合溶劑（1∶1）洗脫，收集洗脫液；

將洗脫液濃縮至干，得雷公藤甲素粗品9.5g，將粗品用甲醇溶解后于4℃下靜置析晶12小時，將結(jié)晶過濾，干燥，得雷公藤甲素純品8.5g，經(jīng)高效液相色譜儀檢測，含量為99.5%。

實施例2

將雷公藤藥材400Kg（雷公藤甲素的含量為0.0041%），粉碎成30～50目，裝入提取容器中，按質(zhì)量比加入2500Kg 75%乙醇溶液，回流提取3次，每次5小時，過濾，合并提取液；

將雷公藤提取液打入濃縮罐，濃縮至相對密度為1.06；

將濃縮后的溶液離心，收集上清液；

用200nm陶瓷膜濾芯過濾；

經(jīng)精濾后的雷公藤提取液用泵打入膜過濾系統(tǒng)，在0.50～1.0MPa的條件下，經(jīng)分子量為1000的超濾膜過濾，得雷公藤透析液；

將雷公藤透析液濃縮至干，得浸膏0.86Kg，用乙酸乙酯溶解，干法拌樣后進(jìn)行常壓過硅膠柱（硅膠為200～300目，15 Kg，濕法裝直徑為350mm的柱），用乙酸乙酯/石油醚混合溶劑（1.5∶1）洗脫，收集洗脫液；

將洗脫液濃縮至干，得雷公藤甲素粗品17.0g，將粗品用二氯甲烷-石油醚（1∶1）溶解后于4℃下靜置析晶12小時，將結(jié)晶過濾，干燥，得雷公藤甲素純品15.6g，經(jīng)高效液相色譜儀檢測，含量為99.8%。

實施例3

將雷公藤藥材350Kg（雷公藤甲素的含量為0.0032%），粉碎成30～50目，裝入提取容器中，按質(zhì)量比加入2100Kg 80%乙醇溶液，回流提取3次，每次4.5小時，過濾，合并提取液；

將雷公藤提取液打入濃縮罐，濃縮至相對密度為1.08；

將濃縮后的溶液離心，收集上清液；

用200nm陶瓷膜濾芯過濾；

經(jīng)精濾后的雷公藤提取液用泵打入膜過濾系統(tǒng)，在0.50～1.0MPa的條件下，經(jīng)分子量為1000的超濾膜過濾，得雷公藤透析液；

將雷公藤透析液濃縮至干，得浸膏0.62Kg，用二氯甲烷溶解，干法拌樣后進(jìn)行常壓過硅膠柱（硅膠為200～300目，16Kg，濕法裝直徑為400mm的柱），用乙酸乙酯/石油醚混合溶劑（2∶1）洗脫，收集洗脫液；

將洗脫液濃縮至干，得雷公藤甲素粗品12.3g，將粗品用乙酸乙酯-石油醚（1∶2）溶解后于4℃下靜置析晶12小時，將結(jié)晶過濾，干燥，得雷公藤甲素純品10.4g，經(jīng)高效液相色譜儀檢測，含量為99.4%。

測定雷公藤甲素的含量方法：

稱取雷公藤甲素樣品10mg,置100ml量瓶中，加甲醇溶解，并定容，作為供試品溶液；稱取雷公藤甲素對照品適量,加甲醇溶解并制成每1ml含0.1mg的溶液作為對照品溶液。

色譜條件：色譜柱：Diamonsil C18（4.6*250mm,5μm），流動相：甲醇-水（45∶55），流速：0.8ml/min。

檢測波長：220nm，柱溫：35℃，進(jìn)樣量：10μl。

經(jīng)檢測以上方法制備的雷公藤雷甲素的含量均在99%以上。