本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體的說(shuō)是涉及芳?；一鶌W司他韋羧酸衍生物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
流感是流行性感冒(influenza)的簡(jiǎn)稱，是一種流感病毒引發(fā)的急性上呼吸道傳染病，一般秋冬季節(jié)是高發(fā)期。流感傳染性強(qiáng)、傳播速度快，主要通過(guò)空氣中的飛沫、人與人之間的接觸或與被污染物品的接觸傳播。典型的臨床癥狀是：急起高熱、全身疼痛、顯著乏力和輕度呼吸道癥狀。目前流感依舊是威脅人類生命健康的主要疾病之一。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，全世界每年平均大約有25～50萬(wàn)人死于流感。
流感病毒還根據(jù)其表面的血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的抗原性不同而分為很多亞型。其中NA有9種不同亞型(N1～N9)，HA有16種亞型(H1～H16)，二者可以相互組合而形成一百多種亞型。神經(jīng)氨酸酶(NA)，由節(jié)段6編碼(基因長(zhǎng)度為1407個(gè)核苷酸殘基)，為四聚體，由4條相同的糖基化多肽組成。NA可水解細(xì)胞表面糖蛋白受體的末端唾液酸殘基，促進(jìn)病毒的釋放與遷移，防止病毒聚集。
目前為止，已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)上市的神經(jīng)氨酸酶抑制劑(NAIs)有扎那米韋、奧司他韋和帕拉米韋。奧司他韋為唯一口服藥物。然而，奧司他韋耐藥菌株不斷出現(xiàn)，例如H274Y，I117V，E119A，R292K等神經(jīng)氨酸酶突變株，使NA抑制劑的有效性下降。因此，耐藥菌株的出現(xiàn)，迫切需要研究新一代神經(jīng)氨酸酶抑制劑。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)并合成一類結(jié)構(gòu)新穎的芳?；一鶌W司他韋羧酸衍生物，從中篩選出具有較好活性的化合物，并提供這些化合物的制備方法及其在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。
經(jīng)過(guò)大量研究，本發(fā)明如下技術(shù)方案：
1、式I所示芳?；一鶌W司他韋羧酸衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
其中，R為取代或未取代的烷烴、鹵素、硝基、羥基。
優(yōu)選的，R為氫、甲基、甲氧基、三氟甲基、羥基、溴、硝基；
優(yōu)選的，所述芳?；一鶌W司他韋羧酸衍生物為下述化合物中的任意一種：
化合物A1：((3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(2-苯甲?；一?-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A2：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-甲基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A3：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(3-甲基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A4：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(4-甲基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A5：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-甲氧基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A6：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(3-甲氧基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A7：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(4-甲氧基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A8：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-三氟甲基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A9：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(3-三氟甲基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A10：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-溴苯甲酰基)胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A11：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(2-羥基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
化合物A12：(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰氨基-5-(3-(4-硝基苯甲?；?胍基)-1-環(huán)己稀-1-羧酸、
優(yōu)選的，所述藥學(xué)上可接受的鹽為三氟乙酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，甲磺酸鹽，鹽酸鹽；
2、芳?；一鶌W司他韋羧酸衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，包括如下步驟：
所合成的化合物具體結(jié)構(gòu)式，如下：
以上合成路線中，a-e表示反應(yīng)條件：
a：將原料甲基硫脲氫碘酸鹽，二碳酸二叔丁酯(Boc2O)，氫氧化鈉和溶劑叔丁醇/水，0-30℃下攪拌反應(yīng)12小時(shí)，制得中間體1；
b：將中間體1，相對(duì)應(yīng)的羧酸，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(Pybop)，甲基嗎啉(NMM)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，12小時(shí)，制得中間體2；
c：將中間體2，磷酸奧司他韋，氯化汞(II)(HgCl2)，三乙胺(Et3N)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，12小時(shí)，制得中間體3；
d：將中間體3，三氟乙酸(TFA)，二氯甲烷(CH2Cl2)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，5小時(shí)，制得中間體4；
e：將中間體4，乙醇，碳酸鉀(K2CO3)，水，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，5小時(shí)，制得A1-A12。
f：將目標(biāo)化合物A1-A12與藥用酸成鹽，得到目標(biāo)化合物A1-A12的藥用鹽。
進(jìn)一步，所述步驟a中溶劑叔丁醇/水＝10/1，反應(yīng)結(jié)束后，二氯甲烷萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，柱層析制到中間體1；
所述步驟b中，中間體1與相對(duì)應(yīng)的羧酸投料的摩爾比為1∶1-1∶3，反應(yīng)結(jié)束后，乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，柱層析制到中間體2；
所述步驟c中，中間體2與磷酸奧司他韋投料的摩爾比為1∶1-1∶3，反應(yīng)結(jié)束后，乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，柱層析制到中間體3；
所述步驟d中，三氟乙酸(TFA)與二氯甲烷(CH2Cl2)的體積比為1∶1-1∶10，反應(yīng)結(jié)束后，二氯甲烷重結(jié)晶，制到中間體4；
所述步驟e中，中間體4與碳酸鉀(K2CO3)投料的摩爾比為1∶1-1∶10，反應(yīng)結(jié)束后，高效液相色譜法(HPLC)，制到化合物A1-A12；
所述步驟f中，將目標(biāo)化合物A1-A12與三氟乙酸或?qū)妆交撬猁}或甲磺酸或鹽酸于二氯甲烷中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束，加入乙醚，過(guò)濾得到目標(biāo)化合物A1-A12的藥用鹽。
3、芳?；一鶌W司他韋羧酸衍生物的應(yīng)用
芳?；一鶌W司他韋羧酸衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療病毒性疾病藥物或在制備神經(jīng)氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用
優(yōu)選的，所述病毒性疾病為流感病毒引起的疾病。
本發(fā)明的有益效果在于，本發(fā)明設(shè)計(jì)了一類結(jié)構(gòu)新穎的芳?；一鶌W司他韋羧酸衍生物，這些化合物經(jīng)過(guò)體外抗病毒活性篩選實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)對(duì)H1N1、H3N2型流感病毒的神經(jīng)氨酸酶具有較強(qiáng)的抑制作用，尤其對(duì)H259Y(H1N1)型流感病毒的神經(jīng)氨酸酶的抑制作用，部分化合物超過(guò)陽(yáng)性藥奧司他韋羧酸。本發(fā)明的化合物具有較高活性，可以用于制備治療流感病毒性疾病藥物或在制備神經(jīng)氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用，且制備方法簡(jiǎn)單，原料易得，成本較低。
具體實(shí)施方式：
下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。
實(shí)施例1、化合物A1的制備
中間體1的合成：取S-甲基硫脲氫碘酸鹽(11g，50.4mmol)溶于100mL叔丁醇中，加入10mL溶有氫氧化鈉(2g，50.4mmol)的水溶液，室溫?cái)嚢?0min。冰浴下加入50mL溶解9g Boc2O的叔丁醇溶液，乳濁液，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，反應(yīng)完全，停止反應(yīng)加入140mL二氯甲烷，飽和碳酸鈉水溶液洗滌2次，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮至干，快速柱層析(PE∶EA＝6∶1)，得中間體1，7.1g，白色固體，產(chǎn)率74％。
中間體2的合成：將苯甲酸(283mg，2.32mmol)，Pybop(1.21g，2.32mmol)，NMM(469mg，4.64mmol)溶于4mLDMF，室溫?cái)嚢?0min，加入中間體1(220mg，1.16mmol)，室溫?cái)嚢?，過(guò)夜，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，加入水，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮至干，快速柱層析(PE∶EA＝25∶1)，得中間體2。
中間體3的合成：將磷酸奧司他韋(200mg，0.82mmol)，中間體2(241mg，0.82mmol)三乙胺(274mg，2.71mmol)溶于3mLDMF溶液中，室溫?cái)嚢瑁?0min，冰浴下加入氯化汞(268mg，0.98mmol)，5min后有沉淀析出，室溫?cái)嚢?，過(guò)夜，待反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，加入水、乙酸乙酯稀釋反應(yīng)液，硅藻土過(guò)濾，去除固體沉淀，濾液乙酸乙酯萃取2次，飽和食鹽水洗滌2次，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮至干，快速柱層析(PE∶EA＝3∶2)，得中間體3。
中間體4的合成：將中間體3(218mg，0.39mmol)溶于5mL TFA/二氯甲烷＝1/1溶液中，室溫?cái)嚢瑁?h，濃縮至干，加入乙醚，有沉淀析出，過(guò)濾得到中間體4。
目標(biāo)化合物A1的合成：將中間體4(110mg，0.24mmol)溶解于16ml乙醇，4ml溶有碳酸鉀(132mg，0.96mmol)的水溶液加入其中，有少量固體析出，超聲2min，室溫?cái)嚢瑁?2小時(shí)，反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，反應(yīng)液減壓濃縮至少量，加入10％的HCl水溶液調(diào)PH＝4～5，有白色固體析出，減壓濃縮至干，HPLC制備(乙腈/0.1％甲酸水)，得產(chǎn)物A1，65mg，產(chǎn)率63％。
目標(biāo)化合物A1三氟乙酸鹽的制備：將目標(biāo)化合物A1(100mg，0.23mmol)，二氯甲烷5ml，三氟乙酸5ml，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，12小時(shí)，反應(yīng)完畢，加入乙醚5ml，過(guò)濾，制定目標(biāo)化合物A1三氟乙酸鹽。
化合物A1：1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.71(br，1H，-COOH)，11.91(s，1H，-NH)，9.45(d，J＝8.6Hz，1H，9.25(s，1H)，8.13(d，J＝7.7Hz，2H)，7.74(t，J＝7.7Hz，1H)，7.61(t，J＝7.7Hz，2H)，6.72(s，1H)，4.24-4.22(1H，m)，4.17-4.08(1H，m)，4.02-3.90(1H，m)，3.45-3.37(1H，m)，2.79(1H，dd，J＝17.3Hz，4.5Hz)，2.44-2.37(1H，m)，1.81(3H，s，1.52-1.37(4H，m)，0.88-0.78(6H，m)；13C NMR(CDCl3，100MHz)，δ(ppm)：170.2，167.9，167.5，154.4，131.5，129.4，128.9，129.2，128.8，127.6，81.8，74.7，52.8，50.4，29.7，26.1，25.7，23.2，9.9，9.4；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C22H30N4O5[M+H]+431.2294，found 431.2317.
化合物A2-A13的制備按照化合物A1的方法制備，將丙酸改變?yōu)橄鄬?duì)應(yīng)的羧酸，相對(duì)應(yīng)的羧酸和其它原料按照化合物A1的當(dāng)量比和用量投料，其它實(shí)驗(yàn)步驟相同，制得化合物A2-A13及其藥用鹽。
化合物A2：白色固體，產(chǎn)率64％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.71(br，1H)，11.87(s，1H)，9.22(d，J＝8.7Hz，1H)，9.10(s，1H)，8.29(d，J＝7.7Hz，1H)，7.69(t，J＝7.7Hz，1H)，7.52(t，J＝7.7Hz，1H)，7.36(t，J＝7.7Hz，1H)，6.70(s，1H)，4.26-4.24(1H，m)，4.19-4.09(1H，m)，4.01-3.95(1H，m)，3.46-3.37(1H，m)，2.78(1H，dd，J＝17.4Hz，4.8Hz)，2.45(3H，s)，2.42-2.37(1H，m)，1.83(3H，s)，1.52-1.40(4H，m)，0.88-0.78(6H，m)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)，δ(ppm)：170.2，169.1，167.5，154.1，137.8，137.4，132.8，132.5，131.9，128.9，128.6，126.4，81.9，74.6，52.8，50.5，29.6，26.2，25.7，23.2，20.2，9.9，9.5；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C23H32N4O5[M+H]+445.2451，found 445.2530.
化合物A3：白色固體，產(chǎn)率90％。1H NMR(DMSO-d6，，400MHz)，δ(ppm)：7.93(1H，s)，7.73(1H，d，J＝7.3Hz)，7.42(1H，t，J＝7.3Hz)，7.38(1H，d，J＝7.9Hz)，6.72(1H，s)，4.12-4.08(1H，m)，4.06-4.01(1H，m)，4.00-3.93(1H，m)，3.43-3.38(1H，m)，2.80(1H，dd，J＝17.9Hz，4.9Hz)，2.36(3H，s)，2.30-2.25(1H，m)，1.81(3H，s)，1.55-1.44(4H，m)，1.30(3H，t，J＝7.1Hz)，0.87-0.77(6H，m)；13C NMR(DMSO-d6，，100MHz)，δ(ppm)：170.0，168.4，166.1，154.0，138.3，138.1，133.8，132.9，129.5，129.1，128.8，125.7，81.8，61.1，52.5，54.9，48.1，，30.8，26.1，25.8，21.3，14.5，9.9，9.6；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C23H32N4O5[M+H]+445.2451，found 445.2534
化合物A4：白色固體，產(chǎn)率73％。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.87(d，J＝8.0Hz，2H)，7.36(d，J＝8.0Hz，2H)，6.80(s，1H)，4.28-4.20(1H，m)，4.19-4.09(1H，m)，4.02-3.95(1H，m)，3.48-3.47(1H，m)，2.94(1H，dd，J＝17.4Hz，4.8Hz)，2.45(3H，s)，2.43-2.36(1H，m)，1.97(3H，s)，1.59-1.53(4H，m)，0.98-0.90(6H，m)；13C NMR(MeOD，100MHz)，δ(ppm)：172.5，169.0，166.8，154.9，144.3，138.4，130.7，129.8，129.5，128.7，83.0，75.9，61.4，54.0，31.2，26.7，26.3，22.5，14.2，9.6，9.4；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C23H32N4O5[M+H]+445.2451，found 445.2528.
化合物A5：白色固體，產(chǎn)率78％。1H NMR(MeOD，400MHz)δ7.99(d，J＝7.8Hz，1H)，7.64(t，J＝7.8Hz，1H)，7.24(d，J＝7.8Hz，1H)，7.15(d，J＝7.8Hz，1H)，6.80(s，1H)，4.24-4.18(1H，m)，4.16-4.04(1H，m)，4.06(3H，s)，3.89-3.81(1H，m)，3.49-3.41(1H，m)，2.74(1H，dd，J＝17.4Hz，4.8Hz)，2.96-2.88(1H，m)，1.97(3H，s)，1.58-1.50(4H，m)，0.97-0.89(6H，m)；13C NMR(MeOD，100MHz)，δ(ppm)：172.6，166.7，158.5，154.6，138.6，138.3，135.4，133.7，132.1，130.1，121.8，112.9，82.9，75.9，56.4，55.4，54.1，32.1，26.7，26.3，14.1，9.5，9.3；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C23H32N4O6[M+H]+461.2400，found 461.2578.
化合物A6：白色固體，產(chǎn)率75％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.61(s，1H)，10.70(s，1H)，8.78(s，1H)，8.09(s，1H)，7.54(s，1H)，7.52(d，J＝7.9Hz，1H)，7.41(t，J＝7.9Hz，1H)，7.17(d，J＝7.9Hz，1H)，6.69(s，1H)，4.14-4.10(1H，m)，4.10-3.90(1H，m)，3.82(3H，s)，3.45-3.40(1H，m)，3.40-3.36(1H，m)，2.80(1H，dd，J＝17.4Hz，4.8Hz)，2.25-2.19(1H，m)，1.82(3H，s，1.49-1.39(4H，m)，0.87-0.78(6H，m)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)，δ(ppm)：170.0，167.7，159.6，153.9，137.6，134.3，130.1，129.4，120.9，119.5，113.2，112.9，81.6，75.0，55.8，52.6，48.4，30.6，26.1，25.8，23.1，9.9，9.5；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C23H32N4O6[M+H]+461.2400，found461.2426.
化合物A7：白色固體，產(chǎn)率70％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.62(s，1H，N-H)，10.60(s，1H)，8.75(s，1H)，8.07(s，1H)，7.74(d，J＝7.3Hz，2H)，7.04(d，J＝7.3Hz，2H)，6.69(s，1H)，4.19-4.13(1H，m)，4.13-3.95(1H，m)，3.87-3.80(1H，m，)，3.38(3H，s)，3.44-3.40(1H，m)，2.82-2.78(1H，m)，2.31-2.21(1H，m)，1.82(3H，s)，1.47-1.39(4H，m)，0.87-0.78(6H，m)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)，δ(ppm)：170.0，168.4，167.7，153.9，138.3，132.9，130.7，129.1，125.7，114.2，81.6，75.0，56.0，52.6，48.4，30.6，26.2，25.8，23.1，9.9，9.5；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C23H32N4O6[M+H]+461.2400，found 461.2422.
化合物A8：白色固體，產(chǎn)率68％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.22(d，J＝8.4Hz，1H)，8.24(d，J＝8.7Hz，1H)，7.93(d，J＝7.4Hz，1H)，7.87-7.81(m，2H)，6.71(s，1H)，4.26-4.22(1H，m)，4.18-4.08(1H，m)，4.02-3.95(1H，m)，3.43-3.36(1H，m)，2.76(1H，dd，J＝17.4Hz，4.3Hz)，2.44-2.38(1H，m)，1.85(3H，s)，1.53-1.35(4H，m)，0.88-0.78(6H，m)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)，δ(ppm)：170.2，168.3，167.5，153.5，138.3，137.4，133.3，132.5，129.4，128.9，127.4，126.7，82.0，74.5，52.7，50.6，29.5，26.2，25.7，23.1，15.72，9.9，9.5；HR-MS(ESI)m/z：calcdfor C23H9F3N4O5[M+H]+499.2168，found 499.2237.
化合物A9：白色固體，產(chǎn)率70％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.21(s，1H)，8.4(s，1H)，8.18(d，J＝8.7Hz，1H)，8.09(d，J＝8.7Hz，1H)，7.86(t，J＝8.7Hz，1H)，6.72(s，1H)，4.23-4.20(1H，m)，4.14-4.10(1H，m)，4.00-3.94(1H，m)，3.48-3.38(1H，m)，2.79(1H，dd，J＝17.2Hz，4.3Hz)，2.43-2.37(1H，m)，1.85(3H，s)，1.50-1.33(4H，m)，0.88-0.79(6H，m)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)，δ(ppm)：170.2，167.3，166.3，154.0，137.6，137.4，132.9，130.8，128.9，125.5，125.3，122.8，81.8，74.5，52.7，50.4，29.7，26.2，25.7，23.1，15.6，9.9，9.5；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C23H9F3N4O5[M+H]+499.2168，found 499.2241.
化合物A10：白色固體，產(chǎn)率58％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.15(s，J＝8.7Hz，1H)，7.97(d，J＝7.6Hz，1H)，7.89(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70(t，J＝7.6Hz，1H)，7.35(t，J＝7.5Hz，1H)，6.74(1H，s)，4.41-4.38(1H，m)，4.26-4.22(1H，m)，4.15-4.09(1H，m)，3.38-3.32(1H，m)，2.80-2.74(1H，m)，2.34-2.28(1H，m)，1.84(3H，s)，1.50-1.35(4H，m)，0.84-0.74(6H，m)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)，δ(ppm)：175.7，172.6，172.2，158.5，142.8，139.4，138.6，138.1，137.9，134.2，132.6，124.4，79.0，65.7，58.3，55.3，34.6，，30.9，30.5，27.9，14.4，14.1；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C22H29BrN4O5[M+H]+509.1400，found 509.1393.
化合物A11：白色固體，產(chǎn)率70％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.51(s，J＝8.7Hz，1H)，7.97(d，J＝7.5Hz，1H)，7.89(d，J＝7.5Hz，1H)，7.70(t，J＝7.5Hz，1H)，7.35(t，J＝7.5Hz，1H)，6.66(1H，s)，4.21-4.18(1H，m)，4.14-4.05(1H，m)，3.95-3.88(1H，m)，3.46-3.39(1H，m)，2.70-2.64(1H，m)，2.42-2.35(1H，m)，1.69(3H，s)，1.49-1.36(4H，m)，0.87-0.75(6H，m)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)，δ(ppm)：170.1，167.6，166.1，158.6，153.9，138.1，134.7，129.2，127.3，125.7，117.5，116.2，81.5，75.2，53.9，50.4，29.9，26.2，25.7，23.1，9.9，9.4；HR--MS(ESI)m/z：calcd for C22H30N4O5[M+H]+447.2244，found 447.2334.
化合物A12：白色固體，產(chǎn)率20％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)，δ(ppm)：8.29(2H，d，J＝8.0Hz)，8.24(2H，d，J＝8.0Hz)，7.89(1H，d，J＝8.6Hz)，6.66(1H，s)，4.39-4.29(1H，m)，4.16-4.12(1H，m)，3.95-3.89(1H，m)，3.83-3.80(1H，m)，2.82-2.68(1H，m)，2.34-2.13(1H，m)，1.81(3H，s)，1.49-1.38(4H，m)，0.88-0.77(6H，m)；13C NMR(CDCl3，100MHz)，δ(ppm)：170.4，168.0，161.4，157.4，149.3，144.9，130.0，129.9，123.5，120.1，81.6，75.8，52.5，49.4，36.3，26.2，25.7，23.3，9.8，9.5；HR-MS(ESI)m/z：calcd for C22H29N5O7[M+H]+476.2145，found 476.2130.
實(shí)施例2、芳?；一鶌W司他韋羧酸衍生物體外抗病毒活性實(shí)驗(yàn)
1、實(shí)驗(yàn)材料：A/PuertoRico/8/1934(H1N1)；A/hong kong/498/97(H3N2)；A/PuertoRico/8/1934(H259Y，NA resisitant strain)；奧司他韋酸鹽(對(duì)照藥)；酶底物MUNANA(2′-4-methylumbelliferyl-a-N-acetylneuraininate，2′-4-甲基傘形酮-α-N-乙酰神經(jīng)氨酸，Sigma)；PBS緩沖液或者生理鹽水；恒溫培養(yǎng)箱；酶標(biāo)儀。
2、實(shí)驗(yàn)原理：流感病毒神經(jīng)氨酸酶是一種具有酶活性的表面糖蛋白，對(duì)流感病毒的復(fù)制有重要作用。本實(shí)驗(yàn)室采用MUNANA作為底物檢測(cè)流感病毒NA活性。MUNANA是流感病毒NA的特異性底物，在NA作用下產(chǎn)生的催化產(chǎn)物在激發(fā)光照射下，可以產(chǎn)生熒光；熒光強(qiáng)度的變化，可以靈敏反映神經(jīng)氨酸酶的活性。
3、方法步驟：
1)藥物稀釋：在藥物稀釋板中，將待測(cè)化合物和奧司他韋羧酸鹽用DMSO 3倍梯度稀釋8個(gè)濃度梯度；
2)藥物與流感病毒NA作用：將梯度稀釋后的待測(cè)化合物轉(zhuǎn)移至測(cè)試板中，其中測(cè)試板中的每孔中含有PBS，然后在孔中加入流感病毒NA與化合物混勻；
3)底物與NA及藥物作用：將底物加入到含有NB與化合物的孔中混勻并孵育；其中測(cè)試的最高濃度為1μM；
4)實(shí)驗(yàn)設(shè)置NA活性對(duì)照，空白對(duì)照，以及神經(jīng)氨酸酶(NA)陽(yáng)性抑制劑奧司他韋羧酸鹽對(duì)照。
5)37℃下反應(yīng)40分鐘后，多標(biāo)記分析儀上熒光檢測(cè)。
抑制率(％)＝100-(樣品孔-空白對(duì)照)/(NA對(duì)照-空白對(duì)照)*100％
本發(fā)明化合物對(duì)流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性，如表1
表1芳酰基胍基奧司他韋羧酸衍生物體外NA(H1N1，H3N2和H259Y(H1N1))的抑制活性
ND：not detected.
由表1可知，本發(fā)明的部分化合物對(duì)野生型流感病毒的神經(jīng)氨酸酶顯示了良好的抑制活性。其中化合物A8、A9、A10、A12與陽(yáng)性藥羧酸奧司他韋相比，對(duì)野生型流感病毒的神經(jīng)氨酸酶抑制活性稍弱，但對(duì)突變型流感病毒的神經(jīng)氨酸酶抑制活性更高。本發(fā)明的化合物可以用于制備預(yù)防與治療流感病毒引起的疾病的藥物。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。