本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種短型肽聚糖識別蛋白及其制備方法、分離的核酸以及應(yīng)用和抗菌藥物。

背景技術(shù)：

肽聚糖識別蛋白(peptidoglycan recognition proteins，PGRPs)是固有免疫系統(tǒng)中重要的模式識別受體，在機體抵御細(xì)菌性病原微生物的免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。目前，PGRPs已經(jīng)在軟體動物、節(jié)肢動物、棘皮動物和脊椎動物中報道。已報道的PGRPs分子均含有一個或多個由160個氨基酸構(gòu)成的PGRP結(jié)構(gòu)域。

無脊椎動物的PGRPs主要通過以下幾個方面發(fā)揮作用：1)識別模式識別受體，激活Toll或免疫缺陷信號通路，調(diào)節(jié)相關(guān)抗菌肽基因的表達；2)誘發(fā)酚氧化酶原級聯(lián)反應(yīng)，產(chǎn)生黑色素等抗微生物產(chǎn)物來包裹微生物從而限制感染；3)酰胺酶活性，能夠水解肽聚糖N-乙酰胞壁酸和L-丙氨酸之間的酰胺鍵，將具有活性PGN分子轉(zhuǎn)變?yōu)闊o活性的PGN片段從而發(fā)揮其抗菌活性。低等脊椎動物魚類的GRPs同樣具有PGN識別、酰胺酶活性和直接殺菌活性。哺乳動物的PGRPs同樣具有PGN識別功能，同時天然動物的短型PGRP和中間型PGRP具有直接殺菌活性。

中國大鯢(Andrias davidianus)為國家二類保護水生野生動物，是世界上現(xiàn)存最大的有尾兩棲動物。大鯢為兩棲類原始類群，在研究陸生四足類動物系統(tǒng)演化中具有重要的科學(xué)價值。近年來，通過我國學(xué)者的不懈努力，大鯢人工養(yǎng)殖技術(shù)及產(chǎn)業(yè)化規(guī)模已不斷擴大，大鯢已經(jīng)成為我國中西部地區(qū)重要的名特優(yōu)養(yǎng)殖品種。但隨著大鯢養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大、養(yǎng)殖集約化程度不斷提高以及苗、種交流日益頻繁，大鯢的病害問題日益突出。大鯢病害的主要病原有細(xì)菌、病毒、寄生蟲等，而由細(xì)菌性病原所引起的疾病最常見，造成的損失也最大。

因此，在大鯢中進行PGRPs抗菌功能研究與應(yīng)用將為深入開展大鯢病原菌防御機制研究，對保護大鯢種質(zhì)資源，促進大鯢養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種短型肽聚糖識別蛋白，該短型肽聚糖識別蛋白對細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌和細(xì)胞外細(xì)菌均具有明顯的抑菌作用。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種分離的核酸，其編碼上述的短型肽聚糖識別蛋白。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種載體，該載體含有上述的用于編碼短型肽聚糖識別蛋白的核酸。

本發(fā)明的另一目的在于提供含有上述載體的重組細(xì)胞或重組菌。

本發(fā)明的另一目的在于提供制備上述短型肽聚糖識別蛋白的方法。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述的短型肽聚糖識別蛋白在制備抗菌藥物、免疫增強劑、保健品或飼料添加劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種抗菌藥物，其活性成分為上述的短型肽聚糖識別蛋白。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

一種短型肽聚糖識別蛋白，其氨基酸序列如以下(1)或(2)所示：

(1)SEQ ID NO:1所示；

(2)由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或多個氨基酸殘基的替換和/缺失所得到的、且具有與SEQ ID NO:1相同活性的衍生序列。

一種分離的核酸，其編碼上述的短型肽聚糖識別蛋白。

一種載體，其含有上述的核酸。

含有上述載體的重組細(xì)胞或重組菌。

一種制備上述短型肽聚糖識別蛋白的方法，其包括：用編碼上述短型肽聚糖識別蛋白的核酸在宿主細(xì)胞中表達，純化后得到上述短型肽聚糖識別蛋白。

上述的短型肽聚糖識別蛋白在制備抗菌藥物、免疫增強劑、保健品或飼料添加劑中的應(yīng)用。

一種抗菌藥物，其活性成分為上述的短型肽聚糖識別蛋白。

本發(fā)明提供的一種短型肽聚糖識別蛋白和分離的核酸以及應(yīng)用、抗菌藥物的有益效果是：本發(fā)明首次從中國大鯢(Andrias davidianus)克隆出編碼短型肽聚糖識別蛋白的cDNA，短型肽聚糖識別蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，并通過細(xì)胞實驗驗證了該短型肽聚糖識別蛋白的功能，無論在細(xì)胞內(nèi)、還是在細(xì)胞外，該短型肽聚糖識別蛋白均具有較強的抑菌功能，為深入開展大鯢病原菌防御機制研究，對保護大鯢種質(zhì)資源，促進大鯢養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。同時，為基于PGRPs開發(fā)抗菌藥物、免疫增強劑、保健品以及飼料添加劑等潛在的應(yīng)用領(lǐng)域奠定了基礎(chǔ)。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術(shù)方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實施例，因此不應(yīng)被看作是對范圍的限定，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為本發(fā)明實施例1提供的中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白對胞外遲緩愛德華氏菌增殖的影響結(jié)果；

圖2為本發(fā)明實施例1提供的中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白對胞內(nèi)遲緩愛德華氏菌增殖的影響結(jié)果。

具體實施方式

為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

下面對本發(fā)明實施例的一種短型肽聚糖識別蛋白及其制備方法、分離的核酸以及應(yīng)用和抗菌藥物進行具體說明。

本發(fā)明首次出人意料地發(fā)現(xiàn)來自中國大鯢(Andrias davidianus)的短型肽聚糖識別蛋白(也稱作中國大鯢短型肽聚糖識別蛋白)，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，該短型肽聚糖識別蛋白無論是在細(xì)胞內(nèi)還是細(xì)胞外都具有較強的抑菌效果，同時首次克隆分離出編碼該短型肽聚糖識別蛋白的核酸序列。

一方面，本發(fā)明提供了一種短型肽聚糖識別蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本發(fā)明的發(fā)明人通過細(xì)胞實驗，驗證了該短型肽聚糖識別蛋白無論是在細(xì)胞內(nèi)還是細(xì)胞外對細(xì)菌均有較強的抑制作用。

容易理解到，在SEQ ID NO:1的基礎(chǔ)上，經(jīng)過一個或多個氨基酸殘基的替換和/或缺失所得到的，且具有與SEQ ID NO:1具有相同活性(例如對細(xì)菌的抑制作用)的衍生序列也屬于本發(fā)明的保護范圍。

另一方面，本發(fā)明提供了一種分離的核酸，該核酸編碼上述的短型肽聚糖識別蛋白。

根據(jù)密碼子的簡并性，在短型肽聚糖識別蛋白的氨基酸序列確定的基礎(chǔ)上，任何編碼該序列的短型肽聚糖識別蛋白均屬于本發(fā)明的保護范圍。

進一步地，本發(fā)明提供了一種優(yōu)化的用于編碼該短型肽聚糖識別蛋白的核酸，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

另一方面，本發(fā)明提供了一種載體，該載體含有上述的核酸。

進一步地，該載體可以是克隆載體，也可以是表達載體。再進一步地，表達載體可以是原核表達載體，也可以是真核表達載體。再進一步地，表達載體為p2xFLAG-CMV-14。

進一步地，上述的核酸連接至該表達載體p2xFLAG-CMV-14的EcoR I和Xba I酶切位點之間。

容易理解到，通過基因工程操作技術(shù)，可將含有上述核酸的上述載體轉(zhuǎn)化細(xì)胞或細(xì)菌，表達出上述的短型肽聚糖識別蛋白，再經(jīng)過分離、純化等步驟進而可以獲得高純度的短型肽聚糖識別蛋白。

因此，另一方面，本發(fā)明還提供了含有上述載體的重組細(xì)胞或重組菌。通過該重組細(xì)胞或重組菌可以獲得重組表達的短型肽聚糖識別蛋白(SEQ ID NO:2)。

進一步地，重組菌的類型可以是大腸桿菌，也可以是酵母菌或者其他細(xì)菌等；進一步地，重組細(xì)胞的類型可以是昆蟲動物細(xì)胞系，也可以是脊椎動物細(xì)胞系。再進一步地，脊椎動物細(xì)胞系可以人細(xì)胞系，或者是小鼠細(xì)胞系，又或者是草魚腎細(xì)胞系(Ctenopharyngodon idella Kidney cell line,CIK)。

容易理解到，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實際需求，將上述的載體轉(zhuǎn)入不同的細(xì)菌或細(xì)胞中，因此，只要是含有上述載體的重組細(xì)胞或重組菌均屬于本發(fā)明的保護范圍。

另一方面，本發(fā)明還提供了制備上述短型肽聚糖識別蛋白的方法，其包括：用編碼短型肽聚糖識別蛋白的核酸在宿主細(xì)胞中表達，純化后得到所述短型肽聚糖識別蛋白。

進一步地，該制備方法例如可包括：

利用帶有限制性內(nèi)切酶位點的引物adPGRP-F和adPGRP-R擴增中國大鯢短型肽聚糖識別蛋白的cDNA序列的開放閱讀框片段得到PCR擴增產(chǎn)物；

將PCR擴增產(chǎn)物和p2xFLAG-CMV-14質(zhì)粒經(jīng)EcoR I和Xba I雙酶切，連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌Top10感受態(tài)細(xì)胞得到重組菌；

將重組菌進行培養(yǎng)，提取質(zhì)粒，獲得adPGRP-Flag真核表達質(zhì)粒。

將adPGRP-Flag真核表達質(zhì)粒電轉(zhuǎn)染入CIK細(xì)胞中，得到重組細(xì)胞；

重組細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)、純化后即可得到短型肽聚糖識別蛋白。

容易理解到，在本發(fā)明提供的短型肽聚糖識別蛋白的氨基酸序列的前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以通過其他的基因工程技術(shù)獲得本發(fā)明的短型肽聚糖識別蛋白，其也屬于本發(fā)明的保護范圍。

還有一方面，本發(fā)明還提供了上述的短型肽聚糖識別蛋白在制備抗菌藥物、免疫增強劑、保健品或飼料添加劑中的應(yīng)用。

容易理解到，本發(fā)明通過細(xì)胞實驗，首次中國大鯢短型肽聚糖識別蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其無論是在細(xì)胞內(nèi)還是細(xì)胞外都具有較強的抑菌效果。因此，該中國大鯢短型肽聚糖識別蛋白可以應(yīng)用到制備抗菌藥物、免疫增強劑、保健品或飼料添加劑等領(lǐng)域中。得到的含有上述中國大鯢短型肽聚糖識別蛋白的抗菌藥物、免疫增強劑、保健品或飼料添加劑的主體能夠具有抗細(xì)菌感染、增強免疫力等作用。

再一方面，本發(fā)明還提供了一種抗菌藥物，該抗菌藥物的活性成分為上述的短型肽聚糖識別蛋白(氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)。該抗菌藥物具有具有抗菌消炎、增強免疫力等作用。

需要說明的是，本發(fā)明還提供了一種免疫增強劑，其活性成分為為上述的短型肽聚糖識別蛋白(氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)。該免疫增強劑具有抗菌消炎、增強免疫力等作用。

本發(fā)明還提供了一種保健品，其活性成分為為上述的短型肽聚糖識別蛋白(氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)。該保健品具有抗菌消炎、增強免疫力等作用。

本發(fā)明還提供了一種飼料添加劑，其活性成分為為上述的短型肽聚糖識別蛋白(氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)。該飼料添加劑具有抗菌消炎、增強免疫力等作用。

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進一步的詳細(xì)描述。

實施例1

本實施例提供了一種中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白，其氨基酸序列(如SEQ ID NO:1所示)為：

MGECLLLHAAVTDQDDIQVPTLLSSPRFALKVPRMCPLALLLSALCTVTYGCPSIISRSQWGARNVSCLAPMKTPVPYVIIHHTEGRACTTVPACAALVRGIQDFHISERKRCDIGYSFLVGEDGNVYERRSWDYVGTHAPNYNNRSIGISIIGTFTEKT PTLLP；由165個氨基酸殘基組成。

本實施例提供的中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白其無論是在細(xì)胞內(nèi)還是細(xì)胞外都具有較強的抑菌效果。該中國大鯢短型肽聚糖識別蛋白可以應(yīng)用到制備抗菌藥物、免疫增強劑、保健品或飼料添加劑等領(lǐng)域中。

實施例2

真核表達載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化

(1)提取中國大鯢(Andrias davidianus，購自自湖北省嘉魚祥德水產(chǎn)有限責(zé)任公司)的總RNA，所采取的試劑盒為 Reagents(Invitrogen公司，USA)。

具體步驟為：冰上將100mg大鯢脾臟組織充分勻漿；4℃、12000g離心10min，將上清液轉(zhuǎn)移到無RNase的離心管中，室溫靜置10min；加入氯仿0.2mL，渦旋30sec，室溫靜置3-5min；4℃、12000g離心10min；吸取上清至無RNase的EP管，加入等體積的異丙醇，混勻，室溫靜置5min；4℃、12000g離心12min；棄上清，加入800μL 75％乙醇重懸沉淀，4℃、12000g離心5min；棄上清，待乙醇完全揮發(fā)后加入適量DEPC水稀釋總RNA。

采用RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。

具體步驟為：取2μg總RNA，加入1μL oligo(dT)₁₈引物，加DEPC水至終體積11μL，離心，于PCR擴增儀70℃處理5min后迅速冰??；加入4μL 5×反應(yīng)緩沖液，1μL RNA酶抑制劑(Ribonuclease Inhibitor)，2μL dNTP mix(10mmol/L each)，1μL M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶，離心，42℃反應(yīng)60min，70℃、10min終止反應(yīng)，得到后續(xù)PCR模板的cDNA。

(2)采用特異性引物adPGRP-F和adPGRP-R擴增出能夠編碼中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白(adPGRP)的cDNA序列。中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，編碼該中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白的cDNA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

其中，上游引物adPGRP-F的堿基序列為：

5’-CCGGAATTCATGGGTGAGTGTCTGTTAT-3’，下劃線為EcoR I酶切位點；

下游引物adPGRP-R的堿基序列為：

5’-TGCTCTAGACGGTAACAGGGTCG-3’，下劃線為Xba I酶切位點。

(3)PCR反應(yīng)體系：25μL反應(yīng)體積中包括：2.5μL dNTP mix(dNTPs各10mM)；上下游引物(10μM)各1μL；0.25μL Ex Taq酶(5U/μL)；1μL大鯢脾臟cDNA；補水至總體積25μL。

(4)PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃30s，60℃50s，72℃50s，35個循環(huán)；72℃延伸10min。

(5)對擴增的目的片段進行回收純化。將表達載體p2xFLAG-CMV-14進EcoRI和XbaI雙酶切。采用E.Z.N.A^TM cycle-pure kit膠回收試劑盒(Omega公司)對酶切產(chǎn)物純化回收。將酶切的目的片段與酶切后的p2xFLAG-CMV-14用T4連接酶連接過夜；得到表達載體p2xFLAG-CMV-14-adPGRP，然后將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌Top10感受態(tài)細(xì)胞。

實施例3

采用QIAGEN plasmid Mini Kit從上述含有p2xFLAG-CMV-14-adPGRP的大腸桿菌中進行質(zhì)粒提純，將提純的質(zhì)粒p2xFLAG-CMV-14-adPGRP采用Lonza公司的細(xì)胞電轉(zhuǎn)染試劑盒進行CIK細(xì)胞(Ctenopharyngodon idella Kidney cell line,)轉(zhuǎn)染。具體如下：

(1)取生長狀態(tài)良好的CIK細(xì)胞，加入適量培養(yǎng)基反復(fù)吹打使分散為單個細(xì)胞，計數(shù)后取約1×10⁶個細(xì)胞分裝于無菌EP管中；

(2)室溫400g離心10min，棄上清；

(3)用電轉(zhuǎn)緩沖液懸浮細(xì)胞，加入3μg待轉(zhuǎn)染質(zhì)?；靹颍哭D(zhuǎn)移到電轉(zhuǎn)杯中，置于電轉(zhuǎn)儀卡槽中，運行T20程序進行電轉(zhuǎn)染；將細(xì)胞混合液從電轉(zhuǎn)杯吸出，加入到已事先添加2ml新鮮培養(yǎng)基的24孔板，28℃培養(yǎng)；得到含有p2xFLAG-CMV-14-adPGRP的CIK細(xì)胞。

實施例4

本實施例提供了用于制備實施例1的中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白(SEQ ID NO:1)的方法。

按實施例3的方法培養(yǎng)得到含有p2xFLAG-CMV-14-adPGRP的CIK細(xì)胞。將該CIK細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，分離提純后得到含中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白。

實施例5

抑菌活性實驗，以驗證實施例1提供的中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白的抗菌作用。實驗方法如下。

(1)將遲緩愛德華氏菌(Edward siellatarda，又稱遲鈍愛德華氏菌)接種于TSB培養(yǎng)基中，28℃靜置培養(yǎng)至OD₅₄₀＝0.5左右，取菌液離心收集菌體，并重懸稀釋于適量無血清的M199培養(yǎng)基中；

(2)去除24孔板中的細(xì)胞培養(yǎng)基(由實施例3中步驟(3)培養(yǎng)后得到的，以含p2xFLAG-CMV-14-adPGRP的CIK細(xì)胞，作為實驗組)，分別加入500μl稀釋好的含有遲緩愛德華氏菌的M199培養(yǎng)基，170g離心6min，使遲緩愛德華氏菌充分接觸細(xì)胞；

(3)25℃培養(yǎng)箱孵育90min后，分別在3h和6吸取培養(yǎng)基進行胞外細(xì)菌計數(shù)；

(4)對于胞內(nèi)細(xì)菌計數(shù)，去除培養(yǎng)基，用無血清的培養(yǎng)基輕輕漂洗細(xì)胞兩次，再加入500μl含有100μg/ml慶大霉素的M199培養(yǎng)基，以殺死胞外菌，并繼續(xù)培養(yǎng)，分別在3h和6h后，去除培養(yǎng)基，用無血清的培養(yǎng)基漂洗四次，每孔加入500μl含1％Triton-X100的PBS緩沖液，置于搖床上室溫裂解細(xì)胞20min；將裂解液用TSB進行10倍梯度稀釋，然后進行細(xì)菌計數(shù)；

(5)以轉(zhuǎn)化空載體(不含編碼編碼中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白(adPGRP)的cDNA序列的p2xFLAG-CMV-14表達載體)的CIK細(xì)胞作為對照組，并分析數(shù)據(jù)，結(jié)果如圖1和圖2所示。

圖1的結(jié)果顯示(圖中：“flag”代表對照組，“PGRP1”代表實驗組，橫坐標(biāo)表示檢測時間，縱坐標(biāo)表示每3×10⁵個CIK細(xì)胞濃度的細(xì)胞外遲緩愛德華氏菌的數(shù)量，“*”代表差異顯著、p<0.05，“**”代表差異極顯著、p<0.01)，轉(zhuǎn)染p2xFLAG-CMV-14-adPGRP表達質(zhì)粒3h后，實驗組的CIK細(xì)胞胞外遲緩愛德華氏菌的細(xì)胞數(shù)量為3.3×10⁷個；6h后胞外遲緩愛德華氏菌的細(xì)胞數(shù)量為6.0×10⁷個。胞外細(xì)菌數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對照組(轉(zhuǎn)化空載體p2xFLAG-CMV-14)對應(yīng)時間的胞外細(xì)菌數(shù)量(3h為3.9×10⁷個；6h為1.0×10⁸個)；

圖2的結(jié)果顯示(圖中：“flag”代表對照組，“PGRP1”代表實驗組，橫坐標(biāo)表示檢測時間，縱坐標(biāo)表示每3×10⁵個CIK細(xì)胞濃度細(xì)胞內(nèi)遲緩愛德華氏菌的數(shù)量，“*”代表差異顯著、p<0.05，“**”代表差異極顯著、p<0.01)，轉(zhuǎn)染p2xFLAG-CMV-14-adPGRP表達質(zhì)粒3h后，實驗組的CIK細(xì)胞胞內(nèi)遲緩愛德華氏菌的細(xì)胞數(shù)量為1.2×10⁶個；6h后胞內(nèi)遲緩愛德華氏菌的細(xì)胞數(shù)量為8×10⁶個。胞內(nèi)細(xì)菌數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對照組對應(yīng)時間的胞內(nèi)細(xì)菌數(shù)量(3h為2.1×10⁶個；6h為1.4×10⁷個)。

上述結(jié)果表明，無論是在細(xì)胞內(nèi)還是細(xì)胞外，實驗組的細(xì)菌數(shù)量均低于對照組，表明p2xFLAG-CMV-14-adPGRP載體上表達出的中國大鯢短型短型肽聚糖識別蛋白(adPGRP)具有較強的細(xì)菌抑制作用，能夠抑制細(xì)菌至少是遲緩愛德華氏菌的生長。

綜上，本發(fā)明提供的中國大鯢肽聚糖識別蛋白為短型肽聚糖識別蛋白，轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞后，提取的重組蛋白對胞內(nèi)和胞外遲緩愛德華氏菌均具有較強的抑菌效果。本發(fā)明首次在大鯢中進行PGRPs抗菌功能研究與應(yīng)用將為深入開展大鯢病原菌防御機制研究，揭示了中國大鯢肽聚糖識別蛋白(SEQ ID NO:1)的抗菌作用，這對保護大鯢種質(zhì)資源，促進大鯢養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。同時，為基于PGRPs開發(fā)抗菌藥物、免疫增強劑、保健品以及飼料添加劑等潛在的應(yīng)用領(lǐng)域奠定了基礎(chǔ)。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

SEQUENCE LISTING

<110> 鹽城工學(xué)院

<120> 一種短型肽聚糖識別蛋白及其制備方法、分離的核酸以及應(yīng)用和抗菌藥物

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 165

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Met Gly Glu Cys Leu Leu Leu His Ala Ala Val Thr Asp Gln Asp Asp

1 5 10 15

Ile Gln Val Pro Thr Leu Leu Ser Ser Pro Arg Phe Ala Leu Lys Val

20 25 30

Pro Arg Met Cys Pro Leu Ala Leu Leu Leu Ser Ala Leu Cys Thr Val

35 40 45

Thr Tyr Gly Cys Pro Ser Ile Ile Ser Arg Ser Gln Trp Gly Ala Arg

50 55 60

Asn Val Ser Cys Leu Ala Pro Met Lys Thr Pro Val Pro Tyr Val Ile

65 70 75 80

Ile His His Thr Glu Gly Arg Ala Cys Thr Thr Val Pro Ala Cys Ala

85 90 95

Ala Leu Val Arg Gly Ile Gln Asp Phe His Ile Ser Glu Arg Lys Arg

100 105 110

Cys Asp Ile Gly Tyr Ser Phe Leu Val Gly Glu Asp Gly Asn Val Tyr

115 120 125

Glu Arg Arg Ser Trp Asp Tyr Val Gly Thr His Ala Pro Asn Tyr Asn

130 135 140

Asn Arg Ser Ile Gly Ile Ser Ile Ile Gly Thr Phe Thr Glu Lys Thr

145 150 155 160

Pro Thr Leu Leu Pro

165

<210> 2

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

tggggagccc gcaatgtcag ctgcctcgct cccatgaaga ccccggtgcc ctacgtcatc 60

atccatcaca cagaaggacg cgcctgcacc accgtacctg cctgcgccgc cctcgtgagg 120

ggcatccaag acttccacat cagtgagcgg aaaaggtgtg acatcggcta cagcttcctg 180

gttggcgagg acggcaatgt gtatgaaagg cgcagctggg actatgtggg aacgcacgcc 240

cccaactaca ataacaggtc cattggcatc agcatcattg gcaccttcac agaaaaaacg 300

ccgactctgc tgccctga 318