專利名稱：兩種酶依次水解鹿血蛋白獲取活性肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種兩種酶依次水解鹿血蛋白獲取活性肽的方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)鹿血資源的生物學(xué)利用，獲得具有高生物活性的肽產(chǎn)物，屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
氨基酸彼此以酰胺鍵相互連接形成的化合物稱作肽，其中含10個(gè)以上氨基酸殘基的肽稱為多肽，而含10個(gè)以下氨基酸殘基的稱為寡肽或者低聚肽。由于肽的分子相對(duì)于蛋白質(zhì)小得多，但生物活性很高，因而又稱之為生物活性肽。生物活性肽對(duì)機(jī)體具有一定生理功能，在生命活動(dòng)中起著傳遞生理信息，調(diào)節(jié)生理功能的作用，對(duì)維持人體正常的生理活動(dòng)具有重要意義。近年來(lái)，已有100多種生物活性肽被發(fā)現(xiàn)和識(shí)別，有些已應(yīng)用于食品工業(yè)。動(dòng)物血液如豬血是一種重要的生物資源，現(xiàn)有技術(shù)采用酶水解蛋白方法已經(jīng)使得 40 %的豬血得到開發(fā)。例如將豬血配成5 %的水溶液，加入胰酶，胰酶占豬血成分質(zhì)量的 10%,用堿控制該水溶液的pH值在7 8范圍內(nèi)，在40 50°C的溫度下保溫水解，水解5 小時(shí)后得豬血蛋白水解液。不過(guò)，該單一酶解技術(shù)其酶解程度并不徹底，豬血蛋白的水解度僅有10%，造成資源浪費(fèi)。相對(duì)于豬血來(lái)說(shuō)，具有更重要的生物成分的鹿血資源其利用要滯后得多，現(xiàn)有技術(shù)僅限于對(duì)鹿血原血液的直接利用，例如與酒混合配制鹿血酒。

發(fā)明內(nèi)容
為了實(shí)現(xiàn)對(duì)鹿血資源的生物學(xué)利用，使其有益生物成分得以充分利用，據(jù)此獲取具有很高生物活性的肽，我們發(fā)明了一種兩種酶依次水解鹿血蛋白獲取活性肽的方法。本發(fā)明是一種酶水解蛋白方法，其特征在于(1)配制鹿血水溶液原料為鹿血原血液或者鹿血粉，按鹿血成分5 10%的質(zhì)量濃度配制；(2)木瓜酶水解鹿血蛋白向所配制的鹿血水溶液中加入木瓜酶，加入量占鹿血成分質(zhì)量的2 6%，水解溫度35 40°C，pH值6. 5 7. 5，水解時(shí)間為2 3小時(shí)，得到一次水解液；(3)堿性蛋白酶水解鹿血蛋白向一次水解液加入堿性蛋白酶，加入量占步驟(2) 中所述鹿血成分質(zhì)量的2 6%，水解溫度50 55°C，pH值8. 5 9. 5，水解時(shí)間為2 3 小時(shí)，得到二次水解液；(4)純化二次水解液首先經(jīng)水浴使二次水解液殘余酶失活，其次采用膜技術(shù)純化二次水解液，獲得活性肽溶液，再經(jīng)干燥獲得固態(tài)粉末狀活性肽產(chǎn)物。本發(fā)明之方法其效果在于，原料為來(lái)自鹿飼養(yǎng)場(chǎng)的新鮮鹿血，作為鹿血原血液直接用于鹿血蛋白酶水解，或者先行將新鮮鹿血制成鹿血粉儲(chǔ)存，供日后進(jìn)行酶水解之用。經(jīng)過(guò)所述兩種酶依次水解，獲得固態(tài)粉末狀活性肽產(chǎn)物，鹿血蛋白水解度達(dá)到30 %，測(cè)得產(chǎn)物中游離氮含量高達(dá)50. 43%，說(shuō)明產(chǎn)物主要成分為活性肽。本發(fā)明不僅使得鹿血資源獲得生物學(xué)利用，而且使其有益生物成分得以充分利用，同時(shí)能夠滿足市場(chǎng)對(duì)生物活性肽的需求。 本發(fā)明之方法水解技術(shù)參數(shù)容易實(shí)現(xiàn)，水解工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明之方法具體實(shí)施方式
如下(1)配制鹿血水溶液原料為鹿血原血液或者鹿血粉，按鹿血成分5 10%的質(zhì)量濃度配制。其中，鹿血粉是由鹿血原血液經(jīng)離心噴霧干燥所制取，具體方法是將鹿血原血液通入高速離心噴霧干燥裝置，設(shè)置入口溫度為160 200°C，出口溫度為70 90°C，轉(zhuǎn)數(shù)為 2700 3000rpm，流速為30 60ml/min，獲得鹿血粉，得率為15. 61%。(2)木瓜酶水解鹿血蛋白向所配制的鹿血水溶液中加入木瓜酶，加入量占鹿血成分質(zhì)量的2 6%，水解溫度35 40°C，pH值6. 5 7. 5，水解時(shí)間為2 3小時(shí)，用 0. lmol/L的HCl使pH值保持在所述范圍內(nèi)，得到一次水解液。(3)堿性蛋白酶水解鹿血蛋白向一次水解液加入堿性蛋白酶，加入量占步驟(2) 中所述鹿血成分質(zhì)量的2 6%，水解溫度50 55°C，pH值8. 5 9. 5，水解時(shí)間為2 3 小時(shí)，用0. lmol/L的NaOHHpH值保持在所述范圍內(nèi)，得到二次水解液。(4)純化二次水解液首先經(jīng)水浴使二次水解液殘余酶失活，其次采用膜技術(shù)純化二次水解液，獲得活性肽溶液，再經(jīng)干燥獲得固態(tài)粉末狀活性肽產(chǎn)物。其中的干燥方法為，干燥過(guò)程在冷凍干燥裝置中進(jìn)行，用0. lmol/L的酸如HCl調(diào)整活性肽溶液PH值為7. 0，設(shè)置冷凍干燥溫度為-60 -80°C，壓強(qiáng)為20 50Pa，經(jīng)3 5 小時(shí)冷凍后加熱到30 45°C，完成干燥。將獲得的固態(tài)粉末狀活性肽產(chǎn)物密封，低溫避光保存。
權(quán)利要求
1.一種兩種酶依次水解鹿血蛋白獲取活性肽的方法，是一種酶水解蛋白方法，其特征在于(1)配制鹿血水溶液原料為鹿血原血液或者鹿血粉，按鹿血成分5 10%的質(zhì)量濃度配制；(2)木瓜酶水解鹿血蛋白向所配制的鹿血水溶液中加入木瓜酶，加入量占鹿血成分質(zhì)量的2 6%，水解溫度35 40°C，pH值6. 5 7. 5，水解時(shí)間為2 3小時(shí)，得到一次水解液；(3)堿性蛋白酶水解鹿血蛋白向一次水解液加入堿性蛋白酶，加入量占步驟( 中所述鹿血成分質(zhì)量的2 6%，水解溫度50 55°C，pH值8. 5 9. 5，水解時(shí)間為2 3小時(shí)，得到二次水解液；(4)純化二次水解液首先經(jīng)水浴使二次水解液殘余酶失活，其次采用膜技術(shù)純化二次水解液，獲得活性肽溶液，再經(jīng)干燥獲得固態(tài)粉末狀活性肽產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶水解鹿血蛋白獲取活性肽的方法，其特征在于，鹿血粉是由鹿血原血液經(jīng)離心噴霧干燥所制取，具體方法是將鹿血原血液通入高速離心噴霧干燥裝置，設(shè)置入口溫度為160 200°C，出口溫度為70 90°C，轉(zhuǎn)數(shù)為2700 3000rpm，流速為 30 60ml/min，獲得鹿血粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶水解鹿血蛋白獲取活性肽的方法，其特征在于，步驟(2)用 0. lmol/L的HCl使pH值保持在所述范圍內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶水解鹿血蛋白獲取活性肽的方法，其特征在于，步驟(3)用 0. lmol/L的NaOH使pH值保持在所述范圍內(nèi)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶水解鹿血蛋白獲取活性肽的方法，其特征在于，其中的干燥方法為，干燥過(guò)程在冷凍干燥裝置中進(jìn)行，用0. lmol/L的酸如HCl調(diào)整活性肽溶液pH值為7. 0，設(shè)置冷凍干燥溫度為-60 -80°C，壓強(qiáng)為20 50Pa，經(jīng)3 5小時(shí)冷凍后加熱到 30 45 °C，完成干燥。
全文摘要
兩種酶依次水解鹿血蛋白獲取活性肽的方法屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域?，F(xiàn)有單一酶解豬血蛋白技術(shù)其水解度僅有10％。而對(duì)鹿血資源的利用僅限于直接利用。本發(fā)明為(1)原料為鹿血原血液或者鹿血粉，按鹿血成分5～10％的質(zhì)量濃度配制鹿血水溶液；(2)向所配制的鹿血水溶液中加入木瓜酶，加入量占鹿血成分質(zhì)量的2～6％，水解溫度35～40℃，pH值6.5～7.5，水解時(shí)間為2～3小時(shí)，得到一次水解液；(3)向一次水解液加入堿性蛋白酶，加入量依然占鹿血成分質(zhì)量的2～6％，水解溫度50～55℃，pH值8.5～9.5，水解時(shí)間為2～3小時(shí)，得到二次水解液；(4)經(jīng)水浴使二次水解液殘余酶失活，采用膜技術(shù)純化，獲得活性肽溶液。
文檔編號(hào)C12P21/06GK102199648SQ20111007431
公開日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2011年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月25日
發(fā)明者劉達(dá), 楊爽, 牛曉輝, 謝冠男, 高冷 申請(qǐng)人:伊通滿族自治縣吉云鹿業(yè)發(fā)展有限公司