本發(fā)明涉及分子生物學(xué)檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地，涉及一種快速提取病毒rna的試劑盒。
背景技術(shù)：
：核酸提取是核酸檢測(cè)整個(gè)技術(shù)流程的第一步，也是分子生物學(xué)中最關(guān)鍵的方法之一。它是下游核酸檢測(cè)和科學(xué)研究的基礎(chǔ)，抽提的核酸的質(zhì)量及其完整性會(huì)直接影響臨床研究或診斷的結(jié)果。一般的核酸提取過程包括兩大步驟：樣品的裂解和純化。裂解指使樣品中的核酸釋放到反應(yīng)體系中，純化則是指使核酸與反應(yīng)體系中的其它成分，如蛋白質(zhì)、鹽類以及其他雜質(zhì)徹底地分離。常用的rna的提取方法有trizol法、異硫氰酸胍法、ctab-licl法及國(guó)內(nèi)外各生物公司的總rna提取試劑盒等。rna提取的經(jīng)典方法是trizol法，它是一種基于異硫氰酸肌/苯酚/氯仿抽提原理的方法，該法適用范圍廣，動(dòng)植物都適用，提取的rna基本無基因組dna的污染，但是該法操作步驟繁瑣，提取試劑中使用了苯酚、氯仿等有毒試劑，而且該法不適用于富含多糖多酚材料rna的提取。ctab-licl法常被用來提取植物組織rna的提取，但是由于ctab木身是一個(gè)與sds功能相類似的試劑，盡管它可和rna以及dna形成不溶的復(fù)合物，但ctab法通常要結(jié)合其它操作，如再經(jīng)licl沉淀等步驟，使得該法操作繁瑣，并且在抽提時(shí)使用有毒試劑氯仿。傳統(tǒng)的提取試劑由于提取得率相對(duì)較低，且步驟較為繁雜，給提取工作帶來一定影響，因此難以得到合格的rna樣品。磁珠法是近幾年才發(fā)展起來的核酸提取方法。磁珠的直徑幾十納米至數(shù)微米，在磁場(chǎng)下表現(xiàn)出磁性，由無機(jī)/有機(jī)或者無機(jī)/無機(jī)材料組成的外形呈現(xiàn)為球狀的復(fù)合粒子。磁珠法提取核酸不需要苯酚和氯仿等毒性大的有機(jī)溶劑，提取的核酸純度高、產(chǎn)量大。專利號(hào)為201010281633.6、201510023368.4的專利公開了提取病毒dna/rna的方法，但這些試劑組成比較復(fù)雜，提取步驟比較復(fù)雜，提純周期長(zhǎng)，不利于客戶快速提取純化rna。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，提供一種快速提取病毒rna的試劑盒。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的：一種快速提取流感病毒rna的試劑盒，所述試劑盒包含病毒裂解結(jié)合液，所述病毒裂解結(jié)合液含有聚醚醇、蔗糖、tris-hcl。本發(fā)明試劑盒的工作原理：樣本在病毒裂解結(jié)合液的作用下，可以使病毒的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使病毒rna釋放出來。因此所述病毒裂解結(jié)合液不含抑制pcr反應(yīng)的成分，所以產(chǎn)物可直接用于后續(xù)的pcr檢測(cè)。優(yōu)選地，所述聚醚醇的濃度為10～14%（v/v）。優(yōu)選地，所述病毒裂解結(jié)合液的ph為6.5～7.5。優(yōu)選地，所述蔗糖的濃度為20～50mm，tris-hcl的濃度為10～50mm。作為一種具體的實(shí)施方式，所述病毒解裂結(jié)合液的組成為：20～50mm蔗糖，10～50mm三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（tris-hcl），10～14%（v/v）聚醚醇，溶劑為高壓滅菌水（ph值為6.5～7.5）。本發(fā)明還提供一種利用所述rna試劑盒進(jìn)行核酸快速提取檢測(cè)的方法，是將樣本于病毒裂解結(jié)合液混合，震蕩室溫靜置5～10min后，取混合液進(jìn)行pcr反應(yīng)。優(yōu)選地，樣本和病毒裂解結(jié)合液的混合體積比為1～1.5：1。優(yōu)選地，混合液在pcr反應(yīng)體系中的體積不超過25%。作為一種具體的實(shí)施方式，本發(fā)明所述利用rna試劑盒進(jìn)行核酸快速提取檢測(cè)的方法是：將200μl新鮮樣本于200μl病毒裂解混合液震蕩混合均勻后，室溫靜置5～10min，取5～10μl混合液進(jìn)行pcr反應(yīng)檢測(cè)核酸。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明提供了一種快速提取流感病毒rna的試劑盒，所述試劑盒包含病毒裂解結(jié)合液，所述病毒裂解結(jié)合液含有聚醚醇、蔗糖、tris-hcl；利用該試劑盒，只需一步操作即可使流感病毒的核酸釋放出來，后續(xù)的物質(zhì)可以用于熒光pcr的檢測(cè)。附圖說明圖1為實(shí)施例1所述熒光pcr檢測(cè)結(jié)果；圖中的1-5分別對(duì)應(yīng)著相應(yīng)的樣本編號(hào)，本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果為藍(lán)色箭頭所指，其他的為對(duì)照試劑結(jié)果。具體實(shí)施方式下面結(jié)合說明書附圖和具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下例實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照本領(lǐng)域常規(guī)條件或按照制造廠商建議的條件。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的意義相同。實(shí)施例1其中病毒裂解結(jié)合液終濃度組成為：20mm蔗糖，10mm三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（tris-hcl），14%（v/v）聚醚醇，溶劑為高壓滅菌水，病毒裂解結(jié)合液的ph值為7.0，利用該病毒裂解結(jié)合液進(jìn)行核酸檢測(cè)的方法：取一無rnase的1.5ml的離心管，在管內(nèi)先加入200μl病毒裂解結(jié)合液，然后再加入200μl新鮮流感樣本，震蕩混合均勻室溫靜置5min中。對(duì)照試劑選用qiaampviralrnaminikit提取的樣本量為200μl，洗脫體積為100μl。提取完成后，取上述核酸rna提取液5μl作為模板，應(yīng)用達(dá)安基因的甲型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒（一步pcr熒光法）進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見下表1和附圖1。表1不同樣本ct值比較樣本編號(hào)本發(fā)明檢測(cè)結(jié)果（ct值）qiagen試劑檢測(cè)結(jié)果（ct值）131.4731.73232.3233.13332.8831.86426.7427.31532.9232.23結(jié)果表明，市面上提取1個(gè)流感病毒rna的核酸提取試劑提取時(shí)間為30～40分鐘。本發(fā)明僅用5分鐘即可完成流感樣本的核酸提取，并且本發(fā)明的流感核酸提取效率與現(xiàn)有的核酸提取試劑的提取效率處于同一水平，因此，本發(fā)明在快速核酸提取應(yīng)用方面具有明顯優(yōu)勢(shì)。實(shí)施例2實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1，唯一不同的是，病毒裂解結(jié)合液終濃度組成為：30mm蔗糖，30mmtris-hcl，12%（v/v）聚醚醇，溶劑為高壓滅菌水，病毒裂解結(jié)合液的ph值為6.5。實(shí)施例3實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1，唯一不同的是，病毒裂解結(jié)合液終濃度組成為：50mm蔗糖，50mmtris-hcl，10%（v/v）聚醚醇，溶劑為高壓滅菌水，病毒裂解結(jié)合液的ph值為7.5。當(dāng)前第1頁12