本發(fā)明涉及fxr受體激動(dòng)劑、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯以及它們的立體異構(gòu)體，含有這些化合物的藥物制劑，以及該化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯以及它們的立體異構(gòu)體，在制備治療和/或預(yù)防由fxr受體介導(dǎo)的非酒精性脂肪肝、原發(fā)性膽汁性肝硬化、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病并發(fā)癥及惡性腫瘤等相關(guān)疾病的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

fxr受體(法尼醇x受體)屬于配體激活轉(zhuǎn)錄因子核受體家族成員，具有典型的核受體結(jié)構(gòu)，即氨基末端高度保守的dna結(jié)合區(qū)(dbd)，羧基末端配體結(jié)合區(qū)(lbd)，氨基末端配體非依賴性轉(zhuǎn)錄激活功能區(qū)(af1)，羧基末端配體依賴性轉(zhuǎn)錄激活功能區(qū)(af2)和腳鏈區(qū)。fxr可與視黃醇類x受體(rxr)形成異二聚體，當(dāng)配體與fxr的lbd區(qū)域結(jié)合后，fxr構(gòu)象可發(fā)生改變，dna的結(jié)合區(qū)結(jié)合到靶基因啟動(dòng)子的fxr反應(yīng)元件(ir-1)上面，釋放輔抑制因子(如ncor)，招募了輔激活因子，從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。

fxr在多個(gè)器官組織中均有表達(dá)，包括脂肪組織、肝臟、胃腸道、腎臟等，其中肝臟中表達(dá)量最為豐富。fxr信號(hào)通路，可直接或間接調(diào)節(jié)多個(gè)下游基因的表達(dá)，如bsep、shp、cyp7a1、fgfr4、ostα/β、srebp-1c等基因，進(jìn)而調(diào)節(jié)多種代謝途徑，如：甘油三酯、膽固醇、血糖及能量穩(wěn)定性代謝膽酸的代謝，具有治療癌癥、非酒精性脂肪肝、代謝紊亂、炎癥等疾病的功能。通過(guò)抑制膽酸的合成、結(jié)合及轉(zhuǎn)運(yùn)，調(diào)節(jié)其代謝，是體內(nèi)膽酸平衡的主要調(diào)節(jié)者。

部分天然膽酸類化合物可激動(dòng)fxr受體，如鵝去氧膽酸(cdca)、脫氧膽酸(dca)、石膽酸(lca)及牛磺酸和這些膽酸的甘氨酸結(jié)合物。除去天然的化合物，目前國(guó)際上研發(fā)的fxr激動(dòng)劑可主要分為兩大類，一類是甾體類，以intercept公司的奧貝膽酸為代表(obeticholicacid，oca)，針對(duì)非酒精性脂肪肝適應(yīng)癥，處于臨床iii期；另一類是新型分子實(shí)體，早期研發(fā)的化合物如gw4604(wo2000/037077)，雖然具有較強(qiáng)的激動(dòng)活性，但其對(duì)光不穩(wěn)定且生物利用度較低。另外，phenex公司研發(fā)的px-104(wo2011020615a1)已轉(zhuǎn)讓給gilead公司，目前處于臨床ii期研究階段。

本專利涉及的發(fā)明在于提供具有新型分子結(jié)構(gòu)的化合物，其可有效激動(dòng)fxr受體，提升bsep及shp基因表達(dá)水平，同時(shí)有效抑制cyp7a1基因的表達(dá)。另外，為了達(dá)到更好的治療效果的目的，更好的滿足市場(chǎng)需求，我們希望能夠開(kāi)發(fā)出高效低毒且穩(wěn)定性較好的fxr受體激動(dòng)劑。本發(fā)明將提供一種新型結(jié)構(gòu)的fxr受體激動(dòng)劑，其具有很好的藥效，為fxr受體激動(dòng)劑用于治療非酒精性脂肪肝、原發(fā)性膽汁性肝硬化、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病并發(fā)癥及惡性腫瘤提供了可能性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一類靶向fxr受體激動(dòng)劑，具體的技術(shù)方案為如下：

方案1、通式(ⅰ)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：

其中，

r¹、r²分別獨(dú)立地選自氫原子、氰基、鹵素原子、硝基、氨基、羥基、羧基、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二c1-6烷基氨基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基羰基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基磺?；?、c1-6烷基氨基磺?；⒍1-6烷基氨基磺?；?、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氧基、c2-8烯基或c2-8炔基；

r³選自氫原子，未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基p取代的c1-6烷基、c1-6烷氧基、c3-8環(huán)烷基、c3-8雜環(huán)基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基氨基磺?；?、二c1-6烷基氨基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氧基；

p選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二c1-6烷基氨基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基磺?；?、c2-8烯基或c2-8炔基；

r⁴選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、c1-6烷氧基、c1-6烷基、羥基c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、羧基c1-6烷基、羧基氧基c1-6烷基、羧基氨基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、氨基羰基c1-6烷基、羥基c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷氧基、羧基c1-6烷氧基、c2-8烯基、c2-8炔基、c1-6烷基氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基磺?；1-6烷基氨基磺?；蚨1-6烷基氨基；

w選自ch2、nh、o、s、so、so2或co；a選自nh、o或s；

z選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基q取代的芳基或雜芳基；

q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二c1-6烷基氨基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c2-8烯基或c2-8炔基；

e選自c、ch、ch2、n、nh、o、s、so、so2或co；

f選自不存在、c、ch、ch2、n、nh、o、s、so、so2或co；

x選自c、ch或n；

y選自c、ch、ch2、n、nh、o、s、so、so2或co；

e、x、y、f之間的連接方式分別獨(dú)立地選自單鍵或雙鍵，e、x、y、f之間的連接方式至少有一個(gè)為雙鍵；

e、x、y、f連接形成的基團(tuán)不為噻吩，且當(dāng)r³為異丙基時(shí)，e、x、y、f連接形成的基團(tuán)不為苯環(huán)或咪唑；

m選自0-3的整數(shù)；n選自0-4的整數(shù)。

方案2、如方案1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：

其中，

r¹、r²分別獨(dú)立地選自氫原子、氰基、鹵素原子、硝基、氨基、羥基、羧基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、c1-4烷基硫基、c1-4烷基羰基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基或c1-4烷氧基c1-4烷基；

r³選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基p取代的c3-6環(huán)烷基或c3-6雜環(huán)基；

p選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；

r⁴選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、c1-4烷氧基、c1-4烷基、羥基c1-4烷基、鹵代c1-4烷基、羧基c1-4烷基、羧基氧基c1-4烷基、羧基氨基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、氨基羰基c1-4烷基、羥基c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷氧基、羧基c1-4烷氧基、c2-6烯基、c2-6炔基、c1-4烷基氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基羰基氨基、c1-4烷基磺?；?、c1-4烷基氨基磺酰基或二c1-4烷基氨基；

w選自ch2、nh、o、s、so、so2或co；a選自nh、o或s；

z選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基q取代的苯基或5-6元雜芳基；

q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；

e選自c、ch、ch2、n、nh、co或o；

f選自不存在，c、ch、ch2、n、nh、co或o；

x選自c、ch或n；

y選自c、ch、ch2、n、nh、co或o；

e、x、y、f之間的連接方式分別獨(dú)立地選自單鍵或雙鍵，e、x、y、f之間的連接方式至少有一個(gè)為雙鍵；

m選自0-2的整數(shù)；n選自0-3的整數(shù)。

方案3、如方案2所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：

其中，

r³選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)p取代的c3-6環(huán)烷基；

p選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；

w選自nh、o或s；a選自nh、o或s；

z選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基q取代的苯基或5-6元雜芳基；

q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；

e、x、y、f共同構(gòu)成的環(huán)狀基團(tuán)與苯環(huán)一起形成以下的結(jié)構(gòu)：

苯并吡喃基、4h-色烯-4-酮基、苯并噁唑基、4h-色原烯基、苯并呋喃基、苯并1,4-二氧雜環(huán)己二烯基、苯并4h-1,4-噁嗪基、苯并4h-1,2-噁嗪基、苯并4h-1,3-噁嗪基、二氫噌啉基、喹唑啉基、二氫喹唑啉基、喹啉基、二氫喹啉基、異喹啉基、二氫異喹啉基、喹啉酮基、異喹啉酮基、苯并二氫吡嗪基、苯并吡嗪基、二氫萘基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基或異吲哚基；

n選自0-2的整數(shù)。

方案4、如方案3所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：

r¹、r²分別獨(dú)立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、甲基氨基、乙酰基、三氟甲基、三氟乙基或三氟甲氧基；

r³選自環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基；

r⁴選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、乙炔基、甲氨基、乙氨基、乙?；?、乙酰氨基、甲磺?；蚨装被?；

z選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基q取代的苯基或5-6元雜芳基；

q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；

e、x、y、f共同構(gòu)成的環(huán)狀基團(tuán)與苯環(huán)一起形成以下的結(jié)構(gòu)：

n選自1或2。

方案5、如方案4所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：

其中，r¹、r²分別獨(dú)立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、甲基氨基、乙?；?、三氟甲基或三氟甲氧基；

r³選自環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基；

r⁴選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、乙?；蛞阴０被?；

w選自nh、o或s；a選自nh、o或s；

z選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基q取代的苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、噻吩基、噻唑基、噁唑基；

q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；

e、x、y、f共同構(gòu)成的環(huán)狀基團(tuán)與苯環(huán)一起形成以下的結(jié)構(gòu)：

n選自1。

方案6、如方案5所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：

其中，r¹、r²分別獨(dú)立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、三氟甲基或三氟甲氧基；

r³選自環(huán)丙基；

r⁴選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、乙?；蛞阴０被?；

w選自o或s；

a選自o或s；

z選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基q取代的苯基；

q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、甲氨基、二甲氨基、三氟甲基或三氟甲氧基；

e、x、y、f共同構(gòu)成的環(huán)狀基團(tuán)與苯環(huán)一起形成以下的結(jié)構(gòu)：

n選自1。

方案7、如方案1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體，具有通式(ⅱ)所示的結(jié)構(gòu)：

其中，

z選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基q取代的苯基或5-6元雜芳基；

q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；

x選自c、ch或n；y選自ch、或n；

f選自ch、ch2、n、nh或o；

x、y、f之間的連接方式分別獨(dú)立地選自單鍵或雙鍵；x、y、f之間的連接方式至少有一個(gè)為雙鍵；

當(dāng)r³為異丙基時(shí)，x、y、f連接形成的基團(tuán)不為咪唑。

方案8、如方案7所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：

其中，r¹、r²分別獨(dú)立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基、叔丁基、丁基、甲氧基、甲基氨基、二甲氨基、乙酰基、三氟甲基、三氟乙基或三氟甲氧基；

r³選自環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基；

r⁴選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、乙炔基、甲氨基、乙氨基、乙?；?、乙酰氨基、甲磺?；蚨装被?；

w選自nh、o或s；a選自nh、o或s；

n選自0-2的整數(shù)；

z選自未被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基q取代的苯基或5-6元雜芳基；

q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；

x選自c、ch或n；y選自ch或n；

f選自ch、ch2、n或nh；

x、y、f之間的連接方式分別獨(dú)立地選自單鍵或雙鍵；x、y、f之間的連接方式至少有一個(gè)為雙鍵。

方案9、如方案8所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：

r¹、r²分別獨(dú)立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、甲基氨基、乙酰基、三氟甲基或三氟甲氧基；

r³選自環(huán)丙基；

r⁴選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、乙?；蛞阴０被?；

w選自o；a選自o；

z選自未被取代或被1-2個(gè)取代基q取代的苯基；

q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、甲氨基、二甲氨基、三氟甲基或三氟甲氧基；

x、y、f共同構(gòu)成的環(huán)狀基團(tuán)與苯環(huán)一起形成以下的結(jié)構(gòu)：

n選自1。

上述方案之間的基團(tuán)可以相互組合。

本發(fā)明的部分化合物

發(fā)明詳述

本發(fā)明所述的“鹵素原子”包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子等。

本發(fā)明所述的“c1-6烷基”表示直鏈或支鏈的含有1-6個(gè)碳原子的烷基，包括例如“c1-4烷基”、“c1-3烷基”等，具體實(shí)例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、2-甲基丙基、1-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基等。

本發(fā)明所述的“c2-8烯基”是指含有至少一個(gè)雙鍵的碳原子數(shù)為2-8的直鏈或支鏈或環(huán)狀的烯基，包括例如“c2-6烯基”、“c2-4烯基”、“c2-3烯基”、“c3-6環(huán)烯基”等，具體實(shí)例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1,1-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基等。

本發(fā)明所述的“c2-8炔基”是指含有三鍵的碳原子數(shù)為2-8的直鏈或支鏈的炔基，其中包括例如“c2-6炔基”、“c2-4炔基”、“c2-3炔基”等，具體實(shí)例包括但不限于：乙炔基、1-丙炔基、2-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1,1-二甲基-2-丙炔基、1-乙基-2-丙炔基、2-己炔基、3-己炔基、1-甲基-2-戊炔基等。

本發(fā)明所述的“c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二c1-6烷基氨基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基磺?；?、c1-6烷基氨基磺?；?、二c1-6烷基氨基磺?；?、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氧基”，是指以c1-6烷基-o-、c1-6烷基-nh-、(c1-6烷基)2-n-、c1-6烷基-s-、c1-6烷基-c(o)-、c1-6烷基-c(o)-o-、c1-6烷基-so2-、c1-6烷基-nh-so2-、(c1-6烷基)2-n-so2-、c1-6烷基-so2-nh-、c1-6烷基-so2-o-方式形成的基團(tuán)，其中“c1-6烷基”的定義如前文所述。

本發(fā)明所述的“c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、c1-4烷基硫基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基羰基氧基、c1-4烷基磺?；1-4烷基氨基磺?；?、二c1-4烷基氨基磺?；?，是指以c1-4烷基-o-、c1-4烷基-nh-、(c1-4烷基)2-n-、c1-4烷基-s-、c1-4烷基-c(o)-、c1-4烷基-c(o)-o-、c1-4烷基-so2-、c1-4烷基-nhso2-、(c1-4烷基)2-n-so2-方式形成的基團(tuán)，其中“c1-4烷基”的定義如前文所述。

本發(fā)明所述的“鹵代c1-6烷基、羥基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷氧基、羧基c1-6烷氧基、羧基氧基c1-6烷基、羧基氨基c1-6烷基、氨基羰基c1-6烷基”，是指一至多個(gè)，例如1～4個(gè)、1～3個(gè)、1～2個(gè)鹵素原子、羥基、氨基、羧基、羧基氧基、羧基氨基、氨基羰基、c1-6烷氧基分別取代c1-6烷基、c1-6烷氧基中的氫原子所形成的基團(tuán)。

本發(fā)明所述的“鹵代c1-4烷基、羥基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、c1-4烷氧基c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷氧基、羧基c1-4烷氧、羧基氧基c1-4烷基、羧基氨基c1-4烷基、氨基羰基c1-4烷基”，是指一至多個(gè)，例如1～4個(gè)、1～3個(gè)、1～2個(gè)鹵素原子、羥基、氨基、羧基、羧基氧基、羧基氨基、氨基羰基、c1-4烷氧基分別取代c1-4烷基、c1-4烷氧基中的氫原子所形成的基團(tuán)。

本發(fā)明所述“芳基”是指芳香族環(huán)，例如苯基、萘基、蒽基等。

本發(fā)明所述的“雜芳基”是指含有至少一個(gè)雜原子不飽和的環(huán)狀基團(tuán)，包括“5～8元雜芳基、5～7元雜芳基”、“5～6元雜芳基”，所述的雜原子有氮、氧和硫等，同時(shí)包括碳原子、氮原子和硫原子被氧代的情況。具體可以為“含1～3個(gè)o、s和/或n的5～8元雜芳基”、“含1～2個(gè)o、s和/或n的5～8元雜芳基”、“含2～3個(gè)o、s和/或n的5～8元雜芳基”、“含1～2個(gè)o、s和/或n的5～6元雜芳基”、“含2～3個(gè)o、s和/或n的5～6元雜芳基”。具體實(shí)例包括但不僅限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮、4-吡啶酮、嘧啶基、1,4-二氧雜環(huán)己二烯基、噠嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基等，優(yōu)選為“5～6元雜芳基”。

“5～8元芳基”是指是指環(huán)原子為5～8元碳原子的環(huán)狀芳香族化合物除去氫原子得到基團(tuán)，優(yōu)選為“5～6元芳基”。

本發(fā)明所述的“3-8元環(huán)烷基”，是指3-8個(gè)碳原子的烷烴部分去除一個(gè)氫原子衍生的部分飽和或飽和的單環(huán)環(huán)狀烷基，包括例如“3-6元環(huán)烷基”、“4-7元環(huán)烷基”、“4-6元環(huán)烷基”、“5-6元環(huán)烷基”等。具體可以為“3-8元飽和環(huán)烷基”、“3-8元部分飽和環(huán)烷基”、“5-6元飽和環(huán)烷基”、“5-6元部分飽和環(huán)烷基”。3-8元飽和環(huán)烷基包括但不限于：環(huán)丙烷基、環(huán)丁烷基、環(huán)戊烷基、環(huán)己烷基、環(huán)庚烷基、環(huán)辛烷基、甲基環(huán)丙烷基、二甲基環(huán)丙烷基、甲基環(huán)丁烷基、二甲基環(huán)丁烷基、甲基環(huán)戊烷基、二甲基環(huán)戊烷基、甲基環(huán)己烷基、二甲基環(huán)己烷基等；3-8元部分飽和環(huán)烷基包括但不限于：環(huán)戊烯基、1,3-環(huán)戊二烯基、環(huán)己烯基、1,4-環(huán)己二烯基、環(huán)庚烯基、1,4-環(huán)庚二烯基、環(huán)辛烯基。

本發(fā)明所述的“3-8元雜環(huán)基”是指含有3-8個(gè)環(huán)原子、且含有至少一個(gè)雜原子(例如1、2、3、4或5個(gè)雜原子)的飽和或部分飽和的單環(huán)雜環(huán)化合物除去一個(gè)氫原子得到的基團(tuán)。包括例如“3-7元雜環(huán)基”、“3-6元雜環(huán)基”、“3-5元雜環(huán)基”、“4-7元雜環(huán)基”、“4-6元雜環(huán)基”、“5-6元雜環(huán)基”、6-7元雜環(huán)基”、“6-8元雜環(huán)基”等。具體可以為：“含1-2個(gè)n、o和/或s原子的3-8元雜環(huán)基”、“含1-2個(gè)n、o和/或s原子的3-8元飽和雜環(huán)基”、“5-6元飽和雜環(huán)基”、“含1-2個(gè)n、o和/或s原子的5-6元雜環(huán)基”、“含1-2個(gè)n、o和/或s原子的5-6元飽和雜環(huán)基”。3-8元部分飽和單雜環(huán)基，是指含有雙鍵、雜原子的環(huán)狀基團(tuán)。3-8元飽和單雜環(huán)基，是指全部為飽和鍵的含有雜原子的環(huán)狀基團(tuán)。本發(fā)明所述的“雜原子”是指n、o、s、so和/或so2等，優(yōu)選n、o、s，更優(yōu)選n、o。

本發(fā)明所述“部分飽和”是指環(huán)部分包括至少一個(gè)雙鍵或三鍵。

本發(fā)明所述的“f選自不存在”，是指y直接與苯基連接。

本發(fā)明通式(ⅰ)(ⅱ)中的是指單鍵或雙鍵。

本發(fā)明還提供了式(i)化合物的制備方法，其包括但不限于下述工藝路線(其中，各縮寫(xiě)所代表的定義如下：dcm：二氯甲烷；dmso：二甲基亞砜；ea：乙酸乙酯；meoh：甲醇；nbs：n-溴代丁二酰亞胺；ncs：n-氯代丁二酰亞胺；pe：石油醚；thf：四氫呋喃；dibal-h：二異丁基氫化鋁；dmap：4-二甲氨基吡啶)

具體的示例性步驟如下：

1、中間體1的制備

將起始原料1溶于有機(jī)溶劑(例如乙醇)中，分批緩慢加入起始原料2，加畢，加入堿性溶液(例如naoh溶液)，加熱到60℃-90℃反應(yīng)5-48小時(shí)。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液減壓除去溶劑，固體用水洗滌，干燥，得中間體1。

2、中間體2的制備

將中間體1溶于有機(jī)溶劑(例如dmf)中，分批緩慢加入親電取代試劑(例如n-氯代丁二酰亞胺)，加完后，攪拌0.2-5小時(shí)，將反應(yīng)液倒入水中。用有機(jī)溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，有機(jī)相用水和飽和氯化鈉溶液洗滌，干燥，除去溶劑得中間體2。

3、中間體3的制備

將中間體2溶于有機(jī)溶劑(例如三乙胺)中，加入起始原料3，反應(yīng)5-20小時(shí)。反應(yīng)完畢，減壓脫除溶劑，柱色譜分離(例如pe:ea＝10:1)得中間體3。

4、中間體4的制備

將中間體3溶于有機(jī)溶劑(例如四氫呋喃)中，冰浴冷卻，加入二異丁基氫化鋁(dibal-h)的甲苯溶液，加畢升溫至20-30℃反應(yīng)5-20小時(shí)，反應(yīng)完畢，冰浴，加入飽和的鹵化劑(例如氯化銨溶液)淬滅反應(yīng)，用有機(jī)溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，有機(jī)相用飽和的鹵化劑(例如氯化銨溶液和氯化鈉溶液)洗滌，干燥，除去溶劑得中間體4。

5、中間體5的制備

將中間體4溶于有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷)中，加入三乙胺，然后加入鹵化物(例如三氯化磷，三溴化磷)，20-40℃反應(yīng)0.5-5小時(shí)。反應(yīng)完畢后除去溶劑，柱色譜分離(例如pe:ea＝10:1)得中間體5。

6、中間體6的制備

制備或購(gòu)買中間體6。

7、中間體7的制備

方案一：將中間體6和中間體5，堿性試劑(例如碳酸鉀，碳酸銫)溶于有機(jī)溶劑(例如乙腈)中，加熱至40-100℃反應(yīng)0.2-24小時(shí)，反應(yīng)完畢，加入有機(jī)溶劑(例如乙酸乙酯)，用水洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，經(jīng)柱色譜(例如pe:ea＝1-5:1)，得中間體7’，將中間體7’溶于有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷/三氟乙酸)，20-30℃反應(yīng)0.2-12小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入有機(jī)溶劑(例如乙酸乙酯)，用堿性溶液(例如飽和碳酸氫鈉溶液)和水洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，經(jīng)柱色譜(例如pe:ea＝1:1-1:5)，得中間體7。

方案二：將中間體6溶于有機(jī)溶劑(例如n,n-二甲基甲酰胺)中，加入中間體5，堿性試劑(例如碳酸鉀，碳酸銫)，升溫至100℃攪拌6-24小時(shí)，反應(yīng)完全，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(例如石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化，得中間體7。

8、式(i)化合物的制備

方案一：將中間體7，堿性試劑(例如氫氧化鋰)溶于有機(jī)溶劑(例如甲醇)中，加熱至20-80℃反應(yīng)0.2-24小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入酸性試劑(例如稀鹽酸)，用有機(jī)溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，經(jīng)柱色譜(例如dcm:meoh＝20:1)，得式(i)化合物。

方案二：將中間體7溶于有機(jī)溶劑(例如甲醇/水)中，加入堿性試劑(例如一水合氫氧化鋰)，20-40℃攪拌6-24小時(shí)，酸性溶液(例如稀鹽酸)調(diào)節(jié)ph＝2-7，析出固體，抽濾，干燥，得式(i)化合物。

r¹、r²、r³、r⁴、m、n、w、a、z、e、f、x、y如前文所述，a'代表氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。

本發(fā)明式(i)所示化合物的“藥學(xué)上可接受的鹽”是指式(i)化合物中存在的酸性官能團(tuán)與適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)或者有機(jī)陽(yáng)離子(堿)形成的鹽，包括與堿金屬或堿土金屬形成的鹽、銨鹽，以及與含氮有機(jī)堿形成的鹽；以及式(i)化合物中存在的堿性官能團(tuán)(例如-nh2等)與適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)或者有機(jī)陰離子(酸)形成的鹽，包括與無(wú)機(jī)酸、與有機(jī)羧酸。

本發(fā)明式(i)所示化合物的“酯”是指，當(dāng)式(i)化合物存在羧基時(shí)，可以與醇發(fā)生酯化反應(yīng)而形成的酯，當(dāng)式(i)化合物存在羥基時(shí)，可以與有機(jī)酸、無(wú)機(jī)酸、有機(jī)酸鹽等發(fā)生酯化反應(yīng)而形成的酯。酯在酸或者堿存在的條件下，可以發(fā)生水解反應(yīng)生成相應(yīng)的酸或醇。

本發(fā)明式(i)化合物的“立體異構(gòu)體”是指當(dāng)式(i)化合物存在不對(duì)稱碳原子時(shí)，會(huì)產(chǎn)生對(duì)映異構(gòu)體，當(dāng)化合物存在碳碳雙鍵或環(huán)狀結(jié)構(gòu)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生順?lè)串悩?gòu)體，當(dāng)化合物存在酮或肟時(shí)，會(huì)產(chǎn)生互變異構(gòu)體，所有式(i)化合物的對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、消旋異構(gòu)體、順?lè)串悩?gòu)體、互變異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、差向異構(gòu)體及其混合物，均包括在本發(fā)明范圍中。

本發(fā)明進(jìn)一步要求保護(hù)包括式(i)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯以及他們的立體異構(gòu)體與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，其可以制成藥學(xué)上可接受的任一劑型。如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑、注射液、注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液、栓劑、吸入劑或噴霧劑等。

本發(fā)明所述的“載體”包括但不限于填充劑、稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、表面活性劑、防腐劑、著色劑、矯味劑、芳香劑、泡騰劑、乳化劑、絮凝劑、反絮凝劑、抑菌劑、增溶劑。

本發(fā)明還提供了本發(fā)明式(i)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯以及他們的立體異構(gòu)體在制備用于治療和/或預(yù)防fxr介導(dǎo)的疾病及相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。所述的疾病包括：(1)慢性肝內(nèi)或一些形式的肝外膽汁郁積病癥，或慢性膽汁郁積病癥或急性肝內(nèi)膽汁郁積病癥導(dǎo)致的肝纖維化，肝硬化，肝的梗阻性或慢性炎性紊亂，脂肪肝及其并發(fā)癥，與酒精有關(guān)的脂肪肝及其并發(fā)癥，急性肝衰竭，膽石病，和/或炎性腸道疾病，原發(fā)性膽汁性肝硬化；由于強(qiáng)迫脂質(zhì)，特別是甘油三酯蓄積，然后促進(jìn)肝纖維化激活導(dǎo)致的慢性脂肪性和纖維性變性引起的病癥和疾病，如非酒精性脂肪肝病或非酒精性脂肪肝炎；脂質(zhì)或脂蛋白紊亂，如動(dòng)脈粥樣硬化、血脂異常、血栓。(2)i型或ii型糖尿病的臨床并發(fā)癥，包括糖尿病性腎病、糖尿病性神經(jīng)病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病、及其臨床顯性長(zhǎng)期糖尿病的其他觀察到的結(jié)果。(3)非惡性過(guò)度增殖性疾病或過(guò)度增殖性疾病，選自：肝細(xì)胞癌、結(jié)腸腺瘤和息肉病、結(jié)腸腺癌、乳腺癌、胰腺癌、食管癌和其他形式的胃腸道和肝臟腫瘤性疾病。

本發(fā)明化合物具有以下優(yōu)點(diǎn)：

(1)本發(fā)明式(i)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯、其溶劑化物以及它們的立體異構(gòu)體具有優(yōu)異的fxr受體激動(dòng)活性，能被安全的用于治療和/或預(yù)防非酒精性脂肪肝、原發(fā)性膽汁性肝硬化、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病并發(fā)癥及惡性腫瘤等相關(guān)疾病。

(2)本發(fā)明式(i)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯、其溶劑化物以及它們的立體異構(gòu)體顯示出良好的生物穩(wěn)定性，作用更持久，生物利用度高。

(3)本發(fā)明式(i)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其酯、其溶劑化物以及它們的立體異構(gòu)體顯示出較低的毒性，耐藥性好，安全性高。

以下通過(guò)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡述本發(fā)明化合物有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明化合物僅具有下列有益效果。

實(shí)驗(yàn)例1：本發(fā)明化合物體外生化分析

(1)測(cè)試物：本發(fā)明化合物，其化學(xué)名稱和制備方法見(jiàn)各個(gè)化合物的制備實(shí)施例。

(2)實(shí)驗(yàn)方法：

檢測(cè)化合物溶解在100％dmso中，稀釋1000倍后，取160nl，然后加入3.84μl檢測(cè)緩沖液；target/antibody混合物，稀釋2倍后，再加入8μl溶液；加入4.0μl稀釋4倍的共激活肽；在室溫孵育60分鐘；孵育后在熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)并分析數(shù)據(jù)。

(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論：

表1本發(fā)明化合物的生化分析

由表1可見(jiàn)，本發(fā)明化合物對(duì)fxr受體有一定的激動(dòng)作用，對(duì)于治療非酒精性脂肪肝、原發(fā)性膽汁性肝硬化、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病并發(fā)癥及惡性腫瘤等相關(guān)疾病具有重要的意義。

實(shí)驗(yàn)例2：本發(fā)明化合物對(duì)hepg2細(xì)胞和人源肝細(xì)胞bsepmrna相對(duì)表達(dá)量的影響

(1)測(cè)試物：本發(fā)明化合物，其化學(xué)名稱和制備方法見(jiàn)各個(gè)化合物的制備實(shí)施例。

對(duì)照藥：px-104，具體結(jié)構(gòu)見(jiàn)背景技術(shù)；px-102，為px-104的消旋體。

pbs：磷酸鹽緩沖液。

(2)實(shí)驗(yàn)方法：

①鋪細(xì)胞，加化合物和收集細(xì)胞

使用胰酶消化、收集細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞濃度；根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，重懸細(xì)胞至7.5e5cell/ml密度；6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔接種2ml細(xì)胞；將培養(yǎng)板至于培養(yǎng)箱中，于37℃，5％co2條件培養(yǎng)24小時(shí)。

使用dmso稀釋待測(cè)化合物至12150，4050，1350，450，150，50，16.67，5.56以及1.85μm；取上一步稀釋得到的儲(chǔ)液5μl分別加到5ml培養(yǎng)基中。得到的工作液濃度分別為12150，4050，1350，450，150，50，16.67，5.56，1.85nm。對(duì)照組培養(yǎng)基使用等體積的dmso代替儲(chǔ)液配制；移除細(xì)胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)基，加入工作液和對(duì)照培養(yǎng)基；將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，于37℃，5％co2條件培養(yǎng)24小時(shí)。

處理24小時(shí)后，移除細(xì)胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)基，用預(yù)冷(4℃)的pbs潤(rùn)洗細(xì)胞3次；每孔加入200μl胰酶(預(yù)熱至37℃)，輕輕晃動(dòng)使得胰酶均勻覆蓋板底。將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱溫育直至細(xì)胞脫離板底。加入1ml培養(yǎng)基終止消化。用移液器輕輕吹打幾次后，將孔中所有物質(zhì)吸入到1.5ml的rnase-free的離心管中，200×g離心5分鐘；移除上清，收集細(xì)胞樣品。

②從細(xì)胞樣品中提取和純化rna

細(xì)胞裂解：準(zhǔn)備新鮮的rna裂解液(1ml裂解液加10μl2-巰基乙醇)；向細(xì)胞樣品加入600μl裂解液；劇烈渦旋1-2分鐘，使細(xì)胞完全裂解；將細(xì)胞裂解液于12,000×g離心5分鐘；取上清轉(zhuǎn)移至rnase-free的1.5ml離心管中。

rna提取純化：添加等量的70％的乙醇到細(xì)胞裂解液中；劇烈震蕩離心管，充分混合，盡量分散加入乙醇后可能形成的微粒沉淀；將吸附柱置于收集管上，轉(zhuǎn)移混合物至吸附柱中。每次最多轉(zhuǎn)移700μl；室溫離心15秒。棄掉收集管中的溶液，將剩余的混合物全部轉(zhuǎn)移到吸附柱中。加700μl洗脫液i至吸附柱中；室溫離心15秒。加500μl洗脫液ii到吸附柱中；室溫12,000×g離心15秒。棄掉收集管中的溶液，加500μl洗脫液ii到吸附柱中；室溫離心1-2分鐘，將吸附柱放置于rna收集管上；加入50μlrnase-free水至吸附柱的中心位置，室溫孵育1分鐘；室溫離心2分鐘，將rna洗脫至收集管中。

測(cè)量提取的rna的濃度和質(zhì)量。rna存儲(chǔ)于-80℃。

③rna逆轉(zhuǎn)錄為cdna

將第二步驟中提取的rna在70℃孵育5分鐘使rna變性。處理后將樣品置于冰上；使用rnase-free水稀釋rna樣品至200ng/μl；按照下表配制10μl的逆轉(zhuǎn)錄溶液，并和10μl變性rna混合。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中rna的總量為2μg。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，所有試劑均放置于冰上。

逆轉(zhuǎn)錄在g-stormgs1thermalcyclerpcr熱循環(huán)儀上進(jìn)行。逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程設(shè)置如下：

25℃10分鐘→37℃120分鐘→85℃5分鐘→4℃∞。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(cdna)存儲(chǔ)于-20℃。

④樣品qpcr實(shí)驗(yàn)

根據(jù)qpcr擴(kuò)增效率，選擇合適的cdna濃度進(jìn)行樣品的qpcr實(shí)驗(yàn)。第三步驟逆轉(zhuǎn)錄得到的cdna樣品，取10μl加60μlrnase-free水稀釋7倍。

按照下表準(zhǔn)備80μl的反應(yīng)混合物，用移液器取20μl到96孔pcr反應(yīng)板中，3個(gè)重復(fù)(每個(gè)反應(yīng)孔加7μl100ng)cdna樣品。

qpcr在abi7500實(shí)時(shí)定量pcr儀上進(jìn)行，程序設(shè)置如下：

50℃2分鐘→95℃10分鐘→95℃15秒→60℃60秒，其中95℃15秒與60℃60秒之間設(shè)置40個(gè)循環(huán)。

(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論：

表2.本發(fā)明化合物處理的hepg2細(xì)胞中bsepmrna相對(duì)表達(dá)量的檢測(cè)

表3.本發(fā)明化合物處理的hepg2細(xì)胞中bsepmrna相對(duì)表達(dá)量的檢測(cè)

備注：mrna的相對(duì)表達(dá)量％＝100*[mrna(測(cè)試物)/mrna(px-102或px-104)]

由表2、表3可知，本發(fā)明化合物對(duì)hepg2細(xì)胞中bsepmrna有較好的表達(dá)作用，對(duì)于治療非酒精性脂肪肝具有重要的意義。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

制備方案

制備例1：(e)-2,6-二氯苯甲醛肟的制備

將2,6-二氯苯甲醛(25g,0.14mol)溶于乙醇(200ml)中，分批緩慢加入鹽酸羥胺(11g,0.16mol),加畢，加入naoh溶液(6.4g，0.16mol，溶于100ml水)，加熱到90℃反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液減壓除去溶劑，固體用水(200ml)洗滌，干燥，得標(biāo)題化合物25.9g，產(chǎn)率97％。

制備例2：(z)-2,6-二氯-n-羥基亞氨芐基氯的制備

將(e)-2,6-二氯苯甲醛肟(25.9g,0.136mol)溶入到dmf(300ml)，分批緩慢加入n-氯代丁二酰亞胺(18.2g,0.136mol)，加完后，25℃攪拌一小時(shí)，將反應(yīng)液倒入水(500ml)中。用乙酸乙酯(500ml)萃取，有機(jī)相用水(200ml)和飽和氯化鈉溶液(200ml)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑得標(biāo)題化合物28g，粗產(chǎn)物不提純，進(jìn)行下一步。

制備例3：5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-甲酸乙酯的制備

將(z)-2,6-二氯-n-羥基亞氨芐基氯(28g,0.125mol)溶于三乙胺中(100ml)，加入3-環(huán)丙基-3-氧代丙酸乙酯(19.5g,0.125mol)，25℃反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，減壓脫除溶劑，柱色譜分離(pe:ea＝10:1)得標(biāo)題化合物24.4g，兩步合計(jì)產(chǎn)率55.1％。

制備例4：(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇的制備

將5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-甲酸乙酯(20g,61.3mmol)溶于四氫呋喃(300ml)中，冰浴冷卻，加入二異丁基氫化鋁(dibal-h)的甲苯溶液(1.5mol/l,123ml,0.184mol)，加畢升溫至25℃反應(yīng)12小時(shí)，反應(yīng)完畢，冰浴，加入飽和氯化銨溶液(200ml)淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯(500ml)萃取，有機(jī)相用飽和氯化銨溶液(200ml)和飽和氯化鈉溶液(200ml)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑得標(biāo)題化合物16g，產(chǎn)率92.0％。

制備例5-1：4-(溴甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑的制備

將(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(5.0g,17.6mmol)加入到二氯甲烷(30ml)中，加入三乙胺(1.78g,17.6mmol)，然后加入三溴化磷(4.77g,17.6mmol)，30℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢后除去溶劑，柱色譜分離(pe:ea＝10:1)得產(chǎn)物4.3g，產(chǎn)率70.4％。

制備例5-2：4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑的制備

將(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(5.0g,17.6mmol)加入到二氯甲烷(30ml)中，加入三乙胺(1.78g,17.6mmol)，然后加入三氯化磷(2.42g,17.6mmol)，30℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢后除去溶劑，柱色譜分離(pe:ea＝10:1)得產(chǎn)物3.60g，產(chǎn)率67.7％。

實(shí)施例13-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-6-羧酸的制備(化合物1)

(1)1h-吲哚-6-羧酸甲酯的制備

將1h-吲哚-6-羧酸(1.0g,6.2mmol)、碳酸鉀(856mg,6.2mmol)加入到dmf(10ml)中，加入碘甲烷(1.14g,8.0mmol)，避光，25℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入乙酸乙酯(100ml)，依次用水(30ml)和飽和氯化鈉溶液(30ml)洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，得到標(biāo)題化合物1.03g，產(chǎn)率94.9％。

(2)3-溴-1h-吲哚-6-羧酸甲酯的制備

將1h-吲哚-6-羧酸甲酯(1.03g,5.9mmol)加入dmf(20ml)中，-78℃下加入n-溴代丁二酰亞胺(1.26g,7.1mmol)的dmf(10ml)溶液，緩慢升至30℃反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入乙酸乙酯(150ml)，依次用飽和氯化鈉溶液(50ml)，水(50ml)洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，柱色譜(pe:ea＝5:1)，得標(biāo)題化合物1.2g，產(chǎn)率80.0％。

(3)1-叔丁基-6-甲基-3-溴-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯的制備

將3-溴-1h-吲哚-6-羧酸甲酯(1.2g,4.72mmol)，二碳酸二叔丁酯(1.31g,6.0mmol)，4-二甲氨基吡啶(576mg,4.72mmol)加入四氫呋喃(30ml)中，30℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入乙酸乙酯(150ml)，依次用1mol/l稀鹽酸(10ml)和水(50ml)洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑得標(biāo)題化合物1.6g，產(chǎn)率95.8％。

(4)4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)苯酚的制備

將4-溴苯酚(1.73g,10mmol)、聯(lián)硼酸頻那醇酯(2.54g,10mmol)、碳酸銫(3.26g,10mmol)、pd(dppf)cl2(173mg)加入到1,4-二氧六環(huán)(30ml)中，90℃反應(yīng)6小時(shí)，反應(yīng)完畢，加入乙酸乙酯(120ml)，用飽和氯化鈉溶液(50ml)洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，柱色譜分離(pe:ea＝10:1)，得標(biāo)題化合物1.50g，產(chǎn)率68.2％。

(5)1-叔丁基6-甲基3-(4-羥基苯基)-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯的制備

將1-叔丁基6-甲基3-溴-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯(500mg,1.41mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)苯酚(339mg,1.54mmol)、碳酸銫(652mg,2.0mmol)、pd(dppf)cl2(50mg)加入到1,4-二氧六環(huán)(20ml)中，90℃反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)完畢，加入乙酸乙酯(120ml)，用飽和氯化鈉溶液(50ml)洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，柱色譜分離(pe:ea＝10:1)，得標(biāo)題化合物221mg，產(chǎn)率42.7％。

(6)1-叔丁基6-甲基3-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯的制備

將1-叔丁基6-甲基3-(4-羥基苯基)-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯(221mg,0.60mmol),4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(218mg,0.72mmol)、碳酸鉀(124mg，0.90mmol)加入乙腈(5ml)中，然后加熱至60℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入乙酸乙酯(50ml)，用水(25ml)洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，柱色譜(pe:ea＝5:1)，得標(biāo)題化合物217mg，產(chǎn)率57.1％。

(7)3-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-6-羧酸甲酯的制備

將1-叔丁基6-甲基3-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯(217mg,0.34mmol)溶于二氯甲烷(1ml)和三氟乙酸(1ml)的混合溶液中，25℃反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入乙酸乙酯(50ml)，用飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)和水(10ml)洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，柱色譜(pe:ea＝1:1)，得標(biāo)題化合物115mg，產(chǎn)率63.4％。

(8)3-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-6-羧酸的制備

將3-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-6-羧酸甲酯(115mg,0.22mmol)，氫氧化鋰(53mg,2.2mmol)加入甲醇(3ml)中，然后加熱至60℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入0.5mol/l的稀鹽酸(10ml)，用乙酸乙酯(50ml)萃取，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，柱色譜(dcm:meoh＝20:1)，得產(chǎn)物25mg，產(chǎn)率21.9％。分子式：c28h20cl2n2o4分子量：519.4lc-ms(m/z):519.1(m+h)⁺

¹h-nmr(400mhz,meod)δ:8.10(s,1h),7.68(d,3h,j＝8.8hz),7.50-7.54(m,3h),7.44(s,1h),7.45-7.47(m,1h),6.88(d,2h,j＝8.4hz),6.75(s,1h),4.94(s,2h),2.33-2.36(m,1h),1.20-1.22(m,4h).

實(shí)施例21-(4–((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-5-甲酸的制備(化合物2)

(1)1-(4-羥基苯基)-1h-吲哚-5-羧酸甲酯的制備

將1h-吲哚-5-羧酸甲酯(700mg,4.0mmol)、4-碘苯酚(1.76g,8.0mmol)、醋酸銅(100mg)加入n,n-二甲基乙酰胺(10ml)中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，然后加熱至160℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入乙酸乙酯(50ml)，依次用水(15ml)和飽和氯化鈉溶液(10ml)洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，柱色譜(pe:ea＝5:1)，得產(chǎn)物230mg，產(chǎn)率21.5％。

(2)1-(4–((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-5-羧酸甲酯的制備

參考實(shí)施例1步驟(6)中的制備方法，加入1-(4-羥基苯基)-1h-吲哚-5-羧酸甲酯(230mg,0.86mmol)、4-(溴甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(298mg,0.86mmol)，得產(chǎn)物215mg，產(chǎn)率46.8％。

(3)1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-5-甲酸的制備

參考實(shí)施例1步驟(8)的制備方法，加入1-(4–((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-5-羧酸甲酯(215mg,0.40mmol)，得產(chǎn)物100mg，產(chǎn)率47.8％。

分子式：c28h20cl2n2o4分子量：519.4lc-ms(m/z):519.1(m+h)⁺

¹h-nmr(400mhz,meod)δ:8.48(s,1h),7.84(dd,1h,j1＝1.2hz,j2＝8.4hz),7.52-7.54(m,2h),7.28-7.49(m,5h),6.98(d,2h,j＝8.8hz),6.74(d,1h,j＝1.2hz),4.97(s,2h),2.38-2.40(m,1h),1.18-1.25(m,4h).

實(shí)施例31-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸的制備(化合物3)

(1)4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑的制備

將(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(1g,3.52mmol)溶于氯化亞砜(25ml)中，油浴加熱至80℃，反應(yīng)16小時(shí)，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)檢測(cè)反應(yīng)完全，真空濃縮，得標(biāo)題化合物(1.02g,產(chǎn)率96％)。

(2)4-((4-甲氧基苯基)氨基)-3-硝基苯甲酸乙酯的制備

將4-氟-3-硝基苯甲酸乙酯(2.13g,10mmol)溶于n-甲基吡咯烷酮(25ml)，加入氫化鈉(質(zhì)量分?jǐn)?shù)60％,0.6g,15mmol)和茴香胺(1.23g,10mmol)，油浴加熱至100℃，反應(yīng)16小時(shí)，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)檢測(cè)反應(yīng)完全，降至室溫，加水(200ml)，乙酸乙酯(50ml×2)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化，得標(biāo)題化合物(2.69g,產(chǎn)率85％)。

(3)3-氨基-4-((4-甲氧基苯基)氨基)苯甲酸乙酯的制備

將4-((4-甲氧基苯基)氨基)-3-硝基苯甲酸乙酯(2.69g,8.5mmol)溶于甲醇(100ml)中，加入鈀炭(269mg)，通氫氣反應(yīng)16小時(shí)，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)檢測(cè)反應(yīng)完全，濾去鈀炭，真空濃縮得標(biāo)題化合物(2.36g,產(chǎn)率97％)。

(4)1-(4-甲氧基苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯的制備

將3-氨基-4-((4-甲氧基苯基)氨基)苯甲酸乙酯(2.36g,8.24mmol)溶于原甲酸三乙酯(50ml)中，油浴加熱至100℃反應(yīng)16小時(shí)，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)檢測(cè)反應(yīng)完全，加水(100ml)，乙酸乙酯萃取(100ml×2)，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化，得標(biāo)題化合物(1.69g,產(chǎn)率69％)。

(5)1-(4-羥基苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯的制備

將1-(4-甲氧基苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯(1g,3.37mmol)，溶于二氯甲烷(10ml)中，冰浴下加入三溴化硼(1mol\l二氯甲烷溶液,10.11ml,10.11mmol)，反應(yīng)16小時(shí)，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)檢測(cè)反應(yīng)完全，加水(20ml)，乙酸乙酯萃取(50ml×2)，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)純化，得產(chǎn)物(381mg,產(chǎn)率40％)。

(6)1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯的制備

將1-(4-羥基苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯(500mg,1.77mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中，加入4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(535.6mg,1.77mmol)，碳酸銫(1.73g,5.31mmol)，升溫至100℃攪拌16小時(shí)，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)檢測(cè)反應(yīng)完全，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化，得產(chǎn)物(651mg,產(chǎn)率67％)。

(7)1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸的制備

將1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯(300mg,0.547mmol)溶于甲醇/水(10ml/10ml)中，加入一水合氫氧化鋰(68.9mg,1.641mmol)，25℃攪拌16小時(shí)，稀鹽酸調(diào)節(jié)ph＝2，析出白色固體，抽濾，固體真空干燥，得標(biāo)題化合物(169mg,產(chǎn)率59.3％)。

分子式:c27h19cl2n3o4分子量:520.4lc-ms(m/z)：520.1(m+h)⁺

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.92(brs,1h),8.63(s,1h),8.30(s,1h),7.93-7.91(m,1h),7.67-7.60(m,2h),7.57-7.52(m,4h),7.04(d,j＝8.8hz,2h),4.97(s,2h),1.22-1.15(m,5h).

實(shí)施例41-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酸的制備(化合物4)

(1)4-(溴甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑的制備

將(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(1.65g,5.8mmol)溶在二氯甲烷(20ml)中，冰浴下滴加三溴化磷(3.14g,11.6mmol)，滴加完畢，回到25℃，繼續(xù)反應(yīng)4小時(shí)。體系真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝40:1)純化，得產(chǎn)物(1.8g，產(chǎn)率89.4％)。

(2)3-氯-2-硝基苯甲酸乙酯的制備

將3-氯-2-硝基苯甲酸(6.8g,33.7mmol)加入到乙醇(80ml)中，然后加入濃硫酸(2ml)，在85℃下反應(yīng)24小時(shí)。冷卻至室溫，真空濃縮，加入水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)，分液，所得有機(jī)相真空濃縮，得標(biāo)題化合物(6.0g,產(chǎn)率77.5％)。

(3)3-((4-甲氧基苯基)氨基)-2-硝基苯甲酸乙酯的制備

將3-氯-2-硝基苯甲酸乙酯(3.22g,14.0mmol)，對(duì)甲氧基苯胺(5.2g,42.3mmol)和碳酸銫(13.7g,42.0mmol)加入到1,4-二氧六環(huán)(100ml)中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入三(二亞芐基丙酮)二鈀(1.3g,1.42mmol)和4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(1.61g,2.8mmol)，110℃下反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝50:1)純化，得標(biāo)題化合物(1.0g,產(chǎn)率22.6％)。

(4)2-氨基-3-((4-甲氧基苯基)氨基)苯甲酸乙酯的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(3)。

(5)1-(4-甲氧基苯基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酸乙酯的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(4)。

(6)1-(4-羥基苯基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酸乙酯的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(5)。

(7)1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酸乙酯的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(6)。

(8)1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酸的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(7)。

分子式:c27h19cl2n3o4分子量:520.4lc-ms(m/z)：520.1(m+h)⁺

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.66(s,1h),7.90-7.80(m,1h),7.75-7.70(m,1h),7.65-7.60(m,2h),7.58-7.50(m,3h),7.45-7.40(m,1h),7.08-7.01(m,2h),4.97(s,2h),2.04-1.96(m,1h),1.20-1.10(m,4h).

實(shí)施例51-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-6-甲酸的制備(化合物5)

(1)3-氟-4-硝基苯甲酸乙酯的制備

稱取3-氟-4-硝基苯甲酸(5.0g,27mmol)溶于乙醇(100ml)，加入濃硫酸(1ml)，加熱至80℃回流反應(yīng)16小時(shí)，減壓濃縮，加入水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮，得標(biāo)題化合物(5.1g，產(chǎn)率88.5％)。

(2)3-((4-甲氧基苯基)氨基)-4-硝基苯甲酸乙酯的制備

將3-氟-4-硝基苯甲酸乙酯(2.13g,10mmol)、碳酸銫(6.52g,20mmol)和對(duì)甲氧基苯胺(1.23g,10mmol)加入到乙腈(60ml)中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至80℃反應(yīng)24小時(shí)，反應(yīng)液濃縮，加入水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)純化，得產(chǎn)物(0.81g,產(chǎn)率25.6％)。

(3)4-氨基-3-((4-甲氧基苯基)氨基)苯甲酸乙酯的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(3)。

(4)1-(4-甲氧基苯基)-1h-苯并[d]咪唑-6-甲酸乙酯的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(4)。

(5)1-(4-羥基苯基)-1h-苯并[d]咪唑-6-甲酸乙酯的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(5)。

(6)1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-6-甲酸乙酯的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(6)。

(7)1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-6-甲酸的制備

制備過(guò)程，參照實(shí)施例3步驟(7)。

分子式:c27h19cl2n3o4分子量:520.36lc-ms(m/z)：520.1(m+h)⁺

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.60(s,1h),7.99(s,1h),7.87(d,j＝1.2hz,1h),7.82-7.80(m,1h),7.64-7.62(m,2h),7.56-7.51(m,3h),7.05(d,j＝8.8hz,2h),4.98(s,2h),1.22-1.14(m,6h).

實(shí)施例63-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-6-羧酸的制備(化合物6)

(1)3-碘-1h-吲哚-6-羧酸甲酯的制備

將1h-吲哚-6-羧酸甲酯(5.26g,30.0mmol)加入n,n-二甲基甲酰胺(40ml)中，加入氫氧化鉀(3.36g,60.0mmol)。然后滴加碘單質(zhì)(8.0g,31.5mmol)的n,n-二甲基甲酰胺溶液(10ml)，滴加完畢，25℃下反應(yīng)2小時(shí)。體系倒入冰水中，析出固體，減壓抽濾，得標(biāo)題化合物8.2g，產(chǎn)率90.8％。

(1)3-(2-氯-4-甲氧基苯基)-1h-吲哚-6-羧酸甲酯的制備

將3-碘-1h-吲哚-6-羧酸甲酯(3.01g,10mmol)、(2-氯-4-甲氧基苯基)硼酸(2.05g,11mmol)、碳酸鈉(2.12g,20mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(408mg,0.56mmol)加入到1,4-二氧六環(huán)(40ml)和水(4ml)中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下100℃反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入乙酸乙酯(120ml)，用飽和氯化鈉溶液(50ml)洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化，得標(biāo)題化合物1.75g，產(chǎn)率55.4％。

(3)3-(2-氯-4-羥基苯基)-1h-吲哚-6-羧酸甲酯的制備

將3-(2-氯-4-甲氧基苯基)-1h-吲哚-6-羧酸甲酯(1.75g,5.54mmol)加入到無(wú)水二氯甲烷(20ml)中，冰浴下滴加三溴化硼的二氯甲烷溶液(1mol/l,27.7ml,27.7mmol)，滴加完畢，升到30℃反應(yīng)12小時(shí)。體系加入甲醇(10ml)淬滅，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)純化，得標(biāo)題化合物1.2g，產(chǎn)率71.7％。

(4)3-(4-((叔丁基二甲硅基)氧基)-2-氯苯基)-1h-吲哚-6-羧酸甲酯的制備

將3-(2-氯-4-羥基苯基)-1h-吲哚-6-羧酸甲酯(350mg,1.16mmol)加入到二氯甲烷(20ml)中，加入三乙胺(293mg,2.9mmol)和4-二甲氨基吡啶(14mg,0.115mmol)，分批加入叔丁基二甲基氯硅烷(263mg,1.74mmol)，30℃下反應(yīng)2小時(shí)。體系加入水(20ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮得標(biāo)題化合物，不經(jīng)提純直接用于下一步。

(5)1-叔丁基6-甲基3-(4-((叔丁基二甲硅基)氧基)-2-氯苯基)-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯的制備

將3-(4-((叔丁基二甲硅基)氧基)-2-氯苯基)-1h-吲哚-6-羧酸甲酯(粗品)溶于二氯甲烷(20ml)中，加入三乙胺(293mg,2.9mmol)和4-二甲氨基吡啶(14mg,0.115mmol)，分批加入二碳酸二叔丁酯(379mg,1.74mmol)，30℃下反應(yīng)2小時(shí)。體系加入水(20ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮得標(biāo)題化合物，不經(jīng)提純直接用于下一步。

(6)1-叔丁基6-甲基3-(2-氯-4-羥基苯基)-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯的制備

將1-叔丁基6-甲基3-(4-((叔丁基二甲硅基)氧基)-2-氯苯基)-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯溶于四氫呋喃(10ml)中，再加入四丁基氟化銨三水合物(726mg,2.3mmol)，30℃下反應(yīng)2小時(shí)。體系真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)純化，得標(biāo)題化合物340mg，三步產(chǎn)率72.9％。

(7)1-叔丁基6-甲基3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯的制備

將1-叔丁基6-甲基3-(2-氯-4-羥基苯基)-1h-吲哚-1，6-二羧酸酯(340mg，0.85mmol)、4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(326mg,0.94mmol)和碳酸銫(554mg,1.70mmol)加入n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，參考實(shí)施例1步驟(6)的制備方法得標(biāo)題化合物400mg，產(chǎn)率70.4％。

(8)3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-6-甲酸甲酯的制備

參考實(shí)施例1步驟(7)中的制備方法，加入1-叔丁基6-甲基3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-1,6-二羧酸酯(400mg,0.60mmol)，得標(biāo)題化合物300mg，產(chǎn)率88.0％。

(9)3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-6-羧酸的制備

將3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-1h-吲哚-6-甲酸甲酯(150mg,0.26mmol)和氫氧化鋰一水合物(55mg,1.3mmol)的水溶液(1ml)加入甲醇(3ml)中，然后加熱至30℃反應(yīng)12小時(shí)。參考實(shí)施例1步驟(8)中的制備方法得標(biāo)題化合物90mg，產(chǎn)率62.5％。

分子式:c28h19cl3n2o4分子量:553.8lc-ms(m/z)：553.1(m+h)⁺

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.60(brs,1h),11.70(d,j＝2.0hz,1h),8.07(s,1h),7.69-7.68(m,1h),7.66-7.61(m,3h),7.58-7.54(m,1h),7.45-7.35(m,2h),7.05(d,j＝2.8hz,1h),6.87-6.84(m,1h),4.95(s,2h),1.25-1.10(m,5h)。