本發(fā)明涉及一種酶固定化載體及其制備方法,更具體地說,本發(fā)明涉及一種氨基?;腹潭ɑd體及其制備方法,屬于酶固定化技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù):
液態(tài)酶固定化后具有諸多優(yōu)點:可增加酶的穩(wěn)定性從而延長酶的使用壽命;在酶催化反應結(jié)束后可方便將酶與反應產(chǎn)物及反應液通過過濾手段得到分離,既降低了操作成本,又避免了酶對催化產(chǎn)物的污染;可實現(xiàn)酶催化的柱操作,提高酶催化效率等。
目前,生產(chǎn)氨基酸的主要方法是微生物發(fā)酵法和化學合成法。隨著醫(yī)藥工業(yè)、食品工業(yè)以及多肽合成科學的發(fā)展,對光學純氨基酸的需求急劇增加。而化學合成法生產(chǎn)的氨基酸一般是外消旋的混合物,需要進行光學拆分。溶液酶拆分混旋氨基酸,產(chǎn)品分離純化困難,不利于工業(yè)化生產(chǎn)。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中產(chǎn)品分離純化困難,不利于工業(yè)化生產(chǎn)的問題,提供一種氨基酰化酶固定化載體,該載體可應用于生產(chǎn)氨基酸的氨基酰化酶,增加酶的穩(wěn)定性從而延長酶的使用壽命,提高酶活性,且利于產(chǎn)品分離純化。
為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的,其具體的技術(shù)方案如下:
一種氨基?;腹潭ɑd體,其特征在于:包括載體基體樹脂和二乙胺,所述的載體基體樹脂包括以下按照重量份數(shù)計的原料:
油相:
甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯 30-40份
二乙烯基苯 40-50份
丙烯腈 5-10份
甲苯 50-60份
2-乙基己醇 50-60份
過氧化二苯甲酰 1-3份;
水相:
聚乙烯醇 5-10份
明膠 5-10份
NaCl 100-200份
CaCO3 15份
去離子水 1000份。
本發(fā)明優(yōu)選的,所述聚乙烯醇為PVA1788。
一種氨基?;腹潭ɑd體的制備方法,其特征在于:包括以下工藝步驟:
A、按照配方要求準確稱取油相原料中的甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯、二乙烯基苯、丙烯腈、甲苯、2-乙基己醇和過氧化二苯甲酰于容器中充分混合均勻,備用;
B、按照水相配方要求,將聚乙烯醇、明膠、NaCl、CaCO3和去離子水加入一具攪拌、冷凝管及加料口三口瓶內(nèi);將體系溫度升至40-50℃,開動攪拌直至水相各組分充分混合溶解;
C、將步驟A配制好的油相混合物倒入步驟B制備好的水相三口瓶內(nèi);保持反應器中攪拌的速度為100-200轉(zhuǎn)/分鐘,使油相形成均勻的珠體分散在預先配制好的水相中;升溫至72-76℃,直至珠體定型;
D、將聚合反應體系溫度升到80℃,保溫2-3個小時;將聚合反應體系升溫至85℃,保溫2-3個小時;將聚合反應體系升溫至90℃,保溫2-3個小時;將反應體系降溫至30-50℃,濾出樹脂珠體;
E、采用乙醇對樹脂進行淋洗,除去樹脂的雜質(zhì)風干即得到氨基?;腹潭ɑd體。
本發(fā)明帶來的有益技術(shù)效果:
本發(fā)明采用環(huán)境友好技術(shù)懸浮聚合工藝,以甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯為主要原料,以二乙烯基苯為交聯(lián)劑,通過添加第三單體丙烯腈以增加載體的機械強度,在致孔劑存在下制備了大孔酶載體基體樹脂。該基體樹脂再與二乙胺反應,制備出氨基?;腹潭ɑd體。用該載體進行氨基?;傅墓潭ɑ霉潭ɑ傅幕钚栽?000-1200u/g之間。
具體實施方式
實施例1
一種氨基?;腹潭ɑd體,包括載體基體樹脂和二乙胺,所述的載體基體樹脂包括以下按照重量份數(shù)計的原料:
油相:
甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯 30份
二乙烯基苯 40份
丙烯腈 5份
甲苯 50份
2-乙基己醇 50份
過氧化二苯甲酰 1份;
水相:
聚乙烯醇 5份
明膠 5份
NaCl 100份
CaCO3 15份
去離子水 1000份。
實施例2
一種氨基酰化酶固定化載體,包括載體基體樹脂和二乙胺,所述的載體基體樹脂包括以下按照重量份數(shù)計的原料:
油相:
甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯 40份
二乙烯基苯 50份
丙烯腈 10份
甲苯 60份
2-乙基己醇 60份
過氧化二苯甲酰 3份;
水相:
聚乙烯醇 10份
明膠 10份
NaCl 200份
CaCO3 15份
去離子水 1000份。
實施例3
一種氨基酰化酶固定化載體,包括載體基體樹脂和二乙胺,所述的載體基體樹脂包括以下按照重量份數(shù)計的原料:
油相:
甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯 35份
二乙烯基苯 45份
丙烯腈 7.5份
甲苯 55份
2-乙基己醇 55份
過氧化二苯甲酰 1-3份;
水相:
聚乙烯醇 7.5份
明膠 7.5份
NaCl 150份
CaCO3 15份
去離子水 1000份。
實施例4
一種氨基?;腹潭ɑd體,包括載體基體樹脂和二乙胺,所述的載體基體樹脂包括以下按照重量份數(shù)計的原料:
油相:
甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯 32份
二乙烯基苯 46份
丙烯腈 9份
甲苯 59份
2-乙基己醇 53份
過氧化二苯甲酰 1.5份;
水相:
聚乙烯醇 6份
明膠 8份
NaCl 105份
CaCO3 15份
去離子水 1000份。
實施例5
A、按照配方要求準確稱取油相原料中的甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯、二乙烯基苯、丙烯腈、甲苯、2-乙基己醇和過氧化二苯甲酰于容器中充分混合均勻,備用;
B、按照水相配方要求,將聚乙烯醇、明膠、NaCl、CaCO3和去離子水加入一具攪拌、冷凝管及加料口三口瓶內(nèi);將體系溫度升至40℃,開動攪拌直至水相各組分充分混合溶解;
C、將步驟A配制好的油相混合物倒入步驟B制備好的水相三口瓶內(nèi);保持反應器中攪拌的速度為100轉(zhuǎn)/分鐘,使油相形成均勻的珠體分散在預先配制好的水相中;升溫至72℃,直至珠體定型;
D、將聚合反應體系溫度升到80℃,保溫2個小時;將聚合反應體系升溫至85℃,保溫2個小時;將聚合反應體系升溫至90℃,保溫2個小時;將反應體系降溫至30℃,濾出樹脂珠體;
E、采用乙醇對樹脂進行淋洗,除去樹脂的雜質(zhì)風干即得到氨基酰化酶固定化載體。
實施例6
A、按照配方要求準確稱取油相原料中的甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯、二乙烯基苯、丙烯腈、甲苯、2-乙基己醇和過氧化二苯甲酰于容器中充分混合均勻,備用;
B、按照水相配方要求,將聚乙烯醇、明膠、NaCl、CaCO3和去離子水加入一具攪拌、冷凝管及加料口三口瓶內(nèi);將體系溫度升至50℃,開動攪拌直至水相各組分充分混合溶解;
C、將步驟A配制好的油相混合物倒入步驟B制備好的水相三口瓶內(nèi);保持反應器中攪拌的速度為200轉(zhuǎn)/分鐘,使油相形成均勻的珠體分散在預先配制好的水相中;升溫至76℃,直至珠體定型;
D、將聚合反應體系溫度升到80℃,保溫3個小時;將聚合反應體系升溫至85℃,保溫3個小時;將聚合反應體系升溫至90℃,保溫3個小時;將反應體系降溫至50℃,濾出樹脂珠體;
E、采用乙醇對樹脂進行淋洗,除去樹脂的雜質(zhì)風干即得到氨基?;腹潭ɑd體。
實施例7
A、按照配方要求準確稱取油相原料中的甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯、二乙烯基苯、丙烯腈、甲苯、2-乙基己醇和過氧化二苯甲酰于容器中充分混合均勻,備用;
B、按照水相配方要求,將聚乙烯醇、明膠、NaCl、CaCO3和去離子水加入一具攪拌、冷凝管及加料口三口瓶內(nèi);將體系溫度升至45℃,開動攪拌直至水相各組分充分混合溶解;
C、將步驟A配制好的油相混合物倒入步驟B制備好的水相三口瓶內(nèi);保持反應器中攪拌的速度為150轉(zhuǎn)/分鐘,使油相形成均勻的珠體分散在預先配制好的水相中;升溫至74℃,直至珠體定型;
D、將聚合反應體系溫度升到80℃,保溫2.5個小時;將聚合反應體系升溫至85℃,保溫2.5個小時;將聚合反應體系升溫至90℃,保溫2.5個小時;將反應體系降溫至40℃,濾出樹脂珠體;
E、采用乙醇對樹脂進行淋洗,除去樹脂的雜質(zhì)風干即得到氨基?;腹潭ɑd體。
實施例8
A、按照配方要求準確稱取油相原料中的甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯、二乙烯基苯、丙烯腈、甲苯、2-乙基己醇和過氧化二苯甲酰于容器中充分混合均勻,備用;
B、按照水相配方要求,將聚乙烯醇、明膠、NaCl、CaCO3和去離子水加入一具攪拌、冷凝管及加料口三口瓶內(nèi);將體系溫度升至41℃,開動攪拌直至水相各組分充分混合溶解;
C、將步驟A配制好的油相混合物倒入步驟B制備好的水相三口瓶內(nèi);保持反應器中攪拌的速度為120轉(zhuǎn)/分鐘,使油相形成均勻的珠體分散在預先配制好的水相中;升溫至73℃,直至珠體定型;
D、將聚合反應體系溫度升到80℃,保溫2.2個小時;將聚合反應體系升溫至85℃,保溫2.8個小時;將聚合反應體系升溫至90℃,保溫2.7個小時;將反應體系降溫至36℃,濾出樹脂珠體;
E、采用乙醇對樹脂進行淋洗,除去樹脂的雜質(zhì)風干即得到氨基?;腹潭ɑd體。