1.一種應用數(shù)字PCR檢測尿液中人乳頭瘤病毒16/18型基因的方法，其特征在于：具體步驟為：
步驟一、尿液中 DNA的抽提：
a、收集30ml尿液樣本，在4℃的條件下， 5000rpm 離心 10min，收集底部的沉淀；
b、向步驟a收集的沉淀內加入1.0ml TE 緩沖液 ，混勻，8000rpm 離心5min，收集底部的沉淀；
c、向步驟b收集的沉淀內加入1.0ml TE 緩沖液 ，混勻，8000rpm 離心5min，收集底部的沉淀；
d、向步驟c收集的沉淀內加入450ul 裂解液和10ul 蛋白酶K， 在55℃的條件下，水浴1小時，沉淀溶解，得到混合液；
e、將混合液取出，冷卻至室溫后加入等體積的飽和酚，混勻，5000 rpm離心10min，棄上清；
f、加入432μL的氯仿和18μL的異戊醇，混勻，5000 rpm 離心10min，棄上清；
g、加入占步驟f制得的混合液1/10體積的3mol/L乙酸鈉溶液，再加入2.5倍步驟f制得的混合液體積的無水乙醇,混勻，在-20℃ 的條件下放置1h后，10000rpm離心15min，棄上清；
h、采用0.6mL的70%乙醇溶液洗滌2次，晾干后，加入50μL TE緩沖液，完成了對尿液中 DNA的抽提，得到了DNA模板；
i、將所有提取的DNA模板均用看家基因β-actin進行PCR檢測，以確認DNA模板中含有人類DNA，將擴增結果陽性標本確認為有效的DNA模板，在－20℃的條件下保存?zhèn)溆茫?/p>
步驟二、制備引物反應溶液：
室溫溶解HPV16 E7的PCR引物、HPV18 E7的PCR引物以及TaqMan探針，配置20 μL引物反應溶液，引物反應溶液包含 10 μL 2×dd PCR Master Mix、10 μmol/L 的正向引物和10 μmol/L的反向引物各0.8 μL、TaqMan-MGB探針0.5 μL、DNA 模板 2 μL、無菌水6 μL，陰性對照組中，使用不含DNA的TE緩沖液作為模板；
步驟三、制備微滴：
將20 uL上述引物反應溶液轉入DG8微滴發(fā)生卡中并放入QX100微滴發(fā)生器內，在每個孔中加入70 μL 微滴生成油，然后置于微滴生成卡中，覆蓋專用膠墊后置入微滴生成儀，生成微滴；
步驟四、PCR擴増：
將樣本生成的微滴手動轉移到96孔PCR板上，孔板用錫箱熱封后進行PCR擴增；
步驟五、檢測微滴：
PCR反應后，將96孔PCR板置于QX100微滴分析儀中，依次吸取每個樣本中的微滴并隨載液流逐一通過檢測器，有熒光信號的微滴為陽性，無熒光信號的微滴為陰性；
步驟六、分析數(shù)據(jù)以及顯示結果：
采用QuantaSoft軟件分析ddPCR數(shù)據(jù)確定等位基因分型，當樣本中至少有2個微滴出現(xiàn)在FAM信號的陽性區(qū)域時，認為該樣本此突變?yōu)殛栃?，否則為陰性。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種應用數(shù)字PCR檢測尿液中人乳頭瘤病毒16/18型基因的方法，其特征在于：所述的步驟d中，所述的裂解液的組分構成為：10mM Tris-HCl，1mM EDTA,0.5% SDS。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種應用數(shù)字PCR檢測尿液中人乳頭瘤病毒16/18型基因的方法，其特征在于：所述的步驟g中，所述的乙酸鈉溶液的pH值為 5.2。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種應用數(shù)字PCR檢測尿液中人乳頭瘤病毒16/18型基因的方法，其特征在于：所述的步驟二中，所述的引物預混液中，引物序列如下：
HPV16 E7正向引物序列 F：5`-TGCAGCTGGACAAGCAGAAC-3`
HPV16 E7反向引物序列 R：5`-CACAACCGAAGCGTAGAGTC-3`
HPV16 E7 Taqman MGB 探針： 5`-FAM-ACAGAGCCCATTACAAT-3`
HPV18 E7正向引物序列 F：5`-TACATTTACCAGCCCGACG-3`
HPV18 E7反向引物序列 R：5`-TCGTCTGCTGAGCTTTCTAC-3`
HPV18 E7 Taqman MGB 探針： 5`-FAM-AACCACAACGTCACACAA-3`。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種應用數(shù)字PCR檢測尿液中人乳頭瘤病毒16/18型基因的方法，其特征在于：所述的步驟四中，檢測的熱循環(huán)模式為：95 ℃孵育10min； 94 ℃孵育30s，60 ℃孵育1min，共40個循環(huán)；98℃孵育10 min，最后置于4 ℃中。