本發(fā)明涉及分子生物學(xué)及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種腺病毒檢測(cè)、測(cè)序的引物組合及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

人腺病毒(human adenovirus，HAdV)是一類無包膜的雙鏈DNA病毒，分為A-G 7個(gè)血清學(xué)組，其中B組腺病毒感染目前己成為急性呼吸系統(tǒng)疾病的重要因素。B組又可分為B1和B2亞組，B1主要包括3、7、16、21、51型；B2包括14、34、35及55型。

對(duì)我國爆發(fā)的腺病毒毒株進(jìn)行基因組測(cè)序，有助于了解該病毒的進(jìn)化特點(diǎn)和流行趨勢(shì)，有助于對(duì)55型腺病毒的預(yù)防和控制。

目前，還沒有比較有效的針對(duì)人腺病毒(human adenovirus，HAdV)的快速檢測(cè)和測(cè)序的手段?；蛘呤歉采w不全面，檢測(cè)不準(zhǔn)確，容易導(dǎo)致誤檢和誤判。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一目的在于提供一種腺病毒的檢測(cè)引物，該引物能特異的檢測(cè)出腺病毒。

本發(fā)明的第二目的在于提供上述的腺病毒的檢測(cè)引物在檢測(cè)腺病毒中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第三目的在于提供上述的腺病毒的檢測(cè)引物在制備檢測(cè)腺病毒試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四目的在于提供一種腺病毒的檢測(cè)試劑盒；試劑盒能快速、特異的檢測(cè)出腺病毒。

本發(fā)明的第五目的在于提供一種腺病毒的測(cè)序引物。

本發(fā)明的第六目的在于提供上述的腺病毒的測(cè)序引物在腺病毒基因組DNA測(cè)序中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第七目的在于提供上述的腺病毒的測(cè)序引物在制備腺病毒測(cè)序試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第八目的在于提供一種腺病毒的測(cè)序試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種腺病毒的檢測(cè)引物，檢測(cè)引物包括第一引物組合，第一引物組合為第1-12引物對(duì)中的一種或多種，第1-12引物對(duì)的堿基序列分別如SEQ ID No.1-24所示。

上述的腺病毒的檢測(cè)引物在檢測(cè)腺病毒中的應(yīng)用。

上述的腺病毒的檢測(cè)引物在制備檢測(cè)腺病毒試劑盒中的應(yīng)用。

一種腺病毒的檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)試劑盒包括上述的檢測(cè)引物，以及PCR反應(yīng)緩沖液、Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg²⁺中至少一種。

一種腺病毒的測(cè)序引物，測(cè)序引物包括第二引物組合和如上述的第一引物組合，第二引物組合包括第13-24引物對(duì)，第13-24引物對(duì)的堿基序列分別如SEQ ID No.25-48所示。

上述的腺病毒的測(cè)序引物在腺病毒基因組DNA測(cè)序中的應(yīng)用。

上述的腺病毒的測(cè)序引物在制備腺病毒測(cè)序試劑盒中的應(yīng)用。

一種腺病毒的測(cè)序試劑盒，測(cè)序試劑盒包括如權(quán)利要求2所述的引物對(duì)；以及PCR反應(yīng)緩沖液、Taq DNA聚合酶、ddNTPs、dNTPs和Mg²⁺中的至少一種。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供腺病毒的檢測(cè)引物能特異的檢測(cè)出腺病毒，腺病毒的檢測(cè)引物在制備試劑盒中的應(yīng)用，更方便對(duì)腺病毒的檢測(cè)，且使用方法的簡便和快捷；本發(fā)明還提供應(yīng)用腺病毒的測(cè)序引物，該測(cè)序引物能全覆蓋的將腺病毒基因組測(cè)序，該測(cè)序引物在制備腺病毒測(cè)序中的應(yīng)用，更方便對(duì)腺病毒的快速測(cè)序，能幫助準(zhǔn)確判斷腺病毒的類型，效果明顯。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1提供的檢測(cè)引物電泳結(jié)果圖；

圖2為本發(fā)明測(cè)序的結(jié)果與已知序列比對(duì)結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

Invitrogen PureLink^TM Viral RNA/DNA Mini Kit購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司；引物和PCR用高保真DNA聚合酶I5-MIX購自成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司；生化試劑購自上海生工生物工程有限公司，其余試劑均購自國藥生化試劑公司。

下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例的一種腺病毒檢測(cè)、測(cè)序引物組合及應(yīng)用進(jìn)行具體說明。

一種腺病毒的檢測(cè)引物，檢測(cè)引物包括第一引物組合，第一引物組合為第1-12引物對(duì)中的一種或多種，第1-12引物對(duì)的堿基序列分別如SEQ ID No.1-24所示。

檢測(cè)引物針對(duì)腺病毒的序列設(shè)計(jì)，針對(duì)性強(qiáng)，特異性好，靈敏度高，檢測(cè)結(jié)果可靠準(zhǔn)確。

上述的腺病毒的檢測(cè)引物在檢測(cè)腺病毒中的應(yīng)用。

應(yīng)用上述檢測(cè)引物，近年來，HAdV-B55在成人特別是學(xué)校和軍隊(duì)特殊人群中引起日益頻繁的急性呼吸道傳染病流行；應(yīng)用生物化學(xué)的方法，能快速有效的檢測(cè)出腺病毒，為后續(xù)的針對(duì)性的治療等提供準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)結(jié)果。

進(jìn)一步地，以腺病毒DNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)；

PCR反應(yīng)體系為：Mix反應(yīng)液，25μL；上游引物，1μL；下游引物，1μL；DNA模板，2μL；ddH2O，21μL；PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?8℃，3min；98℃，10s；57-69℃，10s；72℃，45s；30個(gè)循環(huán)；72℃，5min。

選擇57-69℃退火溫度，能擴(kuò)增出較好的目的條帶，避免擴(kuò)增出非特異的條帶干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，30個(gè)循環(huán)能擴(kuò)增出大量片段，將微量的模板放大，利于檢測(cè)，而且30個(gè)循環(huán)反應(yīng)時(shí)間相對(duì)較縮短，利于快速反應(yīng)，快速拿到檢測(cè)結(jié)果。

上述的腺病毒的檢測(cè)引物在制備檢測(cè)腺病毒試劑盒中的應(yīng)用。

應(yīng)用上述檢測(cè)引物，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。

一種腺病毒的檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)試劑盒包括上述的檢測(cè)引物，以及PCR反應(yīng)緩沖液、Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg²⁺中的至少一種。

將檢測(cè)引物應(yīng)用到檢測(cè)試劑盒中，方便檢測(cè)應(yīng)用，配套使用，能快速檢測(cè)腺病毒，方便且經(jīng)濟(jì)。

一種腺病毒的測(cè)序引物，測(cè)序引物包括第二引物組合和上述的第一引物組合，第二引物包括第13-24引物對(duì)，第13-24引物對(duì)的堿基序列分別如SEQ ID No.25-48所示。

該測(cè)序引物的設(shè)計(jì)，退火溫度適中，無引物二聚體，無錯(cuò)配現(xiàn)象的發(fā)生。產(chǎn)物長度適中而且各個(gè)片段的長度也接近，也有利于測(cè)序反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)快速，結(jié)果準(zhǔn)確。

上述的腺病毒的測(cè)序引物在腺病毒基因組DNA測(cè)序中的應(yīng)用。

上述的腺病毒的測(cè)序引物的應(yīng)用，能幫助快速分析所測(cè)序的腺病毒的類型，結(jié)果更為可信和可靠，證據(jù)更為充分。

進(jìn)一步地，以腺病毒DNA為模板，進(jìn)行PCR反應(yīng)；

測(cè)序引物對(duì)在測(cè)序的時(shí)候，每一對(duì)測(cè)序引物對(duì)設(shè)置有第一反應(yīng)管、第二反應(yīng)管、第三反應(yīng)管和第四反應(yīng)管，共四個(gè)反應(yīng)管；每個(gè)反應(yīng)管中加入模板DNA、引物對(duì)、PCR反應(yīng)緩沖液、高保真Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+引物對(duì)；第一反應(yīng)管還加入ddATP，第二反應(yīng)管還加入ddGTP，第三反應(yīng)管還加入ddCTP，第四反應(yīng)管還加入ddTTP；PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?8℃，3min；98℃，10s；58-67℃,10s；72℃，150s；40個(gè)循環(huán)；72℃，5min。

由于腺病毒的基因組DNA堿基數(shù)量不多，采用第一代測(cè)序技術(shù)對(duì)腺病毒基因組進(jìn)行測(cè)序；能快速準(zhǔn)確的獲得所需要的數(shù)據(jù)，且結(jié)果也更可靠和直觀，可以直接使用讀取的結(jié)果；避免二代測(cè)序技術(shù)，避免對(duì)讀取的數(shù)據(jù)的后期加工，簡單可靠。

測(cè)序引物對(duì)在測(cè)序使用的時(shí)候，分為四個(gè)反應(yīng)管，每個(gè)反應(yīng)管中加入模板DNA、引物對(duì)、PCR反應(yīng)緩沖液、高保真Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg²⁺引物對(duì)；第一反應(yīng)管還加入ddATP，第二反應(yīng)管還加入ddGTP，第三反應(yīng)管還加入ddCTP，第四反應(yīng)管還加入ddTTP；選用高保真Taq DNA聚合酶，可以保證在反應(yīng)的過程中，能較好的保證擴(kuò)增的序列與模板序列一致，避免擴(kuò)增的序列出現(xiàn)失真的現(xiàn)象；而Mg²⁺能激活高保真Taq DNA聚合酶的活性，使酶保持較高的活性；第一反應(yīng)管中加還加入ddATP，當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行過程中，ddATP連接到反應(yīng)鏈上的時(shí)候，由于還ddATP無法形成3-5磷酸二酯鍵，反應(yīng)即終止，由于ddATP是隨機(jī)的加入到反應(yīng)的，所以擴(kuò)增的片段上有腺嘌呤A的位置都會(huì)有終止；加入ddGTP、ddCTP和ddTTP的反應(yīng)管也是同樣的；每一個(gè)反應(yīng)管通過電泳就能讀出整個(gè)擴(kuò)增的片段的堿基序列。

當(dāng)然，在ddNTPs上還需要進(jìn)行標(biāo)記，通常采用放射性標(biāo)記或者熒光標(biāo)記；從安全的角度考慮，優(yōu)選熒光標(biāo)記。

熒光標(biāo)記的ddNTPs，四種不同的ddNTPs分別標(biāo)記不同的熒光，反應(yīng)結(jié)束后，通過毛細(xì)管電泳，不同分子量大小的擴(kuò)增片段會(huì)以從小到達(dá)的順序通過電泳，而通過識(shí)別不同的熒光讀出序列的堿基。

上述的腺病毒的測(cè)序引物在制備腺病毒測(cè)序試劑盒中的應(yīng)用。

一種腺病毒的測(cè)序試劑盒，測(cè)序試劑盒包括上述的測(cè)序引物對(duì)；以及PCR反應(yīng)緩沖液、Taq DNA聚合酶、ddNTPs、dNTPs和Mg²⁺中的至少一種。

測(cè)序試劑盒能幫助快速的建立測(cè)序反應(yīng)體系，快速的讀出腺病毒的基因組堿基序列。

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供一種腺病毒的檢測(cè)引物，檢測(cè)引物包括第一引物組合，第一引物組合為第1-12引物對(duì)，第1-12引物對(duì)的堿基序列分別如SEQ ID No.1-24所示。

上述腺病毒檢測(cè)引物的使用，具體方法如下：

樣本的獲取

樣本：55型腺病毒樣本采集自2016年西藏拉薩地區(qū)某呼吸道感染病例。

在生物安全2級(jí)(BSL2)實(shí)驗(yàn)室采用腺病毒敏感細(xì)胞系Hep-2細(xì)胞對(duì)咽拭子樣本進(jìn)行病毒分離。

實(shí)驗(yàn)方法：

1.1 將Hep-2細(xì)胞接種于24孔板內(nèi)，接種密度1.5×10⁵個(gè)/孔，培養(yǎng)24h；

1.2 使用PBS洗細(xì)胞3次，每孔加入500μl的2％的DMEM培養(yǎng)基，每孔加入確診患者的咽拭子標(biāo)本30μl；

1.3 37℃孵箱內(nèi)持續(xù)培養(yǎng)并逐日觀察細(xì)胞病變(CPE)情況，當(dāng)75％的細(xì)胞出現(xiàn)典型CPE時(shí)，收集細(xì)胞上清；

1.4 采用PCR方法進(jìn)行核酸檢測(cè)并對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序鑒定，將陽性分離物分裝保存于-80℃冰箱內(nèi)。

腺病毒DNA的提取方法如下：

2.1 病毒上清液500μL，12000rpm離心5min，用移液器件將20μL蛋白酶K加入樣本中，65℃消化10-20min；

2.2 管中加入500μL的結(jié)合液，充分混勻；

2.3 在向管中加入400的無水乙醇，成分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，將溶液和絮狀沉淀加入吸附柱，靜置2min；

2.4 12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管；

2.5 向吸附柱中加入700μL的漂洗液，12000rpm轉(zhuǎn)速離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中；

2.6 向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm轉(zhuǎn)速離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中；

2.7 12000rpm轉(zhuǎn)速離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置3-5min，晾干；

2.8 件吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜上懸空滴加50-100μL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm轉(zhuǎn)速離心1min；

2.9 離心所得洗脫液再放入吸附柱，室溫放置2min，12000rpm轉(zhuǎn)速離心2min，得到腺病毒基因組DNA。

PCR反應(yīng)檢測(cè)：

以提取的腺病毒DNA為模板，就行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，上述第1-12引物對(duì)分別同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)；

PCR反應(yīng)體系如下：I5-MIX 25μL，上游引物1μL，下游引物1μL，ddH₂O 21μL，模板DNA 2μL；

PCR反應(yīng)程序：98℃預(yù)變性3min，98℃變性10s，62℃退火15s，72℃延伸45s，30個(gè)循環(huán)，72℃5min。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示(圖中：1-12分別代表第1-12對(duì)引物對(duì)，M為DNA Marker(DL2000))，第1-12引物對(duì)均能鑒定擴(kuò)增出目的條帶，且條帶清晰，說明本實(shí)施例提供的第1-12引物對(duì)能很好的檢測(cè)出腺病毒，且具有較好的特異性；在微量的模板的情況下通過PCR反應(yīng)也能快速的檢測(cè)出腺病毒。

實(shí)施例2

本實(shí)施例提供一種腺病毒的檢測(cè)試劑盒，試劑盒包括實(shí)施例1中提供的第1引物對(duì)，第1引物對(duì)的堿基序列分別如SEQ ID No.1-2所示。

當(dāng)然，本試劑盒還包括可以直接進(jìn)行PCR反應(yīng)的試劑，包括PCR反應(yīng)緩沖液、Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg²⁺中的至少一種。

檢測(cè)試劑盒的使用，參考實(shí)施例1的方法。

實(shí)施例3

本實(shí)施例提供一種腺病毒的測(cè)序引物，測(cè)序引物包括第二引物組合和實(shí)施例1提供的第一引物組合，第二引物組合包括第13-24引物對(duì)，第13-24引物對(duì)的堿基序列分別如SEQ ID No.25-48所示。

本實(shí)施例提供的測(cè)序引物的使用，具體如下：

第一部分，測(cè)序樣本的模板制備

樣本的模板制備參考實(shí)施例1提供的樣本的提取和腺病毒DNA的提取方法。

第二部分腺病毒DNA的測(cè)序，方法如下：

1.1 第1-24對(duì)引物，每對(duì)引物分別設(shè)置4個(gè)反應(yīng)管，分別命名為A反應(yīng)管、T反應(yīng)管、C反應(yīng)管和G反應(yīng)管；

1.2 每個(gè)反應(yīng)管中加入模板腺病毒DNA1μL、高保真Taq DNA聚合酶1μL，10×buffer緩沖液5μL、dNTPs(10mM each)2μL、MgSO₄2μL以及ddH₂O 35μL，上下游的引物各0.75μL；

1.3 在命名為A的反應(yīng)管中另外加入雙脫氧的ddATP 2.5μL，在命名為T的反應(yīng)管中另外加入雙脫氧的ddTTP 2.5μL，在命名為C的反應(yīng)管中另外加入雙脫氧的ddCTP 2.5μL，在命名為G的反應(yīng)管中另外加入雙脫氧的ddGTP 2.5μL；雙脫氧的ddATP、雙脫氧的ddTTP、雙脫氧的ddCTP和雙脫氧的ddGTP均用³²P標(biāo)記；

1.4 進(jìn)行PCR反應(yīng)，反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性2Min，94℃變性30s，62℃退火30s，72℃延伸120s，40個(gè)循環(huán)，68℃延伸5min；

1.5 每一個(gè)引物對(duì)的4的反應(yīng)管單獨(dú)進(jìn)行瓊脂糖糖凝膠電泳，然后放射自顯影讀取序列，不同引物對(duì)的序列拼接，獲得腺病毒的基因組序列。

測(cè)序結(jié)果與已知腺病毒基因組序列通過應(yīng)用軟件DNAMAN進(jìn)行序列比對(duì)，比對(duì)結(jié)果如圖2所示，實(shí)驗(yàn)測(cè)序的結(jié)果通過比較與現(xiàn)有腺病毒的堿基序列一致，說明本實(shí)施例提供的測(cè)序引物對(duì)能準(zhǔn)確的測(cè)序腺病毒的基因組，且特異性較高，反應(yīng)溫和，交底濃度的模板也可以進(jìn)行測(cè)序。

實(shí)施例4

本實(shí)施例提供一種腺病毒的測(cè)序引物，測(cè)序引物包括實(shí)施例1提供的第一引物組合的第1-12引物對(duì)和第二引物組合，第二引物包括第13-24引物對(duì)，第13-24引物對(duì)的堿基序列分別如SEQ ID No.25-48所示。

使用方法參考實(shí)施例3，區(qū)別在于：

本實(shí)施例中加入的雙脫氧的ddATP用綠色熒光標(biāo)記，雙脫氧的ddTTP用紅色熒光標(biāo)記，雙脫氧的ddCTP用黃色熒光標(biāo)記，雙脫氧的ddGTP用藍(lán)色熒光標(biāo)記。

PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)產(chǎn)物通過毛細(xì)管電泳，在毛細(xì)管電泳上有熒光信號(hào)識(shí)別的儀，通過所識(shí)別的熒光信號(hào)儀器自動(dòng)轉(zhuǎn)換成對(duì)應(yīng)的不同的堿基序列，最后不同的引物對(duì)測(cè)序的序列拼接成腺病毒的基因組序列。

測(cè)序結(jié)果與已知腺病毒基因組序列通過應(yīng)用DNAMAN軟件進(jìn)行序列比對(duì)，序列比對(duì)結(jié)果如圖2所示，實(shí)驗(yàn)測(cè)序的結(jié)果通過比較與現(xiàn)有腺病毒基因組的堿基序列一致，說明本實(shí)施例提供的測(cè)序引物對(duì)能準(zhǔn)確的測(cè)序腺病毒的基因組，且特異性較高，反應(yīng)溫和，即使較低濃度的模板也可以進(jìn)行測(cè)序。

實(shí)施例5

本實(shí)施例提供一種腺病毒的測(cè)序試劑盒，測(cè)序試劑盒包括實(shí)施例4提供的引物對(duì)；以及PCR反應(yīng)緩沖液、Taq DNA聚合酶、ddNTPs、dNTPs和Mg²⁺中的一種或多種；ddNTPs包括用綠色熒光標(biāo)記的雙脫氧ddATP，紅色熒光標(biāo)記的雙脫氧ddTTP，用黃色熒光標(biāo)記的雙脫氧ddCTP，用藍(lán)色熒光標(biāo)記的雙脫氧ddGTP。

腺病毒的測(cè)序試劑盒的使用方法參考實(shí)施例4提供的方法。

綜上所述，本發(fā)明實(shí)施例的提供的腺病毒檢測(cè)引物能特異的識(shí)別腺病毒的基因組序列，快速高效的檢測(cè)出腺病毒，多個(gè)引物同時(shí)使用，達(dá)到交叉驗(yàn)證的目的，使結(jié)果更準(zhǔn)確可靠，應(yīng)用該引物并制備檢測(cè)腺病毒的試劑盒，能更方便快捷的檢測(cè)腺病毒，具有較好的應(yīng)用前景；提供的測(cè)序引物，能全面的覆蓋腺病毒的基因組，擴(kuò)增的片段長度合理，退火溫度等參數(shù)較為適中，反應(yīng)條件溫和；能快速的得到并讀取測(cè)序結(jié)果，使檢測(cè)更為準(zhǔn)確、方便和高效，有利于在實(shí)際中的應(yīng)用，該測(cè)序引物制備的試劑盒能更方便的測(cè)序，使成本更低廉，結(jié)果也更可靠。

以上所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。本發(fā)明的實(shí)施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

SEQUENCE LISTING

<110> 劉媛

<120> 一種腺病毒檢測(cè)、測(cè)序的引物組合及應(yīng)用

<130> PA16031461SC

<160> 49

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 1

tttgggggtg gagtgttttt gc 22

<210> 2

<211> 23

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 2

agtgcgggca ataaccaaat gat 23

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 3

atttgcggtg cttccgatga g 21

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 4

ggaccccagg tcacgtgaaa tac 23

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<211> 21

<212> DNA

<213> human adenovirus

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catcaccacc tgagcgaggt t 21

<210> 6

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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rtctgggcga tgtcagcgaa at 22

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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catcaccacc tgagcgaggt t 21

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<211> 25

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 8

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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<211> 24

<212> DNA

<213> human adenovirus

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gtgacatctg aggtggtgag caat 24

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<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 11

cgatgtatct ggaggaacgg ac 22

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<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

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aagtaactca gcgtcgacgc ac 22

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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tgcttttaat taaatatgga gtagc 25

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<211> 21

<212> DNA

<213> human adenovirus

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aggaacatgc agcagaaaag t 21

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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ttctaacacc tgctaccttt ttgat 25

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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acagcggggt atgcaaagtg t 21

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<211> 23

<212> DNA

<213> human adenovirus

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cttggaagag gttccaaaaa tct 23

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<211> 23

<212> DNA

<213> human adenovirus

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tggatacctc tgcctctgat tac 23

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<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 19

tacttttgga acagtcagct cttac 25

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<211> 24

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 20

tttctaaggt gttctggtgg agta 24

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<211> 24

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 21

caacttctag actggatcct tgtg 24

<210> 22

<211> 21

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 22

tcttccctct cctctcctgc t 21

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<211> 25

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 23

aaccttgtca taatggagtt gcttc 25

<210> 24

<211> 23

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 24

gttgcaagtt aagcggatgt gac 23

<210> 25

<211> 23

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 25

aaaaggagca gtttatgcag act 23

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<211> 24

<212> DNA

<213> human adenovirus

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ttaaagccaa ctcagatcta gcat 24

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<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 27

ccaacgtctg ggtgaacttt ct 22

<210> 28

<211> 21

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 28

ttcgaccagc aggatgagtc t 21

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<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 29

tctaaggcca tttgccattc tc 22

<210> 30

<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 30

gtctcaggac tctggacagc tc 22

<210> 31

<211> 24

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 31

ggtgatgaaa ttaaagtagg cagt 24

<210> 32

<211> 24

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 32

ggaacgtatg gagtcttgta gatc 24

<210> 33

<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 33

tgcatgatgg tctttagctg ac 22

<210> 34

<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 34

acttcgctgc tacgtacact gt 22

<210> 35

<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 35

ctcctactgc gcctacatct ac 22

<210> 36

<211> 21

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 36

agccaaggat gaaaaattga t 21

<210> 37

<211> 25

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 37

aaaccagata ctaaaatgaa accat 25

<210> 38

<211> 24

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 38

tgaagtcttt gtaattgacc tcat 24

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 39

ttgcaggtct gcctacccat 20

<210> 40

<211> 22

<212> DNA

<213> human adenovirus

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atgttgacag caatggctga gt 22

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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ttaacaattt tcgctctttc atc 23

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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gtcgcgtgaa ggatatgttt c 21

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<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 43

tgaattaaga ctctcctacg gact 24

<210> 44

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<213> human adenovirus

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<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 45

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<211> 23

<212> DNA

<213> human adenovirus

<400> 46

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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caagagcagg acacgctaca gt 22

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<212> DNA

<213> human adenovirus

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acaaaaaaca gccaatatag cct 23