1.一種用vero細(xì)胞生產(chǎn)流感病毒的方法,其特征在于其培養(yǎng)基包含新橙皮苷二氫查爾酮。
2.權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:
所述培養(yǎng)基中新橙皮苷二氫查爾酮的濃度為0.8-1.5毫克/升。
3.一種流感病毒疫苗的生產(chǎn)方法,其步驟如下:
制備培養(yǎng)基:
以下含量以毫克/升計(jì)為:
新橙皮苷二氫查爾酮 0.8-1.5
L-色氨酸 10
L-半胱氨酸 100
L-異亮氨酸 225
L-亮氨酸 80-100
L-纈氨酸 100
L-精氨酸鹽酸鹽 650-800
L-賴氨酸 320-350
L-蛋氨酸 60
L-谷氨酸 50-82
L-苯丙氨酸 216
L-天冬酰胺 800-1000
甘氨酸 15
L-脯氨酸 180
L-丙氨酸 55
L-天冬氨酸 65-68
L-絲氨酸 290
L-蘇氨酸 50~300
L-谷氨酰胺 650-690
維生素C 60-99
煙酰胺 8
核黃素 0.6
鹽酸硫胺素 3.5
氯化膽堿 9
D-泛酸鈣 0.3
葉酸 3.8
六水氯化鎂 50
無水硫酸鎂 55
無水氯化鈣 100
氯化鉀 450
氯化鈉 5000
一水磷酸二氫鈉 200
磷酸氫二鈉 150
甘氨酸鐵 0.01
五水硫酸銅 0.0001~0.002;
酵母浸膏 8000;
亞油酸 0.01~0.1
亞麻酸 0.08-0.1;
碳酸氫鈉 3000
D-葡萄糖 3000~6000
次黃嘌呤鈉鹽 6
硫辛酸 0.1~0.4;
(2)使用上述培養(yǎng)基,將Vero細(xì)胞以0.3×106細(xì)胞數(shù)/毫升密度接種于5升攪拌式生物反應(yīng)器中,cytodex-1微載體濃度為4克/升,在細(xì)胞密度達(dá)到10.8*106細(xì)胞數(shù)/毫升直接按照M.O.I為0.01接種流感病毒,維持70小時(shí)即收獲。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于:
所述新橙皮苷二氫查爾酮的結(jié)構(gòu)式為:
。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于:病毒的血凝效價(jià)為1:640以上。
6.權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于:
所述培養(yǎng)基成分如下,以下含量以毫克/升計(jì)為
新橙皮苷二氫查爾酮 1.0
L-色氨酸 10
L-半胱氨酸 100
L-異亮氨酸 225
L-亮氨酸 90
L-纈氨酸 100
L-精氨酸鹽酸鹽 750
L-賴氨酸 340
L-蛋氨酸 60
L-谷氨酸 70
L-苯丙氨酸 216
L-天冬酰胺 900
甘氨酸 15
L-脯氨酸 180
L-丙氨酸 55
L-天冬氨酸 67
L-絲氨酸 290
L-蘇氨酸 145
L-谷氨酰胺 670
維生素C 83
煙酰胺 8
核黃素 0.6
鹽酸硫胺素 3.5
氯化膽堿 9
D-泛酸鈣 0.3
葉酸 3.8
六水氯化鎂 50
無水硫酸鎂 55
無水氯化鈣 100
氯化鉀 450
氯化鈉 5000
一水磷酸二氫鈉 200
磷酸氫二鈉 150
甘氨酸鐵 0.01
五水硫酸銅 0.001;
酵母浸膏 8000;
亞油酸 0.02
亞麻酸 0.09;
碳酸氫鈉 3000
D-葡萄糖 4000
次黃嘌呤鈉鹽 6
硫辛酸 0.3。