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標(biāo)簽GST的一種不可逆親和標(biāo)記試劑及應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12411735閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.N-(對(duì)甲氧基苯氧乙基)-(N-對(duì)位取代酰胺基苯甲?;?甘氨酸類標(biāo)簽GST的單價(jià)不可逆親和標(biāo)記試劑,其與標(biāo)記活性對(duì)應(yīng)的顯著結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是包括至少四種功能基,其對(duì)應(yīng)作用在于:

(1)引導(dǎo)親和標(biāo)記試劑進(jìn)入活性位點(diǎn)疏水腔的對(duì)甲氧基苯氧乙基,也稱為疏水定位基;

(2)與活性中心附近巰基、胺基發(fā)生親核取代反應(yīng)的修飾基團(tuán),包括但不限于1-鹵代乙酰基、丙烯?;?、N-烷基馬來酰亞胺基、乙烯磺?;?;

(3)將親和標(biāo)記試劑偶聯(lián)到微納米材料表面的偶聯(lián)功能基,包括但不限于甘氨酸、β-氨基丙酸,γ-氨基丁酸、6-氨基戊酸,以其羧基與材料表面氨基偶聯(lián);

(4)疏水定位、修飾功能基及偶聯(lián)功能基之間的連接骨架功能基,包括但不限于對(duì)氨基苯甲?;?-氨基己?;?、γ-谷氨酰基、及對(duì)氨基苯甲?;陌被c所述氨基酸形成的酰胺衍生物,以其氨基與修飾基團(tuán)相連而?;c偶聯(lián)基團(tuán)的氨基相連。

2.據(jù)權(quán)利要求1所述(N-對(duì)甲氧基苯氧乙基)-(N-對(duì)位取代酰胺基苯甲酰基)甘氨酸類標(biāo)簽GST單價(jià)不可逆親和標(biāo)記試劑,其應(yīng)用特征在于經(jīng)微納米材料表面氨基與單價(jià)標(biāo)記試劑偶聯(lián)功能基中羧基成酰胺鍵偶聯(lián)后用于親和標(biāo)記固定化GST融合蛋白,使親和標(biāo)記試劑疏水定位基進(jìn)入GST活性位點(diǎn)疏水腔,借助連接基團(tuán)的柔韌性,使修飾基團(tuán)能對(duì)活性中心附近巰基或氨基能實(shí)現(xiàn)共價(jià)修飾,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)GST不可逆親和標(biāo)記。

3.據(jù)權(quán)利要求1所述(N-對(duì)甲氧基苯氧乙基)-(N-對(duì)位取代酰胺基苯甲?;?甘氨酸類標(biāo)簽GST的單價(jià)不可逆親和標(biāo)記試劑,其特征在于:所述單價(jià)不可逆親和標(biāo)記試劑,通過偶聯(lián)功能基中羧基與二乙基三胺或二丙基三胺的末端伯氨基縮水成雙酰胺,轉(zhuǎn)變成能同時(shí)結(jié)合到GST兩個(gè)活性中心的二價(jià)不可逆親和標(biāo)記試劑,以其亞氨基為偶聯(lián)基團(tuán)或該亞胺基與丁二酸酐或戊二酸酐反應(yīng)所得羧基為偶聯(lián)基團(tuán)對(duì)應(yīng)與材料表面羧基或氨基偶聯(lián)。

4.據(jù)權(quán)利要求1所述(N-對(duì)甲氧基苯氧乙基)-(N-對(duì)位取代酰胺基苯甲?;?甘氨酸類標(biāo)簽GST的單價(jià)不可逆親和標(biāo)記試劑,及其衍生的二價(jià)不可逆親和標(biāo)記試劑,與微納米材料偶聯(lián)過程有如下特征:非蛋白類微納米材料與相對(duì)于表面可反應(yīng)基團(tuán)過量的標(biāo)記試劑在包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、乙腈中經(jīng)脫水縮合成酰胺偶聯(lián)得親和標(biāo)記試劑偶聯(lián)微納米材料;對(duì)蛋白類微納米材料,先將親和標(biāo)記試劑在所述溶劑中用水溶性活化劑包括但不限于1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺加N-羥基琥珀酰亞胺活化,再加蛋白微納米材料偶聯(lián)。

5.據(jù)權(quán)利要求1所述(N-對(duì)甲氧基苯氧乙基)-(N-對(duì)位取代酰胺基苯甲?;?甘氨酸類標(biāo)簽GST的單價(jià)不可逆親和標(biāo)記試劑,及其衍生的二價(jià)不可逆親和標(biāo)記試劑,與微納米材料偶聯(lián)后,對(duì)GST或其融合蛋白的固定化及封閉過程有如下特征:在緩沖液中加入相對(duì)于親和標(biāo)記試劑偶聯(lián)微納米材料表面反應(yīng)官能團(tuán)過量的GST或其融合蛋白進(jìn)行不可逆親和標(biāo)記;再用過量單價(jià)標(biāo)記試劑封閉固定化GST中的未修飾活性中心;最后用過量半胱氨酸、谷胱甘肽、巰基乙醇、巰基乙酸、巰基乙磺酸之一或其混合物,將偶聯(lián)在微納米材料表面的剩余親和標(biāo)記試劑轉(zhuǎn)變成親水基團(tuán);以避免功能化材料對(duì)疏水小分子的結(jié)合。

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