本發(fā)明涉及一種TaGPI1mS543A蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：植物淀粉是一類最初在植物葉綠體中合成、最終在其他異養(yǎng)器官(如種子、根、果實等)貯存的高聚化、非水溶性的碳水化合物。它為地球上異氧生物提供了主要的碳源和能量源；對人類來講，它是我們必不可少的食物和能量來源。與此同時，淀粉還被廣泛的應(yīng)用于醫(yī)療、能源、化工、建筑、材料等多種行業(yè)之中，可以說淀粉生產(chǎn)和應(yīng)用與我們的生活息息相關(guān)。6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶(簡稱GPI)是植物淀粉合成、代謝途徑中的關(guān)鍵酶，它可逆的催化了6-磷酸葡萄糖和6-磷酸果糖的相互轉(zhuǎn)變。在葉綠體中，作為淀粉合成途徑的關(guān)鍵酶，它催化了6-磷酸果糖到6-磷酸葡萄糖的生化反應(yīng)。6-磷酸果糖是卡爾循環(huán)重要的終產(chǎn)物之一，而6-磷酸葡萄糖是淀粉合成代謝、糖代謝中的重要中間產(chǎn)物。6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶是連接卡爾文循環(huán)、淀粉合成代謝、糖代謝的重要蛋白(酶)。PGI既存在于質(zhì)體中，又定位在胞質(zhì)之中，質(zhì)體PGI突變后，植物表現(xiàn)為葉片淀粉合成明顯減少，生長緩慢等表型，而胞質(zhì)PGI突變后，植物生長受阻、葉片淀粉明顯積累、生殖生長受到嚴重干擾等表型，因此兩種類型的PGI對植物都是十分重要的。在動物中，大量的研究表明它參與了人類能量代謝相關(guān)的多種疾病的發(fā)生過程。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種TaGPI1mS543A蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種蛋白質(zhì)(命名為TaGPI1mS543A蛋白)，是將6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶蛋白第543位絲氨酸突變?yōu)楸彼岬玫降?。所述TaGPI1mS543A蛋白是如下(a1)或(a2)：(a1)由序列表中序列4所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(a2)將序列4的氨基酸序列經(jīng)過除第543位氨基酸殘基以外的一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與具有相同功能的由序列4衍生的蛋白質(zhì)。所述6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶蛋白是如下(a3)或(a4)：(a3)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(a4)將序列2的氨基酸序列經(jīng)過除第543位氨基酸殘基以外的一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與具有相同功能的由序列2衍生的蛋白質(zhì)。為了使(a1)中的蛋白質(zhì)便于純化和檢測，可在由序列表中序列4所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。表1標簽的序列標簽殘基序列Poly-Arg5-6(通常為5個)RRRRRPoly-His2-10(通常為6個)HHHHHHFLAG8DYKDDDDKStrep-tagII8WSHPQFEKc-myc10EQKLISEEDL上述(a2)中的蛋白質(zhì)可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。本發(fā)明還保護編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的基因。將所述基因命名為TaGPI1mS543A基因。所述基因為如下(b1)-(b3)中任一所述的DNA分子：(b1)編碼區(qū)如序列表中序列3所示的DNA分子；(b2)在嚴格條件下與(b1)限定的DNA序列雜交且編碼所述蛋白質(zhì)的DNA分子；(b3)與(b1)或(b2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且編碼所述蛋白質(zhì)的DNA分子。上述嚴格條件可為用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA雜交實驗中65℃下雜交并洗膜。本發(fā)明還保護含有TaGPI1mS543A基因的重組表達載體、表達盒或重組菌。所述重組表達載體具體可為在pHUE載體的多克隆位點(例如SacII和KpnI酶切位點間)插入序列表的序列3所示的雙鏈DNA分子得到的重組質(zhì)粒。本發(fā)明還保護TaGPI1mS543A蛋白的應(yīng)用，為如下(c1)-(c6)中至少一種：(c1)作為6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶；(c2)催化6-磷酸果糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖；(c3)催化6-磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸果糖；(c4)以6-磷酸果糖為原料制備6-磷酸葡萄糖酸；(c5)促進植物淀粉的合成；(c6)提高植物光合效力。本發(fā)明還保護一種重組菌，是將TaGPI1mS543A基因?qū)胨拗骶械玫降?。所述TaGPI1mS543A基因可通過含有TaGPI1mS543A基因的重組表達載體導(dǎo)入宿主菌得到重組菌。所述重組表達載體具體可為將pHUE載體的SacII和KpnI酶切位點間插入了序列表的序列3所示的雙鏈DNA分子得到的重組質(zhì)粒。所述宿主菌可為大腸桿菌，具體可為大腸桿菌BL21(DE3)。本發(fā)明還保護一種6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的制備方法，包括如下步驟：培養(yǎng)所述重組菌，從重組菌中得到6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶。所述“從重組菌中得到6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶”具體可包括步驟(d1)和(d2)：(d1)破碎所述重組菌菌體，得到含有6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的粗提液；(d2)分離所述粗提液中的6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶并去除His-Ub融合標簽，得到6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶。所述分離所述粗提液中的6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶可采用親和層析的方法對所述粗提液中的6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶進行純化，具體可采用Ni-NTA親和層析柱進行純化。所述純化還包括將蛋白液進行透析處理。所述透析的步驟具體可為使用dialysisbuffer(20mMTris-HCL，pH8.0、100mMNaCl)透析過夜。所述去除His-Ub融合標簽具體可為采用Usp2-cc蛋白酶對蛋白液進行酶切。所述酶切的步驟具體可為4℃酶切24小時。每1mg蛋白液加入20UUsp2-cc蛋白酶。本發(fā)明還保護所述重組菌或所述方法在制備6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明還保護一種組合物，包括所述蛋白質(zhì)和6-磷酸葡萄糖脫氫酶；所述組合物的用途為制備6-磷酸葡萄糖酸或催化6-磷酸果糖到6-磷酸葡萄糖酸的生化反應(yīng)。所述組合物還包括6-磷酸果糖。所述組合物還包括NADP。所述組合物還包括雙甘氨肽和MgCl2。所述蛋白質(zhì)、6-磷酸葡萄糖脫氫、6-磷酸果糖、NADP、雙甘氨肽和MgCl2的配比具體可為3.8U∶0.008U∶0.011μmol∶0.0022μmol∶0.7μmol∶0.011μmol。以上任一所述6-磷酸果糖具體可為D-6-磷酸果糖。本發(fā)明提供了一種TaGPI1mS543A蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。實驗證明，本發(fā)明的TaGPI1mS543A蛋白具有6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的活性，并且酶活力較現(xiàn)有的6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶顯著提高。本發(fā)明有望被用于實際的生產(chǎn)實踐以提高植物光合效力及淀粉的合成能力，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。附圖說明圖1為TaGPI1和TaGPI1mS543A蛋白純化過程中收集樣品的SDS-PAGE檢測結(jié)果。圖2為TaGPI1和TaGPI1mS543A蛋白酶活力檢測曲線。具體實施方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。小偃54小麥：參考文獻：陳海蓮，王劍環(huán)，王新芳，等.小偃54小麥的抗逆性表現(xiàn)[J].氣象與環(huán)境科學(xué)，2005(2)：28-30.；公眾可以從中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所獲得。pHUE載體：參考文獻：CatanzaritiA，SobolevaTA，JansDA，etal.Anefficientsystemforhigh-levelexpressionandeasypurificationofauthenticrecombinantproteins[J].ProteinScience，2004，13(5)：1331-1339.；公眾可以從中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所獲得。大腸桿菌BL21(DE3)：天根生化科技(北京)有限公司，產(chǎn)品目錄號：CB105-02。Usp2-cc蛋白酶：北京毅事合生物科技有限公司，貨號：G11502。Ni-NTA親和層析柱：Merck(Novagen)，貨號：70666。雙甘氨肽：Sigma，貨號：G-1002。D-6-磷酸果糖：Sigma，貨號：F-3627。NADP：Sigma，貨號：0505。MgCl2：Sigma，貨號：M-0250。6-磷酸葡萄糖脫氫酶：Sigma，貨號：G-6378。實施例1、TaGPI1mS543A蛋白及其編碼基因的獲得對各物種中6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶(GPI)進行序列分析和功能驗證，從小麥中發(fā)現(xiàn)一種蛋白質(zhì)，將其命名為TaGPI1蛋白。TaGPI1蛋白的編碼基因如序列表的序列1所示，編碼序列表的序列2所示的蛋白質(zhì)。將序列2所示的蛋白第543位絲氨酸突變?yōu)楸彼?，將突變后得到的蛋白命名為TaGPI1mS543A蛋白。TaGPI1mS543A蛋白的編碼基因如序列表的序列3所示，編碼序列表的序列4所示的蛋白質(zhì)。實施例2、小麥TaGPI1蛋白及TaGPI1mS543A蛋白的克隆及原核表達載體的構(gòu)建1、提取小偃54小麥的總RNA，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA。2、以步驟1得到的cDNA為模板，采用引物pHUE-TaGPI1-For和引物pHUE-TaGPI1-rev進行PCR擴增，得到擴增產(chǎn)物。pHUE-TaGPI1-For：5′-TCCCCGCGGTGGTATGGCGTCGCCGGC-3′；pHUE-TaGPI1-rev：5′-GGGGTACCTTACACTTTTGGAAGCACTGTTGTGTC-3′。pHUE-TaGPI1-For和pHUE-TaGPI1-rev中，下劃線分別標注SacII和KpnI酶切位點。3、用限制性內(nèi)切酶SacII和KpnI雙酶切步驟2的PCR擴增產(chǎn)物，回收酶切產(chǎn)物。4、用限制性內(nèi)切酶SacII和KpnI雙酶切pHUE載體，回收約5927bp的載體骨架。5、將步驟3的酶切產(chǎn)物和步驟4的載體連接，得到重組載體pHUE-TaGPI1。根據(jù)測序結(jié)果，對重組載體pHUE-TaGPI1進行結(jié)構(gòu)描述如下：將pHUE載體的SacII和KpnI酶切位點之間的小片段取代為了序列表的序列1的自5′端第1-1704位核苷酸所示的DNA分子。序列1所示的DNA分子編碼序列2所示的蛋白質(zhì)。6、以步驟5得到的重組載體pHUE-TaGPI1為模板，采用引物pHUE-TaGPI1mS543A-For和引物pHUE-TaGPI1mS543A-rev進行PCR定點突變(方法參照文獻：Fisher，C.L.，andPei，G.K.(1997).ModificationofaPCR-basedsite-directedmutagenesismethod.Biotechniques23，570-574.)，得到重組載體pHUE-TaGPI1mS543A。pHUE-TaGPI1mS543A-For：5′-CGAGGGCTTCAACCCCAGCGCGGCAAGTTTGCT-3′；pHUE-TaGPI1mS543A-rev：5′-GCTGGGGTTGAAGCCCTCGACGGGCTTTCC-3′。根據(jù)測序結(jié)果，對重組載體pHUE-TaGPI1mS543A進行結(jié)構(gòu)描述如下：將pHUE載體的SacII和KpnI酶切位點之間的小片段取代為了序列表的序列3的自5′端第1-1704位核苷酸所示的DNA分子。序列3所示的DNA分子編碼序列4所示的蛋白質(zhì)。(序列2和序列4只有第543位氨基酸不同，其余氨基酸相同；序列2第543位氨基酸為絲氨酸，序列4第543位氨基酸為丙氨酸)。實施例3、小麥TaGPI1蛋白及TaGPI1mS543A蛋白體外表達和純化將實施例2得到的重組載體pHUE-TaGPI1和重組載體pHUE-TaGPI1mS543A分別進行如下步驟：1、將重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，得到重組菌，將重組菌接種至50mlLB液體培養(yǎng)基(氨芐抗性：100μg/ml)中，37℃、220rpm/min震蕩培養(yǎng)過夜。2、將20ml步驟1得到的菌液轉(zhuǎn)接到1L新鮮LB液體培養(yǎng)基中，繼續(xù)37℃、220rpm震蕩培養(yǎng)至菌液OD600nm＝0.8-1.0，向菌液中加入IPTG并使其在體系中的濃度為0.1mM，16℃、220rpm/min誘導(dǎo)24小時，誘導(dǎo)結(jié)束后4000rpm/min離心收集菌體。3、按照如下步驟進行蛋白純化：(1)用Ni-NTAlysisbuffer(50mMNaH2PO4、300mMNaCl、10mM咪唑)重懸步驟2收集的菌體，置冰上超聲破碎后得到全細胞裂解液。(2)將全細胞裂解液50000g離心30分鐘，收集上清液。(3)將上清液經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，加載到Ni-NTA親和層析柱，收集流穿液。(4)向親和層析柱中加入10倍柱床體積的washbuffer(50mMNaH2PO4、300mMNaCl、25mM咪唑)，收集流穿液。(5)向親和層析柱中加入4倍柱床體積的elutebuffer(50mMNaH2PO4、300mMNaCl、250mM咪唑)，收集洗脫蛋白(即為帶His-Ub融合標簽的目的蛋白)。(6)向洗脫蛋白中加入Usp2-cc蛋白酶(20U/mg洗脫蛋白)進行酶切反應(yīng)(4℃酶切24小時)，以去除His-Ub融合標簽，得到酶切反應(yīng)液。(7)將酶切反應(yīng)液使用dialysisbuffer(20mMTris-HCL，pH8.0、100mMNaCl)透析過夜后再一次加載到Ni-NTA柱，收集流穿蛋白(即為不帶His-Ub融合標簽的目的蛋白)。4、將步驟3純化過程中每一步流程中收集的樣品進行SDS-PAGE檢測。結(jié)果如圖1所示。圖1A為TaGPI1蛋白純化過程中收集的樣品，圖1B為TaGPI1mS543A蛋白純化過程中收集的樣品。圖中，泳道1為步驟(1)得到的全細胞裂解液，泳道2為步驟(2)收集的上清液，泳道3為步驟(3)收集的流穿液，泳道4為步驟(4)收集的流穿液，泳道5為步驟(5)收集的洗脫蛋白，泳道6為步驟(6)得到的酶切反應(yīng)液，泳道7為步驟(7)收集的流穿蛋白，即純化產(chǎn)物。結(jié)果顯示大量、可溶且純度較高TaGPI1蛋白和TaGPI1mS543A蛋白被純化。重組載體pHUE-TaGPI1進行步驟1至4，收集的流穿蛋白命名為TaGPI1溶液。重組載體pHUE-TaGPI1mS543A進行步驟1至4，收集的流穿蛋白命名為TaGPI1mS543A。5、將步驟4得到的TaGPI1溶液進行BCA定量，蛋白濃度為20.4mg/ml。將步驟4得到的TaGPI1mS543A溶液進行BCA定量，蛋白濃度為30.6mg/ml。結(jié)果表明，在相同培養(yǎng)條件下，TaGPI1mS543A較TaGPI1產(chǎn)量提高。實施例4、小麥TaGPI1蛋白及TaGPI1mS543A蛋白外酶活力的檢測和比較對實施例3純化得到的TaGPI1蛋白和TaGPI1mS543A蛋白進行酶活力檢測(方法參照文獻：GuilbaultGG.Enzymaticmethodsofanalysis[J].AnalyticaChimicaActa，1970，52(1)：75-82.)。TaGPI1蛋白或TaGPI1mS543A蛋白可以作為6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶，催化6-磷酸果糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，但該反應(yīng)無法直接通過分光度計直接檢測。6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶與其底物6-磷酸果糖反應(yīng)產(chǎn)生的6-磷酸葡萄糖，可在6-磷酸葡萄糖脫氫酶的催化下轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖酸，并伴隨NADP向NADPH的轉(zhuǎn)化。NADPH在分光度計340nm處有光吸收，因此在6-磷酸葡萄糖脫氫酶過量情況下，NADPH光吸收變化可以反映TaGPI1蛋白或TaGPI1mS543A蛋白的酶活力。反應(yīng)體系(100μL)：42mM雙甘氨肽(pH7.4)16.67μL，3.3mMD-6-磷酸果糖3.33μL，0.67mMNADP3.33μL，3.3mMMgCl23.33μL，2.5U/mL6-磷酸葡萄糖脫氫酶3.33μL，H2O65.01μL，蛋白稀釋液5μL。蛋白稀釋液的制備方法：取實施例3制備的TaGPI1溶液或TaGPI1mS543A溶液，用dialysisbuffer(20mMTris-HCL，pH8.0、100mMNaCl)稀釋，得到蛋白濃度為1mg/ml的蛋白母液，將蛋白母液稀釋至500倍體積，得到蛋白濃度為0.002mg/ml的蛋白稀釋液。反應(yīng)在25℃條件下進行，分光光度計在340nm處測取5分鐘內(nèi)的吸光度值。結(jié)果如圖2所示。選取酶反應(yīng)最初3分鐘內(nèi)的數(shù)據(jù)進行計算。酶活力計算公式為：酶活力(U/ml)＝(Δ340/min×0.1×500)/(6.22×0.005)公式中：Δ340/min為反應(yīng)時間內(nèi)340nm處吸光度值變化/反應(yīng)時間；0.1為實驗體系總體積(0.1ml)；500為稀釋倍數(shù)(蛋白母液濃度/蛋白稀釋液濃度)；6.22為1mmolNADPH在340nm波長的消光系數(shù)；0.005為反應(yīng)體系中加入蛋白溶液的體積(0.005ml)。計算得到的酶活力(U/ml)數(shù)值/蛋白母液濃度(1mg/ml)＝酶活力(U/mg)經(jīng)過計算，TaGPI1酶活力為580±55U/mg，而TaGPI1mS543A酶活力為763±47U/mg，TaGPI1mS543A的酶活力對比TaGPI1的酶活力提升了約百分之三十。<110>中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所<120>TaGPI1mS543A蛋白及其編碼基因和應(yīng)用<130>GNCYXMN161846<160>4<210>1<211>1704<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>1atggcgtcgccggcgctcatctccgacaccgaccagtggaaggccctccaggcgcacgtc60ggcgcgatccacaagacgcacctgcgcgacctcatgacggacgccgaccgatgcaaggca120atgacggcggaattcgaaggcgtctacctggactactcgaggcagcaggccaccacggag180accatcgacaagctgttcaagctggcagaggctgcaaagctcaaggagaagattgacaag240atgtttaaaggcgaaaagataaataccactgagaacagatcagtgctccatgtggctcta300agggctccaagagacgcagtcataaacagtgacggtgtgaatgtggtccccgaagtttgg360gctgttaaggataaaatcaagcagttttcagagactttcagaagtggctcatgggttggg420gcaactgggaaaccattgacaaatgttgtctcggtcgggattggtggtagcttccttgga480cctctgtttgtgcatacggctctccagactgacccggaagcagcggaagctgccaaaggc540cgacaactgagatttcttgcaaatgttgatccagttgatgttgcacggagcatcaaagat600ttagatcctgcaaccactcttgttgtggttgtctcaaagaccttcacgacagctgaaaca660atgttaaatgctcgaactatcaaggagtggattgtctcttctcttggacctcaggctgtt720tccaaacacatgattgctgtcagtactaatcttaagcttgtcaaggagttcggaattgac780cctaacaacgcttttgcgttttgggactgggttggcggccgctatagtgtttgcagtgct840gtcggtgttctgcccttatctcttcagtatggatttccaattgttcagaaatttctggag900ggtgcttctagcattgacaatcatgtccatacatcttcatttgagaaaaatatacctgta960ctccttggtttgttgagtgtgtggaatgtttcatttctcggatatccggctagggcaata1020ttgccatactgtcaagcacttgagaaactagcaccacatattcagcagcttagcatggag1080agtaatggaaagggtgtctccattgatggtgttcgacttccatttgaggctggtgaaatt1140gattttggtgaacctggaacaaacgggcaacacagcttctatcaattaatccatcaggga1200agagttattccttgtgattttattggcgtcataaaaagccagcagcccgtttacctgaaa1260ggggaaactgttagcaatcatgatgagttgatgtccaatttctttgctcagcctgatgcg1320cttgcctatgggaagactcctgagcaattacacagcgagaaagttcccgaaaatcttatc1380cctcacaagacttttcagggcaaccggccatcactgagtttcttgctgtcttcgttatct1440gcctatgagattggacagcttttatccatctatgagcaccggatcgcagttcagggtttc1500atatggggaatcaactcgtttgaccagtggggagtggagctgggcaagtcactggcttct1560acagtgaggaaacagttgcatgcatcacgcatggaaggaaagcccgtcgagggcttcaac1620cccagcagcgcaagtttgctcacacggtttcttgcggttaaaccatccaccccatatgac1680acaacagtgcttccaaaagtgtaa1704<210>2<211>567<212>PRT<213>人工序列<220><223><400>2MetAlaSerProAlaLeuIleSerAspThrAspGlnTrpLysAlaLeu151015GlnAlaHisValGlyAlaIleHisLysThrHisLeuArgAspLeuMet202530ThrAspAlaAspArgCysLysAlaMetThrAlaGluPheGluGlyVal354045TyrLeuAspTyrSerArgGlnGlnAlaThrThrGluThrIleAspLys505560LeuPheLysLeuAlaGluAlaAlaLysLeuLysGluLysIleAspLys65707580MetPheLysGlyGluLysIleAsnThrThrGluAsnArgSerValLeu859095HisValAlaLeuArgAlaProArgAspAlaValIleAsnSerAspGly100105110ValAsnValValProGluValTrpAlaValLysAspLysIleLysGln115120125PheSerGluThrPheArgSerGlySerTrpValGlyAlaThrGlyLys130135140ProLeuThrAsnValValSerValGlyIleGlyGlySerPheLeuGly145150155160ProLeuPheValHisThrAlaLeuGlnThrAspProGluAlaAlaGlu165170175AlaAlaLysGlyArgGlnLeuArgPheLeuAlaAsnValAspProVal180185190AspValAlaArgSerIleLysAspLeuAspProAlaThrThrLeuVal195200205ValValValSerLysThrPheThrThrAlaGluThrMetLeuAsnAla210215220ArgThrIleLysGluTrpIleValSerSerLeuGlyProGlnAlaVal225230235240SerLysHisMetIleAlaValSerThrAsnLeuLysLeuValLysGlu245250255PheGlyIleAspProAsnAsnAlaPheAlaPheTrpAspTrpValGly260265270GlyArgTyrSerValCysSerAlaValGlyValLeuProLeuSerLeu275280285GlnTyrGlyPheProIleValGlnLysPheLeuGluGlyAlaSerSer290295300IleAspAsnHisValHisThrSerSerPheGluLysAsnIleProVal305310315320LeuLeuGlyLeuLeuSerValTrpAsnValSerPheLeuGlyTyrPro325330335AlaArgAlaIleLeuProTyrCysGlnAlaLeuGluLysLeuAlaPro340345350HisIleGlnGlnLeuSerMetGluSerAsnGlyLysGlyValSerIle355360365AspGlyValArgLeuProPheGluAlaGlyGluIleAspPheGlyGlu370375380ProGlyThrAsnGlyGlnHisSerPheTyrGlnLeuIleHisGlnGly385390395400ArgValIleProCysAspPheIleGlyValIleLysSerGlnGlnPro405410415ValTyrLeuLysGlyGluThrValSerAsnHisAspGluLeuMetSer420425430AsnPhePheAlaGlnProAspAlaLeuAlaTyrGlyLysThrProGlu435440445GlnLeuHisSerGluLysValProGluAsnLeuIleProHisLysThr450455460PheGlnGlyAsnArgProSerLeuSerPheLeuLeuSerSerLeuSer465470475480AlaTyrGluIleGlyGlnLeuLeuSerIleTyrGluHisArgIleAla485490495ValGlnGlyPheIleTrpGlyIleAsnSerPheAspGlnTrpGlyVal500505510GluLeuGlyLysSerLeuAlaSerThrValArgLysGlnLeuHisAla515520525SerArgMetGluGlyLysProValGluGlyPheAsnProSerSerAla530535540SerLeuLeuThrArgPheLeuAlaValLysProSerThrProTyrAsp545550555560ThrThrValLeuProLysVal565<210>3<211>1704<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>3atggcgtcgccggcgctcatctccgacaccgaccagtggaaggccctccaggcgcacgtc60ggcgcgatccacaagacgcacctgcgcgacctcatgacggacgccgaccgatgcaaggca120atgacggcggaattcgaaggcgtctacctggactactcgaggcagcaggccaccacggag180accatcgacaagctgttcaagctggcagaggctgcaaagctcaaggagaagattgacaag240atgtttaaaggcgaaaagataaataccactgagaacagatcagtgctccatgtggctcta300agggctccaagagacgcagtcataaacagtgacggtgtgaatgtggtccccgaagtttgg360gctgttaaggataaaatcaagcagttttcagagactttcagaagtggctcatgggttggg420gcaactgggaaaccattgacaaatgttgtctcggtcgggattggtggtagcttccttgga480cctctgtttgtgcatacggctctccagactgacccggaagcagcggaagctgccaaaggc540cgacaactgagatttcttgcaaatgttgatccagttgatgttgcacggagcatcaaagat600ttagatcctgcaaccactcttgttgtggttgtctcaaagaccttcacgacagctgaaaca660atgttaaatgctcgaactatcaaggagtggattgtctcttctcttggacctcaggctgtt720tccaaacacatgattgctgtcagtactaatcttaagcttgtcaaggagttcggaattgac780cctaacaacgcttttgcgttttgggactgggttggcggccgctatagtgtttgcagtgct840gtcggtgttctgcccttatctcttcagtatggatttccaattgttcagaaatttctggag900ggtgcttctagcattgacaatcatgtccatacatcttcatttgagaaaaatatacctgta960ctccttggtttgttgagtgtgtggaatgtttcatttctcggatatccggctagggcaata1020ttgccatactgtcaagcacttgagaaactagcaccacatattcagcagcttagcatggag1080agtaatggaaagggtgtctccattgatggtgttcgacttccatttgaggctggtgaaatt1140gattttggtgaacctggaacaaacgggcaacacagcttctatcaattaatccatcaggga1200agagttattccttgtgattttattggcgtcataaaaagccagcagcccgtttacctgaaa1260ggggaaactgttagcaatcatgatgagttgatgtccaatttctttgctcagcctgatgcg1320cttgcctatgggaagactcctgagcaattacacagcgagaaagttcccgaaaatcttatc1380cctcacaagacttttcagggcaaccggccatcactgagtttcttgctgtcttcgttatct1440gcctatgagattggacagcttttatccatctatgagcaccggatcgcagttcagggtttc1500atatggggaatcaactcgtttgaccagtggggagtggagctgggcaagtcactggcttct1560acagtgaggaaacagttgcatgcatcacgcatggaaggaaagcccgtcgagggcttcaac1620cccagcgcggcaagtttgctcacacggtttcttgcggttaaaccatccaccccatatgac1680acaacagtgcttccaaaagtgtaa1704<210>4<211>567<212>PRT<213>人工序列<220><223><400>4MetAlaSerProAlaLeuIleSerAspThrAspGlnTrpLysAlaLeu151015GlnAlaHisValGlyAlaIleHisLysThrHisLeuArgAspLeuMet202530ThrAspAlaAspArgCysLysAlaMetThrAlaGluPheGluGlyVal354045TyrLeuAspTyrSerArgGlnGlnAlaThrThrGluThrIleAspLys505560LeuPheLysLeuAlaGluAlaAlaLysLeuLysGluLysIleAspLys65707580MetPheLysGlyGluLysIleAsnThrThrGluAsnArgSerValLeu859095HisValAlaLeuArgAlaProArgAspAlaValIleAsnSerAspGly100105110ValAsnValValProGluValTrpAlaValLysAspLysIleLysGln115120125PheSerGluThrPheArgSerGlySerTrpValGlyAlaThrGlyLys130135140ProLeuThrAsnValValSerValGlyIleGlyGlySerPheLeuGly145150155160ProLeuPheValHisThrAlaLeuGlnThrAspProGluAlaAlaGlu165170175AlaAlaLysGlyArgGlnLeuArgPheLeuAlaAsnValAspProVal180185190AspValAlaArgSerIleLysAspLeuAspProAlaThrThrLeuVal195200205ValValValSerLysThrPheThrThrAlaGluThrMetLeuAsnAla210215220ArgThrIleLysGluTrpIleValSerSerLeuGlyProGlnAlaVal225230235240SerLysHisMetIleAlaValSerThrAsnLeuLysLeuValLysGlu245250255PheGlyIleAspProAsnAsnAlaPheAlaPheTrpAspTrpValGly260265270GlyArgTyrSerValCysSerAlaValGlyValLeuProLeuSerLeu275280285GlnTyrGlyPheProIleValGlnLysPheLeuGluGlyAlaSerSer290295300IleAspAsnHisValHisThrSerSerPheGluLysAsnIleProVal305310315320LeuLeuGlyLeuLeuSerValTrpAsnValSerPheLeuGlyTyrPro325330335AlaArgAlaIleLeuProTyrCysGlnAlaLeuGluLysLeuAlaPro340345350HisIleGlnGlnLeuSerMetGluSerAsnGlyLysGlyValSerIle355360365AspGlyValArgLeuProPheGluAlaGlyGluIleAspPheGlyGlu370375380ProGlyThrAsnGlyGlnHisSerPheTyrGlnLeuIleHisGlnGly385390395400ArgValIleProCysAspPheIleGlyValIleLysSerGlnGlnPro405410415ValTyrLeuLysGlyGluThrValSerAsnHisAspGluLeuMetSer420425430AsnPhePheAlaGlnProAspAlaLeuAlaTyrGlyLysThrProGlu435440445GlnLeuHisSerGluLysValProGluAsnLeuIleProHisLysThr450455460PheGlnGlyAsnArgProSerLeuSerPheLeuLeuSerSerLeuSer465470475480AlaTyrGluIleGlyGlnLeuLeuSerIleTyrGluHisArgIleAla485490495ValGlnGlyPheIleTrpGlyIleAsnSerPheAspGlnTrpGlyVal500505510GluLeuGlyLysSerLeuAlaSerThrValArgLysGlnLeuHisAla515520525SerArgMetGluGlyLysProValGluGlyPheAsnProSerAlaAla530535540SerLeuLeuThrArgPheLeuAlaValLysProSerThrProTyrAsp545550555560ThrThrValLeuProLysVal565當前第1頁1 2 3