【
技術(shù)領(lǐng)域：
】本發(fā)明涉及大量的細(xì)胞的培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)裝置及試劑盒。
背景技術(shù)：
：【細(xì)胞培養(yǎng)】細(xì)胞在生物體內(nèi)一般作為取三維結(jié)構(gòu)的集團(tuán)存在。一方面，在人工環(huán)境中培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，一般使用細(xì)胞在培養(yǎng)容器底面以單層狀的形二維培養(yǎng)的古典的平面培養(yǎng)法，或在使細(xì)胞在液體培養(yǎng)液中分散的狀態(tài)下培養(yǎng)的懸浮培養(yǎng)法。對(duì)于在平面培養(yǎng)法中使用的細(xì)胞適宜是粘接性比較高的細(xì)胞，但在使用適宜的細(xì)胞時(shí)，由培養(yǎng)環(huán)境的差異，細(xì)胞的性質(zhì)有時(shí)大變化。對(duì)于懸浮培養(yǎng)法也存在適宜的細(xì)胞和不適宜的細(xì)胞。疫苗、酶、激素、抗體、細(xì)胞因子等在醫(yī)療用途中使用的生物體內(nèi)蛋白質(zhì)等的需要上升，使用細(xì)胞培養(yǎng)的生物體內(nèi)蛋白質(zhì)等的大量產(chǎn)生受到關(guān)注。另外，伴隨在再生醫(yī)療中的細(xì)胞移植等受到關(guān)注，效率并且簡(jiǎn)便地培養(yǎng)大量的細(xì)胞的方法論受到關(guān)注。對(duì)于大腸桿菌等的懸浮細(xì)胞，在大型培養(yǎng)槽大量培養(yǎng)的技術(shù)得到研究。在使用大型培養(yǎng)槽的懸浮細(xì)胞的大量培養(yǎng)中，大量的培養(yǎng)液和攪拌裝置變得必要。一方面，使用附著細(xì)胞而進(jìn)行物質(zhì)產(chǎn)生研究也隨著使用的細(xì)胞的研究的進(jìn)展而集合了較多的關(guān)注。當(dāng)要大量培養(yǎng)附著細(xì)胞時(shí)，在經(jīng)典的平面培養(yǎng)法中，由于細(xì)胞僅二維地展開(kāi)，多的培養(yǎng)面積變得必要。作為用立體環(huán)境培養(yǎng)大量的細(xì)胞的方法，也報(bào)告有使用生物反應(yīng)器或細(xì)胞培養(yǎng)載體的方法(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1、專(zhuān)利文獻(xiàn)1)。作為使用生物反應(yīng)器的方法，有在柱內(nèi)蓄積玻璃纖維等的纖維狀物質(zhì)，在該空間繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞而產(chǎn)生物質(zhì)的方法(專(zhuān)利文獻(xiàn)2)。另外，作為代表性的細(xì)胞培養(yǎng)用載體，作為可附著培育細(xì)胞的小粒子的微載體成為廣泛的研究對(duì)象(專(zhuān)利文獻(xiàn)3、4)。如在專(zhuān)利文獻(xiàn)4中以病毒產(chǎn)生作為例示，為了由使用微載體的細(xì)胞培養(yǎng)法增加產(chǎn)生物的量而升高效率，達(dá)成高密度的細(xì)胞培養(yǎng)成為最重要的課題。另外，如何效率并且簡(jiǎn)便地使細(xì)胞增殖，可在作為載體的微載體上移植－接種細(xì)胞也成為重要的課題。關(guān)于這方面，在使用微載體的細(xì)胞培養(yǎng)系中，為了微載體不互相凝集，有充分地?cái)嚢瑁瓟U(kuò)散的必要。從而，由于需要僅能將使微載體分散的培養(yǎng)液充分地?cái)嚢瑁瓟U(kuò)散的容積，在可培養(yǎng)的細(xì)胞的密度上有上限。再者，為了分離微載體和培養(yǎng)液，有用可區(qū)分細(xì)的粒子的濾器分離的必要的等，在量及效率上尚還有課題。作為與微載體培養(yǎng)不同的方法，也發(fā)現(xiàn)通過(guò)使用甲基纖維素或膠凝糖膠的3維培養(yǎng)法繼續(xù)大量培養(yǎng)球形形狀的細(xì)胞的方法(非專(zhuān)利文獻(xiàn)2、3)，但在作為限于球形的方法之上，仔細(xì)核對(duì)培養(yǎng)狀況而使球形小粒塊化的等，煩瑣的作業(yè)變得必要。在向簡(jiǎn)便并且自動(dòng)化的過(guò)程中，需要可培養(yǎng)大量的數(shù)的細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)法的開(kāi)拓和構(gòu)建。作為使用載體培養(yǎng)附著性細(xì)胞的系統(tǒng)，使用中空絲培養(yǎng)或纖維素立方體等的生物反應(yīng)器或微載體培養(yǎng)法被廣泛開(kāi)發(fā)。作為古典方法論，如專(zhuān)利文獻(xiàn)5所示，是指通過(guò)向細(xì)胞和培養(yǎng)載體的集合體連續(xù)供給通入5％co2含有空氣的培養(yǎng)基，可達(dá)成繼續(xù)的培養(yǎng)。但是，在這樣的方法中有裝置變復(fù)雜化的難點(diǎn)。一方面，在實(shí)際的生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)中，作為細(xì)胞培養(yǎng)載體最多用微載體(例如非專(zhuān)利文獻(xiàn)4)。使此微載體與培養(yǎng)基供給系統(tǒng)組合使用，進(jìn)行持續(xù)的培養(yǎng)的方法繼續(xù)得到研究(專(zhuān)利文獻(xiàn)6、7及非專(zhuān)利文獻(xiàn)5)。但是，在使用微載體的方法中，裝置復(fù)雜化的例子多，另外，例如與生物體的系統(tǒng)比較，有無(wú)法使培養(yǎng)效率充分地提高的課題。在專(zhuān)利文獻(xiàn)8中示被認(rèn)為更有效率的方法論的想法，但未示實(shí)際進(jìn)行培養(yǎng)的具體例，另外，也未示對(duì)于該方法論適宜的具體的原料。希望更簡(jiǎn)便并且有效的連續(xù)型細(xì)胞培養(yǎng)裝置的確立?！揪埘啺范嗫踪|(zhì)膜】聚酰亞胺是重復(fù)單位中含酰亞胺鍵的高分子的總稱(chēng)。芳香族聚酰亞胺是指芳香族化合物直接以酰亞胺鍵連接的高分子。由于芳香族聚酰亞胺是芳香族和芳香族經(jīng)酰亞胺鍵而具有共價(jià)結(jié)構(gòu)，從而具有剛直且強(qiáng)固的分子結(jié)構(gòu)，并且，由于酰亞胺鍵具有強(qiáng)的分子間力，從而有非常高的水平的熱的、機(jī)械的、化學(xué)性質(zhì)。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜在本發(fā)明前一直作為濾器、低介電常數(shù)膜、燃料電池用電解質(zhì)膜等，特別為以電池關(guān)系作為中心的用途利用。專(zhuān)利文獻(xiàn)9～11中特別記載了，盡管氣體等的物質(zhì)透過(guò)性優(yōu)良，空孔率高，兩表面的平滑性優(yōu)良，相對(duì)強(qiáng)度高，高空孔率，但對(duì)于向膜厚度方向的壓縮應(yīng)力的耐力優(yōu)良的有多數(shù)大空隙的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。這些均是經(jīng)由酰胺酸制成的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜?！粳F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)】【專(zhuān)利文獻(xiàn)】專(zhuān)利文獻(xiàn)1：特愿昭60-205822專(zhuān)利文獻(xiàn)2：wo2008/084857專(zhuān)利文獻(xiàn)3：特開(kāi)平7-313151專(zhuān)利文獻(xiàn)4：wo2003/054174專(zhuān)利文獻(xiàn)5：特公平6-30570專(zhuān)利文獻(xiàn)6：特公平7-8229專(zhuān)利文獻(xiàn)7：專(zhuān)利第4510425號(hào)專(zhuān)利文獻(xiàn)8：特開(kāi)2001-190270專(zhuān)利文獻(xiàn)9：wo2010/038873專(zhuān)利文獻(xiàn)10：特開(kāi)2011-219585專(zhuān)利文獻(xiàn)11：特開(kāi)2011-219586【非專(zhuān)利文獻(xiàn)】非專(zhuān)利文獻(xiàn)1：ogataetal.,journaloffermentationandbioengineeringvol.77,no.1,p.46-511994非專(zhuān)利文獻(xiàn)2：otsujietal.,stemcellreportsvol.2734-745may6,2014非專(zhuān)利文獻(xiàn)3：http://www.nissanchem.co.jp/news_relese/news/n2014_04_25.pdf非專(zhuān)利文獻(xiàn)4：gehealthcarelifesciencesapplicationnote29-0929-38aa非專(zhuān)利文獻(xiàn)5：f.abeilleetal.,labchip,2014,14,3510技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：【發(fā)明要解決的技術(shù)課題】本發(fā)明以提供大量的細(xì)胞的培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)裝置及試劑盒作為目的。另外，本發(fā)明以提供更簡(jiǎn)便并且有效的連續(xù)型細(xì)胞培養(yǎng)裝置及連續(xù)型細(xì)胞培養(yǎng)方法作為目的?！窘鉀Q課題的技術(shù)方案】雖無(wú)限定，本發(fā)明優(yōu)選含以下的實(shí)施方式。[實(shí)施方式1]細(xì)胞的大量培養(yǎng)方法，其包括：(1)將細(xì)胞應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，及(2)將應(yīng)用了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)基而進(jìn)行培養(yǎng)。[實(shí)施方式2]實(shí)施方式1所述的方法，其中將2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上下或左右積層到細(xì)胞培養(yǎng)基中而使用。[實(shí)施方式3]實(shí)施方式1或2所述的方法，其中將聚酰亞胺多孔質(zhì)膜(i)折疊，(ii)卷成輪狀，(iii)將片或小片用絲狀的結(jié)構(gòu)體連接，或者(iv)結(jié)成繩狀而在細(xì)胞培養(yǎng)容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮或固定而使用。[實(shí)施方式4]實(shí)施方式1～3之任一項(xiàng)所述的方法，其中在工序(2)中的培養(yǎng)中，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一部分或整體不與細(xì)胞培養(yǎng)基的液相接觸。[實(shí)施方式5]實(shí)施方式1～4之任一項(xiàng)所述的方法，其中在工序(2)中的培養(yǎng)中，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積是含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的10000倍或比其少。[實(shí)施方式6]實(shí)施方式1～5之任一項(xiàng)所述的方法，其中在工序(2)中的培養(yǎng)中，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積是含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的100倍或比其少。[實(shí)施方式7]實(shí)施方式1～6之任一項(xiàng)所述的方法，其中在工序(2)中的培養(yǎng)用從設(shè)置于細(xì)胞培養(yǎng)容器外的細(xì)胞培養(yǎng)基供給器件向細(xì)胞培養(yǎng)容器中連續(xù)或間歇供給細(xì)胞培養(yǎng)基的系進(jìn)行。[實(shí)施方式8]實(shí)施方式7所述的方法，其使細(xì)胞培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)基供給器件和細(xì)胞培養(yǎng)容器之間循環(huán)。[實(shí)施方式9]實(shí)施方式7或8所述的方法，其中上述系統(tǒng)是含作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的培養(yǎng)單位和作為細(xì)胞培養(yǎng)基供給器件的培養(yǎng)基供給單位的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位是收容用于負(fù)載細(xì)胞的1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)單位，是具備培養(yǎng)基供給口及培養(yǎng)基排出口的培養(yǎng)單位，培養(yǎng)基供給單位是具備培養(yǎng)基收納容器、培養(yǎng)基供給線和經(jīng)培養(yǎng)基供給線連續(xù)或間歇輸送培養(yǎng)基的送液泵的培養(yǎng)基供給單位，其中培養(yǎng)基供給線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器內(nèi)的培養(yǎng)基接觸，培養(yǎng)基供給線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基供給口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)。[實(shí)施方式10]實(shí)施方式9所述的方法，其中培養(yǎng)單位是不具備空氣供給口及空氣排出口的培養(yǎng)單位。[實(shí)施方式11]實(shí)施方式9或10所述的方法，其中培養(yǎng)單位還具備培養(yǎng)基排出線，其中培養(yǎng)基排出線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器連接，培養(yǎng)基排出線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基排出口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)，培養(yǎng)基能在培養(yǎng)基供給單位和培養(yǎng)單位循環(huán)。[實(shí)施方式12]實(shí)施方式1～11之任一項(xiàng)所述的方法，其中細(xì)胞選自動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞、植物細(xì)胞、酵母菌及細(xì)菌。[實(shí)施方式13]實(shí)施方式12所述的方法，其中動(dòng)物細(xì)胞是屬于脊椎動(dòng)物門(mén)的動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞。[實(shí)施方式14]實(shí)施方式12所述的方法，其中細(xì)菌選自乳酸菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及藍(lán)細(xì)菌。[實(shí)施方式15]權(quán)利要求1～14之任一項(xiàng)所述的方法，其中聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是含由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式16]實(shí)施方式15所述的方法，其中聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是通過(guò)使含由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰胺酸溶液和著色前體的聚酰胺酸溶液組合物成形之后，以250℃以上熱處理得到的著色的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式17]實(shí)施方式15或16所述的方法，其中聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是有2個(gè)不同的表層面和大空隙層的多層結(jié)構(gòu)的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式18]用于在實(shí)施方式1～17之任一項(xiàng)所述的方法中使用的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式19]實(shí)施方式18所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上下或左右積層的，。[實(shí)施方式20]用于在實(shí)施方式1～17之任一項(xiàng)所述的方法中使用的試劑盒，其含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式21]聚酰亞胺多孔質(zhì)膜用于實(shí)施方式1～17之任一項(xiàng)所述的方法的用途。[實(shí)施方式22]細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其含收容用于負(fù)載細(xì)胞的1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)單位，其為具備培養(yǎng)基供給口及培養(yǎng)基排出口的培養(yǎng)單位，及培養(yǎng)基供給單位，其為具備培養(yǎng)基收納容器、培養(yǎng)基供給線和經(jīng)培養(yǎng)基供給線連續(xù)或間歇輸送培養(yǎng)基的送液泵的培養(yǎng)基供給單位，其中培養(yǎng)基供給線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器內(nèi)的培養(yǎng)基接觸，培養(yǎng)基供給線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基供給口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)。[實(shí)施方式23]實(shí)施方式22所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位不具備空氣供給口、空氣排出口、及氧交換膜。[實(shí)施方式24]實(shí)施方式22所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位還具備空氣供給口及空氣排出口、或者氧交換膜。[實(shí)施方式25]實(shí)施方式24所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中空氣供給口是含5％co2的氣體的空氣供給口，空氣排出口是含5％co2的氣體的空氣排出口。[實(shí)施方式26]實(shí)施方式22～25之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位無(wú)用于攪拌聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的器件。[實(shí)施方式27]實(shí)施方式22～25之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位還有用于攪拌聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的器件。[實(shí)施方式28]實(shí)施方式22～27之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位還具備培養(yǎng)基排出線，其中培養(yǎng)基排出線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器連接，培養(yǎng)基排出線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基排出口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)，培養(yǎng)基能在培養(yǎng)基供給單位和培養(yǎng)單位循環(huán)。[實(shí)施方式29]實(shí)施方式22～27之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位還具備培養(yǎng)基排出線，其中培養(yǎng)基排出線的第一端部與培養(yǎng)基回收單位連接，培養(yǎng)基排出線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基排出口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)，能將排出的培養(yǎng)基回收到培養(yǎng)基回收單位內(nèi)。[實(shí)施方式30]實(shí)施方式22～29之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其還含用于振蕩培養(yǎng)單位的器件。[實(shí)施方式31]實(shí)施方式22～30之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位由可撓性袋構(gòu)成。[實(shí)施方式32]實(shí)施方式31所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中可撓性袋是氣體透過(guò)性塑料袋。[實(shí)施方式33]實(shí)施方式22～32之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜被裝載到以相對(duì)于水平45度以下的角度傾斜的剛體之上，以從聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的上端部近傍供給培養(yǎng)基的方式設(shè)置有培養(yǎng)基供給線的第二端部，以從聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的下端部近傍排出培養(yǎng)基的方式設(shè)置有培養(yǎng)基排出線的第二端部。[實(shí)施方式34]實(shí)施方式33所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中剛體是金屬網(wǎng)。[實(shí)施方式35]實(shí)施方式33或34所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜和剛體被收容到殼內(nèi)，殼被收容到培養(yǎng)單位內(nèi)。[實(shí)施方式36]實(shí)施方式33～35之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中以包被1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的上表面的一部分或全部的方式還裝載有比聚酰亞胺多孔質(zhì)膜平均孔徑大的多孔質(zhì)片。[實(shí)施方式37]實(shí)施方式36所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中多孔質(zhì)片選自無(wú)紡布、紗布、及海綿。[實(shí)施方式38]實(shí)施方式33～37之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)基供給線的第二端部的近傍還設(shè)置有除沫單位。[實(shí)施方式39]實(shí)施方式22～38之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上下積層。[實(shí)施方式40]實(shí)施方式22～39之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜折疊。[實(shí)施方式41]實(shí)施方式22～40之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一部分或整體由培養(yǎng)基濕潤(rùn)。[實(shí)施方式42]實(shí)施方式22～41之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜表面的一部分或整體不與培養(yǎng)基的液相接觸。[實(shí)施方式43]實(shí)施方式22～42之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位內(nèi)所含的培養(yǎng)基的體積是含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的10000倍或比其少。[實(shí)施方式44]實(shí)施方式22～43之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位內(nèi)所含的培養(yǎng)基的體積是含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的100倍或比其少。[實(shí)施方式45]實(shí)施方式22～43之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位內(nèi)所含的培養(yǎng)基的體積是含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的5倍或比其少。[實(shí)施方式46]實(shí)施方式22～45之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是含由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式47]實(shí)施方式46所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是通過(guò)使含由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰胺酸溶液和著色前體的聚酰胺酸溶液組合物成形之后，在250℃以上熱處理而得到的著色的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式48]細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其包括在溫育器內(nèi)設(shè)置實(shí)施方式22～47之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，培養(yǎng)細(xì)胞。[實(shí)施方式49]用于回收由細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)的方法，其包括：在溫育器內(nèi)設(shè)置實(shí)施方式22～47之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，培養(yǎng)細(xì)胞，及連續(xù)或間歇地回收與細(xì)胞接觸的培養(yǎng)基。[實(shí)施方式50]聚酰亞胺多孔質(zhì)膜用于實(shí)施方式22～47之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的用途。[實(shí)施方式51]實(shí)施方式22～47之任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的用途，其用于回收由細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)?！景l(fā)明效果】本發(fā)明當(dāng)使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，基于通過(guò)使多數(shù)的片以各種各樣的形態(tài)共存于限定的空間，可有效培養(yǎng)大量的細(xì)胞見(jiàn)解。由本發(fā)明的方法，省空間、效率并且簡(jiǎn)便地培養(yǎng)大量的細(xì)胞變得可能。另外，本發(fā)明作為細(xì)胞培養(yǎng)載體，通過(guò)使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，在培養(yǎng)空間或培養(yǎng)基的量少的條件下，也使簡(jiǎn)便并且有效的連續(xù)型細(xì)胞培養(yǎng)成為可能。由于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜有微親水性的多孔質(zhì)特性，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜內(nèi)進(jìn)行穩(wěn)定的液保持，即使干燥也保持強(qiáng)的濕潤(rùn)環(huán)境。因此，與以往的細(xì)胞培養(yǎng)裝置比較，即使用極少量的培養(yǎng)基，也可達(dá)成細(xì)胞的生存及增殖。另外，由于即使聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一部分或全部露出到空氣的狀態(tài)也能培養(yǎng)，可對(duì)于細(xì)胞進(jìn)行有效的氧供給，可培養(yǎng)大量的細(xì)胞。由本發(fā)明，因?yàn)槭褂玫呐囵B(yǎng)基的量極少，另外，可作為培養(yǎng)載體的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜露出到氣相，向細(xì)胞的氧供給由擴(kuò)散充分地進(jìn)行。從而，在本發(fā)明中不特別以氧供給裝置作為必要。再者，由于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜也可升高緊密附著性而積層而使用，在非常小的體積中大量并且穩(wěn)定培養(yǎng)細(xì)胞變得可能。另外，在本發(fā)明中，通過(guò)接近聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而連續(xù)或間歇地供給培養(yǎng)基，不使培養(yǎng)基滯留而連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞也變得可能。再者，由本發(fā)明，即使在以往附著細(xì)胞而傳代變得必要的匯合的狀態(tài)時(shí)，也通過(guò)使未接種細(xì)胞及/或有細(xì)胞植活的空間的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜緊密附著(例如，挾持的，積層的等)于成匯合或亞匯合的細(xì)胞培養(yǎng)載體，從而不使用以往使用的胰蛋白酶等，擴(kuò)大培養(yǎng)變得可能?！靖綀D說(shuō)明】【圖1】圖1示使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞培養(yǎng)的模型圖?！緢D2】圖2示細(xì)胞培養(yǎng)裝置的一例?！緢D3】圖3示使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而大量培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞結(jié)果。【圖4】圖4示使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而大量培養(yǎng)cho-k1細(xì)胞結(jié)果。【圖5】圖5示使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而大量培養(yǎng)cho-k1細(xì)胞結(jié)果。【圖6】圖6示使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而大量培養(yǎng)cho-k1細(xì)胞結(jié)果?！緢D7】圖7是示使用本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的cho-k1細(xì)胞的培養(yǎng)結(jié)果的圖?！緢D8】圖8是示產(chǎn)生人抗il-8抗體的chodp-12細(xì)胞的培養(yǎng)結(jié)果的圖。【圖9】圖9是示產(chǎn)生人抗il-8抗體的chodp-12細(xì)胞的培養(yǎng)結(jié)果的圖。【圖10】圖10是示使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜及市售的3維培養(yǎng)支架的基因重組cho-k1細(xì)胞的培養(yǎng)結(jié)果的圖?！緢D11】圖11是示使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜及市售的3維培養(yǎng)支架的人成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)結(jié)果的圖的【圖12】示使用可撓性袋的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的例。向氧透過(guò)性一次性培養(yǎng)袋放入接種細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜和培養(yǎng)基，在其上設(shè)置培養(yǎng)基的供給線及排出線。向5％co2供給型的37℃的溫育器放入裝置整體，執(zhí)行培養(yǎng)?！緢D13】示使用旋轉(zhuǎn)瓶的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的例。向旋轉(zhuǎn)瓶放入接種細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜和培養(yǎng)基，在其上設(shè)置培養(yǎng)基的供給線及排出線。連接含有5％co2的空氣線，向37℃的溫育器放入裝置整體，執(zhí)行培養(yǎng)?！緦?shí)施方式】【i.細(xì)胞的培養(yǎng)方法】本發(fā)明涉及細(xì)胞的大量培養(yǎng)方法。再者，通過(guò)參考在本說(shuō)明書(shū)中援用國(guó)際申請(qǐng)編號(hào)pct/jp2014/070407的全內(nèi)容。本發(fā)明的細(xì)胞的培養(yǎng)方法包括將細(xì)胞應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，培養(yǎng)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜適宜于細(xì)胞的粘接、培養(yǎng)，由此想到本發(fā)明。本發(fā)明的方法以在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上應(yīng)用細(xì)胞，在聚酰亞胺膜的表面或內(nèi)部含培養(yǎng)細(xì)胞作為特征。【1.細(xì)胞向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的應(yīng)用】細(xì)胞向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜應(yīng)用的具體工序不特別限定。采用本說(shuō)明書(shū)中記載的工序、或者，對(duì)于將細(xì)胞應(yīng)用于膜狀的載體適宜的任意的方法是可能的。雖無(wú)限定，在本發(fā)明的方法中，細(xì)胞向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的應(yīng)用，例如，含如下所述的實(shí)施方式。(a)包括向上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面接種細(xì)胞的工序的實(shí)施方式；(b)包括如下工序的實(shí)施方式；在上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的干燥的表面載乘細(xì)胞懸浮液，放置，或移動(dòng)上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而促進(jìn)液的流出，或刺激表面的一部分而使細(xì)胞懸浮液被吸入上述膜，進(jìn)而，在上述膜內(nèi)蓄積細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞，使水分流出；以及(c)包括如下工序的實(shí)施方式；將上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一面或兩面用細(xì)胞培養(yǎng)液或滅菌的液體濕潤(rùn)，向上述濕潤(rùn)的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜裝填細(xì)胞懸浮液，進(jìn)而，在上述膜內(nèi)蓄積細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞，使水分流出。(a)的實(shí)施方式含直接在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面接種細(xì)胞、細(xì)胞塊。或者，也含向細(xì)胞懸浮液中放入聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，從膜的表面浸潤(rùn)細(xì)胞培養(yǎng)液的實(shí)施方式。接種到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面上的細(xì)胞粘接到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，進(jìn)入多孔的內(nèi)部。優(yōu)選為，即使不特別從外部加物理或化學(xué)的力，細(xì)胞也自發(fā)粘接到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。接種到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面上的細(xì)胞能在膜的表面及/或內(nèi)部穩(wěn)定生長(zhǎng)－增殖。細(xì)胞根據(jù)生長(zhǎng)－增殖的膜的位置，可取各種的不同的形態(tài)。在(b)的實(shí)施方式中，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的干燥的表面載乘細(xì)胞懸浮液。通過(guò)放置聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，或移動(dòng)上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而促進(jìn)液的流出，或刺激表面的一部分而將細(xì)胞懸浮液吸入到上述膜，細(xì)胞懸浮液在膜中滲透。不被理論束縛，這被認(rèn)為是由于來(lái)源于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的各表面形狀等的性質(zhì)的。由本實(shí)施方式，細(xì)胞被吸入裝填膜的細(xì)胞懸浮液的位置而接種。或者，(c)的如實(shí)施方式一樣，由于將上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一面或兩面的部分或整體用細(xì)胞培養(yǎng)液或滅菌的液體濕潤(rùn)，從而也可向濕潤(rùn)的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜裝填細(xì)胞懸浮液。此時(shí)，細(xì)胞懸浮液的通過(guò)速度大大提高。例如，可使用以膜的飛散防止作為主目的將膜極一部分濕潤(rùn)的方法(之后，將其記作“一點(diǎn)濕法”)。一點(diǎn)濕法與不實(shí)質(zhì)上濕潤(rùn)膜的干法((b)的實(shí)施方式)大致相近。但是，對(duì)于濕潤(rùn)的小部分，認(rèn)為細(xì)胞液的膜透過(guò)變得迅速。另外，也可使用向使聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一面或兩面的整體充分地濕潤(rùn)的膜(之后，將其記作“濕膜”)裝填細(xì)胞懸浮液的方法(之后，將其記作“濕膜法”)。此時(shí)，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的整體中，細(xì)胞懸浮液的通過(guò)速度大大提高。在(b)及(c)的實(shí)施方式中，在上述膜內(nèi)蓄積細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞，使水分流出。由此，濃縮細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞的濃度的，使細(xì)胞以外的不要的成分與水分一同流出的等的處理也變得可能。有時(shí)將(a)的實(shí)施方式稱(chēng)為“自然播種”，將(b)及(c)的實(shí)施方式稱(chēng)為“吸入播種”。雖無(wú)限定，優(yōu)選為，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上活細(xì)胞選擇性地停留。從而，在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方式中，活細(xì)胞在上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜內(nèi)停留，死細(xì)胞優(yōu)先與水分一同流出。在實(shí)施方式(c)中使用的滅菌的液體不特別限定，是滅菌的緩沖液或滅菌水。緩沖液是例如，(+)及(-)dulbecco氏pbs、(+)及(-)hank氏平衡鹽溶液等。緩沖液的例示于以下的表1。【表1】成分濃度(mmol/l)濃度(g/l)nacl1378.00kcl2.70.20na2hpo4101.44kh2po41.760.24ph(-)7.47.4再者，在本發(fā)明的方法中，也包括細(xì)胞向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的應(yīng)用通過(guò)使處于懸浮狀態(tài)的粘接性細(xì)胞與聚酰亞胺多孔質(zhì)膜懸浮共存而使細(xì)胞附著到膜的實(shí)施方式(附著上)。例如，在本發(fā)明的細(xì)胞的培養(yǎng)方法中，為了將細(xì)胞應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，也可向細(xì)胞培養(yǎng)容器中放入細(xì)胞培養(yǎng)基、細(xì)胞及1或其以上的上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。在細(xì)胞培養(yǎng)基是液體的情況，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是在細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮的狀態(tài)。從聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的性質(zhì)，可將細(xì)胞粘接到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。從而，即使是不先天適宜于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜也能在細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮的狀態(tài)下培養(yǎng)。優(yōu)選為，細(xì)胞自發(fā)粘接到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜?！白园l(fā)粘接”是指即使不特別從外部加物理或化學(xué)力，細(xì)胞也停留在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面或內(nèi)部。細(xì)胞培養(yǎng)根據(jù)在細(xì)胞培養(yǎng)中的存在形態(tài)而培養(yǎng)細(xì)胞可被分類(lèi)為粘接培養(yǎng)系細(xì)胞和懸浮培養(yǎng)系細(xì)胞。粘接培養(yǎng)系細(xì)胞是附著于培養(yǎng)容器而增殖的培養(yǎng)細(xì)胞，在傳代中進(jìn)行培養(yǎng)基更換。懸浮培養(yǎng)系細(xì)胞是在培養(yǎng)基中在懸浮狀態(tài)下增殖的培養(yǎng)細(xì)胞，一般而言，在傳代時(shí)不進(jìn)行培養(yǎng)基更換，進(jìn)行稀釋培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)由于懸浮狀態(tài)、即在液體中的培養(yǎng)是可能的，大量培養(yǎng)是可能的，與僅在培養(yǎng)容器表面生長(zhǎng)的附著細(xì)胞比較，則由于是立體的培養(yǎng)，有每單位空間的能培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)多的益處。在本發(fā)明的大量培養(yǎng)方法中，在將聚酰亞胺多孔質(zhì)膜懸浮于細(xì)胞培養(yǎng)基中的狀態(tài)下使用時(shí)，也可使用2個(gè)以上的上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的小片。由于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是立體且柔性的薄膜，例如，通過(guò)使該小片在培養(yǎng)液中懸浮而使用，在一定容量的細(xì)胞培養(yǎng)基中保持有多個(gè)能培養(yǎng)的表面積的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜變得可能。在通常培養(yǎng)的情況中，容器底面積成為能細(xì)胞培養(yǎng)的面積的上限，但在使用本發(fā)明的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞培養(yǎng)中，先前保持的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的大表面積的全部成為能細(xì)胞培養(yǎng)的面積。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜通過(guò)使細(xì)胞培養(yǎng)液通過(guò)，即使在例如折疊的膜內(nèi)，營(yíng)養(yǎng)或氧等的供給也變得可能。另外，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜與以往的平面培養(yǎng)完全不同，由于是有立體的并且柔性的結(jié)構(gòu)的細(xì)胞培養(yǎng)基材，即使不選培養(yǎng)容器的形狀，也能在各種各樣的形狀、材質(zhì)、大小的培養(yǎng)容器(例如，培養(yǎng)皿、瓶、箱、袋等)內(nèi)培養(yǎng)有粘接性的細(xì)胞。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的小片的大小，形狀不特別限定。形狀可取圓、橢圓形、四角形、三角形、多角形、繩狀等任意的形。由于本發(fā)明的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜有柔軟性，可使形狀變化而使用?？蓪⒕埘啺范嗫踪|(zhì)膜加工成非平面狀，也可以立體狀加工形狀而使用。例如，也可將聚酰亞胺多孔質(zhì)膜(i)折疊，(ii)卷成輪狀，(iii)將片或小片用絲狀的結(jié)構(gòu)體連接，或者，(iv)結(jié)成繩狀而在細(xì)胞培養(yǎng)容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮或固定。通過(guò)如(i)～(iv)一樣加工形狀，與使用小片時(shí)同樣地，在一定容量的細(xì)胞培養(yǎng)基中可放入多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。再者，因?yàn)榭梢愿餍∑鳛榧象w處理，使細(xì)胞體集合化而移動(dòng)變得可能，總合的應(yīng)用性高。作為與小片集合體同樣的想法，也可將2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜在細(xì)胞培養(yǎng)基中上下或左右積層而使用。積層也包括聚酰亞胺多孔質(zhì)膜一部分重疊的實(shí)施方式。由積層培養(yǎng)，在窄的空間高密度培養(yǎng)細(xì)胞變得可能。在已經(jīng)培育細(xì)胞的膜上進(jìn)一步積層膜而設(shè)置而形成與別種細(xì)胞的多層系統(tǒng)也可能。積層的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的數(shù)不特別限定。也可將上述的本發(fā)明的細(xì)胞的培養(yǎng)方法使2種或比其更多的方法組合使用。例如，也可使用實(shí)施方式(a)～(c)的任何的方法先向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜應(yīng)用細(xì)胞，接下來(lái)，將粘接細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜懸浮培養(yǎng)?；蛘?，作為應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的工序，也可將上述實(shí)施方式(a)～(c)的任何的方法使2種或比其更多組合使用。在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選為，細(xì)胞在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面及內(nèi)部生長(zhǎng)增殖。由本發(fā)明的方法，細(xì)胞可持續(xù)增殖2天以上、更優(yōu)選為4天以上、再優(yōu)選為6天以上。在本說(shuō)明書(shū)中記載的實(shí)施例1中，觀察到細(xì)胞增加至少23天。【2.細(xì)胞】在本發(fā)明的方法中可利用的細(xì)胞的種類(lèi)不特別限定，能在任意的細(xì)胞的增殖中利用。例如，細(xì)胞選自動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞、植物細(xì)胞、酵母菌及細(xì)菌。動(dòng)物細(xì)胞大分為屬于脊椎動(dòng)物門(mén)的動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞和無(wú)脊椎動(dòng)物(屬于脊椎動(dòng)物門(mén)的動(dòng)物以外的動(dòng)物)來(lái)源的細(xì)胞。在本說(shuō)明書(shū)中的，動(dòng)物細(xì)胞的來(lái)源不特別限定。優(yōu)選為，是指屬于脊椎動(dòng)物門(mén)的動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞。脊椎動(dòng)物門(mén)含無(wú)頜類(lèi)和有頜類(lèi)，有頜類(lèi)含哺乳綱、鳥(niǎo)綱、兩棲綱、爬行綱等。優(yōu)選為，一般而言，哺乳動(dòng)物等的屬于哺乳綱的動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞。哺乳動(dòng)物不特別限定，優(yōu)選為，含小鼠、大鼠、人、猴、豬、狗、綿羊、山羊等。在本說(shuō)明書(shū)中的植物細(xì)胞的來(lái)源不特別限定。含苔蘚植物、蕨類(lèi)植物、種子植物的植物的細(xì)胞成為對(duì)象。種子植物細(xì)胞所來(lái)源的植物含單子葉植物、雙子葉植物之任何。雖無(wú)限定，在單子葉植物中，含蘭科植物、稻科植物(稻、玉米、大麥、小麥、高粱等)、莎草科植物等。在雙子葉植物中，含屬于菊亞綱、木蘭亞綱、薔薇亞綱等多的亞綱的植物。藻類(lèi)也可看作細(xì)胞來(lái)源生物。含從作為真正細(xì)菌的藍(lán)細(xì)菌(藍(lán)藻)到作為真核生物且單細(xì)胞生物(硅藻、黃綠藻、渦鞭毛藻等)及作為多細(xì)胞生物的海藻類(lèi)(紅藻、褐藻、綠藻)等的不同的組。在本說(shuō)明書(shū)中的古細(xì)菌及細(xì)菌的種類(lèi)也不特別限定。古細(xì)菌從由甲烷菌－高度好鹽菌－嗜熱好酸菌－超嗜熱菌等構(gòu)成的組選擇。細(xì)菌，例如，選自乳酸菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及藍(lán)細(xì)菌等。可在本發(fā)明的方法中利用的動(dòng)物細(xì)胞或植物細(xì)胞的種類(lèi)雖無(wú)限定，優(yōu)選為，選自多能性干細(xì)胞、組織干細(xì)胞、體細(xì)胞、及生殖細(xì)胞。在本發(fā)明中“多能性干細(xì)胞”是有向所有的組織的細(xì)胞分化的能力(分化多能性)的干細(xì)胞的總稱(chēng)。雖無(wú)限定，多能性干細(xì)胞含胚胎干細(xì)胞(es細(xì)胞)、人工多能性干細(xì)胞(ips細(xì)胞)、胚性生殖干細(xì)胞(eg細(xì)胞)、生殖干細(xì)胞(gs細(xì)胞)等。優(yōu)選為，es細(xì)胞或ips細(xì)胞。ips細(xì)胞由于也無(wú)倫理的問(wèn)題等的理由而是特別優(yōu)選的。作為多能性干細(xì)胞，能使用公知的任意的干細(xì)胞，例如，能使用國(guó)際公開(kāi)wo2009/123349(pct/jp2009/057041)中記載的多能性干細(xì)胞?！敖M織干細(xì)胞”是指能分化的細(xì)胞系列限定于特定的組織，但有能向多樣的細(xì)胞種分化的能力(分化多能性)的干細(xì)胞。例如骨髓中的造血干細(xì)胞成為血細(xì)胞的原來(lái)，神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化。此外還有構(gòu)筑肝臟的肝干細(xì)胞、成為皮膚組織的皮膚干細(xì)胞等各種各樣的種類(lèi)。優(yōu)選為，組織干細(xì)胞從間充質(zhì)干細(xì)胞、肝干細(xì)胞、胰腺干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞、或者造血干細(xì)胞選擇。“體細(xì)胞”是指構(gòu)成多細(xì)胞生物的細(xì)胞的中生殖細(xì)胞以外的細(xì)胞。在有性生殖中，不繼承到第二代。優(yōu)選為，體細(xì)胞從肝細(xì)胞、胰腺細(xì)胞、肌細(xì)胞、骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、皮膚細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、胰腺細(xì)胞、腎細(xì)胞、肺細(xì)胞、或者，淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或巨核細(xì)胞的血細(xì)胞選擇?！吧臣?xì)胞”是指具有在生殖中向第二代傳遞遺傳信息的作用的細(xì)胞。例如，含用于有性生殖的配偶子、即卵子、卵細(xì)胞、精子、精細(xì)胞、用于無(wú)性生殖的孢子等。細(xì)胞也可選自肉瘤細(xì)胞、株化細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞?！叭饬觥笔侵冈诠?、軟骨、脂肪、肌肉、血液等的非上皮性細(xì)胞來(lái)源的結(jié)締組織細(xì)胞中發(fā)生的癌，含軟部肉瘤、惡性骨腫瘤等。肉瘤細(xì)胞是來(lái)源于肉瘤的細(xì)胞?！爸昊?xì)胞”是指經(jīng)長(zhǎng)期間在體外維持，至具有一定的穩(wěn)定性質(zhì)，半永久的的傳代培養(yǎng)變得可能的培養(yǎng)細(xì)胞。存在pc12細(xì)胞(大鼠腎上腺髓質(zhì)來(lái)源)、cho細(xì)胞(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢來(lái)源)、hek293細(xì)胞(人胎兒腎臟來(lái)源)、hl-60細(xì)胞(人白血細(xì)胞來(lái)源)、hela細(xì)胞(人子宮頸癌來(lái)源)、vero細(xì)胞(非洲綠猴腎臟上皮細(xì)胞來(lái)源)、mdck細(xì)胞(狗腎臟腎小管上皮細(xì)胞來(lái)源)、hepg2細(xì)胞(人肝癌來(lái)源)等來(lái)源于含人的各種各樣的生物種的各種各樣的組織的細(xì)胞株?！稗D(zhuǎn)化細(xì)胞”是指從細(xì)胞外部導(dǎo)入核酸(dna等)，使遺傳的性質(zhì)變化的細(xì)胞。對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、細(xì)菌的轉(zhuǎn)化公知各種適宜的方法。【3.聚酰亞胺多孔質(zhì)膜】聚酰亞胺是重復(fù)單位中含酰亞胺鍵的高分子的總稱(chēng)，通常是指芳香族化合物直接以酰亞胺鍵連接的芳香族聚酰亞胺。芳香族聚酰亞胺由于芳香族和芳香族經(jīng)酰亞胺鍵而具有共價(jià)結(jié)構(gòu)，具有剛直且強(qiáng)固的分子結(jié)構(gòu)，并且，由于酰亞胺鍵具有強(qiáng)的分子間力，從而有非常高的水平的熱的、機(jī)械的、化學(xué)性質(zhì)。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是(作為主要的成分)含由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，更優(yōu)選為由由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺構(gòu)成的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜?！白鳛橹饕某煞趾笔侵缸鳛榫埘啺范嗫踪|(zhì)膜的構(gòu)成成分，基本上不含由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺以外的成分，或者即使含也不影響由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺的性質(zhì)的附加的成分。也含在成形含從四羧酸成分和二胺成分得到的聚酰胺酸溶液和著色前體的聚酰胺酸溶液組合物之后，由在250℃以上熱處理得到的著色的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜?！揪埘０匪帷烤埘０匪崾菍⑺聂人岢煞趾投烦煞志酆隙玫?。聚酰胺酸是可通過(guò)熱亞胺化或化學(xué)亞胺化閉環(huán)成為聚酰亞胺的聚酰亞胺前體。聚酰胺酸即使酰胺酸的一部分亞胺化，只要是不給本發(fā)明帶來(lái)影響的范圍，就可使用。即，聚酰胺酸也可部分熱亞胺化或化學(xué)亞胺化。當(dāng)使聚酰胺酸熱亞胺化時(shí)，可根據(jù)需要，向聚酰胺酸溶液添加亞胺化催化劑、含有有機(jī)磷的化合物、無(wú)機(jī)微粒子、有機(jī)微粒子等的微粒子等。另外，當(dāng)使聚酰胺酸化學(xué)亞胺化時(shí)，可根據(jù)需要，向聚酰胺酸溶液添加化學(xué)亞胺化劑、脫水劑、無(wú)機(jī)微粒子、有機(jī)微粒子等的微粒子等。即使在聚酰胺酸溶液中將上述成分配合，也優(yōu)選在著色前體不析出的條件下進(jìn)行?！局绑w】在本發(fā)明中著色前體是指由在250℃以上的熱處理而一部分或全部被碳化而生成著色化物的前體。作為在本發(fā)明中使用的著色前體，在聚酰胺酸溶液或聚酰亞胺溶液中均一地溶解或分散，由在250℃以上、優(yōu)選為260℃以上、再優(yōu)選為280℃以上、更優(yōu)選為300℃以上的熱處理、優(yōu)選為在空氣等的氧存在下的250℃以上、優(yōu)選為260℃以上、再優(yōu)選為280℃以上、更優(yōu)選為300℃以上的熱處理熱分解，優(yōu)選碳化而生成著色化物的，更優(yōu)選生成黑色系的著色化物的，更優(yōu)選碳系著色前體。著色前體加熱則變成肉眼可見(jiàn)碳化物，組織上含碳以外的異元素，含層結(jié)構(gòu)、芳香族交聯(lián)結(jié)構(gòu)、含四面體碳的無(wú)秩序結(jié)構(gòu)的。碳系著色前體不特別限制，例如，可舉出石油焦油、石油瀝青、煤焦油、煤瀝青等的焦油或?yàn)r青、焦炭、從含丙烯腈的單體得到的聚合物、二茂鐵化合物(二茂鐵及二茂鐵衍生物)等。在這些之中，優(yōu)選從含丙烯腈的單體得到的聚合物及/或二茂鐵化合物，作為從含丙烯腈的單體得到的聚合物，優(yōu)選聚丙烯酸類(lèi)樹(shù)脂腈。四羧酸二酐可使用任意的四羧酸二酐，可根據(jù)期望的特性等適宜選擇。作為四羧酸二酐的具體例，可舉苯均四酸二酐、3,3’，4,4’-聯(lián)苯基四羧酸二酐(s-bpda)、2,3,3’，4’-聯(lián)苯基四羧酸二酐(a-bpda)等的聯(lián)苯基四羧酸二酐、氧基二酞酸二酐、二苯基砜-3,4,3’，4’-四羧酸二酐、雙(3,4-二羧基苯基)硫化物二無(wú)水物、2,2-雙(3,4-二羧基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷二無(wú)水物、2,3,3’，4’-二苯甲酮四羧酸二酐、3,3’，4,4’-二苯甲酮四羧酸二酐、雙(3,4-二羧基苯基)甲烷二無(wú)水物、2,2-雙(3,4-二羧基苯基)丙烷二無(wú)水物、p-亞苯基雙(偏苯三酸單酯酸酐)、p-雙亞苯基雙(偏苯三酸單酯酸酐)、m-三聯(lián)苯基-3,4,3’，4’-四羧酸二酐、p-三聯(lián)苯基-3,4,3’，4’-四羧酸二酐、1,3-雙(3,4-二羧基苯氧基)苯二無(wú)水物、1,4-雙(3,4-二羧基苯氧基)苯二無(wú)水物、1,4-雙(3,4-二羧基苯氧基)聯(lián)苯基二無(wú)水物、2,2-雙〔(3,4-二羧基苯氧基)苯基〕丙烷二無(wú)水物、2,3,6,7-萘四羧酸二酐、1,4,5,8-萘四羧酸二酐、4,4’-(2,2-六氟異亞丙基)二酞酸二酐等。另外，使用2,3,3’，4’-二苯基砜四羧酸等的芳香族四羧酸也是優(yōu)選的。這些可單獨(dú)使用，也可將2種以上組合使用。在這些之中，也特別優(yōu)選選自聯(lián)苯基四羧酸二酐及苯均四酸二酐的至少一種芳香族四羧酸二酐。作為聯(lián)苯基四羧酸二酐，可適宜地使用3,3’，4,4’-聯(lián)苯基四羧酸二酐。二胺可使用任意的二胺。作為二胺的具體例，可舉以下的。(1)1,4-二氨基苯(對(duì)亞苯基二胺)、1,3-二氨基苯、2,4-二氨基甲苯、2,6-二氨基甲苯等的苯核1個(gè)苯二胺；(2)4,4’-二氨基二苯基醚、3,4’-二氨基二苯基醚等的二氨基二苯基醚、4,4’-二氨基二苯基甲烷、3,3’-二甲基-4,4’-二氨基聯(lián)苯基、2,2’-二甲基-4,4’-二氨基聯(lián)苯基、2,2’-雙(三氟甲基)-4,4’-二氨基聯(lián)苯基、3,3’-二甲基-4,4’-二氨基二苯基甲烷、3,3’-二羧基-4,4’-二氨基二苯基甲烷、3,3’，5,5’-四甲基-4,4’-二氨基二苯基甲烷、雙(4-氨基苯基)硫化物、4,4’-二氨基苯甲酰苯胺、3,3’-二氯聯(lián)苯胺、3,3’-二甲基聯(lián)苯胺、2,2’-二甲基聯(lián)苯胺、3,3’-二甲氧基聯(lián)苯胺、2,2’-二甲氧基聯(lián)苯胺、3,3’-二氨基二苯基醚、3,4’-二氨基二苯基醚、4,4’-二氨基二苯基醚、3,3’-二氨基二苯基硫化物、3,4’-二氨基二苯基硫化物、4,4’-二氨基二苯基硫化物、3,3’-二氨基二苯基砜、3,4’-二氨基二苯基砜、4,4’-二氨基二苯基砜、3,3’-二氨基二苯甲酮、3,3’-二氨基-4,4’-二氯二苯甲酮、3,3’-二氨基-4,4’-二甲氧基二苯甲酮、3,3’-二氨基二苯基甲烷、3,4’-二氨基二苯基甲烷、4,4’-二氨基二苯基甲烷、2,2-雙(3-氨基苯基)丙烷、2,2-雙(4-氨基苯基)丙烷、2,2-雙(3-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-雙(4-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、3,3’-二氨基二苯基亞砜、3,4’-二氨基二苯基亞砜、4,4’-二氨基二苯基亞砜等的苯核2個(gè)二胺；(3)1,3-雙(3-氨基苯基)苯、1,3-雙(4-氨基苯基)苯、1,4-雙(3-氨基苯基)苯、1,4-雙(4-氨基苯基)苯、1,3-雙(4-氨基苯氧基)苯、1,4-雙(3-氨基苯氧基)苯、1,4-雙(4-氨基苯氧基)苯、1,3-雙(3-氨基苯氧基)-4-三氟甲基苯、3,3’-二氨基-4-(4-苯基)苯氧基二苯甲酮、3,3’-二氨基-4,4’-二(4-苯基苯氧基)二苯甲酮、1,3-雙(3-氨基苯基硫化物)苯、1,3-雙(4-氨基苯基硫化物)苯、1,4-雙(4-氨基苯基硫化物)苯、1,3-雙(3-氨基苯基砜)苯、1,3-雙(4-氨基苯基砜)苯、1,4-雙(4-氨基苯基砜)苯、1,3-雙〔2-(4-氨基苯基)異丙基〕苯、1,4-雙〔2-(3-氨基苯基)異丙基〕苯、1,4-雙〔2-(4-氨基苯基)異丙基〕苯等的苯核3個(gè)二胺；(4)3,3’-雙(3-氨基苯氧基)聯(lián)苯基、3,3’-雙(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯基、4,4’-雙(3-氨基苯氧基)聯(lián)苯基、4,4’-雙(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯基、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕醚、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕醚、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕醚、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕醚、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕酮、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕酮、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕酮、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕酮、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕硫化物、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕硫化物、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕硫化物、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕硫化物、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕砜、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕砜、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕砜、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕砜、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕甲烷、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕甲烷、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕甲烷、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕甲烷、2,2-雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕丙烷、2,2-雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕丙烷、2,2-雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕丙烷、2,2-雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕丙烷、2,2-雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷等的苯核4個(gè)二胺。這些可單獨(dú)使用，也可將2種以上混合使用。使用的二胺可根據(jù)期望的特性等適宜選擇。在這些之中，也優(yōu)選芳香族二胺化合物，可適宜地使用3,3’-二氨基二苯基醚、3,4’-二氨基二苯基醚、4,4’-二氨基二苯基醚及對(duì)亞苯基二胺、1,3-雙(3-氨基苯基)苯、1,3-雙(4-氨基苯基)苯、1,4-雙(3-氨基苯基)苯、1,4-雙(4-氨基苯基)苯、1,3-雙(4-氨基苯氧基)苯、1,4-雙(3-氨基苯氧基)苯。特別是，優(yōu)選選自苯二胺、二氨基二苯基醚及雙(氨基苯氧基)苯基的至少一種二胺。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜從耐熱性、高溫下的尺寸穩(wěn)定性的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選由將玻璃轉(zhuǎn)移溫度240℃以上或者300℃以上而無(wú)明確的轉(zhuǎn)移點(diǎn)的四羧酸二酐和二胺組合而得到的聚酰亞胺形成。本發(fā)明的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜從耐熱性、高溫下的尺寸穩(wěn)定性的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選由以下的芳香族聚酰亞胺構(gòu)成的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。(i)由選自聯(lián)苯基四羧酸單位及苯均四酸單位的至少一種四羧酸單位和芳香族二胺單位構(gòu)成的芳香族聚酰亞胺、(ii)由四羧酸單位，和選自苯二胺單位、二氨基二苯基醚單位及雙(氨基苯氧基)苯基單位的至少一種芳香族二胺單位構(gòu)成的芳香族聚酰亞胺、及/或(iii)由選自聯(lián)苯基四羧酸單位及苯均四酸單位的至少一種四羧酸單位，和選自苯二胺單位、二氨基二苯基醚單位及雙(氨基苯氧基)苯基單位的至少一種芳香族二胺單位構(gòu)成的芳香族聚酰亞胺。雖無(wú)限定，作為聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，在本發(fā)明的方法中使用至少有2個(gè)表面層(a面及b面)和被夾在所述2個(gè)表面層之間的大空隙層的多層結(jié)構(gòu)的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是可能的。優(yōu)選為，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是上述大空隙層有與上述表面層(a面及b面)結(jié)合的隔壁和被所述隔壁以及上述表面層(a面及b面)包圍的膜平面方向的平均孔徑是10～500μm的多個(gè)大空隙，上述的大空隙層的隔壁、以及上述表面層(a面及b面)各自有厚度0.01～20μm，平均孔徑0.01～100μm的多個(gè)孔，所述細(xì)孔可彼此連通的，再者與上述大空隙連通而部分或全面有多層結(jié)構(gòu)，進(jìn)而，總膜厚是5～500μm，空孔率是不足40％以上95％的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的總膜厚雖無(wú)限定，作為一實(shí)施方式，也可作為20～75μm。由膜厚的差異，在細(xì)胞的增殖速度、細(xì)胞的形態(tài)、面內(nèi)細(xì)胞的飽和度等方面可觀察到差異。在本發(fā)明中，當(dāng)使用有2個(gè)不同的表面層(a面及b面)和被夾在所述2個(gè)表面層之間的大空隙層的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜時(shí)，也可在a面存在的孔的平均孔徑與存在于b面的孔的平均孔徑有差。優(yōu)選為，在a面存在的孔的平均孔徑比在b面存在的孔的平均孔徑小。更優(yōu)選為，在a面存在的孔的平均孔徑比在b面存在的孔的平均孔徑小，在a面存在的孔的平均孔徑是0.01～50μm、0.01μm～40μm、0.01μm～30μm、0.01μm～20μm、或者0.01μm～15μm，在b面存在的孔的平均孔徑是20μm～100μm、30μm～100μm、40μm～100μm、50μm～100μm、或者60μm～100μm。特別優(yōu)選為，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的a面是有平均孔徑15μm以下，例如0.01μm～15μm的小的孔的網(wǎng)結(jié)構(gòu)，b面是平均孔徑20μm以上、例如20μm～100μm的大孔結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的總膜厚的測(cè)定可用接觸式的厚度計(jì)進(jìn)行。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜表面的平均孔徑可由多孔質(zhì)膜表面的掃描型電子顯微鏡照片，對(duì)于200分以上的開(kāi)孔部測(cè)定孔面積，從該孔面積的平均值，通過(guò)根據(jù)下式(1)計(jì)算求出孔的形狀作為正圓時(shí)的平均直徑?！緮?shù)1】(式中，sa是指孔面積的平均值。)在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的空孔率可測(cè)定切成指定的大小的多孔質(zhì)膜的膜厚及質(zhì)量，從單位面積重量質(zhì)量，根據(jù)下式(2)求出?！緮?shù)2】空孔率(％)＝(1-w/(s×d×d))×100(2)(式中，s表示多孔質(zhì)膜的面積、d表示總膜厚、w表示測(cè)定的質(zhì)量、d表示聚酰亞胺的密度。以聚酰亞胺的密度作為1.34g/cm3。)例如，國(guó)際公開(kāi)wo2010/038873、特開(kāi)2011-219585、或者特開(kāi)2011-219586中記載的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜也能在本發(fā)明的方法中使用。接種到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面上的細(xì)胞能在膜的表面及/或內(nèi)部穩(wěn)定生長(zhǎng)－增殖。細(xì)胞可根據(jù)膜中的生長(zhǎng)－增殖的位置，取各種的不同的形態(tài)。在本發(fā)明的一實(shí)施方式中，根據(jù)細(xì)胞的種類(lèi)，也有一邊在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面及內(nèi)部移動(dòng)，一邊使形狀變化一邊增殖。在本發(fā)明的方法中應(yīng)用細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜當(dāng)然不含應(yīng)用的以外的細(xì)胞的狀態(tài)、即，優(yōu)選滅菌的。本發(fā)明的方法優(yōu)選為，包括對(duì)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜預(yù)先滅菌的工序。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的耐熱性極優(yōu)良，且輕量，形－大小也能自由選擇，滅菌處理容易。由干熱滅菌、蒸氣滅菌、乙醇等消毒劑的滅菌、紫外線或γ線等的電磁波滅菌等任意的滅菌處理是可能的。【4.細(xì)胞培養(yǎng)和培養(yǎng)體積】使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞培養(yǎng)的模型圖示于圖1。圖1是用于助理解的圖，各要素不是實(shí)際尺寸。在本發(fā)明的方法中，由于通過(guò)向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜應(yīng)用細(xì)胞而進(jìn)行培養(yǎng)，在有聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的內(nèi)部的多面的連接多孔部分或表面，生長(zhǎng)大量的細(xì)胞，簡(jiǎn)便地培養(yǎng)大量的細(xì)胞變得可能。另外，在本發(fā)明的方法中，當(dāng)比以往的方法更大幅地減在細(xì)胞培養(yǎng)中使用的培養(yǎng)基的量的同時(shí)，培養(yǎng)大量的細(xì)胞變得可能。例如，即使聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一部分或整體是不與細(xì)胞培養(yǎng)基的液相接觸的狀態(tài)，也可培養(yǎng)大量的細(xì)胞。另外，相對(duì)于含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和，相比以往的方法更顯著地減細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積也變得可能。在本說(shuō)明書(shū)中，將不含細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜含其內(nèi)部間隙的體積而在空間中占的體積稱(chēng)為“表觀聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積”(圖1之左的狀態(tài))。進(jìn)而，將向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜應(yīng)用細(xì)胞，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面及內(nèi)部負(fù)載細(xì)胞的狀態(tài)中，以聚酰亞胺多孔質(zhì)膜、細(xì)胞、及浸潤(rùn)到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜內(nèi)部的培養(yǎng)基作為整體在空間中所占的體積稱(chēng)為“含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積”(圖1之右的狀態(tài))。在膜厚25μm的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的情況中，含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積相比表觀聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積，最大成50％左右大的值。在本發(fā)明的方法中，可在1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)容器中收容多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而進(jìn)行培養(yǎng)，此時(shí)，有將含對(duì)于負(fù)載細(xì)胞的多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的各自的細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和簡(jiǎn)記作“含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和”的。通過(guò)使用本發(fā)明的方法，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積在含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的10000倍或比其少的條件下，也良好地培養(yǎng)細(xì)胞變得可能。另外，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積在含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的1000倍或比其少的條件下，也可良好地培養(yǎng)細(xì)胞。再者，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積在含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的100倍或比其少的條件下，也可良好地培養(yǎng)細(xì)胞。進(jìn)而，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積在含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的10倍或比其少的條件下，也可良好地培養(yǎng)細(xì)胞。即，由本發(fā)明，與以往的二維的細(xì)胞培養(yǎng)裝置比，變得能將細(xì)胞培養(yǎng)的空間(容器)小型化至極限。另外，當(dāng)想要增加培養(yǎng)的細(xì)胞的數(shù)時(shí)，由增加積層的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的枚數(shù)等的簡(jiǎn)便的操作，柔軟地增加細(xì)胞培養(yǎng)的體積變得可能。只要是在本發(fā)明中使用的具備聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，就分離培養(yǎng)細(xì)胞的空間(容器)和儲(chǔ)藏細(xì)胞培養(yǎng)基的空間(容器)變得可能，根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)，準(zhǔn)備必要的量的細(xì)胞培養(yǎng)基變得可能。儲(chǔ)藏細(xì)胞培養(yǎng)基的空間(容器)可根據(jù)目的大型化或小型化，或者也可為能替換的容器，不特別限定。例如，在實(shí)施例1中的培養(yǎng)條件下，將向50個(gè)1.4cm見(jiàn)方的正方形且膜厚25μm的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜應(yīng)用人皮膚成纖維細(xì)胞的(含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和大概是0.25cm3)使用4ml的培養(yǎng)基培養(yǎng)。這是細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積成含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的大概16倍左右的條件。結(jié)果，作為細(xì)胞在全部細(xì)胞培養(yǎng)基中均一地分散時(shí)的細(xì)胞數(shù)盡管是非株化細(xì)胞的人粘接性細(xì)胞，仍可以達(dá)每1ml培養(yǎng)基超2.5×106個(gè)數(shù)的程度大量地培養(yǎng)。在本說(shuō)明書(shū)中，細(xì)胞的大量培養(yǎng)是指，例如，在使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)后細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞的數(shù)，作為細(xì)胞在全部細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基中均一地分散的，培養(yǎng)至每1ml培養(yǎng)基成1.0×105個(gè)以上、1.0×106個(gè)以上、2.0×106個(gè)以上、5.0×106個(gè)以上、1.0×107個(gè)以上、2.0×107個(gè)以上、5.0×107個(gè)以上、1.0×108個(gè)以上、2.0×108個(gè)以上、5.0×108個(gè)以上、1.0×109個(gè)以上、2.0×109個(gè)以上、或者5.0×109個(gè)以上。作為以在使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)后在細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞的數(shù)作為細(xì)胞在全部細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基中均一地分散的測(cè)量的方法，可適宜使用公知的方法。例如，如在實(shí)施例1中使用的方法一樣，可適宜地使用使用cck8的細(xì)胞數(shù)測(cè)量法。具體而言，在使用cellcountinigkit8；同仁化學(xué)研究所制溶液試劑(以下，記作“cck8”)，而不使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的通常的培養(yǎng)中測(cè)量細(xì)胞數(shù)，求出吸光度和實(shí)際的細(xì)胞數(shù)的相關(guān)系數(shù)。其后，應(yīng)用細(xì)胞，將培養(yǎng)的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜移到含cck8的培養(yǎng)基，在溫育1～3小時(shí)器內(nèi)保存，除去上清而在480nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，從首先求出的相關(guān)系數(shù)計(jì)算細(xì)胞數(shù)。當(dāng)使用動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，作為細(xì)胞在全部細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基中均一地分散的，在使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)后在細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞的數(shù)培養(yǎng)至每1ml培養(yǎng)基成1.0×105個(gè)以上、1.0×106個(gè)以上、2.0×106個(gè)以上、5.0×106個(gè)以上、1.0×107個(gè)以上、2.0×107個(gè)以上、或者5.0×107個(gè)以上，可稱(chēng)為細(xì)胞的大量培養(yǎng)。當(dāng)使用如人皮膚成纖維細(xì)胞一樣的成纖維細(xì)胞時(shí)，作為細(xì)胞在全部細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基中均一地分散的，在使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)后在細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞的數(shù)培養(yǎng)至每1ml培養(yǎng)基成1.0×105個(gè)以上、1.0×106個(gè)以上、2.0×106個(gè)以上、5.0×106個(gè)以上、1.0×107個(gè)以上、2.0×107個(gè)以上、或者5.0×107個(gè)以上，可稱(chēng)為細(xì)胞的大量培養(yǎng)。另外，當(dāng)使用cho細(xì)胞時(shí)，在使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)后在細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞的數(shù)，作為細(xì)胞在全部細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基中均一地分散的，培養(yǎng)至每1ml培養(yǎng)基成1.0×105個(gè)以上、1.0×106個(gè)以上、2.0×106個(gè)以上、5.0×106個(gè)以上、1.0×107個(gè)以上、2.0×107個(gè)以上、或者5.0×107個(gè)以上，可稱(chēng)為細(xì)胞的大量培養(yǎng)。另外，當(dāng)使用hela細(xì)胞時(shí)，在使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)后細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞的數(shù)，作為細(xì)胞在全部細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基中均一地分散的，培養(yǎng)至每1ml培養(yǎng)基成1.0×105個(gè)以上、1.0×106個(gè)以上、2.0×106個(gè)以上、5.0×106個(gè)以上、1.0×107個(gè)以上、2.0×107個(gè)以上、或者5.0×107個(gè)以上，可稱(chēng)為細(xì)胞的大量培養(yǎng)。另外，從別的觀點(diǎn)來(lái)看，細(xì)胞的大量培養(yǎng)是指，例如，在使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)后培養(yǎng)至每1平方厘米聚酰亞胺多孔質(zhì)膜含的細(xì)胞數(shù)成1.0×105個(gè)以上、2.0×105個(gè)以上、1.0×106個(gè)以上、2.0×106個(gè)以上、5.0×106個(gè)以上、1.0×107個(gè)以上、2.0×107個(gè)以上、5.0×107個(gè)以上、1.0×108個(gè)以上、2.0×108個(gè)以上、或者5.0×108個(gè)以上。每1平方厘米聚酰亞胺多孔質(zhì)膜中所含的細(xì)胞數(shù)能使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器等的公知的方法適宜測(cè)量。當(dāng)使用動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)至成1.0×105個(gè)以上、2.0×105個(gè)以上、1.0×106個(gè)以上、2.0×106個(gè)以上、5.0×106個(gè)以上、1.0×107個(gè)以上、2.0×107個(gè)以上、或者5.0×107個(gè)以上，可稱(chēng)為細(xì)胞的大量培養(yǎng)。對(duì)于在本說(shuō)明書(shū)中的大量培養(yǎng)的定義，是指與上述的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜每1平方厘米成育大量的細(xì)胞并列，片上的細(xì)胞不形成球形樣的細(xì)胞集合塊，與聚酰亞胺多孔質(zhì)膜粘接的細(xì)胞占整體的細(xì)胞數(shù)的80％以上的狀態(tài)。這是用于穩(wěn)定培養(yǎng)大量的細(xì)胞的重要的條件，是指不是僅引發(fā)凝集或壞死的細(xì)胞彼此的集合化，一邊向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上及內(nèi)部供給充分的培養(yǎng)基等的養(yǎng)分或氧，一邊具有穩(wěn)定的生長(zhǎng)的支架的細(xì)胞集團(tuán)的穩(wěn)定的培養(yǎng)方法?！?.細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)及培養(yǎng)條件】在本發(fā)明的方法中，細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)及培養(yǎng)條件可根據(jù)細(xì)胞的種類(lèi)等適宜決定。適宜于動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、及細(xì)菌的各細(xì)胞的培養(yǎng)方法是公知的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用任意的公知的方法培養(yǎng)應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)基也可根據(jù)細(xì)胞的種類(lèi)適宜調(diào)制。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)基，例如，在lonza公司的細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品目錄中記載。植物細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)基，例如，在wako公司的植物組織培養(yǎng)基系列等中記載。細(xì)菌的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)基，例如，在bd公司的一般細(xì)菌用培養(yǎng)基產(chǎn)品目錄中記載。在本發(fā)明的方法中使用的細(xì)胞培養(yǎng)基也可為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基等的任何的形態(tài)。另外，也可通過(guò)在細(xì)胞培養(yǎng)容器中噴霧作為液滴狀的液體培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基與負(fù)載細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜接觸。關(guān)于使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞的培養(yǎng)，也可與微載體或纖維素海綿等、其他懸浮型培養(yǎng)載體共存。在本發(fā)明的方法中，在培養(yǎng)中使用的系統(tǒng)的形狀、規(guī)模等不特別限定，能從細(xì)胞培養(yǎng)用的培養(yǎng)皿、瓶、塑料袋、試管至大型的箱適宜利用。例如，含bdfalcon公司制的細(xì)胞培養(yǎng)皿或thermoscientific公司制的nunc細(xì)胞工廠等。再者，通過(guò)在本發(fā)明中使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，對(duì)于不能先天懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，也用向懸浮培養(yǎng)裝置，進(jìn)行在懸浮培養(yǎng)類(lèi)似狀態(tài)下的培養(yǎng)變得可能。作為懸浮培養(yǎng)用的裝置，例如，能使用康寧公司制的旋轉(zhuǎn)瓶或旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)等。另外，作為可實(shí)現(xiàn)同樣的功能的環(huán)境，也能使用veritas公司的如fibercell(注冊(cè)商標(biāo))system一樣的中空絲培養(yǎng)。在本發(fā)明的方法中的培養(yǎng)也能使用能使向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上連續(xù)添加培養(yǎng)基而回收的連續(xù)循環(huán)或開(kāi)放型的裝置，以在空氣中露出聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片的型式執(zhí)行。在本發(fā)明中，細(xì)胞的培養(yǎng)也可用從設(shè)置于細(xì)胞培養(yǎng)容器外的細(xì)胞培養(yǎng)基供給器件向細(xì)胞培養(yǎng)容器中連續(xù)或間歇供給細(xì)胞培養(yǎng)基的系統(tǒng)進(jìn)行。此時(shí)、可為細(xì)胞培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)基供給器件和細(xì)胞培養(yǎng)容器之間循環(huán)的系統(tǒng)。當(dāng)將細(xì)胞的培養(yǎng)用從設(shè)置于細(xì)胞培養(yǎng)容器外的細(xì)胞培養(yǎng)基供給器件向細(xì)胞培養(yǎng)容器中連續(xù)或間歇供給細(xì)胞培養(yǎng)基的系統(tǒng)進(jìn)行時(shí)，該系統(tǒng)也可為含作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的培養(yǎng)單位和作為細(xì)胞培養(yǎng)基供給器件的培養(yǎng)基供給單位的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其中培養(yǎng)單位是收容用于負(fù)載細(xì)胞的1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)單位，是具備培養(yǎng)基供給口及培養(yǎng)基排出口的培養(yǎng)單位，培養(yǎng)基供給單位是具備培養(yǎng)基收納容器、培養(yǎng)基供給線和經(jīng)培養(yǎng)基供給線連續(xù)或間歇輸送培養(yǎng)基的送液泵的培養(yǎng)基供給單位，其中培養(yǎng)基供給線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器內(nèi)的培養(yǎng)基接觸，培養(yǎng)基供給線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基供給口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)。另外，在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，培養(yǎng)單位可為不具備空氣供給口及空氣排出口的培養(yǎng)單位，另外，可為具備空氣供給口及空氣排出口的培養(yǎng)單位。培養(yǎng)單位可不具備空氣供給口及空氣排出口，對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng)必要的氧等被通入培養(yǎng)基而充分地供給于細(xì)胞。再者，在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，培養(yǎng)單位可還具備培養(yǎng)基排出線，其中培養(yǎng)基排出線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器連接，培養(yǎng)基排出線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基排出口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)，培養(yǎng)基能在培養(yǎng)基供給單位和培養(yǎng)單位循環(huán)。作為上述細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)的一例的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的例示于圖2，可用于本發(fā)明的目的的細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)不限于此。【ii.細(xì)胞培養(yǎng)裝置】本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其含：收容用于負(fù)載細(xì)胞的1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)單位，其為具備培養(yǎng)基供給口及培養(yǎng)基排出口的培養(yǎng)單位，及培養(yǎng)基供給單位，其為具備培養(yǎng)基收納容器、培養(yǎng)基供給線和經(jīng)培養(yǎng)基供給線連續(xù)或間歇輸送培養(yǎng)基的送液泵的培養(yǎng)基供給單位，其中培養(yǎng)基供給線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器內(nèi)的培養(yǎng)基接觸，培養(yǎng)基供給線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基供給口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)。再者，將國(guó)際申請(qǐng)?zhí)杙ct/jp2014/070407的全內(nèi)容由參照援用。本發(fā)明另外涉及含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的，用于在本發(fā)明的培養(yǎng)方法中使用的細(xì)胞培養(yǎng)裝置。在本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜可固定起來(lái)使用，或也可在細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮而使用，可置于培養(yǎng)基中，也從培養(yǎng)基露出。在細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜也可上下或左右積層。積層的集合體或蓄積體無(wú)論是置于培養(yǎng)基中，還是從培養(yǎng)基露出也都沒(méi)關(guān)系。作為本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，只要是含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的，就可取任意的形態(tài)。例如，在上述的本發(fā)明的大量培養(yǎng)方法中使用的細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)均可作為本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置使用。在本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜可以平面狀或折疊而使用1個(gè)膜，也可上下積層或折疊而積層2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而使用。積層聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的方法不限定，也可a面和b面彼此相合的方式積層。在本發(fā)明的方法中使用的細(xì)胞培養(yǎng)基(在本說(shuō)明書(shū)中，有簡(jiǎn)記作培養(yǎng)基的)可為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基等的任何的形態(tài)，可優(yōu)選使用液體培養(yǎng)基。另外，也可通過(guò)在細(xì)胞培養(yǎng)容器中噴霧作為霧狀或液滴狀的液體培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基與負(fù)載細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜接觸。關(guān)于使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞的培養(yǎng)，也可與微載體或纖維素海綿等其他懸浮型培養(yǎng)載體共存。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置含收容用于負(fù)載細(xì)胞的1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)單位及培養(yǎng)基供給單位。在培養(yǎng)單位內(nèi)，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜可固定起來(lái)使用，或也可在細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮而使用，可置于培養(yǎng)基中，也可從培養(yǎng)基露出。在細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜也可上下或左右積層。積層的集合體或蓄積體無(wú)論是置于培養(yǎng)基中，還是從培養(yǎng)基露出也都無(wú)所謂。培養(yǎng)單位具備培養(yǎng)基供給口及培養(yǎng)基排出口。培養(yǎng)單位可為不具備空氣供給口、空氣排出口、及氧交換膜的。由本發(fā)明，使用的培養(yǎng)基的量極少，另外，因?yàn)榭墒棺鳛榕囵B(yǎng)載體的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜露出到氣相，向細(xì)胞的氧供給由擴(kuò)散充分地進(jìn)行。從而，在本發(fā)明中，不以特別氧供給裝置或氣體交換機(jī)構(gòu)作為必要。當(dāng)然，培養(yǎng)單位也可具備空氣供給口及空氣排出口、或者氧交換膜?？諝夤┙o口可為含5％co2的氣體的空氣供給口，及空氣排出口可為含5％co2的氣體的空氣排出口。培養(yǎng)單位可為無(wú)用于攪拌聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的器件的。由本發(fā)明，在培養(yǎng)容器內(nèi)使用的培養(yǎng)基的量極少，另外，因?yàn)榭墒棺鳛榕囵B(yǎng)載體的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜露出到氣相，向細(xì)胞的氧供給可由擴(kuò)散充分地進(jìn)行。當(dāng)然，培養(yǎng)單位也可為收容用于攪拌聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的器件的。另外，培養(yǎng)單位可還具備培養(yǎng)基排出線，其中培養(yǎng)基排出線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器連接，培養(yǎng)基排出線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基排出口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)，培養(yǎng)基能在培養(yǎng)基供給單位和培養(yǎng)單位循環(huán)。此時(shí)，不以頻繁的培養(yǎng)基供給或培養(yǎng)基更換作為必要，連續(xù)的培養(yǎng)基供給變得可能。另外，培養(yǎng)單位還具備培養(yǎng)基排出線，其中培養(yǎng)基排出線的第一端部與培養(yǎng)基回收單位連接，培養(yǎng)基排出線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基排出口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)，也可為能將排出的培養(yǎng)基回收到培養(yǎng)基回收單位內(nèi)。例如，在要從排出的培養(yǎng)基回收細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)等的情況等中，可有效地使用此實(shí)施方式。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置含培養(yǎng)基供給單位。培養(yǎng)基供給單位具備培養(yǎng)基收納容器、培養(yǎng)基供給線和經(jīng)培養(yǎng)基供給線連續(xù)或間歇輸送培養(yǎng)基的送液泵，其中培養(yǎng)基供給線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器內(nèi)的培養(yǎng)基接觸，培養(yǎng)基供給線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基供給口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置也可還含用于振蕩培養(yǎng)單位的器件。作為用于振蕩培養(yǎng)單位的器件，不限于從外部給適宜于細(xì)胞的培養(yǎng)的振蕩，例示例如多搖床等的振蕩機(jī)。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置中所含的培養(yǎng)單位只要是有上述的要素的，就也可為任何材質(zhì)或形態(tài)?？蓪⑹惺鄣呐囵B(yǎng)容器直接使用或者也可在加工品中收容聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而使用。作為市售的培養(yǎng)容器的例，例示例如氣體不透過(guò)性或透過(guò)性的如塑料袋一樣的可撓性袋或旋轉(zhuǎn)瓶等，但不限于這些。培養(yǎng)單位由可撓性袋構(gòu)成的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的例示于圖12，培養(yǎng)單位是由旋轉(zhuǎn)瓶構(gòu)成的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的例示于圖13。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置可為1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜在以相對(duì)于水平45度以下的角度傾斜的剛體之上裝載，以從聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的上端部近傍供給培養(yǎng)基的方式設(shè)置有培養(yǎng)基供給線的第二端部，以從聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的下端部近傍排出培養(yǎng)基的方式設(shè)置有培養(yǎng)基排出線的第二端部。這樣的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的例示于圖2。剛體可以相對(duì)于水平40度以下，35度以下，30度以下，25度以下，20度以下，15度以下，10度以下，或者5度以下的角度傾斜。剛體的傾斜角度也可可根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞的種類(lèi)、接種的細(xì)胞數(shù)、培養(yǎng)增殖速度、氧要求性等適宜優(yōu)化，或者，經(jīng)時(shí)變化。剛體的材質(zhì)只要是可穩(wěn)定支持聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的，就不特別限定，但例示例如不銹鋼等的金屬網(wǎng)。在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，可以從聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的上端部近傍供給培養(yǎng)基的方式設(shè)置有培養(yǎng)基供給線的第二端部，以從聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的下端部近傍排出培養(yǎng)基的方式設(shè)置有培養(yǎng)基排出線的第二端部。其中聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的上端部近傍是指可在使在剛體之上裝載的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜以剛體的傾斜取向而略約三等分之中的最高的端部應(yīng)用培養(yǎng)基的位置。另外，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的下端部近傍是指可在使在剛體之上裝載的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜以剛體的傾斜取向而經(jīng)大致三等分之中的最低的端部排出培養(yǎng)基的位置。在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜和剛體也可被收容到殼內(nèi)，作為殼被收容到培養(yǎng)單位內(nèi)。殼的材質(zhì)及形態(tài)可根據(jù)目的適宜決定。在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜和裝載該1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的剛體也可為如圖10所示設(shè)多個(gè)構(gòu)成。由此，各段的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜成為大致相同條件的培養(yǎng)基，即使大量地培養(yǎng)細(xì)胞，保持各段的培養(yǎng)條件變得可能。在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，以包被1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的上表面的一部分或全部的方式，也可還裝載相比聚酰亞胺多孔質(zhì)膜平均孔徑大的多孔質(zhì)片。多孔質(zhì)片只要是比聚酰亞胺多孔質(zhì)膜平均孔徑大的，就均可使用，例如，可適宜地使用無(wú)紡布、紗布、及海綿等。因?yàn)橥ㄟ^(guò)將相比聚酰亞胺多孔質(zhì)膜平均孔徑大的多孔質(zhì)片裝載到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上，可抑制在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜表面上流動(dòng)的培養(yǎng)基、特別液體培養(yǎng)基的偏流，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜表面上均一地應(yīng)用培養(yǎng)基，可進(jìn)一步升高培養(yǎng)效率。在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，也可在培養(yǎng)基供給線的第二端部的近傍還設(shè)置除沫單位。其中，培養(yǎng)基供給線的第二端部的近傍是指除沫單位可捕獲培養(yǎng)基可在培養(yǎng)基供給于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上時(shí)發(fā)生的氣泡的位置。通過(guò)設(shè)置除沫單位，因?yàn)榭稍诰埘啺范嗫踪|(zhì)膜表面上均一地應(yīng)用培養(yǎng)基，可進(jìn)一步升高培養(yǎng)效率。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置可為上述的任何的實(shí)施方式，可使在細(xì)胞培養(yǎng)裝置內(nèi)的培養(yǎng)槽內(nèi)使用的培養(yǎng)基的量變極少，貢獻(xiàn)于培養(yǎng)裝置的小型化、省空間化。例如，可以1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一部分或整體作為由培養(yǎng)基濕潤(rùn)的。另外，可以1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜表面的一部分或整體作為不與培養(yǎng)基的液相接觸的。1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜表面的一部分或整體不與培養(yǎng)基的液相接觸的狀態(tài)可為1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜表面的一部分或整體暴露于氣相的狀態(tài)。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置由于培養(yǎng)基連續(xù)或間歇供給于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上存在的孔的一部分或全部保持含培養(yǎng)基的濕潤(rùn)狀態(tài)。當(dāng)由于本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置使在細(xì)胞培養(yǎng)中使用的培養(yǎng)基的量相比以往的方法更大幅地減的同時(shí)，培養(yǎng)大量的細(xì)胞成為可能，相對(duì)于含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和，相比以往的方法更顯著地減培養(yǎng)單位中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積也變得可能。在本說(shuō)明書(shū)中，將不含細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜連其內(nèi)部間隙的體積也含而在空間中占的體積稱(chēng)為“表觀聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積”。進(jìn)而，將在向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜應(yīng)用細(xì)胞，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面及內(nèi)部負(fù)載細(xì)胞的狀態(tài)中，以聚酰亞胺多孔質(zhì)膜、細(xì)胞、及浸潤(rùn)到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜內(nèi)部的培養(yǎng)基作為整體在空間中所占的體積稱(chēng)為“含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積”。膜厚25μm的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的情況，含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積相比表觀聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積，最大成大50％左右的值。在本發(fā)明的方法中，可在1個(gè)培養(yǎng)單位中收容多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而進(jìn)行培養(yǎng)，此時(shí)，有將含對(duì)于負(fù)載細(xì)胞的多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的各自的細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和簡(jiǎn)記作“含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和”的。通過(guò)使用本發(fā)明的方法，培養(yǎng)單位中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積是含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的10000倍或比其少的條件、1000倍或比其少的條件、100倍或比其少的條件、10倍或比其少的條件、或者5倍或比其少，也可良好地培養(yǎng)細(xì)胞。本發(fā)明另外也涉及含將上述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置設(shè)置到溫育器內(nèi)，培養(yǎng)細(xì)胞的，細(xì)胞的培養(yǎng)方法。溫育器只要可保持對(duì)于細(xì)胞的培養(yǎng)適宜的溫度，就均可使用。也可使用除了溫度之外，可調(diào)整濕度及co2濃度的溫育器。當(dāng)使用一般的動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，使用可向細(xì)胞培養(yǎng)裝置供給5％co2的溫育器好的?！緄ii.用于在細(xì)胞的培養(yǎng)方法中使用的試劑盒】本發(fā)明還涉及含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的，用于在細(xì)胞的培養(yǎng)方法中使用的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒除聚酰亞胺多孔質(zhì)膜之外，可適宜含對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)必要的構(gòu)成要素。例如，含應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、連續(xù)培養(yǎng)基供給裝置、連續(xù)培養(yǎng)基循環(huán)裝置、支持聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的支架或模塊、細(xì)胞培養(yǎng)裝置、試劑盒的對(duì)待說(shuō)明書(shū)等。雖無(wú)限定，作為一實(shí)施方式，在透明的袋內(nèi)單獨(dú)或多個(gè)保存滅菌的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，含能直接在細(xì)胞培養(yǎng)中使用的形態(tài)的包裝或，或者，在同袋內(nèi)與聚酰亞胺多孔質(zhì)膜一同封入滅菌液體，含效率的吸入接種變得可能的膜－液體的一體型形態(tài)的試劑盒?！緄v.用于回收由細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)的方法】本發(fā)明也涉及含將上述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置設(shè)置到溫育器內(nèi)，培養(yǎng)細(xì)胞，及連續(xù)或間歇地回收與細(xì)胞接觸的培養(yǎng)基的，用于回收由細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)的方法。由本發(fā)明的方法，細(xì)胞由于保持于聚酰亞胺多孔質(zhì)，沒(méi)必要使用以往為了除去細(xì)胞或從細(xì)胞產(chǎn)生的碎片等而進(jìn)行的離心分離操作，或?yàn)V器等，僅回收培養(yǎng)上清變得可能。【v.細(xì)胞培養(yǎng)裝置的使用】本發(fā)明也涉及上述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置用于培養(yǎng)細(xì)胞的用途。另外，本發(fā)明也涉及上述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置用于回收由細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)的用途。以下，基于實(shí)施例，更具體說(shuō)明本發(fā)明。再者，本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。本領(lǐng)域技術(shù)人員可基于本說(shuō)明書(shū)的記載容易地對(duì)本發(fā)明加修飾－變更，它們含在本發(fā)明的技術(shù)性范圍內(nèi)。之后，當(dāng)不特別記述時(shí)，“聚酰亞胺多孔質(zhì)膜”是指總膜厚25μm、空孔率73％的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。所述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜有2個(gè)不同的表面層(a面及b面)和被夾在所述2個(gè)表面層之間的大空隙層。在a面存在的孔的平均孔徑是6μm，在b面存在的孔的平均孔徑是46μm。再者，在以下的實(shí)施例中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜通過(guò)成形含從作為四羧酸成分的3,3’，4,4’-聯(lián)苯基四羧酸二酐(s-bpda)和作為二胺成分的4,4’-二氨基二苯基醚(oda)得到的聚酰胺酸溶液和作為著色前體的聚丙烯酰胺的聚酰胺酸溶液組合物之后，在250℃以上熱處理而調(diào)制。<使用的細(xì)胞、材料等>·人成纖維細(xì)胞(lonza公司productcodecc-2511)·cho-k1(publichealthenglandcat.85051005)·chodp-12(atcccrl-12445)·人成纖維細(xì)胞用培養(yǎng)基(lonza公司productcodecc-3132)·cho-k1用培養(yǎng)基(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社ham氏f-12087-08335)·chodp-12用培養(yǎng)基(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社imdm098-06465)·3.5cm培養(yǎng)皿(falcon公司cat.353001)·20cm2培養(yǎng)皿(falcon公司cat.353004)·細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8(cck8、株式會(huì)社同仁化學(xué)研究所ck04)·凍存管(thermofisherscientific公司1.8mlcat.377267)·2cm×2cm的滅菌的正方形容器(thermofisherscientific公司cat.103)·青霉素-鏈霉素-兩性霉素b懸浮液(x100)(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社161-23181)·顯微鏡名、使用的圖像軟件名carlzeiss公司制lsm700使用軟件zen產(chǎn)生－人gcsf的cho-k1細(xì)胞株由委托業(yè)務(wù)，通過(guò)以下的順序得到產(chǎn)生人gcsf(粒細(xì)胞集落刺激因子)的cho-k1細(xì)胞株。使用的細(xì)胞是cho-k1(publichealthenglandcat.85051005)。根據(jù)以下工序，得到穩(wěn)定表達(dá)人gcsf的細(xì)胞株。順序(i)導(dǎo)入新霉素抗性基因和合成人gcsf基因的質(zhì)粒的設(shè)計(jì)及制造順序(ii)轉(zhuǎn)染等級(jí)質(zhì)粒大量調(diào)制順序(iii)瞬時(shí)基因表達(dá)細(xì)胞的制成順序(iv)基因穩(wěn)定表達(dá)株的制成、由realtimepcr的表達(dá)基因確認(rèn)及單克隆化順序(v)各克隆的目的蛋白質(zhì)表達(dá)的由elisa的確認(rèn)從由此得到的細(xì)胞株選擇產(chǎn)生良好的細(xì)胞株；#42，在往后的實(shí)驗(yàn)中使用。【實(shí)施例】【實(shí)施例1：人皮膚成纖維細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的大量培養(yǎng)】使用人皮膚成纖維細(xì)胞，進(jìn)行向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的播種之后，在培養(yǎng)皿內(nèi)實(shí)施大量培養(yǎng)。向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加放入了2％fbs的細(xì)胞培養(yǎng)基0.5ml，將滅菌的1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜使網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面或大孔結(jié)構(gòu)的b面朝上而浸漬。另行準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基懸浮2.1×106個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是1.9×106個(gè)、死細(xì)胞是1.6×105個(gè)、活細(xì)胞率92％)的人皮膚成纖維細(xì)胞懸浮液。向上述正方形容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基添加各50μl細(xì)胞懸浮液。在此正方形容器中培養(yǎng)24小時(shí)之后，將接種150個(gè)細(xì)胞的片各自各50個(gè)移動(dòng)到3個(gè)20cm2培養(yǎng)皿，加4ml的培養(yǎng)基而繼續(xù)培養(yǎng)。在4天、7天、14天、23天后使用cck8測(cè)量細(xì)胞數(shù)，觀察增殖行為。結(jié)果示于圖3?！緦?shí)施例2：cho-k1細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的大量培養(yǎng)】在本實(shí)施例中，使用cho-k1細(xì)胞進(jìn)行向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的接種之后，在培養(yǎng)皿內(nèi)實(shí)施大量培養(yǎng)。向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加放入了2％fbs的細(xì)胞培養(yǎng)基0.5ml，將滅菌的1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜使網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上而浸漬。另行準(zhǔn)備每4ml培養(yǎng)基懸浮5.0×106個(gè)cho-k1細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是4.5×106個(gè)、死細(xì)胞是4.7×105個(gè)、活細(xì)胞率91％)的cho-k1細(xì)胞懸浮液。向上述正方形容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基添加各40μl細(xì)胞懸浮液。在此正方形容器中培養(yǎng)24小時(shí)之后，將接種25個(gè)細(xì)胞的片移動(dòng)到1個(gè)20cm2培養(yǎng)皿而集合，加2ml的培養(yǎng)基而繼續(xù)培養(yǎng)。在11天、18天、20天后使用cck8測(cè)量細(xì)胞數(shù)，觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)行為。通過(guò)觀察期間，觀察到每1ml生息1.0×107個(gè)以上的細(xì)胞數(shù)?！颈?】培養(yǎng)期間11天18天20天每1ml的細(xì)胞數(shù)1.0×1071.6×1071.6×107【實(shí)施例3：cho-k1細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的大量連續(xù)培養(yǎng)】在本實(shí)施例中，使用cho-k1細(xì)胞，進(jìn)行向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的接種之后，使用連續(xù)培養(yǎng)裝置實(shí)施大量連續(xù)培養(yǎng)。對(duì)4cm×10cm的滅菌的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜10個(gè)進(jìn)行干熱滅菌，在滅菌的角型培養(yǎng)皿內(nèi)排列。準(zhǔn)備每5ml培養(yǎng)基含1.1×107個(gè)cho-k1細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是1.1×107個(gè)、死細(xì)胞是5.0×105個(gè)、活細(xì)胞率96％)的懸浮液，在首先準(zhǔn)備的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上各自接種各0.5ml。置于片上的懸浮液用細(xì)胞刮具均一化，通過(guò)少許動(dòng)片，使液通過(guò)而向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜接種細(xì)胞。將此片10個(gè)使a面朝上而積層，在同尺寸的不銹鋼制金屬網(wǎng)上載乘，再向上部載乘pe/pp混合無(wú)紡布，將含此細(xì)胞的集合體設(shè)置到塑料箱內(nèi)(參照?qǐng)D2)。此時(shí)，使含細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜積層體約20°傾斜。從傾斜上部連續(xù)添加培養(yǎng)基(向加青霉素－鏈霉素－兩性霉素b(終濃度；青霉素：100iu/ml、鏈霉素：0.1mg/ml、兩性霉素b：0.25μg/ml)的ham氏f-12添加10％fbs的)，以每分3ml的流速?gòu)?50ml量的培養(yǎng)基溜循環(huán)。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜相互緊密附著而作為集合體存在。3天后，廢棄培養(yǎng)基溜的液后，向培養(yǎng)基溜添加新穎的100ml的培養(yǎng)基液，再繼續(xù)2天培養(yǎng)基循環(huán)。在從接種結(jié)束起5天后停止培養(yǎng)基循環(huán)，使用由cck8的呈色反應(yīng)研究生長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)。在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜各片生息的細(xì)胞的總和是8.9×108個(gè)。相對(duì)于膜厚25μm，上表面下表面合計(jì)至膜厚自身的50％推定由細(xì)胞－培養(yǎng)基的增加區(qū)，則含生存區(qū)域的部件體積是1.5ml，生息細(xì)胞密度是每1ml是5.9×108個(gè)。在無(wú)紡布的細(xì)胞增殖是1.5×107個(gè)，概算生息細(xì)胞密度是每1ml是3.8×106個(gè)。含無(wú)紡布，片每的細(xì)胞數(shù)測(cè)定結(jié)果示于圖4。圖中，數(shù)字示從積層的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片之上數(shù)的編號(hào)。切取一部分最上層(no.1)及中間層(no.5)的細(xì)胞培育的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而進(jìn)行福爾馬林固定，核(dapi)、細(xì)胞膜(cellmask)、及肌動(dòng)蛋白(鬼筆環(huán)肽)染色之后的熒光顯微鏡照片示于圖5。確認(rèn)細(xì)胞的良好的增殖?！緦?shí)施例4：馴化的cho-k1細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的大量連續(xù)培養(yǎng)】將4cm×10cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜10個(gè)于180℃干熱滅菌30分鐘，使網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上而置于滅菌板上。另行、準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基懸浮2.4×106個(gè)經(jīng)0.5％fbs馴化的cho-k1細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是2.3×106個(gè)、死細(xì)胞是9.0×104個(gè)、活細(xì)胞率96％)的cho-k1細(xì)胞懸浮液5ml。將細(xì)胞懸浮液各0.5ml各自添加到上述的滅菌的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜10個(gè)，用細(xì)胞刮具平準(zhǔn)化。放置數(shù)分鐘之后，少許動(dòng)片而使懸浮液通過(guò)，其后，積層10個(gè)結(jié)束在與片同型的金屬網(wǎng)上細(xì)胞接種的片。其后，在積層的片上載乘無(wú)紡布，設(shè)置在培養(yǎng)裝置內(nèi)部，在其上安排培養(yǎng)基供給線，向設(shè)定于37℃的taitec公司制強(qiáng)制通氣式co2溫育器移動(dòng)培養(yǎng)裝置整體，結(jié)束培養(yǎng)準(zhǔn)備。將含0.5％fbs的ham培養(yǎng)基150ml以每分1ml的步幅循環(huán)，開(kāi)始連續(xù)培養(yǎng)。在3天后除去培養(yǎng)基，更換為100ml新鮮的培養(yǎng)基，一邊以同樣的步幅持續(xù)培養(yǎng)基更換，一邊再繼續(xù)培養(yǎng)9天。在從培養(yǎng)開(kāi)始起第12天結(jié)束培養(yǎng)基循環(huán)，拆下聚酰亞胺多孔質(zhì)膜及無(wú)紡布。將拆下的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜作為集合體的狀態(tài)，用cck8實(shí)施細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果確認(rèn)合計(jì)2.6×108個(gè)細(xì)胞。作為概算的細(xì)胞培養(yǎng)密度，是1.7×108個(gè)/ml。切取一部分培育細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，進(jìn)行福爾馬林固定，核(dapi)、細(xì)胞膜(cellmask)、及肌動(dòng)蛋白(鬼筆環(huán)肽)染色之后的熒光顯微鏡照片示于圖6。使用馴化細(xì)胞也確認(rèn)良好的細(xì)胞的增殖?！緦?shí)施例5：大量氣相暴露培養(yǎng)、大量傳代、長(zhǎng)期培養(yǎng)】接著實(shí)施例4，以附著cho-k1細(xì)胞的4cm×10cm見(jiàn)方的長(zhǎng)方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜10個(gè)作為基準(zhǔn)片，使滅菌的同尺寸的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜10個(gè)網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面全部朝上，在基準(zhǔn)片上表面積層。另外，相同地使聚酰亞胺多孔質(zhì)膜10個(gè)網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面全部朝上，在基準(zhǔn)片下表面積層。其后，在積層的30個(gè)片上載乘無(wú)紡布，設(shè)置于在實(shí)施例4中使用的培養(yǎng)裝置(圖2)內(nèi)部，在其上安排培養(yǎng)基供給線，向設(shè)定于37℃的taitec公司制強(qiáng)制通氣式co2溫育器移動(dòng)培養(yǎng)裝置整體，結(jié)束培養(yǎng)準(zhǔn)備。使含0.5％fbs的ham培養(yǎng)基以每分2ml的步幅循環(huán)而開(kāi)始連續(xù)培養(yǎng)。一邊用圖7中所示的步幅持續(xù)培養(yǎng)基更換，一邊再繼續(xù)培養(yǎng)76天以上。將此時(shí)的葡萄糖消費(fèi)量和乳酸生成量用lc/ms(shimadzulcms-2020)測(cè)定。在圖7示其結(jié)果。【實(shí)施例6】在本實(shí)施例中，通過(guò)由使用產(chǎn)生g-csf的cho-k1細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)，對(duì)增殖的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行比較，研究使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的效率。在2cm×2cm的滅菌的正方形容器使網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上設(shè)置40個(gè)滅菌的1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，在其上每1ml培養(yǎng)基加載100μl的3.9×105個(gè)產(chǎn)生g-csf的cho-k1細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是3.5×105個(gè)、死細(xì)胞是3.7×104個(gè)、活細(xì)胞率91％)的懸浮液，使液部通過(guò)，結(jié)束接種。通過(guò)液部抽吸廢棄后，在其上，作為細(xì)胞培養(yǎng)基，添加1ml含10％(20個(gè))或1％(20個(gè))fbs的ham氏-f12培養(yǎng)基，移到co2溫育器，繼續(xù)培養(yǎng)。進(jìn)行每周2次的培養(yǎng)基更換而培養(yǎng)14天之后，使用cck8而測(cè)量細(xì)胞數(shù)的所、培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)是，作為各培養(yǎng)條件20個(gè)平均值，在添加了10％fbs的ham培養(yǎng)基中，每1cm2是3.9×106個(gè)、在添加了1％fbs的ham培養(yǎng)基中，每1cm2是2.9×106個(gè)。【實(shí)施例7】向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加0.5ml細(xì)胞培養(yǎng)基(2％fbs、imdm、和光純藥工業(yè)株式會(huì)社、或者，5％fbs、imdm、和光純藥工業(yè)株式會(huì)社)，使網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上而各自浸漬滅菌的1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。每1個(gè)片向各自培養(yǎng)基內(nèi)片上添加4×104個(gè)產(chǎn)生人抗il-8的chodp-12細(xì)胞懸浮液，一邊以1周2次的比例更換培養(yǎng)基，繼續(xù)實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)，一邊使用cck8經(jīng)時(shí)進(jìn)行細(xì)胞數(shù)的測(cè)定。fbs2％(圖8)及5％(圖9)的兩條件均用10個(gè)片進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，觀察到良好的細(xì)胞的增殖?！颈容^例1：基因重組cho-k1細(xì)胞的使用市售3維培養(yǎng)用支架的大量培養(yǎng)】使用導(dǎo)入人g-csf基因的cho-k1細(xì)胞，進(jìn)行向市售3維培養(yǎng)用支架的接種之后，在培養(yǎng)皿內(nèi)實(shí)施大量培養(yǎng)。(1)由alvetex(注冊(cè)商標(biāo))的培養(yǎng)向alvetex(注冊(cè)商標(biāo))(reprocell公司、cat.avp004)的直徑約2.2cm(接種面積：約3.8cm2)的插入池添加1ml的cho-k1細(xì)胞用培養(yǎng)基；含10％fbs的ham氏-f12培養(yǎng)基，接種5.0×104個(gè)人g-csf基因重組cho-k1細(xì)胞至支架片的每單位面積成2.0×104/cm2。將接種的容器以5％的co2、于37℃溫育，每隔3天回收此培養(yǎng)基的上清，與新接種細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)同樣地加而繼續(xù)培養(yǎng)。在3天、6日、14天后使用cck8測(cè)量細(xì)胞數(shù)。(2)由biotex的培養(yǎng)向3dinsert-pcl/-ps(3dbiotek,llc、cat.ps152012-6)的直徑約2.1cm(接種面積：約3.5cm2)的池添加1ml、向外側(cè)容器添加4ml的cho-k1細(xì)胞用培養(yǎng)基；含10％fbs的ham氏-f12培養(yǎng)基，接種7.0×104個(gè)人g-csf基因重組cho-k1細(xì)胞至支架片的每單位面積成2.0×104/cm2。將接種的容器以5％的co2、于37℃溫育，每隔3天，回收此培養(yǎng)基的上清，與新接種細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)同樣地加而繼續(xù)培養(yǎng)。在3天、6日、14天后使用cck8測(cè)量細(xì)胞數(shù)。(3)由聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加cho-k1細(xì)胞用培養(yǎng)基；含10％fbs的ham氏-f12培養(yǎng)基0.5ml，使10個(gè)滅菌的1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜(接種面積；2cm2)的a面朝上浸漬到培養(yǎng)基中。接種4.0×104個(gè)人g-csf基因重組cho-k1細(xì)胞至片的每單位面積成2.0×104/cm2。將接種的容器以5％的co2、于37℃溫育，每隔3天回收此培養(yǎng)基的上清，與新接種細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)同樣地加而繼續(xù)培養(yǎng)。在6天、14日后使用cck8測(cè)量細(xì)胞數(shù)。<比較驗(yàn)證>各自的部件由于面積及厚度有差異，直接比較細(xì)胞培養(yǎng)效率是困難的，得到面積及厚度，作為體積的效率比較變得必要。因此，將各部件的細(xì)胞數(shù)以1cm2及25μm換算面積－厚度，對(duì)于在該體積內(nèi)培養(yǎng)的細(xì)胞與圖10比較?！颈容^例2：人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖比較】(1)由alvetex(注冊(cè)商標(biāo))的培養(yǎng)向alvetex(注冊(cè)商標(biāo))(reprocell公司、cat.avp004)的直徑約2.2cm(接種面積：約3.8cm2)的插入池添加1ml的細(xì)胞培養(yǎng)基(2％fbs、fibroblastmedia、lonza公司制)，接種人皮膚成纖維細(xì)胞(5.0×104個(gè))懸浮液。將接種的容器以5％的co2、于37℃溫育，每隔3天，回收此培養(yǎng)基的上清，與新接種細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)同樣地加而繼續(xù)培養(yǎng)。在3天、6日、14天后使用cck8測(cè)量細(xì)胞數(shù)。(2)由biotex的培養(yǎng)向3dinsert-pcl/-ps(3dbiotek,llc公司、cat.ps152012-6)的直徑約2.1cm(接種面積：約3.5cm2)的池添加1ml、向外側(cè)容器添加4ml的細(xì)胞培養(yǎng)基(2％fbs、fibroblastmedia、lonza公司制)，接種人皮膚成纖維細(xì)胞(7.0×104個(gè))懸浮液至支架片的每單位面積成2.0×104/cm2。將接種的容器以5％的co2、于37℃溫育，每隔3天，回收此培養(yǎng)基的上清，與新接種細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)同樣地加て繼續(xù)培養(yǎng)。在3天、6日、14天后使用cck8測(cè)量細(xì)胞數(shù)。(3)由聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加1ml細(xì)胞培養(yǎng)基，使滅菌的1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜(接種面積；2cm2)的a面朝上而浸漬到培養(yǎng)基中。接種人皮膚成纖維細(xì)胞至片的每單位面積成2×104/cm2。將接種的容器以5％的co2、于37℃溫育，每隔3天回收此培養(yǎng)基的上清，與新接種細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)同樣地加而繼續(xù)培養(yǎng)。在18天后使用cck8測(cè)量細(xì)胞數(shù)。<比較驗(yàn)證>各自的部件由于面積及厚度有差異，直接比較細(xì)胞培養(yǎng)效率困難，得到面積及厚度，作為體積的效率比較變得必要。因此，將各部件的細(xì)胞數(shù)以1cm2及25μm以換算面積－厚度，對(duì)于在該體積內(nèi)培養(yǎng)的細(xì)胞與圖11比較。當(dāng)前第1頁(yè)12