本發(fā)明涉及，細(xì)胞的長期培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)裝置和試劑盒。詳細(xì)地說，涉及使用聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞的長期培養(yǎng)方法，細(xì)胞培養(yǎng)裝置和試劑盒。此外，本發(fā)明涉及細(xì)胞的冷凍保存方法和試劑盒。具體而言，涉及使用聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞的冷凍保存方法和試劑盒。
背景技術(shù)：
：細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞在體內(nèi)一般作為三維群體存在，在經(jīng)典的平面培養(yǎng)中，細(xì)胞以粘到容器的形式單層培養(yǎng)。在附著性細(xì)胞(付著細(xì)胞)的培養(yǎng)中，長期以來，不同的培養(yǎng)方法已通過培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)等被開發(fā)。通過這種培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)等進(jìn)行培養(yǎng)的情況下，培養(yǎng)細(xì)胞持續(xù)增殖，成為被稱為“融合(鋪滿)”的無法再增殖更多的情況下，增殖停止。雖然也取決于細(xì)胞類型，在不傳代的情況下如果繼續(xù)這種融合(鋪滿)狀態(tài)，那么在一定的時(shí)間段后，開始自發(fā)地剝落，細(xì)胞不能傳代的情況也在許多細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。隨著再生醫(yī)療中對(duì)由細(xì)胞移植與細(xì)胞的物質(zhì)生產(chǎn)得到更多關(guān)注，附著性細(xì)胞的培養(yǎng)方法不斷增長的需求。迄今，利用微載體等的載體的疑似懸浮培養(yǎng)或使用工作表面的球狀體培養(yǎng)或使用中空纖維作為細(xì)胞培養(yǎng)場所的中空纖維培養(yǎng)等，如各種立體培養(yǎng)和載體培養(yǎng)等已被開發(fā)。中空纖維培養(yǎng)在被保護(hù)在牢固的中空纖維的環(huán)境下，作為將細(xì)胞恒定和長期培養(yǎng)的方法論而進(jìn)行處理，此外，微載體培養(yǎng)、通過空氣升液法或以連續(xù)培養(yǎng)為目的的裝置的設(shè)計(jì)的長期培養(yǎng)也已經(jīng)被嘗試過很多。這些方法的特點(diǎn)是通過向應(yīng)用載體的生長空間賦予三維環(huán)境而擴(kuò)大增殖場所，在這種大的生長場所中通過裝置設(shè)計(jì)和方法設(shè)計(jì)使得載體其自身在牢固環(huán)境中得到保護(hù)，目的是使得培養(yǎng)期間延長。在另一方面，在這些方法中使用的系統(tǒng)，是那些需要復(fù)雜的裝置或大容量裝置的，或一旦培養(yǎng)開始，成為難以干預(yù)培養(yǎng)環(huán)境本身的封閉系統(tǒng)的情況多見。因此，雖然將細(xì)胞長期培養(yǎng)、而且可以方便處理系統(tǒng)的方法論被需求，但是，恰當(dāng)?shù)姆椒ㄕ撨€沒有被開創(chuàng)。在另一方面，如非專利文獻(xiàn)1和2中所示，關(guān)于模仿體內(nèi)器官的長期細(xì)胞培養(yǎng)方法，已經(jīng)報(bào)道使用立體載體的研究例子。這些都是胰臟的胰島的重建活體包埋實(shí)驗(yàn)或試驗(yàn)管內(nèi)的骨髓細(xì)胞長期培養(yǎng)等，旨在部位選擇性重建的研究成果事例。雖然存在針對(duì)長期培養(yǎng)課題3維立體環(huán)境中的細(xì)胞培養(yǎng)物的意義和價(jià)值被示出的重要成就，各個(gè)載體對(duì)每個(gè)用途具有高度特異性，所用的材料是生物相容性材料的纖維狀結(jié)構(gòu)體和通過繪圖構(gòu)成的高級(jí)結(jié)構(gòu)體，因此，缺乏通用性，處理也缺乏一般性。更簡單和可適用于多樣化狀態(tài)的方法論的發(fā)展已經(jīng)被期望。細(xì)胞通過其生存形式的特征，主要分為附著性細(xì)胞和懸浮細(xì)胞兩種。任何細(xì)胞在進(jìn)行人工培養(yǎng)的情況下，通過細(xì)胞接種、培養(yǎng)、增殖、傳代、經(jīng)由冷凍保存這樣的周期。近來，隨著使用培養(yǎng)細(xì)胞的疫苗，酶，激素，抗體，細(xì)胞因子等的體內(nèi)蛋白質(zhì)等的生產(chǎn)和或再生醫(yī)療中細(xì)胞移植得到更多關(guān)注，將大量的細(xì)胞有效地并且簡單地培養(yǎng)的方法正在被開發(fā)。特別地，使用載體的細(xì)胞培養(yǎng)方法，由于效率方面的吸引力和通用性而得到多方面注意，有各種各樣的方法正在開發(fā)。一般地，這些細(xì)胞培養(yǎng)涉及與細(xì)胞冷凍保存有關(guān)的技術(shù)，也從許多方面進(jìn)校研究。存在以下報(bào)道：脫離經(jīng)典冷凍法，嘗試更容易地通過培養(yǎng)板本身的細(xì)胞冷凍的技術(shù)和(專利文獻(xiàn)4)，使用立體載體、旨在改善冷凍方面細(xì)胞生存率的方法(專利文獻(xiàn)5)，或者，通過使用纖維性載體，改進(jìn)培養(yǎng)細(xì)胞的冷凍保存特性的實(shí)例(專利文獻(xiàn)6)，檢驗(yàn)干細(xì)胞的生存效率的實(shí)例(非專利文獻(xiàn)3)等的報(bào)道。然而，作為冷凍保存介質(zhì)，被限制為具有獨(dú)特結(jié)構(gòu)的纖維性材料，但這種材料，雖然具有作為冷凍保存介質(zhì)的機(jī)能，但是不是作為細(xì)胞培養(yǎng)載體原樣可以使用的材料，只能作為暫時(shí)保持體而被利用。簡便且有效地，從冷凍保存到的細(xì)胞(細(xì)胞喚醒)解凍、從使用到再冷凍可以自始至終地實(shí)施的/新方法論的構(gòu)建是被期望的。聚酰亞胺多孔膜該聚酰亞胺是包含在重復(fù)單元中具有酰亞胺鍵的高分子(聚合物)的總稱。芳族聚酰亞胺是指芳族化合物通過直接酰亞胺鍵被連接的高分子(聚合物)。由于芳族聚酰亞胺具有芳族和芳族通過酰亞胺鍵的共軛結(jié)構(gòu)，具有剛性和牢固的分子結(jié)構(gòu)，并且由于酰亞胺鍵具有強(qiáng)的分子間力，具有非常高的水平的熱的，機(jī)械的，化學(xué)的性質(zhì)。聚酰亞胺多孔膜過濾器在本發(fā)明前更多地用于濾器，低介電常數(shù)膜，燃料電池電解質(zhì)膜，特別地以電池關(guān)系中心的用途。專利文獻(xiàn)7-9中記載了，特別是在氣體等物質(zhì)透過性中是優(yōu)異的，孔隙率高，兩個(gè)表面的平滑性優(yōu)異，相對(duì)強(qiáng)度高，孔隙率高，但是對(duì)于膜厚度方向的壓縮應(yīng)力耐力優(yōu)良的具有大量大孔隙的聚酰亞胺多孔膜。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1：特開平(特開平)5－123168專利文獻(xiàn)2：特開平(特開平)10－108673專利文獻(xiàn)3：特公平6－30570專利文獻(xiàn)4：特開(特開)2002－34551專利文獻(xiàn)5：特許(特許)第5140155號(hào)專利文獻(xiàn)6：特開(特開)2003－47464專利文獻(xiàn)7：wo2010/038873專利文獻(xiàn)8：特開(特開)2011－219585專利文獻(xiàn)9：特開(特開)2011－219586非專利文獻(xiàn)：非專利文獻(xiàn)1：mortera-blancoetal.,biomaterials32(2011)9263-9270非專利文獻(xiàn)2：daoudetal.,biomaterials32(2011)1536-1542非專利文獻(xiàn)3：a.bissoyietal./cryobiology68(2014)332-342發(fā)明概述發(fā)明要解決的課題本發(fā)明的目的是提供，適應(yīng)所要求的條件和形式，能夠簡便且穩(wěn)定地長期培養(yǎng)細(xì)胞，針對(duì)在培養(yǎng)中的變化也能夠容易應(yīng)對(duì)的細(xì)胞培養(yǎng)方法，并且，提供用于在培養(yǎng)方法中使用的細(xì)胞培養(yǎng)裝置和試劑盒。此外，本發(fā)明的目的是提供，簡便且有效地，從細(xì)胞的冷凍保存到細(xì)胞的解凍(細(xì)胞喚醒)，從使用到重新冷凍，可以自始至終地實(shí)施的細(xì)胞的冷凍方法。用于解決課題的手段本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，通過使用聚酰亞胺多孔膜進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，可以將細(xì)胞效率良好地在長期間內(nèi)培養(yǎng)。本發(fā)明優(yōu)選包括，但不限于，以下的方式。[方式1]細(xì)胞的長期培養(yǎng)方法，其是包括(1)將細(xì)胞施加到聚酰亞胺多孔膜，和(2)將施加了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜施加到細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中，將細(xì)胞培養(yǎng)30天以上的方法。[方式2]方式1中記載的方法，在工序(2)中，培養(yǎng)細(xì)胞60天以上。[方式3]方式1中記載的方法，在工序(2)中，培養(yǎng)細(xì)胞120天以上。[方式4]方式1-3中任一項(xiàng)中記載的方法，兩種以上的聚酰亞胺多孔膜上下或左右地層疊在細(xì)胞培養(yǎng)基中。[方式5]方式1-4中任一項(xiàng)中記載的方法，將聚酰亞胺多孔膜i)折疊，ii)卷成卷狀，iii)將片材或小片通過絲狀結(jié)構(gòu)體連接，或iv)系成繩狀懸浮或固定在細(xì)胞培養(yǎng)容器中的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中。[方式6]方式1-5中任一項(xiàng)中記載的方法，在工序(2)的培養(yǎng)中，聚酰亞胺多孔膜的部分或全部不與細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的液相接觸。[方式7]方式1-6中任一項(xiàng)中記載的方法，在工序(2)的培養(yǎng)中，在細(xì)胞培養(yǎng)容器中包含的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的總體積是，包括細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜體積總和的10000倍或比其更少。[方式8]方式1-7中任一項(xiàng)中記載的方法，在工序(2)的培養(yǎng)中，在細(xì)胞培養(yǎng)容器中包含的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的總體積是，包括細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜體積總和的100倍或比其更少。[方式9]方式1-8中任一項(xiàng)中記載的方法，工序(2)的培養(yǎng)，通過從細(xì)胞培養(yǎng)容器外設(shè)置的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給手段(裝置，器件)、連續(xù)或間歇地將細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給至細(xì)胞培養(yǎng)容器中的系統(tǒng)進(jìn)行。[方式10]方式9中記載的方法，細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給手段(裝置，器件)和細(xì)胞培養(yǎng)容器中之間循環(huán)。[方式11]方式9或10中記載的方法，其中前述系統(tǒng)是細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其包括是細(xì)胞培養(yǎng)容器的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)以及是細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給手段(裝置，器件)的培養(yǎng)基供給單元(培養(yǎng)基供給部件)、此處培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)是容納用于承載細(xì)胞的一種或多種(一個(gè)或多個(gè))聚酰亞胺多孔膜的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)，是具有培養(yǎng)基供給口和培養(yǎng)基排出口的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)，培養(yǎng)基供給單元(培養(yǎng)基供給部件)具備培養(yǎng)基收納容器，培養(yǎng)基供給線，以及用于通過所述培養(yǎng)基供給線連續(xù)地或間歇地將培養(yǎng)基送液的送液泵，此處培養(yǎng)基供給線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器的培養(yǎng)基接觸，培養(yǎng)基供給線的第二端部通過培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)的培養(yǎng)基供給口與培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)內(nèi)連通方法。[方式12]方式13中記載的方法，培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)是不具備空氣供給口，空氣排出口，和氧交換膜的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)。[方式13]方式11或12中記載的方法，培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)還具備培養(yǎng)基排出線，其中，培養(yǎng)基排出線的第一端部連接到培養(yǎng)基收納容器，培養(yǎng)基排出線第二端部經(jīng)由培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)的培養(yǎng)基排出口，連通至培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)內(nèi)，培養(yǎng)基可以在培養(yǎng)基供給單元(培養(yǎng)基供給部件)以及培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)之間循環(huán)。[方式14]方式1-13中任一項(xiàng)中記載的方法，細(xì)胞選自由以下組成的組：動(dòng)物細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞，植物細(xì)胞，酵母菌和細(xì)菌。[方式15]方式14中記載的方法，動(dòng)物細(xì)胞是來自屬于脊椎動(dòng)物的動(dòng)物的細(xì)胞。[方式16]方式15中記載的方法，細(xì)胞選自由以下組成的組：cho細(xì)胞，cho-k1細(xì)胞株，chodp-12細(xì)胞株，cho細(xì)胞關(guān)聯(lián)株，vero細(xì)胞，和mdck細(xì)胞。[方式17]權(quán)利要求1～16中任一項(xiàng)中記載的方法，聚酰亞胺多孔膜是包括從四羧酸二酐和二胺所獲得的聚酰亞胺的聚酰亞胺多孔膜。[方式18]權(quán)利要求17中記載的方法，聚酰亞胺多孔膜是，使包含從四羧酸二酐和二胺得到的聚酰胺酸溶液和著色前體的聚酰胺酸溶液組合物成形后、在250℃以上進(jìn)行熱處理、由此得到的著色的聚酰亞胺多孔膜。[方式19]用于在權(quán)利要求1～18中記載的方法中使用的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，含有聚酰亞胺多孔膜。[方式20]權(quán)利要求19中記載的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，2種(2個(gè))以上的聚酰亞胺多孔膜上下或左右地層疊。[方式21]用于權(quán)利要求1～權(quán)利要求13中任一項(xiàng)中記載的方法中使用的試劑盒，含有聚酰亞胺多孔膜。[方式22]聚酰亞胺多孔膜在細(xì)胞的長期培養(yǎng)方法中的用途。[方式23]細(xì)胞的冷凍保存方法，其是包括(1)將細(xì)胞承載至聚酰亞胺多孔膜的工序，(2)將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜放置在冷凍細(xì)胞的條件下，由此冷凍由聚酰亞胺多孔膜承載的細(xì)胞的工序，和(3)將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜以保持冷凍狀態(tài)的條件保存的工序的方法。[方式24]方式23中記載的方法，在工序(1)中，通過在聚酰亞胺多孔膜接種細(xì)胞，使細(xì)胞承載于聚酰亞胺多孔膜。[方式25]方式23中記載的方法，在工序(1)中，通過將細(xì)胞接種到聚酰亞胺多孔膜而培養(yǎng)，使細(xì)胞承載于聚酰亞胺多孔膜。[方式26]方式23-25中任一項(xiàng)中記載的方法，工序(3)之后，還包括(4)將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜在解凍細(xì)胞的條件下放置，由此使由聚酰亞胺多孔膜承載的細(xì)胞解凍。[方式27]方式26中記載的方法，工序(4)之后，還包括(5)將細(xì)胞解凍的聚酰亞胺多孔膜施加到細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基，培養(yǎng)細(xì)胞的工序。[方式28]方式27中記載的方法，在工序(5)中，培養(yǎng)細(xì)胞直到培養(yǎng)的細(xì)胞在聚酰亞胺多孔膜外也增殖。[方式29]方式27或28中記載的方法，在工序(5)中，與細(xì)胞解凍的聚酰亞胺多孔膜一同、將不承載細(xì)胞的另外一個(gè)或多個(gè)(一種或多種)聚酰亞胺多孔膜施加到細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中并培養(yǎng)，由此，使細(xì)胞承載于另外一個(gè)或多個(gè)(一種或多種)聚酰亞胺多孔膜。[方式30]方式27～29中任一項(xiàng)中記載的方法，工序(5)之后，還包括(6)將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜的部分或全部，在冷凍細(xì)胞的條件下放置，由此冷凍由聚酰亞胺多孔膜承載的細(xì)胞的工序，和(7)將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜以保持冷凍狀態(tài)的條件保存的工序。[方式31]方式30中記載的方法，工序(1)至(7)重復(fù)多次。[方式32]方式23～31中任一項(xiàng)中記載的方法，細(xì)胞選自由以下組成的組：動(dòng)物細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞，植物細(xì)胞，酵母菌和細(xì)菌。[方式33]方式32中記載的方法，動(dòng)物細(xì)胞是來自屬于脊椎動(dòng)物的動(dòng)物的細(xì)胞。[方式34]方式32或33中記載的方法，細(xì)胞是附著性細(xì)胞。[方式35]方式32或33中記載的方法，細(xì)胞是懸浮細(xì)胞。[方式36]方式23～35中任一項(xiàng)中記載的方法，聚酰亞胺多孔膜是，包括從四羧酸二酐和二胺獲得的聚酰亞胺的聚酰亞胺多孔膜。[方式37]方式36中記載的方法，聚酰亞胺多孔膜是，使包含從四羧酸二酐和二胺得到的聚酰胺酸溶液和著色前體的聚酰胺酸溶液組合物成形后、在250℃以上進(jìn)行熱處理、由此得到的著色的聚酰亞胺多孔膜。[方式38]方式36或37中記載的方法，聚酰亞胺多孔膜是具有兩個(gè)不同的表面層和大空隙層的多層結(jié)構(gòu)的聚酰亞胺多孔膜。[方式39]聚酰亞胺多孔膜，用于細(xì)胞的冷凍保存。[方式40]用于在方式23～28中任一項(xiàng)中記載的方法中使用的聚酰亞胺多孔膜。[方式41]用于在方式23～38中任一項(xiàng)中記載的方法中使用的試劑盒，含有聚酰亞胺多孔膜。[方式42]聚酰亞胺多孔膜在方式23～38的任一項(xiàng)中記載的方法中的用途。發(fā)明的效果本發(fā)明，通過使用聚酰亞胺多孔膜，能夠?qū)⒓?xì)胞簡便且穩(wěn)定地進(jìn)行長期間培養(yǎng)。在本發(fā)明中，成為培養(yǎng)載體的聚酰亞胺多孔膜具有，細(xì)胞能夠通過的大口徑的連接孔，因此，即使非常大量的細(xì)胞在其空間中生長，最后三維空間也得到了保障。因此，經(jīng)典平面培養(yǎng)中如融合(鋪滿)的狀態(tài)發(fā)生的情況的培養(yǎng)期間的限制難以發(fā)生。此外，在本發(fā)明中，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，不需要特別將聚酰亞胺多孔膜通過膠原進(jìn)行預(yù)處理。此外，因?yàn)榫埘啺范嗫啄な侨嵝缘谋∧げ牧?，其可以簡便地以自由的形狀彎曲、折疊或切割。因此，通過培養(yǎng)，任何時(shí)候如果必要的話，除去含有細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜，可以經(jīng)受處理和測量等。此外，它也可以適用于細(xì)胞培養(yǎng)自動(dòng)化。此外，由于聚酰亞胺多孔膜是極其耐熱的極好的材料，如滅菌等的操作也可以非常容易實(shí)施。通過使用聚酰亞胺多孔膜冷凍細(xì)胞，可以有效冷凍保存大量的細(xì)胞，并且是有效地操作細(xì)胞。從冷凍狀態(tài)到解凍后，在保持原樣的聚酰亞胺多孔膜上也可以繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)。另外，將繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)的聚酰亞胺多孔膜與細(xì)胞未生長的聚酰亞胺多孔膜等的其它載體接觸，或放置在所述其它載體附近，可以使細(xì)胞移動(dòng)、增殖。細(xì)胞移動(dòng)完成后，取出原始聚酰亞胺多孔膜、將其再冷凍，可以被保存直到下次使用。通過這種方式，從細(xì)胞喚醒到使用和冷凍的一系列的操作可以通過相同的材料進(jìn)行。在這些作業(yè)中，胰蛋白酶等的細(xì)胞剝離操作，膠原蛋白涂層等的繁雜作業(yè)是特別沒有必要的，因此，如，作業(yè)是簡便和有效的，快速的操作是可能的。此外，本發(fā)明的方法也適合于應(yīng)用到包括自動(dòng)化工序的用途。另外，在效率方面，由于在至少25微米的非常薄的膜中可以生長大量細(xì)胞，每單位體積的效率變得前所未有的高。例如，使用有前途(被期望)的細(xì)胞株等進(jìn)行物質(zhì)生產(chǎn)時(shí)，除了長期間使用，還能夠原樣冷凍、保存細(xì)胞，在必要時(shí)重新使用。有前途(被期望)的細(xì)胞株的庫化等也可以容易地進(jìn)行。附圖的簡要說明[圖1]圖1是示出了使用聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞培養(yǎng)的模型圖。[圖2]圖2示出了細(xì)胞培養(yǎng)裝置的一個(gè)實(shí)例。[圖3]圖3示出了人皮膚成纖維細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔膜的長期培養(yǎng)的結(jié)果。[圖4]圖4示出了人皮膚成纖維細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔膜的長期培養(yǎng)的結(jié)果。[圖5]圖5示出了vero細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔膜的長期培養(yǎng)的結(jié)果。[圖6]圖6示出了使用聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞冷凍和解凍的工程概念圖。與細(xì)胞懸浮液的冷凍、解凍過程不同，通過聚酰亞胺多孔膜可以處理直接的細(xì)胞聚集體，因此如離心分離等的工序被引人注目地刪去。[圖7]圖7是聚酰亞胺多孔膜，涉及懸浮細(xì)胞的冷凍、解凍細(xì)胞和操作的概念圖。活用懸浮細(xì)胞在增殖過程中從聚酰亞胺多孔膜溢出的特性，與作為樣品重復(fù)使用的相關(guān)的優(yōu)點(diǎn)被示出。[圖8]圖8示出了人皮膚成纖維細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔膜的長期培養(yǎng)的結(jié)果。[圖9]圖9示出了人皮膚成纖維細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔膜的長期培養(yǎng)的結(jié)果。[圖10]圖10顯示了使用聚酰亞胺多孔膜冷凍chodp-12細(xì)胞后，解凍、培養(yǎng)的結(jié)果進(jìn)行。[圖11]圖11顯示使用聚酰亞胺多孔膜冷凍人皮膚成纖維細(xì)胞后，解凍、培養(yǎng)的結(jié)果。用于實(shí)施發(fā)明的方式i.培養(yǎng)細(xì)胞的方法本發(fā)明涉及細(xì)胞的長期培養(yǎng)方法。順便提及，國際申請(qǐng)?zhí)杙ct/jp2014/070407的全部內(nèi)容，通過引用并入本文。本發(fā)明的細(xì)胞的培養(yǎng)方法包括將細(xì)胞施加到聚酰亞胺多孔膜并培養(yǎng)。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，聚酰亞胺多孔膜適合于細(xì)胞粘附、培養(yǎng)，并想到了本發(fā)明。本發(fā)明的方法特征在于，將細(xì)胞施加到向聚酰亞胺多孔膜，在聚酰亞胺膜的表面或內(nèi)部培養(yǎng)細(xì)胞。1.細(xì)胞施加到聚酰亞胺多孔膜細(xì)胞施加到聚酰亞胺多孔膜的具體工序沒有特別的限制。本說明書中記載的工序，或者適合用于將細(xì)胞施加至膜狀載體的任何方法均可以采用。在本發(fā)明的方法中將細(xì)胞施加到聚酰亞胺多孔膜包括，但不限于，例如，以下方式。(a)包括將細(xì)胞接種到前述聚酰亞胺多孔膜的表面的工序的方式；(b)包括使聚酰亞胺多孔膜干燥的表面承載細(xì)胞懸浮液、放置，或者通過移動(dòng)聚酰亞胺多孔膜，以促進(jìn)液體的流出，或刺激表面的一部分，使細(xì)胞懸浮液被吸入至前述膜，并且，使細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞停留在前述膜內(nèi)，使水分流出的工序的方式；而且，(c)包括將前述聚酰亞胺多孔膜的一個(gè)面或兩個(gè)面用細(xì)胞培養(yǎng)物或經(jīng)滅菌的液體濕潤，將細(xì)胞懸浮液裝填到前述經(jīng)濕潤的聚酰亞胺多孔膜，并且，使細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞停留在前述膜內(nèi)，使水分流出，的工序的方式。(a)的方式，包括在聚酰亞胺多孔膜的表面上直接接種細(xì)胞，細(xì)胞塊?；蛘撸€包括將聚酰亞胺多孔膜放置在細(xì)胞懸浮液中，從而使細(xì)胞培養(yǎng)液浸潤膜的表面的方式。接種于聚酰亞胺多孔膜的表面的細(xì)胞附著到聚酰亞胺多孔膜，進(jìn)入多孔的內(nèi)部。優(yōu)選地，不添加特別是來自外部的物理的或化學(xué)的力，所述細(xì)胞自發(fā)地附著到聚酰亞胺多孔膜。接種于聚酰亞胺多孔膜的表面的細(xì)胞在膜的表面和/或內(nèi)部可穩(wěn)定地生長和增殖。根據(jù)細(xì)胞生長和增殖的膜的位置，可以采取各種不同的形式。(b)的方式中，在聚酰亞胺多孔膜的經(jīng)干燥的表面承載細(xì)胞懸浮液。放置聚酰亞胺多孔膜，或通過移動(dòng)前述聚酰亞胺多孔膜、以促進(jìn)液體的流出，或刺激表面的一部分，使細(xì)胞懸浮液被吸入前述膜，通過前述而使細(xì)胞懸浮液滲透到膜中。不受理論的束縛，但是據(jù)信這是由于來自聚酰亞胺多孔膜的各表面形狀等的性質(zhì)所決定的。本方式中，將在膜的細(xì)胞填裝的位置吸入細(xì)胞懸浮液、從而接種?；蛘撸缭?c)的實(shí)施例中，其中將前述聚酰亞胺多孔膜的一個(gè)面或兩個(gè)面的部分或全體用細(xì)胞培養(yǎng)液或經(jīng)滅菌的液體濕潤，從而在經(jīng)濕潤的聚酰亞胺多孔膜中填裝細(xì)胞懸浮也可。在這種情況下，細(xì)胞懸液的通過速度大大提高。例如，以防膜的飛散為主要目的、潤濕膜端一部分(膜極一部)的方法(在下文中，這被稱為“單點(diǎn)濕法”)可以使用。單點(diǎn)濕法，非常接近那些基本上不潤濕膜的干法((b)的方式)。但是認(rèn)為，關(guān)于被潤濕的小部分，細(xì)胞液的膜滲透很快。此外，在聚酰亞胺多孔膜的一個(gè)面或兩個(gè)面的整體被充分潤濕的膜(在下文中，這被稱為“濕膜”)裝填細(xì)胞懸浮液的方法(在下文中的方法，這被描述為“濕膜法”)可以使用。在這種情況下，在整個(gè)聚酰亞胺多孔膜中，將細(xì)胞懸液的通過速度大大提高。在(b)和(c)的方式中，使細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞停留在前述膜內(nèi)，使水分流出。由此濃縮細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞的濃度，使細(xì)胞以外的不需要的成分與水分一起流出等的處理也是可能的。有時(shí)將(a)方式稱為“自然接種”，將方式(b)和(c)稱為“吸入接種”。雖然不受限制，但是優(yōu)選地，在聚酰亞胺多孔膜中活細(xì)胞選擇性地停留。因此，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，活細(xì)胞停留在前述聚酰亞胺多孔膜內(nèi)，死細(xì)胞優(yōu)先與水分一起流出。在本實(shí)施方式(c)中使用的經(jīng)滅菌的液體沒有特別的限定，是經(jīng)滅菌的緩沖液或無菌水。緩沖液為，例如，(+)和(-)dulbeccopbs(dulbecco’spbs)、(+)和(-)hank氏平衡鹽溶液(hank'sbalancedsaltsolution)等。緩沖液的例子在下面的表1中顯示。表1成分濃度(mmol/l)濃度(g/l)nacl1378.00kcl2.70.20na2hpo4101.44kh2po41.760.24ph(-)7.47.4此外，在本發(fā)明的方法中，將細(xì)胞施加到聚酰亞胺多孔膜、通過使懸浮狀態(tài)粘附性細(xì)胞與聚酰亞胺多孔膜以懸浮狀態(tài)共存而將細(xì)胞附著到膜(纏繞起來)的方式也被包括在內(nèi)。例如，在本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法中，為了將細(xì)胞施加到聚酰亞胺多孔膜，在細(xì)胞培養(yǎng)容器中，也可以加入細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基、細(xì)胞和一種或多種(一個(gè)或多個(gè))前述聚酰亞胺多孔膜。如果細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基是液體，那么聚酰亞胺多孔膜處于懸浮在細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中的狀態(tài)。根據(jù)聚酰亞胺多孔膜的性質(zhì)，細(xì)胞可以附著到聚酰亞胺多孔膜。因此，即使天生不適合懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，也可以通過聚酰亞胺多孔膜懸浮在細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中的狀態(tài)而進(jìn)行培養(yǎng)。優(yōu)選地，細(xì)胞自發(fā)地附著到聚酰亞胺多孔膜?！白园l(fā)地附著”意味著，尤其是在不添加外部的物理力或化學(xué)力的情況下，細(xì)胞也停留在多孔聚酰亞胺膜的表面或內(nèi)部。細(xì)胞培養(yǎng)，通過在細(xì)胞培養(yǎng)中的存在形態(tài)、培養(yǎng)細(xì)胞可分為附著培養(yǎng)系細(xì)胞和懸浮培養(yǎng)系細(xì)胞。附著培養(yǎng)系細(xì)胞是附著于培養(yǎng)容器、增殖的培養(yǎng)細(xì)胞，傳代時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)基交換。懸浮培養(yǎng)系細(xì)胞是在培養(yǎng)基中以懸浮狀態(tài)增殖的培養(yǎng)細(xì)胞，一般在傳代時(shí)不進(jìn)行培養(yǎng)基交換，而進(jìn)行稀釋培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)存在以下的優(yōu)勢：因?yàn)閼腋∨囵B(yǎng)通過懸浮狀態(tài)、即在液體中能夠培養(yǎng)，使得能夠大量培養(yǎng)，相比于只在培養(yǎng)容器表面生長的附著性細(xì)胞，因?yàn)榱Ⅲw培養(yǎng)，每單位空間可能培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)量有很多。在本發(fā)明的長期培養(yǎng)方法中，聚酰亞胺多孔膜以在細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮的狀態(tài)使用時(shí)，可以使用兩個(gè)(兩種)以上的前述聚酰亞胺多孔膜的小片。聚酰亞胺多孔膜是柔性膜，因此，例如通過使其小片懸浮在培養(yǎng)基中而使用，由此在一定容量的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中可以帶入具有許多表面積的聚酰亞胺多孔膜。對(duì)于通常的培養(yǎng)，容器底面積是細(xì)胞培養(yǎng)可能的面積的上限，但是，使用本發(fā)明的聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞培養(yǎng)，先前帶入的聚酰亞胺多孔膜的大表面積的整體成為細(xì)胞培養(yǎng)可能的面積。由于聚酰亞胺多孔膜使得細(xì)胞培養(yǎng)液通過，例如在折疊的膜內(nèi)也可以供給營養(yǎng)，氧等。聚酰亞胺多孔膜的小片的尺寸，形狀沒有特別的限制。形狀可以采用圓形，橢圓形，四角形(四方形)，三角形，多邊形，帶狀等任何形狀。本發(fā)明的聚酰亞胺多孔膜因?yàn)槿嵝钥梢酝ㄟ^改變形狀來使用。的聚酰亞胺多孔膜不采用平面狀，也可以在將形狀加工成立體狀來使用。例如，將聚酰亞胺多孔膜，i)折疊，ii)卷成卷狀，iii)將片材或小片通過絲狀結(jié)構(gòu)體連接，或ⅳ)系成繩狀，在細(xì)胞培養(yǎng)容器的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中懸浮或固定。通過如i)iv)加工形狀，與使用小片的情況同樣地，在一定容量的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中，可以放入大量聚酰亞胺多孔膜。此外，有可能將各小片作為集合體而處理，因此，能夠?qū)⒓?xì)胞集合化而移動(dòng)，綜合性的適用性高。作為與小片集合體相同的看法，兩個(gè)以上(兩種以上)的聚酰亞胺多孔膜可以在細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中上下或左右地層疊。層疊還包括重疊聚酰亞胺多孔膜部分的方式。通過層疊培養(yǎng)，在狹窄的空間也能夠以高密度培養(yǎng)細(xì)胞。另外，也可以在細(xì)胞已經(jīng)生長的膜上進(jìn)一步層疊膜而放置膜，從而形成與其它種類細(xì)胞的多層系統(tǒng)。層疊的聚酰亞胺多孔膜的數(shù)目沒有特別的限制。上述本發(fā)明的細(xì)胞的培養(yǎng)方法可以將兩種或多種方法組合使用。例如，使用方式(a)(c)任一項(xiàng)的方法中先將細(xì)胞施加至聚酰亞胺多孔膜，然后使細(xì)胞附著的聚酰亞胺多孔膜進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，這也是可以的。或者，作為施加至聚酰亞胺多孔膜的工序，也可以將上述方式(a)(c)中任一項(xiàng)的方法中兩種或更多種組合使用。在本發(fā)明的長期培養(yǎng)方法中，優(yōu)選，所述細(xì)胞在聚酰亞胺多孔膜表面和內(nèi)部生長、增殖。通過本發(fā)明的長期培養(yǎng)方法，不用進(jìn)行對(duì)細(xì)胞進(jìn)行如以往的胰蛋白酶處理等的傳代操作，歷經(jīng)30天以上，60天或以上，120天以上，200天以上，或300天以上的長期、可以進(jìn)行培養(yǎng)。此外，通過本發(fā)明的培養(yǎng)方法，在以往的平面培養(yǎng)中可以培養(yǎng)期間以上，例如，平面培養(yǎng)期間的1.5倍以上、2倍以上、2.5倍以上、3倍以上、3.5倍以上、4倍以上、4.5倍以上的期間，可以培養(yǎng)細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，而不造成培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)等的平面培養(yǎng)中長期間細(xì)胞培養(yǎng)物中發(fā)生的細(xì)胞剝離或死滅，在沒有休眠狀態(tài)的情況下，可以長期間維持動(dòng)態(tài)生命。此外，根據(jù)本發(fā)明，細(xì)胞即使是長期培養(yǎng)的細(xì)胞，其細(xì)胞生存力(生物能力(セルバイアビリティ))或細(xì)胞性質(zhì)(例如，分化誘導(dǎo)效率，細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)水平等)，與長期培養(yǎng)前的細(xì)胞相比，幾乎沒有改變。此外，根據(jù)本發(fā)明，由于細(xì)胞在聚酰亞胺多孔膜中三維地增殖，接觸抑制是不可能的，以往的平面培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)的培養(yǎng)領(lǐng)域的限制和平面環(huán)境造成的接觸抑制難以發(fā)生，因此細(xì)胞在長期間生長的培養(yǎng)是有可能的。此外，根據(jù)本發(fā)明，通過將細(xì)胞附著的聚酰亞胺多孔膜與其它聚酰亞胺多孔膜接觸，能夠任意地增加細(xì)胞培養(yǎng)可能的空間，在不執(zhí)行以往伴隨胰蛋白酶處理的傳代操作的情況下，同時(shí)避免接觸抑制引起的融合(鋪滿)狀態(tài)，能夠進(jìn)行在長期間生長的培養(yǎng)。此外，根據(jù)本發(fā)明，也提供了，在不進(jìn)行細(xì)胞冷凍等的情況下，以活的原樣長期間保存的新的保存方法。2.細(xì)胞可在本發(fā)明的方法中可以利用細(xì)胞的種類沒有特別的限制，可用于任何細(xì)胞的增殖。例如，細(xì)胞選自由動(dòng)物細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞，植物細(xì)胞，酵母菌和細(xì)菌組成的組中。動(dòng)物細(xì)胞大致分為，來源于屬于脊椎動(dòng)物門的細(xì)胞和來源于無脊椎動(dòng)物(屬于脊椎動(dòng)物動(dòng)物門的動(dòng)物以外的動(dòng)物)的細(xì)胞。在本說明書中，動(dòng)物細(xì)胞的來源沒有特別的限制。優(yōu)選地，意味著來源于屬于脊椎動(dòng)物門的動(dòng)物的細(xì)胞。脊椎動(dòng)物門包括無顎綱和有頷綱，有頷綱包括哺乳綱，鳥綱，兩棲綱，爬行綱等。優(yōu)選地，在一般情況下，是來源于屬于稱為哺乳動(dòng)物的哺乳綱的動(dòng)物的細(xì)胞。哺乳動(dòng)物包括，但不特別限于，優(yōu)選小鼠，大鼠，人，猴，豬，狗，綿羊，山羊等。在本說明書中植物細(xì)胞的來源沒有特別的限制。包括苔蘚植物，蕨類植物，種子植物的植物的細(xì)胞成為對(duì)象。植物種子細(xì)胞來源的植物包括，單子葉植物、雙子葉植物的任一種。單子葉植物中包括，但不限于，蘭科植物，禾本科植物(稻，玉米，大麥，小麥，高粱等)，莎草科植物等等。在雙子葉植物中，包括屬于菊亞綱，木蘭亞綱，薔薇亞綱等的多種亞綱的植物。藻類，可視為細(xì)胞來源生物。從是真細(xì)菌的藍(lán)細(xì)菌(藍(lán)綠藻(藍(lán)藻))，在真核生物中是單細(xì)胞生物的(硅藻，黃綠藻，渦鞭藻甲藻等)和是多細(xì)胞生物的海藻類(紅藻，褐藻，綠藻)等的不同組被包括。在本說明書中的古細(xì)菌和細(xì)菌種類沒有特別限制。古細(xì)菌包括產(chǎn)甲烷菌，極度嗜鹽菌，嗜熱嗜酸菌，超嗜熱菌等。細(xì)菌選自由以下組成的組：例如，乳酸菌，大腸桿菌，枯草芽孢桿菌和藍(lán)細(xì)菌?？梢栽诒景l(fā)明的方法使用的動(dòng)物細(xì)胞或植物細(xì)胞的種類選、但不限于自由以下組成的組：優(yōu)選地，多能干細(xì)胞，組織干細(xì)胞，體細(xì)胞，和生殖細(xì)胞。在本發(fā)明中術(shù)語“多能干細(xì)胞”意指具有分化成所有組織細(xì)胞的能力(分化多能性)細(xì)胞的總稱。多能干細(xì)胞包括，但不限于，胚胎干細(xì)胞(es細(xì)胞)，人工多能干細(xì)胞(誘導(dǎo)多能干細(xì)胞)(ips細(xì)胞)，胚胎生殖干細(xì)胞(eg細(xì)胞)，生殖干細(xì)胞(gs細(xì)胞)等。優(yōu)選的是，es細(xì)胞或ips細(xì)胞。ips細(xì)胞是特別優(yōu)選的，其原因是不存在倫理問題等的理由。作為多能干細(xì)胞可以使用任何已知的，例如，可以使用在國際公開wo2009/123349(pct/jp2009/057041)中記載的多能干細(xì)胞。作為“組織干細(xì)胞”，可分化細(xì)胞株列已經(jīng)限定于特定的組織，這意味著有可向多種細(xì)胞種類分化的能力(分化多能性)的干細(xì)胞。例如，在骨髓中的造血干細(xì)胞成為血細(xì)胞的來源，神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞。除此之外，存在構(gòu)造肝臟的肝干細(xì)胞，成為皮膚組織的皮膚干細(xì)胞等的不同的類型。優(yōu)選地，組織干細(xì)胞選自，間質(zhì)干細(xì)胞，肝干細(xì)胞，胰干細(xì)胞，神經(jīng)干細(xì)胞，皮膚干細(xì)胞，或造血干細(xì)胞。作為“體細(xì)胞”，意指構(gòu)成多細(xì)胞生物的細(xì)胞中除生殖細(xì)胞以外的細(xì)胞。在有性繁殖中沒有被下一代繼承。優(yōu)選地，體細(xì)胞選自，肝細(xì)胞，胰細(xì)胞，肌細(xì)胞，骨細(xì)胞，成骨細(xì)胞，破骨細(xì)胞，軟骨細(xì)胞，脂肪細(xì)胞，皮膚細(xì)胞，成纖維細(xì)胞，胰細(xì)胞，腎細(xì)胞，肺細(xì)胞，或淋巴細(xì)胞，紅細(xì)胞，白細(xì)胞，單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞或巨核細(xì)胞的血細(xì)胞?！吧臣?xì)胞”指的是具有在生殖中將遺傳信息傳遞給下一代的作用的細(xì)胞。例如，包括用于有性生殖的配子、即卵子、卵細(xì)胞、精子、精子細(xì)胞，用于無性繁殖的孢子。細(xì)胞也可以選自由以下組成的組:肉瘤細(xì)胞，確立細(xì)胞和轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。作為“肉瘤”，包括骨、軟骨、脂肪、肌肉、血液等非上皮細(xì)胞來源的結(jié)締組織細(xì)胞中發(fā)生的癌癥，軟組織肉瘤，惡性骨腫瘤等。肉瘤細(xì)胞是肉瘤來源的細(xì)胞?！按_立細(xì)胞”是指，長期間在體內(nèi)外保持的、具有一定穩(wěn)定的性質(zhì)、可以半永久性傳代培養(yǎng)的培養(yǎng)細(xì)胞。pc12細(xì)胞(來自大鼠腎上腺髓質(zhì))，cho細(xì)胞(來自中國倉鼠卵巢)，hek293細(xì)胞(來自人胎兒腎臟)，hl-60細(xì)胞(來自人白細(xì)胞)，hela細(xì)胞(來自人宮頸癌)，vero細(xì)胞(來自非洲綠猴腎上皮細(xì)胞)，mdck細(xì)胞(來自犬腎小管上皮細(xì)胞)，hepg2細(xì)胞(來自人肝癌)等的包括人類的不同物種的各種組織來源的細(xì)胞株存在。“轉(zhuǎn)化的細(xì)胞”意味著，從細(xì)胞外部導(dǎo)入核酸(dna等)，改變遺傳性質(zhì)的細(xì)胞。對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、細(xì)菌的轉(zhuǎn)化，各個(gè)適合的方法是公知的。3.聚酰亞胺多孔膜聚酰亞胺是在重復(fù)單元中包含酰亞胺鍵的高分子(聚合物)的總稱，通常是指芳族化合物通過直接酰亞胺鍵連接的芳族聚酰亞胺。芳族聚酰亞胺具有芳族和芳族通過酰亞胺鍵的共軛結(jié)構(gòu)，具有剛硬、牢固的分子結(jié)構(gòu)，并且酰亞胺鍵具有強(qiáng)的分子間力，因此，具有非常高水平的熱的、機(jī)械的、化學(xué)的性質(zhì)。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔膜是，包括由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺(作為主要成分)的聚酰亞胺多孔膜，更優(yōu)選為由通過四羧酸二酐和二胺所得到的聚酰亞胺形成的聚酰亞胺多孔膜。所述“作為主要組分包括”意指，作為聚酰亞胺多孔膜的構(gòu)成成分，從四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺以外的成分是基本上不被包含的，或者即使被包含，也是不影響由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺的性質(zhì)的另外的成分。包括從四羧酸成分和二胺組分得到的聚酰胺酸溶液與著色前體的聚酰胺酸溶液組合物成形后，在250℃以上僅限熱處理，由此得到的聚酰亞胺多孔膜也被包括。聚酰胺酸聚酰胺酸是通過聚合四羧酸成分和二胺成分而獲得。聚酰胺酸是，通過熱酰亞胺化或化學(xué)酰亞胺化的閉環(huán)、可以成為聚酰亞胺的聚酰亞胺前體。聚酰胺酸，即使酰胺酸的部分被酰亞胺化，只要它不影響本發(fā)明，也可以使用。即，聚酰胺酸的一部分可以被熱酰亞胺化或者化學(xué)酰亞胺化。在將聚酰胺酸熱酰亞胺化的情況下，根據(jù)需要，酰亞胺化催化劑，有機(jī)含磷化合物，無機(jī)微粒，有機(jī)微粒等的微粒等可被添加到聚酰胺酸溶液。此外，如果將聚酰胺酸化學(xué)酰亞胺化，根據(jù)需要，化學(xué)酰亞胺化劑，脫水劑，無機(jī)微粒，有機(jī)微粒等的微粒等可被添加到聚酰胺酸溶液。聚酰胺酸溶液中即使混合前述成分、在著色前體不析出的條件下進(jìn)行也是優(yōu)選的。著色前體在本發(fā)明中著色前體是指，通過250℃以上的熱處理、部分或完全碳化、以產(chǎn)生著色化物的前體。作為本發(fā)明中使用的著色前體，在聚酰胺酸溶液或聚酰亞胺溶液中均勻地溶解或分散，通過250℃以上、優(yōu)選260℃以上、更優(yōu)選280℃以上、更優(yōu)選300℃以上的熱處理，優(yōu)選在空氣等的氧存在下的250℃以上、優(yōu)選260℃以上、更優(yōu)選280℃以上、更優(yōu)選300℃以上的熱處理而熱分解，碳化，從而產(chǎn)生著色化物的前體是優(yōu)選的，產(chǎn)生黑色系的著色化物的前體是更優(yōu)選的，碳系著色前體是更優(yōu)選的。著色前體如果進(jìn)行加熱則變得可以一下就看到碳化物，但是，在組織(結(jié)構(gòu))中包括除碳之外的不同元素，包括層結(jié)構(gòu)，芳族交聯(lián)結(jié)構(gòu)，含有四面體碳的無序結(jié)構(gòu)。碳系著色前體，沒有特別限定，可以列舉，例如，石油焦油、石油瀝青、煤焦油、煤瀝青等的焦油、或?yàn)r青、焦炭、從含有丙烯腈的單體而得到的聚合物、二茂鐵化合物(二茂鐵和二茂鐵衍生物)等。其中，從含有丙烯腈的單體得到的聚合物和/或二茂鐵化合物是優(yōu)選的，作為由含有丙烯腈的單體得到的聚合物，聚丙烯腈是優(yōu)選的。四羧酸二酐可以使用任何四羧酸二酐，可以根據(jù)所期望的性質(zhì)來適當(dāng)?shù)剡x擇。作為四羧酸二酐的具體例子，可以列舉苯均四酸二酐、3，3’，4，4’－聯(lián)苯四羧酸二酐(s－bpda)、2，3，3’，4’－聯(lián)苯四羧酸二酐(a－bpda)等的聯(lián)苯四羧酸二酐、氧雙鄰苯二甲酸二酐、二苯砜－3，4，3’，4’－四羧酸二酐、雙(3，4－二羧基苯基)硫化物二酐、2，2－雙(3，4－二羧基苯基)－1，1，1，3，3，3－六氟丙烷二酐、2，3，3’，4’－二苯甲酮四羧酸二酐、3，3’，4，4’－二苯甲酮四羧酸二酐、雙(3，4－二羧基苯基)甲烷二酐、2，2－雙(3，4－二羧基苯基)丙烷二酐、p－苯撐雙(偏苯三酸單酯酸酐)、p－雙苯撐雙(偏苯三酸單酯酸酐)、m－三聯(lián)苯基－3，4，3’，4’－四羧酸二酐、p－三聯(lián)苯基－3，4，3’，4’－四羧酸二酐、1，3－雙(3，4－二羧基苯氧基)苯二酐、1，4－雙(3，4－二羧基苯氧基)苯二酐、1，4－雙(3，4－二羧基苯氧基)雙苯基二酐、2，2－雙[(3，4－二羧基苯氧基)苯基]丙烷二酐、2，3，6，7－萘四羧酸二酐、1，4，5，8－萘四羧酸二酐、4，4’－(2，2－六氟亞異丙基)二苯二甲酸二酐等。此外，優(yōu)選使用2，3，3’，4’－二苯砜四羧酸等的芳香族四羧酸。前述這些可以單獨(dú)使用，也可以兩種以上組合使用。在這些中，特別優(yōu)選的是，從由聯(lián)苯四羧酸二酐和均苯四羧酸二酐組成的組中選擇的至少一種芳族四羧酸二酐。作為聯(lián)苯四羧酸二酐，可以適當(dāng)?shù)厥褂?，3’，4，4’－聯(lián)苯四羧酸二酐。二胺可以使用任何二胺。作為二胺的具體例子，可以舉出以下。1)1，4－二氨基苯(對(duì)苯撐二胺)、1，3－二氨基苯、2，4－二氨基甲苯、2，6－二氨基甲苯等的苯核1個(gè)的苯二胺；2)4，4’－二氨基二苯醚、3，4’－二氨基二苯醚等的二氨基二苯醚、4，4’－二氨基二苯基甲烷、3，3’－二甲基－4，4’－二氨基聯(lián)苯，2，2’－二甲基－4，4’－二氨基聯(lián)苯，2，2’－雙(三氟甲基)－4，4’－二氨基聯(lián)苯，3，3’－二甲基－4，4’－二氨基二苯基甲烷、3，3’－二羧基－4，4’－二氨基二苯基甲烷、3，3’，5，5’－四甲基－4，4’－二氨基二苯基甲烷、雙(4－氨基苯基)硫化物、4，4’－二氨基苯甲酰苯胺、3，3’－二氯聯(lián)苯胺、3，3’－二甲基聯(lián)苯胺、2，2’－二甲基聯(lián)苯胺、3，3’－二甲氧基聯(lián)苯胺、2，2’－二甲氧基聯(lián)苯胺、3，3’－二氨基二苯醚、3，4’－二氨基二苯醚、4，4’－二氨基二苯醚、3，3’－二氨基二苯基硫化物、3，4’－二氨基二苯基硫化物、4，4’－二氨基二苯基硫化物、3，3’－二氨基二苯砜、3，4’－二氨基二苯砜、4，4’－二氨基二苯砜、3，3’－二氨基二苯甲酮、3，3’－二氨基－4，4’－二氯二苯甲酮、3，3’－二氨基－4，4’－二甲氧基二苯甲酮、3，3’－二氨基二苯基甲烷、3，4’－二氨基二苯基甲烷、4，4’－二氨基二苯基甲烷、2，2－雙(3－氨基苯基)丙烷、2，2－雙(4－氨基苯基)丙烷、2，2－雙(3－氨基苯基)－1，1，1，3，3，3－六氟丙烷、2，2－雙(4－氨基苯基)－1，1，1，3，3，3－六氟丙烷、3，3’－二氨基二苯基亞砜、3，4’－二氨基二苯基亞砜、4，4’－二氨基二苯基亞砜等的苯核2個(gè)的二胺；3)1，3－雙(3－氨基苯基)苯、1，3－雙(4－氨基苯基)苯、1，4－雙(3－氨基苯基)苯、1，4－雙(4－氨基苯基)苯、1，3－雙(4-氨基苯氧基)苯、1，4－雙(3-氨基苯氧基)苯、1，4－雙(4-氨基苯氧基)苯、1，3－雙(3-氨基苯氧基)－4－三氟甲基苯、3，3’－二氨基－4－(4－苯基)苯氧基二苯甲酮、3，3’－二氨基－4，4’－二(4－苯基苯氧基)二苯甲酮、1，3－雙(3－氨基苯基硫化物)苯、1，3－雙(4－氨基苯基硫化物)苯、1，4－雙(4－氨基苯基硫化物)苯、1，3－雙(3－氨基苯基砜)苯、1，3－雙(4－氨基苯基砜)苯、1，4－雙(4－氨基苯基砜)苯、1，3－雙[2－(4－氨基苯基)異丙基]苯、1，4－雙[2－(3－氨基苯基)異丙基]苯、1，4－雙[2－(4－氨基苯基)異丙基]苯等的苯核3個(gè)的二胺；4)3，3’－雙(3-氨基苯氧基)聯(lián)苯，3，3’－雙(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯，4，4’－雙(3-氨基苯氧基)聯(lián)苯，4，4’－雙(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯，雙[3－(3-氨基苯氧基)苯基]醚、雙[3－(4-氨基苯氧基)苯基]醚、雙[4－(3-氨基苯氧基)苯基]醚、雙[4－(4-氨基苯氧基)苯基]醚、雙[3－(3-氨基苯氧基)苯基]酮、雙[3－(4-氨基苯氧基)苯基]酮、雙[4－(3-氨基苯氧基)苯基]酮、雙[4－(4-氨基苯氧基)苯基]酮、雙[3－(3-氨基苯氧基)苯基]硫化物、雙[3－(4-氨基苯氧基)苯基]硫化物、雙[4－(3-氨基苯氧基)苯基]硫化物、雙[4－(4-氨基苯氧基)苯基]硫化物、雙[3－(3-氨基苯氧基)苯基]砜、雙[3－(4-氨基苯氧基)苯基]砜、雙[4－(3-氨基苯氧基)苯基]砜、雙[4－(4-氨基苯氧基)苯基]砜、雙[3－(3-氨基苯氧基)苯基]甲烷、雙[3－(4-氨基苯氧基)苯基]甲烷、雙[4－(3-氨基苯氧基)苯基]甲烷、雙[4－(4-氨基苯氧基)苯基]甲烷、2，2－雙[3－(3-氨基苯氧基)苯基]丙烷、2，2－雙[3－(4-氨基苯氧基)苯基]丙烷、2，2－雙[4－(3-氨基苯氧基)苯基]丙烷、2，2－雙[4－(4-氨基苯氧基)苯基]丙烷、2，2－雙[3－(3-氨基苯氧基)苯基]－1，1，1，3，3，3－六氟丙烷、2，2－雙[3－(4-氨基苯氧基)苯基]－1，1，1，3，3，3－六氟丙烷、2，2－雙[4－(3-氨基苯氧基)苯基]－1，1，1，3，3，3－六氟丙烷、2，2－雙[4－(4-氨基苯氧基)苯基]－1，1，1，3，3，3－六氟丙烷等的苯核4個(gè)的二胺。前述這些可以單獨(dú)施用，也可以兩種以上混合使用。使用的二胺可以根據(jù)所期望的特性適當(dāng)?shù)剡x擇。在這些中，芳族二胺化合物是優(yōu)選的，3，3’－二氨基二苯醚、3，4’－二氨基二苯醚、4，4’－二氨基二苯醚以及對(duì)苯撐二胺、1，3－雙(3－氨基苯基)苯、1，3－雙(4－氨基苯基)苯、1，4－雙(3－氨基苯基)苯、1，4－雙(4－氨基苯基)苯、1，3－雙(4-氨基苯氧基)苯、1，4－雙(3-氨基苯氧基)苯可以適當(dāng)?shù)厥褂?。特別是，從苯二胺，二氨基二苯醚和雙(氨基苯氧基)苯基組成的組中選擇的至少一種二胺是優(yōu)選的。聚酰亞胺多孔膜，從耐熱性、高溫下的尺寸穩(wěn)定性的觀點(diǎn)來看，從組合玻璃化轉(zhuǎn)變溫度是240℃以上、或300℃以上的沒有明確的轉(zhuǎn)變溫度的四羧酸二酐和二胺而獲得的聚酰亞胺形成是優(yōu)選的。本發(fā)明的聚酰亞胺多孔膜，從耐熱性，高溫下的尺寸穩(wěn)定性的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選是由以下芳族聚酰亞胺形成的聚酰亞胺多孔膜。(i)由選自聯(lián)苯基四羧酸單元和均苯四酸單元組成的組中選擇的至少一種四羧酸單元與，芳族二胺單元形成的芳香族聚酰亞胺、(ii)由四羧酸單元與，從苯二胺單元、二氨基二苯基醚單元和雙(氨基苯氧基)苯基單元組成的組中選擇的至少一種芳族二胺單元形成的芳族聚酰亞胺、和/或，(iii)由選自聯(lián)苯四羧酸單元和均苯四酸單元組成的組中的至少一種四羧酸單元與，從苯二胺單元、二氨基二苯基醚單元和雙(氨基苯氧基)苯基單元組成的組中選擇的至少一種芳族二胺單元形成的芳族聚酰亞胺。雖然沒有限制，作為聚酰亞胺多孔膜，在本發(fā)明的方法中可以使用至少具有兩個(gè)表面層和(a面和b面)，和夾在這兩個(gè)表面層之間的大空隙層的多層結(jié)構(gòu)的聚酰亞胺多孔膜。優(yōu)選地，聚酰亞胺多孔膜具有以下多層結(jié)構(gòu)，前述大空隙層具有，結(jié)合到前述表面層(a面和b面)的隔壁(隔板、隔膜)，由所述隔壁(隔板、隔膜)和前述表面層(a面和b面)所包圍的、膜平面方向的平均孔徑是微米(μm)的多個(gè)大空隙，前述大空隙層的隔壁(隔板、隔膜)和前述表面層(a面和b面)各自厚度是微米，具有多個(gè)具有微米的平均孔直徑的孔，所述細(xì)孔(微孔)可以相互連通，還可以與前述大空隙部分或完全連通的多層結(jié)構(gòu)，并且總的膜厚度為微米，孔隙率為40％以上而小于95％，的聚酰亞胺多孔膜。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔膜的總厚度包括但不限于，可以是微米的一個(gè)方式。根據(jù)膜厚度的差異，細(xì)胞的增殖速度，細(xì)胞形態(tài)，面內(nèi)的細(xì)胞飽和度等的差異可被觀察到。在本發(fā)明中，在具有兩個(gè)不同的表面層(a面和b面)、所述兩個(gè)表面層之間夾的大空隙層的聚酰亞胺多孔膜被使用的情況下，a面中存在的孔的平均孔徑，與b面中存在的孔的平均孔徑可以存在差異。優(yōu)選地，a面中存在的孔的平均孔徑，小于b面中存在的孔的平均孔徑。更優(yōu)選地，a面中存在的孔的平均孔徑，小于b面中存在的孔的平均孔徑，a面中存在的孔的平均孔徑為或b面中存在的孔的平均孔徑為或特別優(yōu)選地，聚酰亞胺多孔膜的a面為具有平均孔徑15μm以下，例如的小孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，b面為具有平均孔徑20μm或更大的孔的表面上，例如在的大孔結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔膜的總厚度的測定通過接觸式的厚度計(jì)進(jìn)行。聚酰亞胺多孔膜表面的平均孔徑可以如下求得，通過多孔膜表面的掃描式電子顯微照片，測定200點(diǎn)以上的開孔部的孔面積，根據(jù)所述孔面積按照下式(1)計(jì)算孔形狀為正圓時(shí)的平均直徑。[數(shù)學(xué)公式1](式中、sa指孔面積的平均值。)本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔膜的孔隙率可以如下求得，測量切割成預(yù)定尺寸的多孔膜的厚度和質(zhì)量，從觀察到的質(zhì)量根據(jù)下式(2)來求得。[數(shù)學(xué)公式2]孔隙率(％)＝(1-w/(s×d×d))×100(2)(式中分別地、s意指多孔膜的面積，d意指總的膜厚度，w意指所測定的質(zhì)量，d意指聚酰亞胺的密度。聚酰亞胺的密度為1.34克/厘米3。)例如，國際公開wo2010/038873，特開2011-219585，或特開2011-219586中記載的聚酰亞胺多孔膜也可以在本發(fā)明的方法中使用。接種于聚酰亞胺多孔膜的表面的細(xì)胞在膜的表面和/或內(nèi)部可穩(wěn)定地生長和增殖。細(xì)胞根據(jù)在膜中生長、增殖的位置，可以采取各種不同的形式。在本發(fā)明的一個(gè)方式中，取決于細(xì)胞種類，一邊移動(dòng)聚酰亞胺多孔膜的表面和內(nèi)部，一邊改變形狀而進(jìn)行增殖的情況也存在。在本發(fā)明的方法中施加細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜，當(dāng)然優(yōu)選，不含施加以外的細(xì)胞的狀態(tài)，即，優(yōu)選是無菌的。本發(fā)明的方法優(yōu)選包括將聚酰亞胺多孔膜預(yù)先滅菌的工序。聚酰亞胺多孔膜的耐熱性非常優(yōu)異，重量輕，形狀和尺寸也可自由選擇，容易進(jìn)行滅菌處理。干熱滅菌，蒸汽滅菌，通過乙醇等消毒劑滅菌，紫外線或γ射線等的電磁波滅菌等任意的滅菌處理都是可能的。4.細(xì)胞培養(yǎng)和培養(yǎng)體積使用聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞培養(yǎng)的模型圖在圖1中顯示。通過本發(fā)明的方法，細(xì)胞培養(yǎng)中使用的培養(yǎng)基的量，與以往方法相比，大幅減少，同時(shí)也能夠培養(yǎng)大量的細(xì)胞。例如，聚酰亞胺多孔膜的部分或整體即使在不與細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的液相接觸的狀態(tài)，也可以長期培養(yǎng)大量細(xì)胞。此外，對(duì)于包括細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜體積的總和，細(xì)胞培養(yǎng)容器中包含的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的總體積能夠顯著減少。在本說明書中，不含細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜也包括其的內(nèi)部間隙的體積、在空間中占據(jù)的體積被稱為“表觀聚酰亞胺多孔膜體積”(圖1的左的狀態(tài))。然后，將細(xì)胞施加到聚酰亞胺多孔膜，聚酰亞胺多孔膜的表面和內(nèi)部承載細(xì)胞的狀態(tài)中，聚酰亞胺多孔膜、細(xì)胞、和浸潤至聚酰亞胺多孔膜內(nèi)部的培養(yǎng)基作為一個(gè)整體在空間中占據(jù)的體積被稱為“包括細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜體積”(圖1的右的狀態(tài))。在膜厚為25微米的聚酰亞胺多孔膜的情況下，包括細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜體積，與表觀聚酰亞胺多孔膜體積相比，成為最大約50％左右的大的值。在本發(fā)明的方法中，可以在一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)容器中容納多個(gè)(多種)聚酰亞胺多孔膜而進(jìn)行培養(yǎng)，在此情況下，對(duì)于承載細(xì)胞的多個(gè)(多種)聚酰亞胺多孔膜的各個(gè)的包括細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜體積總和，簡單地記載為“包括細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜體積的總和”。通過使用本發(fā)明的方法，在細(xì)胞培養(yǎng)容器中包含的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的總體積為包括細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜的體積的總和的10000倍或比其少的條件下，也可以長期良好地培養(yǎng)細(xì)胞。此外，在細(xì)胞培養(yǎng)容器中包含的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的總體積為含有細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜的體積的總和的1000倍或比其更小的條件下，也可以長期良好地培養(yǎng)細(xì)胞。此外，在細(xì)胞培養(yǎng)容器中包含的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的總體積為在含有細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜的體積的總和的100倍或比其更小的條件下，也可以長期良好地培養(yǎng)細(xì)胞。然后，在細(xì)胞培養(yǎng)容器中包含的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的總體積為在含有細(xì)胞生存區(qū)的聚酰亞胺多孔膜的體積的總和的10倍或比其更小的條件下，也可以長期良好地培養(yǎng)細(xì)胞。也就是說，本發(fā)明，與以往進(jìn)行二維培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)裝置相比，能夠?qū)⒓?xì)胞培養(yǎng)空間(容器)小型化到極點(diǎn)。此外，如果要提高培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)量，則通過增加層疊在聚酰亞胺多孔膜的枚數(shù)(張數(shù)，片數(shù))等簡單的操作，能夠柔性地增加細(xì)胞培養(yǎng)的體積。通過具有本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，可以將用于保存用于培養(yǎng)細(xì)胞的空間(容器)與儲(chǔ)藏細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的空間(容器)分離，取決于培養(yǎng)的細(xì)胞物數(shù)，能夠準(zhǔn)備必要的量的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基。儲(chǔ)藏細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的空間(容器)取決于目的可以大型化或小型化，或可以是可更換的容器，而沒有特別的限制。整合的概念是，在冷凍中也是重要的，在極小空間中冷凍保存大量的細(xì)胞是可能的。此外，作為培養(yǎng)中或培養(yǎng)后測定細(xì)胞的數(shù)目的方法，可以使用各種公知的方法。例如，對(duì)于在用聚酰亞胺多孔膜培養(yǎng)后細(xì)胞培養(yǎng)容器中包含的細(xì)胞的數(shù)，使細(xì)胞完全均勻分散在細(xì)胞培養(yǎng)容器中包含的所有細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中而進(jìn)行測量方法，可以適當(dāng)?shù)厥褂霉姆椒ā＠?，如在?shí)施例1中使用的方法，使用cck8的細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)法可以適當(dāng)?shù)厥褂?。具體而言，cellcountinigkit8；同仁化學(xué)實(shí)驗(yàn)所制溶液試劑(在下文中記載為“cck8”)被使用，測量不使用聚酰亞胺多孔膜的通常培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)，求出吸光度和實(shí)際細(xì)胞數(shù)的相關(guān)系數(shù)。然后施加細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)的聚酰亞胺多孔膜轉(zhuǎn)移到含有cck8的培養(yǎng)基中，并保存在培養(yǎng)箱1-3小時(shí)，提取出上清液，在480nm的波長測量吸光度，通過預(yù)先求出的相關(guān)系數(shù)計(jì)算細(xì)胞數(shù)。3.細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)和培養(yǎng)條件在本發(fā)明的方法中，細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)和培養(yǎng)條件可以根據(jù)諸如細(xì)胞種類等適當(dāng)?shù)卮_定。適用于動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、和細(xì)菌的各細(xì)胞的培養(yǎng)方法是公知的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用任何已知的方法、將施加到聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)?？梢愿鶕?jù)細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞類型進(jìn)行適當(dāng)制備。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)基，例如，在朗達(dá)公司(ロンザ社)細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基產(chǎn)品目錄中記載。植物細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基，例如，在wako公司植物組織培養(yǎng)基系列等中記載。細(xì)菌的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基，例如，在bd公司一般細(xì)菌用培養(yǎng)基目錄中記載。本發(fā)明方法中使用的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基可以是液體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基中的任一形式。此外，通過將液滴狀液體培養(yǎng)基噴霧在細(xì)胞培養(yǎng)容器中，可以使承載細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜接觸培養(yǎng)基。對(duì)于使用聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞的培養(yǎng)，微載體、纖維素海綿等、其他懸浮型培養(yǎng)載體可以一起存在。在本發(fā)明的方法中，培養(yǎng)中使用的系統(tǒng)的形狀、規(guī)模等沒有特別的限制，從細(xì)胞培養(yǎng)用的培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)、燒瓶、塑料袋、試管到大型的罐都可適當(dāng)利用。例如，bdfalcon公司制的セルカルチャーディッシュ、サーモサイエンティフィック公司制的nuncセルファクトリー等被包括。順便提及，通過在本發(fā)明中使用聚酰亞胺多孔膜，即使對(duì)于生來不可能懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，在靶向懸浮培養(yǎng)的裝置中，也可能以懸浮培養(yǎng)類似的狀態(tài)下進(jìn)行培養(yǎng)。作為懸浮培養(yǎng)裝置，可用例如，corning公司(コーニング社)制的轉(zhuǎn)瓶(旋轉(zhuǎn)燒瓶)或旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)等。此外，作為可以提供相同的功能的環(huán)境，veritas公司的fibercell(注冊商標(biāo))system這樣的中空纖維培養(yǎng)也可以使用。在本發(fā)明的方法中的培養(yǎng)，使用在聚酰亞胺多孔膜上連續(xù)加入培養(yǎng)基并回收的連續(xù)循環(huán)或開放式裝置，通過將聚酰亞胺多孔膜片材露出在空氣中的形式也可以實(shí)施。在本發(fā)明中，細(xì)胞的培養(yǎng)也可從在細(xì)胞培養(yǎng)容器外設(shè)置的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給手段(裝置，器件)連續(xù)或間歇地將細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給到細(xì)胞培養(yǎng)容器中。這個(gè)時(shí)候，可以存在細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給手段(裝置，器件)和細(xì)胞培養(yǎng)容器之間循環(huán)的系統(tǒng)。在細(xì)胞的培養(yǎng)通過從在細(xì)胞培養(yǎng)容器外設(shè)置的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給手段(裝置，器件)連續(xù)或間歇地將細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給到細(xì)胞培養(yǎng)容器中的系統(tǒng)而進(jìn)行的情況下，該系統(tǒng)可以是細(xì)胞培養(yǎng)裝置，其包括是細(xì)胞培養(yǎng)容器的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)以及是細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基供給手段(裝置，器件)的培養(yǎng)基供給單元(培養(yǎng)基供給部件)，此處培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)是容納用于承載細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)(一種或多種)聚酰亞胺多孔膜的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)，是具有培養(yǎng)基供給口和培養(yǎng)基排出口的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)，培養(yǎng)基供給單元(培養(yǎng)基供給部件)是，具備培養(yǎng)基供給線、經(jīng)由培養(yǎng)基供給線連續(xù)地或間歇地將培養(yǎng)基送液的送液泵，其中，培養(yǎng)基供給線的第一端部與在培養(yǎng)液收納容器內(nèi)的培養(yǎng)基接觸，培養(yǎng)基供給線的第二端部經(jīng)由所述培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)的培養(yǎng)基供給口與培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)內(nèi)連通的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)可以是細(xì)胞培養(yǎng)裝置。此外，在該細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)可以是不具有空氣供給口、空氣排出口和氧交換膜的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)，此外可以是具備空氣供給口和空氣排出口、或氧交換膜的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)。培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)可以是不具有空氣供給口和空氣排出口，以及氧交換膜的培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)，將細(xì)胞培養(yǎng)必要的氧等通入培養(yǎng)基而充分地供給至細(xì)胞。此外，在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，進(jìn)一步具備培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)的培養(yǎng)基排出線，此處培養(yǎng)基排出線的第一端部連接到培養(yǎng)基收納容器，培養(yǎng)基排出線的第二端部經(jīng)由培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)的培養(yǎng)基排出口與培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)內(nèi)連通，培養(yǎng)基可以在培養(yǎng)基供給單元(培養(yǎng)基供給部件)和培養(yǎng)單元(培養(yǎng)部件)之間循環(huán)。是上述細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)的一個(gè)例子的細(xì)胞培養(yǎng)裝置的實(shí)例被示出在圖2中，為了本發(fā)明的目的而使用的細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)并不限于此。ii.細(xì)胞培養(yǎng)裝置本發(fā)明還涉及，含有聚酰亞胺多孔膜的，用于在本發(fā)明的培養(yǎng)方法中使用的細(xì)胞培養(yǎng)裝置。在本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，聚酰亞胺多孔膜可以被固定而使用，或聚酰亞胺多孔膜可以在細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中被懸浮而使用，可以被放置在培養(yǎng)基中，也可以從培養(yǎng)基露出。在細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，兩個(gè)以上(兩種以上)的聚酰亞胺多孔膜可以上下或左右地層疊。層疊的集合體和集成體可以被放置在培養(yǎng)基中，也可以從培養(yǎng)基中露出。作為本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，可以采取含有聚酰亞胺多孔膜的任何形式。例如，在上述本發(fā)明的長期培養(yǎng)方法中使用的細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)中任一項(xiàng)都可以被用作本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)裝置。iii.用于在培養(yǎng)細(xì)胞的方法中使用的試劑盒本發(fā)明還涉及，包含聚酰亞胺多孔膜的、在細(xì)胞的培養(yǎng)方法中使用的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒中，除了聚酰亞胺多孔膜，可適當(dāng)包括細(xì)胞培養(yǎng)必需的構(gòu)成要素。例如，試劑盒包括，施加到聚酰亞胺多孔膜的細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基，連續(xù)培養(yǎng)基供給裝置，連續(xù)培養(yǎng)基循環(huán)裝置，用于支撐聚酰亞胺多孔膜的支架或模塊，細(xì)胞培養(yǎng)裝置，以及試劑盒的使用說明書。不存在限制，作為一個(gè)方式，包括在透明的袋(小袋)內(nèi)保存單獨(dú)或多個(gè)經(jīng)滅菌的聚酰亞胺多孔膜，保持其原樣地在細(xì)胞培養(yǎng)中可使用形式的包裝，或在相同袋(小袋)內(nèi)封入聚酰亞胺多孔膜與滅菌液體，使得有效地吸式接種成為可能的膜-液體集成形式的試劑盒。iv.用途本發(fā)明還涉及，聚酰亞胺多孔膜在細(xì)胞的長期培養(yǎng)方法中的用途。此外，也涉及上述的細(xì)胞培養(yǎng)裝置在細(xì)胞的長期培養(yǎng)方法中的用途。v.細(xì)胞的冷凍保存方法，本發(fā)明涉及，細(xì)胞的冷凍保存方法，其包括(1)將細(xì)胞承載至聚酰亞胺多孔膜的工序，(2)將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜放置在冷凍細(xì)胞的條件下，由此冷凍由聚酰亞胺多孔膜承載的細(xì)胞的工序，(3)將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜以保持冷凍狀態(tài)的條件保存的工序。根據(jù)本發(fā)明，有可能在高密度地使培養(yǎng)的細(xì)胞被承載的狀態(tài)而冷凍聚酰亞胺多孔膜，與以往的以非附著狀態(tài)冷凍的細(xì)胞的冷凍方法相比較，壓倒性地在高密度狀態(tài)下冷凍細(xì)胞成為可能。1.細(xì)胞可在本發(fā)明的方法中可以利用細(xì)胞的種類沒有特別限定，上述的任何細(xì)胞都可以利用。2.將細(xì)胞承載至聚酰亞胺多孔膜的工序本發(fā)明的方法包括在聚酰亞胺多孔膜支持細(xì)胞的工序。作為使聚酰亞胺多孔膜承載細(xì)胞的方法，可以使用任何方法，但可以使用如以下的方法。(a)包括將細(xì)胞接種到前述聚酰亞胺多孔膜的表面的工序的方式；(b)包括使聚酰亞胺多孔膜干燥的表面承載細(xì)胞懸浮液、放置，或者通過移動(dòng)前述聚酰亞胺多孔膜，以促進(jìn)液體的流出，或刺激表面的一部分，使細(xì)胞懸浮液被吸入至前述膜，并且，使細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞停留在前述膜內(nèi)，使水分流出的工序的方式；以及，(c)包括將前述聚酰亞胺多孔膜的一個(gè)面或兩個(gè)面用細(xì)胞培養(yǎng)物或經(jīng)滅菌的液體濕潤，將細(xì)胞懸浮液裝填到前述經(jīng)濕潤的聚酰亞胺多孔膜，并且，使細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞停留在前述膜內(nèi)，使水分流出的工序的方式。接種于聚酰亞胺多孔膜的表面的細(xì)胞附著到聚酰亞胺多孔膜，進(jìn)入多孔的內(nèi)部。優(yōu)選地，即使在不特別添加來自外部的物理力或化學(xué)力的情況下，所述細(xì)胞也自發(fā)地附著到聚酰亞胺多孔膜。接種于聚酰亞胺多孔膜的表面的細(xì)胞在膜的表面和/或內(nèi)部可穩(wěn)定地生長和增殖。根據(jù)細(xì)胞生長和增殖的膜的位置，可以采取各種不同的形式。需要說明的是，將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜與，不承載細(xì)胞的其他一個(gè)或多個(gè)(一種或多種)聚酰亞胺多孔膜施加到相同的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，由此，也可以使所述其他一個(gè)或多個(gè)(一種或多種)聚酰亞胺多孔膜承載細(xì)胞。此時(shí)，承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜與，不承載細(xì)胞的其他一個(gè)或多個(gè)(一種或多種)聚酰亞胺多孔膜，可以通過層疊等彼此接觸，也可以簡單地在相同的細(xì)胞培養(yǎng)基中被設(shè)置。3.將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜，在細(xì)胞冷凍條件下放置，由此冷凍聚酰亞胺多孔膜所承載的細(xì)胞的工序作為冷凍細(xì)胞的條件，只要是聚酰亞胺多孔膜所承載的細(xì)胞的一部分或全部在冷凍后被解凍時(shí)能保持生命機(jī)能的條件，就可以適當(dāng)?shù)卦O(shè)定。此外，用于進(jìn)入聚酰亞胺多孔膜的冷凍用管道或冷凍棒(ケーン)等可以使用銷售的制品。例如，可以將聚酰亞胺多孔膜浸漬在細(xì)胞冷凍保存液中，將其在第一低溫條件下冷凍后，轉(zhuǎn)移到比第一低溫條件低的第二低溫條件下，進(jìn)行冷凍。作為第一低溫條件，例如，能夠使用零下20至25℃左右的條件，作為第二低溫條件，可使用零下80至90℃左右的條件。第一低溫條件下的工序可以省略。向比第一低溫條件低的第二低溫的過渡可以采取線性的，逐步的(分階段的)，曲線的或立即的形式中的任何形式。提供第一低溫條件的裝置與，提供第二低溫條件的裝置可以不同，或者可以是相同的。提供第一低溫條件的裝置與，提供第二低溫條件的裝置不同的情況下，例如，可以列舉的是，提供第一低溫條件的裝置是通常的冷凍器，提供第二低溫條件的裝置是深度冷凍器的情況，但不限于此。此外，提供第一低溫條件的裝置與，提供第二低溫條件的裝置相同的情況下，可以列舉的是，能以一定的速度降低溫度的程序冷凍器(例如neppajin有限公司(ネッパジーン株式會(huì)社)制的程序冷凍器等)，但不限于此。作為細(xì)胞冷凍保存溶液，可以適當(dāng)?shù)厥褂霉摹＠?，可以適當(dāng)?shù)厥褂?在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加dmso至約5％至20％而獲得的，以便在細(xì)胞培養(yǎng)基中，在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加甘油至約5％至20％而獲得的，如在zenoaq公司產(chǎn)品目錄中記載的各種細(xì)胞庫(cellbanker)(セルバンカー)的可商購的細(xì)胞冷凍保存溶液。4.將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜以保持冷凍狀態(tài)的條件保存的工序本發(fā)明的方法，如上所述，包括將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜，在保持冷凍狀態(tài)的條件下保存的工序。作為保持冷凍狀態(tài)的條件，可以列舉，在上述第二冷的條件下保持原樣地保存的條件，以及在比第二低溫條件更低的第三低溫條件下保存的條件。作為第三低溫條件，可以列舉，例如，可以放在液氮中的情況下，但不限于此。根據(jù)本發(fā)明的方法，不僅附著性細(xì)胞而且懸浮細(xì)胞，無論細(xì)胞的種類，均能夠令人滿意地冷凍保存。如果由本發(fā)明的方法冷凍保存懸浮細(xì)胞，則在保持球形的情況下，在聚酰亞胺多孔膜的立體結(jié)構(gòu)中容納細(xì)胞并保存。此外，如果由本發(fā)明的方法冷凍保存附著性細(xì)胞，則在保持與在聚酰亞胺多孔膜內(nèi)生長并增殖時(shí)同樣的非球形狀態(tài)的情況下，在聚酰亞胺多孔膜的立體結(jié)構(gòu)內(nèi)容納細(xì)胞并保存。在本發(fā)明的方法中承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜，當(dāng)然優(yōu)選，不含承載以外的其它細(xì)胞的狀態(tài)，即，是經(jīng)滅菌的。本發(fā)明的方法優(yōu)選包括將聚酰亞胺多孔膜預(yù)先滅菌的工序。聚酰亞胺多孔膜的耐熱性非常優(yōu)異，重量輕，形狀和尺寸也可自由選擇，容易滅菌處理。干熱滅菌，蒸汽滅菌，用乙醇等消毒劑的滅菌，紫外線或γ射線等的電磁波滅菌等任意的滅菌處理是可能的。5.聚酰亞胺多孔膜所承載的細(xì)胞的解凍工序在本發(fā)明的方法中，能夠?qū)⒊休d了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜在冷凍保存后解凍。作為將承載了細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜解凍的方法，可以列舉，將冷凍保存的聚酰亞胺多孔膜從保存容器的外部升溫，解凍的方法。作為升溫的方法，可以適當(dāng)?shù)厥褂萌缦路椒?，在約37℃的恒溫?zé)崴薪肴萜鳌?.將細(xì)胞解凍的聚酰亞胺多孔膜施加到細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基，培養(yǎng)細(xì)胞的工序在本發(fā)明的方法中，通過將細(xì)胞解凍的聚酰亞胺多孔膜在保持原樣的情況下施加至細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基，能夠?qū)⒔鈨龅募?xì)胞在相同的聚酰亞胺多孔膜上進(jìn)行培養(yǎng)。此時(shí)，也可以培養(yǎng)細(xì)胞直到培養(yǎng)的細(xì)胞即使在聚酰亞胺多孔膜外也增殖。對(duì)于懸浮細(xì)胞，其從聚酰亞胺多孔膜內(nèi)向細(xì)胞培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移的懸浮細(xì)胞能夠保持原樣地在培養(yǎng)基中增殖。對(duì)于附著性細(xì)胞，雖然有許多停留在聚酰亞胺多孔膜內(nèi)或表面，但是，能夠?qū)⒁徊糠旨?xì)胞轉(zhuǎn)移至與聚酰亞胺多孔膜接觸的培養(yǎng)容器或，轉(zhuǎn)移至沒有承載細(xì)胞的不同培養(yǎng)載體。因此，與細(xì)胞解凍的聚酰亞胺多孔膜一同，將另外不承載細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)(一種或多種)的聚酰亞胺多孔膜施加到細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中、培養(yǎng)，由此，使得另外一個(gè)或多個(gè)(一種或多種)聚酰亞胺多孔膜承載細(xì)胞，如果需要繼續(xù)培養(yǎng)是可能的。在這種情況下，將細(xì)胞解凍的聚酰亞胺多孔膜，和新承載細(xì)胞的另外聚酰亞胺多孔膜中一部分或全部在細(xì)胞冷凍的條件下放置，由此能夠使聚酰亞胺多孔膜承載的細(xì)胞冷凍，保存。如上所述冷凍，保存，解凍和培養(yǎng)工序能夠重復(fù)多次。根據(jù)本發(fā)明，將大量承載細(xì)胞狀態(tài)下的聚酰亞胺多孔膜冷凍、保存是可能的，在任何時(shí)間解凍，未經(jīng)預(yù)培養(yǎng)工序，能夠用于所期望的用途(例如，蛋白產(chǎn)生等)。以往，為了使用解凍的細(xì)胞，將解凍的細(xì)胞預(yù)培養(yǎng)，使活細(xì)胞培養(yǎng)承載至所希望的基材或載體上而進(jìn)行培養(yǎng)是必須的。然而，根據(jù)本發(fā)明，無需經(jīng)過以往必要的解凍后的預(yù)培養(yǎng)工序，能夠在將保持細(xì)胞附著于聚酰亞胺多孔膜的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，冷凍，保存，和解凍以及再培養(yǎng)。因此，例如，如果承載細(xì)胞的狀態(tài)被冷凍的聚酰亞胺多孔膜被大量制備，在沒有通過擴(kuò)增培養(yǎng)工序的情況下，在期望時(shí)能使用大量的細(xì)胞。vi.用于細(xì)胞的冷凍保存的聚酰亞胺多孔膜本發(fā)明也涉及聚酰亞胺多孔膜，其用于細(xì)胞的冷凍保存。本發(fā)明的，用于細(xì)胞的制冷保存的聚酰亞胺多孔膜，也可以是用于上述細(xì)胞的冷凍保存方法的聚酰亞胺多孔膜。vii.試劑盒本發(fā)明也涉及含有聚酰亞胺多孔膜的用于細(xì)胞冷凍保存的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒中，除了聚酰亞胺多孔膜，可適當(dāng)包括細(xì)胞培養(yǎng)必需的構(gòu)成要素。例如，聚酰亞胺多孔膜，細(xì)胞冷凍保存液，冷凍用管，冷凍用棒和試劑盒的使用說明書等被包括。盡管沒有限制，但是，作為一個(gè)方式，透明的袋(小袋)中保存單獨(dú)或多個(gè)滅菌的聚酰亞胺多孔膜，在保持原樣的情況下在細(xì)胞冷凍中可用形式的包裝或，同一袋內(nèi)與聚酰亞胺多孔膜一同的細(xì)胞冷凍保存液被封閉，可能快速使用的膜-液體的集成形式的試劑盒被包括。以下、基于實(shí)施例對(duì)本發(fā)明更具體地描述。本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。本領(lǐng)域技術(shù)人員基于本說明書中的描述可以容易地對(duì)本發(fā)明添加修改和改變，它們被包括在本發(fā)明的技術(shù)范圍內(nèi)。此后，當(dāng)沒有特別描述時(shí)，“聚酰亞胺多孔膜”是指，總厚度25μm，孔隙率73％的聚酰亞胺多孔膜。所述聚酰亞胺多孔膜具有，兩個(gè)不同的表面層(a面和b面)，夾在兩個(gè)表面層之間的大空隙層。存在于a面的孔的平均孔徑為6μm，存在于在b面的孔的平均孔徑為46μm。順便說一下，在以下實(shí)施例中使用的聚酰亞胺多孔膜如下制成，包括從為四羧酸成分的3，3’，4，4’－聯(lián)苯四羧酸二酐(s－bpda)與為二胺成分的二胺成分的4，4’－二氨基二苯醚(oda)得到的聚酰胺酸溶液以及是著色前體的聚丙烯酰胺的聚酰胺酸溶液組合物成形后，在250℃以上進(jìn)行加熱處理，由此進(jìn)行制備。＜使用的細(xì)胞，材料等＞·人類成纖維細(xì)胞(lonza社productcodecc－2511)·vero細(xì)胞(dsファーマバイオメディカル公司(社)，cat.dsiu002)·cho－k1(パブリックヘルスイングランドcat.85051005)·chodp－12(summitpharmaceuticalsintlcrl－12445)·人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基(lonza社productcodecc－3132)·vero細(xì)胞培養(yǎng)基(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社e－mem051－07615)·cho-k1用培養(yǎng)基(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社ham’sf－12087－08335)·chodp-12用培養(yǎng)基(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社imdm，－06465)·3.5厘米培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)(falcon社cat.353001)·cellcountingkit8(株式會(huì)社同仁化學(xué)研究所cck8ck04)·低溫管(クライオチューブ)(thermofisherscientific社1.8mlcat.377267)·2cm×2cm的無菌方形容器(thermofisherscientific社cat.103)·細(xì)胞庫(日本全藥工業(yè)株式會(huì)社(日本全薬工業(yè)株式會(huì)社)cellbanker1pluscat.cb021)·顯微鏡名稱，使用圖像處理軟件名稱(carlzeiss公司制lsm700使用ソフトzen實(shí)施例1使用人類皮膚成纖維細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜的長期培養(yǎng)2cm×2cm的無菌方形容器中加入細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基0.5毫升，將滅菌的1.4cm角的正方形聚酰亞胺多孔膜分別浸漬在網(wǎng)結(jié)構(gòu)(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))的a面或大孔結(jié)構(gòu)的b面之上。每1個(gè)片材5×104個(gè)人類皮膚成纖維細(xì)胞和，每1個(gè)片材3×105個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞懸浮液被分別加入，以每周兩次的比例更換培養(yǎng)基，持續(xù)地實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)。將這些片材各自制備5片，轉(zhuǎn)到20平方厘米的培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)，加入培養(yǎng)基4毫升，連續(xù)培養(yǎng)中。4天，7天，13天，31天，56天，84天后使用cck8測定細(xì)胞的數(shù)目，觀察到增殖行為。結(jié)果示于圖3。作為參考例，通過平面培養(yǎng)(接種密度：3.5×103個(gè)細(xì)胞/厘米2)到14天的經(jīng)過情況給也被一起示出。實(shí)施例2使用人類皮膚成纖維細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜的長期培養(yǎng)2cm×2cm經(jīng)滅菌的方形容器中添加細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基0.5毫升，將滅菌的1.4cm角的正方形聚酰亞胺多孔膜分別浸漬在網(wǎng)結(jié)構(gòu)(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))的a面或大孔結(jié)構(gòu)的b面之上。接種每1個(gè)片材的4×104個(gè)細(xì)胞，在co2培養(yǎng)箱中進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)。每周兩次更換培養(yǎng)基(1ml)。培養(yǎng)開始后，89天，118天，127天，139天后使用cck8測定細(xì)胞的數(shù)目，觀察到細(xì)胞生長行為。整個(gè)觀察期間，觀察到每1平方厘米1.5×105個(gè)以上的細(xì)胞數(shù)目。結(jié)果示在圖4中。實(shí)施例3使用vero細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜的長期培養(yǎng)2cm×2cm經(jīng)滅菌的方形容器中添加細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基1毫升，滅菌的1.4cm角的正方形聚酰亞胺多孔膜分別浸漬在網(wǎng)結(jié)構(gòu)(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))的a面或大孔結(jié)構(gòu)的b面之上。接種每1個(gè)片材4×104個(gè)和1×105個(gè)細(xì)胞，在co2培養(yǎng)箱中連續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。此時(shí)，除了通常使用的厚度為25μm的聚酰亞胺多孔膜，使用75μm的聚酰亞胺多孔膜。此外，fbs量相對(duì)于培養(yǎng)基以10％或5％的量使用。每周兩次更換培養(yǎng)基(1ml)，并繼續(xù)培養(yǎng)。在140天周期中，使用cck8間歇地測量細(xì)胞數(shù)，觀察到細(xì)胞的生長行為。觀察到穩(wěn)定的細(xì)胞的生長。將其結(jié)果示于圖5。實(shí)施例42cm×2cm經(jīng)滅菌的方形容器中添加細(xì)胞培養(yǎng)基1毫升，將滅菌的1.4cm角的正方形聚酰亞胺多孔膜浸漬在網(wǎng)結(jié)構(gòu)(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))a面之上。每1個(gè)片材4×104個(gè)cho-k1株細(xì)胞被添加，細(xì)胞培養(yǎng)20天后，使用cck8測定細(xì)胞數(shù)，發(fā)現(xiàn)在片材上的細(xì)胞數(shù)為7.7×106個(gè)。將這種細(xì)胞生長的片材切割為3個(gè)細(xì)長片，加入培養(yǎng)基，在5℃保存20小時(shí)后，將聚酰亞胺多孔膜取出，并加入添加了cellbanker1ml的低溫管(冷凍管)(クライオチューブ)，在-20℃保存24小時(shí)后，進(jìn)一步地在-80℃保存24小時(shí)，被轉(zhuǎn)移到液氮中。20天后，將管升溫至37℃以熔融內(nèi)容物，在培養(yǎng)箱中放置16小時(shí)。使用cck8測定細(xì)胞數(shù)，發(fā)現(xiàn)片材上的細(xì)胞數(shù)為4.6×106個(gè)。實(shí)施例52cm×2cm經(jīng)滅菌的方形容器中添加細(xì)胞培養(yǎng)基1毫升，將滅菌的1.4cm角的正方形聚酰亞胺多孔膜浸漬在網(wǎng)結(jié)構(gòu)(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))a面之上。每1個(gè)材片4×104個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞被添加，細(xì)胞培養(yǎng)5天后，使用cck8測定細(xì)胞數(shù)，發(fā)現(xiàn)在片材上的細(xì)胞數(shù)為7.7×106個(gè)。將這種細(xì)胞生長的片材切割為3個(gè)細(xì)長片，加入培養(yǎng)基，在5℃保存8小時(shí)后，將聚酰亞胺多孔膜取出，并放入添加了cellbanker1ml的低溫管(冷凍管)，在-80℃保存24小時(shí)，轉(zhuǎn)移至液態(tài)氮中。兩天后，將管升溫至37℃以融解內(nèi)容物，移動(dòng)至培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)條件下。3天后和5天后，通過用cck8，由吸光度測定比活性，第3天、第5天比活性為36％和64％。實(shí)施例6人類皮膚成纖維細(xì)胞長期培養(yǎng)人類皮膚成纖維細(xì)胞的使用聚酰亞胺多孔膜的長期培養(yǎng)2cm×2cm經(jīng)滅菌的方形容器中添加2％fbs人細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基0.5毫升，將滅菌的1.4cm角正方形聚酰亞胺多孔膜分別浸漬于網(wǎng)結(jié)構(gòu)(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))的a面之上。每1個(gè)片材4×104個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞懸浮液分別加入，以每周兩次的比例更換培養(yǎng)基，持續(xù)實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)。231天，261天，294天，324天，365天，401天，471天后使用cck8測定細(xì)胞的數(shù)目，觀察到生長行為。結(jié)果示于圖8。通過培養(yǎng)時(shí)期，穩(wěn)定的活細(xì)胞數(shù)被確認(rèn)。實(shí)施例7人皮膚成纖維細(xì)胞長期培養(yǎng)時(shí)的氣相傳代導(dǎo)致的增殖確認(rèn)2％fbs人培養(yǎng)基2毫升加入到直徑6厘米的培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)，將每1個(gè)片材4×104個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞接種于1.4厘米正方形正方形聚酰亞胺多孔膜網(wǎng)結(jié)構(gòu)(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))a面，培養(yǎng)一個(gè)月。之后，將片材切割為4分之1，進(jìn)一步培養(yǎng)繼續(xù)，總培養(yǎng)230天。此后，在3.5厘米盤中心，將1.4厘米角的不銹鋼網(wǎng)重疊3個(gè)并放置，在其上將前述聚酰亞胺多孔膜放置，并且通過滅菌的1.4厘米角的空的聚酰亞胺多孔膜2個(gè)材夾住。在該狀態(tài)下添加培養(yǎng)基1ml，培養(yǎng)基達(dá)到與片材相同的高度。在該狀態(tài)下向co2培養(yǎng)箱中移動(dòng)，以每周2次的比例更換培養(yǎng)基，持續(xù)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。7天培養(yǎng)后，各片材各自分出1個(gè)，作為單一片材繼續(xù)培養(yǎng)。7天，10天，16天，21天，28天，42天，56天后使用cck8測定細(xì)胞數(shù)目，對(duì)于原始片材和其后接地的空的聚酰亞胺多孔膜，利用cck8染色法，對(duì)細(xì)胞的增殖行進(jìn)行觀察。從長期間培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞的聚酰亞胺多孔膜，細(xì)胞有效地遷移到空的聚酰亞胺多孔膜，連續(xù)增殖的行為被觀察到。結(jié)果示在圖9中。實(shí)施例8使用chodp-12細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)和將冷凍以及物質(zhì)生產(chǎn)2cm×2cm經(jīng)滅菌的方形容器中添加細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基(2％fbs，imdm，和光純藥工業(yè)株式會(huì)社(和光純薬工業(yè)株式會(huì)社))0.5毫升，將滅菌的1.4cm角的正方形聚酰亞胺多孔膜分別浸漬于網(wǎng)結(jié)構(gòu)(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))a面之上。將每1個(gè)片材4×104個(gè)人抗il-8產(chǎn)生chodp-12細(xì)胞懸浮液分別添加到培養(yǎng)基內(nèi)片材上，以每周兩次的比例更換培養(yǎng)基，持續(xù)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)78天后，使用cck8測定細(xì)胞數(shù)。將這種片材4個(gè)在無菌條件下向4個(gè)冷凍保存袋(小袋)以1袋1個(gè)材的方式轉(zhuǎn)移，將每袋c(diǎn)ellbanker3毫升加入每個(gè)袋子。通過程序冷凍器在在2條件(每分鐘1℃，或者，每10分鐘1℃)冷凍到-80℃后，在-80℃下保存24小時(shí)，向液氮中移動(dòng)。在3天之后，將袋(小袋)升溫到37℃以融解內(nèi)容物，并向提前準(zhǔn)備好的填充有培養(yǎng)基2毫升的10平方厘米培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)4個(gè)中，轉(zhuǎn)移前述各個(gè)片材，并將其放置于培養(yǎng)箱內(nèi)24小時(shí)。此后，向2cm×2cm經(jīng)滅菌的方形容器中轉(zhuǎn)移片材，添加細(xì)胞培養(yǎng)基1毫升，另外培養(yǎng)3天。24小時(shí)后，2天后，3天后，4天后使用cck8測定細(xì)胞數(shù)。結(jié)果示在圖10中。將如上所述培養(yǎng)細(xì)胞的冷凍片材4個(gè)與同樣如上所述同時(shí)接種、繼續(xù)培養(yǎng)的非冷凍片材2個(gè)各自1個(gè)放入10平方厘米培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)，各自加入細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基2毫升，在5％co2，37℃下溫育24小時(shí)，收集培養(yǎng)上清液。在所收集的上清液中抗人il-8抗體含量通過elisa法定量。如表2所示，沒有觀察到抗由于冷凍的il-8產(chǎn)生量的變化。結(jié)果示于表2中。表2人抗il-8抗體量(pg/細(xì)胞/天)冷凍片材①26.4冷凍片材②18.0冷凍片材③24.0冷凍片材④28.7非冷凍片材①16.2非冷凍片材②19.3實(shí)施例9人皮膚成纖維細(xì)胞的冷凍和物質(zhì)產(chǎn)生2cm×2cm經(jīng)滅菌的方形容器中添加細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基0.5毫升，將滅菌的1.4cm角的正方形聚酰亞胺多孔膜分別浸漬于在網(wǎng)結(jié)構(gòu)(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))a面之上。每1個(gè)片材4×104個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞懸浮液分別添加至培養(yǎng)基內(nèi)片材上，在培養(yǎng)co2培養(yǎng)箱內(nèi)開始培養(yǎng)。以每周兩次的比例更換培養(yǎng)基，以繼續(xù)實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)49天后，使用cck8測定細(xì)胞數(shù)，其是9.1×104個(gè)。將這種細(xì)胞生長的片材從培養(yǎng)基中取出，轉(zhuǎn)移至先前制備的、加入cellbanker3毫升的冷凍保存袋(小袋)，通過程序冷凍器每10分鐘降低1℃，冷凍至-80℃后，在-80℃保存24小時(shí)，并保存在液氮中。5天后，將袋(小袋)溫?zé)嶂?7℃以使內(nèi)容物融解，向預(yù)先制備的、填充有培養(yǎng)基2毫升的10平方厘米培養(yǎng)皿(皮氏培養(yǎng)皿)(シャーレ)轉(zhuǎn)移片材，并在co2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)基更換是以每周兩次的速度進(jìn)行。24小時(shí)后，5天后，8天后，13天后，21天后，29天后和35天后使用cck8測定片材中生長的細(xì)胞數(shù)。結(jié)果示于圖11。24小時(shí)后，8天后，21天后和35天后的比活性，分別為34％，91％，105％和152％。35天培養(yǎng)后，相同的片材中生長的人皮膚成纖維細(xì)胞的纖連蛋白的產(chǎn)生量通過elisa法測量。結(jié)果示于下表。在沒有由冷凍產(chǎn)生的損傷的情況下、物質(zhì)生產(chǎn)繼續(xù)進(jìn)行的情況被證實(shí)。結(jié)果示于表3。表3當(dāng)前第1頁12