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一種基于組合自剪切與蛋白支架的生物活性小肽制備方法與流程

文檔序號(hào):12412111閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種基于組合自剪切與蛋白支架的生物活性小肽制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)ELPs介導(dǎo)的C-intein融合LfcinB重組質(zhì)粒的構(gòu)建:構(gòu)建以大腸桿菌為宿主的牛乳鐵素高效融合表達(dá)體系,將pET-22b-EI載體插入通過(guò)重疊PCR構(gòu)建的LfcinB,構(gòu)建pET-22b-EI-LfcinB,利用ELPs可逆相變的特性在C-Inteins介導(dǎo)的蛋白自剪切作用下得到不含外源氨基酸殘基的LfcinB;

(2)根據(jù)Titin蛋白和Telethonin蛋白的特性,分別與LfcinB串連,構(gòu)建pET-24a-Titin-LfcinB、pET-24a-Telethonin-LfcinB重組質(zhì)粒,以大腸桿菌為宿主制備Titin-LfcinB、Telethonin-LfcinB兩種融合抗菌肽,Titin-LfcinB:Telethonin-LfcinB摩爾量比為1-4:1-4的比例將兩者單體混合后,制備得到ZT-LfcinB,其中1-4個(gè)單體串聯(lián)或并聯(lián)穩(wěn)定利用相耦合在一起,并利用Native SDS-PAGE分析顯示組裝成功。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于組合自剪切與蛋白支架的生物活性小肽制備方法,Titin-LfcinB:Telethonin-LfcinB的摩爾量比為2:1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于組合自剪切與蛋白支架的生物活性小肽制備方法,其特征在于,EI-LfcinB的優(yōu)化表達(dá)條件為,當(dāng)IPTG的誘導(dǎo)濃度為1mM,誘導(dǎo)溫度為25℃,誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間為24h時(shí),目的蛋白可得到最佳表達(dá)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于組合自剪切與蛋白支架的生物活性小肽制備方法,其特征在于,內(nèi)含肽自剪切所采用的切割緩沖液為預(yù)冷的含NaCl(1-3M)cleaving buffer。

5.利用權(quán)利要求1—4任意所述基于組合自剪切與蛋白支架的生物活性小肽制備方法制備獲得的生物活性小肽在制備抗菌或抗病毒藥物中的應(yīng)用。

6.利用權(quán)利要求1—4任意所述基于組合自剪切與蛋白支架的生物活性小肽制備方法制備獲得的生物活性小肽。

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