1.一種枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括如下步驟:
(1)枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)基的制備:在容器中裝入NA培養(yǎng)基經(jīng)121℃高壓滅菌30min,冷卻至室溫,所述NA培養(yǎng)基的成分為蛋白胨20g/L、牛肉粉3g/L和氯化鈉5g/L, pH為7.2±0.1;
(2)枯草芽孢桿菌菌種活化培養(yǎng):將斜面保存的枯草芽孢桿菌菌種,接種至步驟(1)制備的枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)基,37℃,100~120rpm搖床震蕩培養(yǎng)16~20h,制成種子液;
(3)枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基的制備:所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為糖蜜9.8g/L 、(NH4)2SO40.2g/L、豆餅粉20g/L、葡萄糖4g/L和氯化鈉4g/L,培養(yǎng)基滅菌前調(diào)節(jié)至pH 7.2±0.1;
(4)對活化后的枯草芽孢桿菌種子液的擴培養(yǎng):將步驟(2)制備的枯草芽孢桿菌種子液按0.1~0.2%的比例接入到已裝有步驟(3)所述發(fā)酵培養(yǎng)基的一級發(fā)酵罐中,再加入發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)量0.2~0.3%的消泡劑,在37℃,通氣量0.4~0.6m3/h,轉(zhuǎn)數(shù)100~120prm,空氣壓力0.05~0.1MPa,控制體系pH為7.2±0.1,條件下培養(yǎng)14~16h;
(5)用擴培養(yǎng)的種子液制備枯草芽孢桿菌發(fā)酵液:將上述步驟(4)制備的枯草芽孢桿菌擴培養(yǎng)的種子液接入到已裝有步驟(3)所制發(fā)酵培養(yǎng)基的二級發(fā)酵罐中,再加入消泡劑,在37℃,通氣量0.8~1m3/h,轉(zhuǎn)數(shù)120prm,空氣壓力0.05~0.1MPa,控制體系pH為7.2±0.1,培養(yǎng)20~24h,即得枯草芽孢桿菌菌液。
2.如權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的制備方法,其特征在于,步驟(5)中所述枯草芽孢桿菌擴培養(yǎng)的種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量比為0.001~0.002:1。
3.如權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的制備方法,其特征在于,步驟(5)中所述消泡劑與發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量比為0.002~0.003:1。