1.體外檢測人細胞有絲分裂染色體不穩(wěn)定性的方法,其特征在于,步驟包括:
(1)細胞培養(yǎng):NCM460細胞使用RPMI-1640培養(yǎng)基,添加10%的新生牛血清、2mM的1%的谷氨酰胺以及5000IU/mL的0.1%的青霉素和5mg/mL鏈霉素,NCM460細胞培養(yǎng)在75cm2的玻璃或聚苯乙烯培養(yǎng)瓶中,放置CO2含量為5%、溫度為37℃的濕潤培養(yǎng)箱中;
(2)細胞處理:按5×105個/mL的密度將處于指數(shù)生長期的NCM460細胞接種到24孔板中,并分別加入0.05μg/mL和0.1μg/mL的絲裂霉素C處理24h,陰性對照組為不加絲裂霉素C的非處理組;
(3)細胞收集:處理結束后,將培養(yǎng)基上清收集到離心管中,并用磷酸緩沖鹽溶液緩慢地清洗貼壁細胞2-3次,然后加入質量濃度為0.25%的胰蛋白酶,在37℃環(huán)境下對細胞進行短暫的消化,加入培養(yǎng)基上清將細胞吹打成單細胞懸液;
(4)細胞濃縮:將細胞懸液重新轉移到離心管中,在1000轉/分的條件下離心5分鐘,棄上清加入少量的新鮮培養(yǎng)基并將細胞團塊吹打成單細胞懸液;
(5)細胞涂片:將濃縮的細胞轉移到涂片離心機中,在800轉/分的條件下離心5分鐘;
(6)細胞固定:取出載玻片,在室溫下干燥5-10分鐘,待完全干燥后將載玻片置于冰甲醇中、置于-40℃的環(huán)境下固定15分鐘;
(7)細胞染色:將固定后的載玻片置于10%的吉姆薩染液中染色10分鐘,之后將載玻片取出,在蒸餾水中緩慢地清洗3遍以上,并置于避光條件下室溫干燥;
(8)細胞封片:帶載玻片充分干燥后,使用中性樹脂和大小為18mm×18mm的蓋玻片對載玻片進行封片,封片完的載玻片在待計數(shù)之前應嚴格避光保存;
(9)染色體不穩(wěn)定統(tǒng)計:使用光學顯微鏡對有絲分裂細胞進行觀察,并對其中染色體不穩(wěn)定指標進行頻率統(tǒng)計。
2.根據權利要求1所述體外檢測人細胞有絲分裂染色體不穩(wěn)定性的方法,其特征在于,步驟(9)中,所述不穩(wěn)定指標包括染色體錯誤排布、染色體多極排布、染色體滯后、極化染色體、染色質橋和染色體多極分離。
3.根據權利要求1所述體外檢測人細胞有絲分裂染色體不穩(wěn)定性的方法,其特征在于,所述染色體錯誤排布和染色體多極排布統(tǒng)計時,中期細胞統(tǒng)計數(shù)≥200個;所述染色體滯后、極化染色體、染色質橋和染色體多極分離,后/期細胞統(tǒng)計數(shù)≥100個。