本發(fā)明涉及生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種體外檢測(cè)人細(xì)胞有絲分裂染色體不穩(wěn)定性的方法。

背景技術(shù)：

有絲分裂是細(xì)胞周期中最脆弱的時(shí)期，因?yàn)檫@一時(shí)期細(xì)胞會(huì)受到來自外源性或內(nèi)源性化學(xué)物質(zhì)的影響，造成染色體不穩(wěn)定性。染色體不穩(wěn)定性會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞的基因組不穩(wěn)定，而后者是眾多人類遺傳-環(huán)境疾病的基礎(chǔ)誘因，其與出生缺陷、發(fā)育異常、免疫缺陷和退行性疾病(如老年性癡呆、帕金森氏病、高血壓、心血管疾病、糖尿病、骨質(zhì)疏松癥、腫瘤等)危險(xiǎn)度增加高度相關(guān)。由于染色體不穩(wěn)定性的指標(biāo)較多，目前使用的大部分檢測(cè)方法只能針對(duì)其中的少數(shù)幾項(xiàng)，缺乏可以系統(tǒng)性和全方位地檢測(cè)染色體不穩(wěn)定的方法。體外檢測(cè)人細(xì)胞有絲分裂染色體不穩(wěn)定性方法的發(fā)明可以用于系統(tǒng)、全面地檢測(cè)有絲分裂時(shí)期的染色體不穩(wěn)定性現(xiàn)象。該技術(shù)可用于；①評(píng)價(jià)個(gè)體基因組穩(wěn)定性；②評(píng)估腫瘤患者細(xì)胞的染色體不穩(wěn)定性水平，從而幫助醫(yī)生針對(duì)該患者選擇合適的治療手段；③評(píng)價(jià)化合物(包含藥物)暴露或營(yíng)養(yǎng)不良時(shí)(營(yíng)養(yǎng)物缺乏或過量)的遺傳毒性。

間期細(xì)胞的染色體是以一種去凝縮的方式、相對(duì)無序地分布在整個(gè)細(xì)胞核內(nèi)。而當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂時(shí)，染色體的構(gòu)象發(fā)生了明顯變化(圖1)。首先，染色體逐漸凝縮(前期)，顯現(xiàn)出染色體雛形；第二，染色體進(jìn)一步凝縮，并通過自身的一對(duì)動(dòng)粒分別與兩極的中心體發(fā)出的紡錘絲結(jié)合(前中期)；第三，染色體被最大限度地凝縮，并均勻地排布在細(xì)胞中期板上(中期)；第四，染色體被紡錘絲均勻地拉向細(xì)胞兩極(后期)；最后，染色體在到達(dá)細(xì)胞兩極之后開始去凝縮(末期)。

在有絲分裂時(shí)，因?yàn)槭サ暮四さ谋Ｗo(hù)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的化合物很容易靠近染色體并對(duì)染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)量造成影響。染色體不穩(wěn)定性主要體現(xiàn)在兩個(gè)時(shí)期：中期(圖2，A-F)和后/末期(圖2，G-R)。中期時(shí)的染色體不穩(wěn)定性表型特征包括染色體錯(cuò)誤排布(chromosome misalignment,CMA)和染色體多極排布(chromosome multipolar alignment,CMPA)。CMA的主要誘因是染色體地動(dòng)粒和紡錘絲沒有結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合，導(dǎo)致該染色體不能及時(shí)地排布到中期板上。CMA的表現(xiàn)特征是一條或多條染色體脫離染色體團(tuán)，游離在細(xì)胞質(zhì)中(圖2，A-C)。CMTA的主要誘因是因?yàn)橹行捏w的異常擴(kuò)增或片段化，形成了多極紡錘絲，從而導(dǎo)致染色體在中期板上形成多級(jí)排布現(xiàn)象。CMTA的表現(xiàn)特征是形成一些異常的中期染色體團(tuán)構(gòu)象，包括“L型”、“Y型”和“+型”等(圖2，D-F)。后/末期時(shí)的染色體不穩(wěn)定性表型特征包括染色體滯后(chromosome lagging,CL)、極化染色體(polar chromosome,PC)、染色質(zhì)橋(chromatin bridge,CB)和染色體多極分離(chromosome multipolar segregation,CMPS)。CL的主要誘因是染色體動(dòng)粒和紡錘絲的異常結(jié)合，如同一動(dòng)粒同時(shí)和來自兩極的紡錘絲結(jié)合(又稱merotely結(jié)合)，導(dǎo)致了該染色體同時(shí)受到兩個(gè)相反方向的拉力，阻斷了染色體的正常分離。CL的主要表現(xiàn)特征是一條或多條染色體滯后于其他主染色體團(tuán)的分離，而被夾在兩個(gè)被拉向兩極的子代染色體團(tuán)之間(圖2，G-I)。

PC的主要誘因是染色體的一對(duì)動(dòng)粒和來自同一極的紡錘絲結(jié)合(又稱syntelic結(jié)合)，導(dǎo)致該染色體在分離時(shí)因缺少反方向的作用力，而更快地被紡錘絲拉向中心體。PC的主要表現(xiàn)特征是一條或多條染色體先于其他染色體形成的子代染色體團(tuán)到達(dá)細(xì)胞極(圖2，J-L)。CB的主要誘因包括：①兩條染色體相互融合或經(jīng)錯(cuò)誤修復(fù)而形成雙著絲粒染色體，從而導(dǎo)致該染色體得姐妹單體無法正常分離；②染色體的姐妹單體出現(xiàn)不解離現(xiàn)象，從而導(dǎo)致姐妹單體在后/末期仍然黏附在一起。CB的表現(xiàn)特征是兩個(gè)子代染色體團(tuán)之間由一條或幾條染色質(zhì)絲相連(圖2，M-O)。CMPS的主要誘因是中期的CMPA細(xì)胞成功地進(jìn)入了后/末期。其表現(xiàn)特征是子代染色體團(tuán)同時(shí)被拉向三極、四極或者更多極(圖2，P-R)。

目前，用于評(píng)價(jià)染色體穩(wěn)定性的黃金標(biāo)準(zhǔn)方法是中期染色體分散法(metaphase chromosome spreading)。雖然該方法可以對(duì)大部分的染色體不穩(wěn)定性現(xiàn)象進(jìn)行分析和統(tǒng)計(jì)，但是，該方法的缺點(diǎn)是：①勞動(dòng)力密集。染色體分散法對(duì)于染色體分離的狀態(tài)要求很高，而人細(xì)胞染色體數(shù)量多且大小差異很大，這些因素限制了染色體分散法的有效觀察次數(shù)，進(jìn)而增加了統(tǒng)計(jì)學(xué)上的誤差、降低了其靈敏度。②可能會(huì)存在因人為因素造成的假陽性結(jié)果。因?yàn)槭褂猛饬?一般是滴片法和蒸汽破裂法)來破裂細(xì)胞質(zhì)的和分散中期染色體可能會(huì)導(dǎo)致其他細(xì)胞的一條或幾條染色體因外力作用而被“濺”到該細(xì)胞的染色體分散區(qū)域內(nèi)。而其它一些用于檢測(cè)染色體不穩(wěn)定性的方法都面臨著檢測(cè)指標(biāo)單一或者經(jīng)濟(jì)成本過高的缺點(diǎn)。因此，需要一種代替性的方法，用以彌補(bǔ)上述方法的不足。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對(duì)上述技術(shù)存在的不足，提供一種體外檢測(cè)人細(xì)胞有絲分裂染色體不穩(wěn)定性的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種體外檢測(cè)人細(xì)胞有絲分裂染色體不穩(wěn)定性的方法，步驟包括：

(1)細(xì)胞培養(yǎng)：NCM460細(xì)胞使用RPMI-1640培養(yǎng)基，添加10％的新生牛血清、2mM的1％的谷氨酰胺以及5000IU/mL的0.1％的青霉素和5mg/mL鏈霉素，NCM460細(xì)胞培養(yǎng)在75cm²的玻璃或聚苯乙烯培養(yǎng)瓶中，放置CO₂含量為5％、溫度為37℃的濕潤(rùn)培養(yǎng)箱中；

(2)細(xì)胞處理：按5×10⁵個(gè)/mL的密度將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的NCM460細(xì)胞接種到24孔板中，并分別加入0.05μg/mL和0.1μg/mL的絲裂霉素C處理24h，陰性對(duì)照組為不加絲裂霉素C的非處理組；

(3)細(xì)胞收集：處理結(jié)束后，將培養(yǎng)基上清收集到離心管中，并用磷酸緩沖鹽溶液緩慢地清洗貼壁細(xì)胞2-3次，然后加入質(zhì)量濃度為0.25％的胰蛋白酶，在37℃環(huán)境下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短暫的消化，加入培養(yǎng)基上清將細(xì)胞吹打成單細(xì)胞懸液；

(4)細(xì)胞濃縮：將細(xì)胞懸液重新轉(zhuǎn)移到離心管中，在1000轉(zhuǎn)/分的條件下離心5分鐘，棄上清加入少量的新鮮培養(yǎng)基并將細(xì)胞團(tuán)塊吹打成單細(xì)胞懸液；

(5)細(xì)胞涂片：將濃縮的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到涂片離心機(jī)中，在800轉(zhuǎn)/分的條件下離心5分鐘；

(6)細(xì)胞固定：取出載玻片，在室溫下干燥5-10分鐘，待完全干燥后將載玻片置于冰甲醇中、置于-40℃的環(huán)境下固定15分鐘；

(7)細(xì)胞染色：將固定后的載玻片置于10％的吉姆薩染液中染色10分鐘，之后將載玻片取出，在蒸餾水中緩慢地清洗3遍以上，并置于避光條件下室溫干燥；

(8)細(xì)胞封片：帶載玻片充分干燥后，使用中性樹脂和大小為18mm×18mm的蓋玻片對(duì)載玻片進(jìn)行封片，封片完的載玻片在待計(jì)數(shù)之前應(yīng)嚴(yán)格避光保存；

(9)染色體不穩(wěn)定統(tǒng)計(jì)：使用光學(xué)顯微鏡對(duì)有絲分裂細(xì)胞進(jìn)行觀察，并對(duì)其中染色體不穩(wěn)定指標(biāo)進(jìn)行頻率統(tǒng)計(jì)。

進(jìn)一步的，步驟(9)中，所述不穩(wěn)定指標(biāo)包括染色體錯(cuò)誤排布、染色體多極排布、染色體滯后、極化染色體、染色質(zhì)橋和染色體多極分離。

進(jìn)一步的，所述染色體錯(cuò)誤排布和染色體多極排布統(tǒng)計(jì)時(shí)，中期細(xì)胞統(tǒng)計(jì)數(shù)≥200個(gè)；所述染色體滯后、極化染色體、染色質(zhì)橋和染色體多極分離，后/期細(xì)胞統(tǒng)計(jì)數(shù)≥100個(gè)。

本發(fā)明中，染色體錯(cuò)誤排布(CMA)、染色體多極排布(CMPA)、染色體滯后(CL)、極化染色體(PC)、染色質(zhì)橋(CB)和染色體多極分離(CMPS)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)如下：

1、染色體錯(cuò)誤排布(CMA)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，A-C)：①、細(xì)胞需處于中期；②、主染色體團(tuán)的構(gòu)象應(yīng)該是兩極分裂時(shí)的長(zhǎng)直條狀；③、未排布染色體與主染色體團(tuán)之間存在明顯的界限。

2、染色體多極排布(CMPA)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，D-F)：①、細(xì)胞需處于中期；②、主染色體團(tuán)的構(gòu)象應(yīng)該是除二極排布的長(zhǎng)直條狀外的其他形狀，主要包括“L型”、“Y型”和“+型”等。

3、染色體滯后(CL)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，G-I)：①、細(xì)胞應(yīng)處于晚后期或者末期，因?yàn)樵谠绾笃跁r(shí)，子代染色體團(tuán)之間分離的距離太短，無法認(rèn)清染色體是否滯后；②、細(xì)胞需進(jìn)行二極分裂，且兩個(gè)子代染色體團(tuán)大小應(yīng)當(dāng)相同或相近；③、滯后的染色體應(yīng)當(dāng)處于兩個(gè)子代染色體團(tuán)的包裹之中；④、處于兩個(gè)子代染色體團(tuán)之間的染色體應(yīng)當(dāng)不與其中任何一方有接觸。

4、極化染色體(PC)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，J-L)：①、細(xì)胞應(yīng)處于后期或者末期；②、細(xì)胞需進(jìn)行二極分裂，且兩個(gè)子代染色體團(tuán)的大小應(yīng)當(dāng)相同或相近；③、極化的染色體在分離上應(yīng)當(dāng)快于子代染色體團(tuán)，即更靠近兩極；④、極化的染色體與同一極的子代染色體團(tuán)之間需存在明顯的間隔。

5、染色質(zhì)橋(CB)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，M-O)：①、細(xì)胞應(yīng)處于晚后期或者末期，因?yàn)樵谠绾笃跁r(shí)，子代染色體團(tuán)之間分離的距離太短，無法認(rèn)清是否存在染色質(zhì)橋；②、細(xì)胞需進(jìn)行二極分裂，且兩個(gè)子代染色體團(tuán)大小應(yīng)當(dāng)相同或相近；③、兩個(gè)子代染色體團(tuán)之間應(yīng)該由一條或多條連續(xù)的染色質(zhì)絲相連。

6、染色體多極分離(CMPS)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，P-R)：①、細(xì)胞應(yīng)處于后期或者末期；②、各子代染色體團(tuán)應(yīng)當(dāng)被拉向明顯不同的方向，但是，如有兩個(gè)或以上的子代染色體團(tuán)被拉向同一方向，只要它們之間有明顯的界限，仍可被看作是多極分離；③、因?yàn)槎鄻O分離時(shí)，染色體動(dòng)粒和紡錘絲的結(jié)合基本上是隨機(jī)的，所以對(duì)各子代染色體團(tuán)之間的大小差異沒有嚴(yán)格的要求。

本發(fā)明的有益技術(shù)效果是：本方法是一種系統(tǒng)性、全方位檢測(cè)有絲分裂染色體不穩(wěn)定性的方法，和其他方法相比，本方法的優(yōu)點(diǎn)在于：①、可同時(shí)檢測(cè)多類染色體不穩(wěn)定現(xiàn)象，分析某一化合物是染色體毒物和/或有絲分裂毒物；②、具有很強(qiáng)的靈敏度，可檢測(cè)極低劑量的遺傳毒性物質(zhì)；③、可以極大地減小因人為原因而造成的假陽性現(xiàn)象；④、具有簡(jiǎn)單、易操作的特點(diǎn)，可以有效地節(jié)省勞動(dòng)力，具有高通量應(yīng)用的潛能；⑤、經(jīng)濟(jì)成本較低，適用于大部分實(shí)驗(yàn)室開展實(shí)施。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1：染色體在細(xì)胞間期和有絲分裂期時(shí)的構(gòu)象變化過程；其中，上排為示意圖，下排為顯微圖，示意圖中染色體為棕色，中心體為淡綠色，紡錘絲為深綠色，下排顯微圖中被吉姆薩染液染成紅色部分為染色體，藍(lán)色部分為細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)(100×油鏡下拍攝)；

圖2：染色體不穩(wěn)定(CIN)的分類，CIN可分為中期CIN(A-F)和后/末期CIN(G-R)，中期CIN包括染色體異常排布(CMA；A-C)和染色體多極排布(CMPA；D-F)。后/末期CIN包括染色體滯后(CL；G-I)、極化染色體(PC；J-L)、染色質(zhì)橋(CB；M-O)和染色體多極分離(CMPS；P-R)，各顯微圖中被吉姆薩染液染成紅色部分為染色體，藍(lán)色部分為細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)(100×油鏡下拍攝)。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

一種體外檢測(cè)人細(xì)胞有絲分裂染色體不穩(wěn)定性的方法，步驟包括：

1、細(xì)胞處理流程

(1)細(xì)胞培養(yǎng)：NCM460細(xì)胞使用RPMI-1640培養(yǎng)基，添加10％的新生牛血清、2mM的1％的谷氨酰胺以及5000IU/mL的0.1％的青霉素和5mg/mL鏈霉素，NCM460細(xì)胞培養(yǎng)在75cm²的玻璃或聚苯乙烯培養(yǎng)瓶中，放置CO₂含量為5％、溫度為37℃的濕潤(rùn)培養(yǎng)箱中；

(2)細(xì)胞處理：按5×10⁵細(xì)胞/mL的密度將傳代中的NCM460細(xì)胞接種到24孔板中，并分別加入0.05μg/mL和0.1μg/mL的絲裂霉素C處理24h，陰性對(duì)照組為不加絲裂霉素C的非處理組；

(3)細(xì)胞收集：處理結(jié)束后，將培養(yǎng)基上清收集到離心管中，并用磷酸緩沖鹽溶液緩慢地清洗貼壁細(xì)胞2-3次，然后加入質(zhì)量濃度為0.25％的胰蛋白酶，在37℃環(huán)境下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短暫的消化，加入培養(yǎng)基上清將細(xì)胞吹打成單細(xì)胞懸液；

(4)細(xì)胞濃縮：將細(xì)胞懸液重新轉(zhuǎn)移到離心管中，在1000轉(zhuǎn)/分的條件下離心5分鐘，棄上清加入少量的新鮮培養(yǎng)基并將細(xì)胞團(tuán)塊吹打成單細(xì)胞懸液；

(5)細(xì)胞涂片：將濃縮的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到涂片離心機(jī)中，在800轉(zhuǎn)/分的條件下離心5分鐘；

(6)細(xì)胞固定：取出載玻片，在室溫下干燥5-10分鐘，待完全干燥后將載玻片置于冰甲醇中、置于-40℃的環(huán)境下固定15分鐘；

(7)細(xì)胞染色：將固定后的載玻片置于10％的吉姆薩染液中染色10分鐘，之后將載玻片取出，在蒸餾水中緩慢地清洗3遍以上，并置于避光條件下室溫干燥；

(8)細(xì)胞封片：帶載玻片充分干燥后，使用中性樹脂和大小為18mm×18mm的蓋玻片對(duì)載玻片進(jìn)行封片，封片完的載玻片在待計(jì)數(shù)之前應(yīng)嚴(yán)格避光保存；

2、染色體不穩(wěn)定性指標(biāo)的計(jì)數(shù)和認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)

有絲分裂細(xì)胞計(jì)數(shù)，使用光學(xué)顯微鏡(10×目鏡和100×物鏡)對(duì)有絲分裂細(xì)胞進(jìn)行觀察，并對(duì)其中染色體不穩(wěn)定指標(biāo)進(jìn)行頻率統(tǒng)計(jì)，對(duì)于染色體異常排布和染色體多極排布，應(yīng)當(dāng)至少統(tǒng)計(jì)200個(gè)中期細(xì)胞；而對(duì)于染色體滯后，極化染色體、染色質(zhì)橋和染色體多極分離，應(yīng)當(dāng)至少統(tǒng)計(jì)100個(gè)后/期細(xì)胞。

(1)、染色體錯(cuò)誤排布(CMA)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，A-C)：

①、細(xì)胞需處于中期；

②、主染色體團(tuán)的構(gòu)象應(yīng)該是兩極分裂時(shí)的長(zhǎng)直條狀；

③、未排布染色體與主染色體團(tuán)之間存在明顯的界限。

(2)、染色體多極排布(CMPA)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，D-F)：

①、細(xì)胞需處于中期；

②、主染色體團(tuán)的構(gòu)象應(yīng)該是除二極排布的長(zhǎng)直條狀外的其他形狀，主要包括“L型”、“Y型”和“+型”等。

(3)、染色體滯后(CL)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，G-I)：

①、細(xì)胞應(yīng)處于晚后期或者末期，因?yàn)樵谠绾笃跁r(shí)，子代染色體團(tuán)之間分離的距離太短，無法認(rèn)清染色體是否滯后；

②、細(xì)胞需進(jìn)行二極分裂，且兩個(gè)子代染色體團(tuán)大小應(yīng)當(dāng)相同或相近；

③、滯后的染色體應(yīng)當(dāng)處于兩個(gè)子代染色體團(tuán)的包裹之中；

④、處于兩個(gè)子代染色體團(tuán)之間的染色體應(yīng)當(dāng)不與其中任何一方有接觸。

(4)、極化染色體(PC)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，J-L)：

①、細(xì)胞應(yīng)處于后期或者末期；

②、細(xì)胞需進(jìn)行二極分裂，且兩個(gè)子代染色體團(tuán)的大小應(yīng)當(dāng)相同或相近；

③、極化的染色體在分離上應(yīng)當(dāng)快于子代染色體團(tuán)，即更靠近兩極；

④、極化的染色體與同一極的子代染色體團(tuán)之間需存在明顯的間隔。

(5)、染色質(zhì)橋(CB)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，M-O)：

①、細(xì)胞應(yīng)處于晚后期或者末期，因?yàn)樵谠绾笃跁r(shí)，子代染色體團(tuán)之間分離的距離太短，無法認(rèn)清是否存在染色質(zhì)橋；

②、細(xì)胞需進(jìn)行二極分裂，且兩個(gè)子代染色體團(tuán)大小應(yīng)當(dāng)相同或相近；

③、兩個(gè)子代染色體團(tuán)之間應(yīng)該由一條或多條連續(xù)的染色質(zhì)絲相連。

(6)、染色體多極分離(CMPS)的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)(圖2，P-R):

①、細(xì)胞應(yīng)處于后期或者末期；

②、各子代染色體團(tuán)應(yīng)當(dāng)被拉向明顯不同的方向。但是，如有兩個(gè)或以上的子代染色體團(tuán)被拉向同一方向，只要它們之間有明顯的界限，仍可被看作是多極分離。

③、因?yàn)槎鄻O分離時(shí)，染色體動(dòng)粒和紡錘絲的結(jié)合基本上是隨機(jī)的，所以對(duì)各子代染色體團(tuán)之間的大小差異沒有嚴(yán)格的要求。

本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，除非另外定義，這里使用的所有術(shù)語(包括技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員的一般理解相同的意義。還應(yīng)該理解的是，諸如通用字典中定義的那些術(shù)語應(yīng)該被理解為具有與現(xiàn)有技術(shù)的上下文中的意義一致的意義，并且除非像這里一樣定義，不會(huì)用理想化或過于正式的含義來解釋。

最后所應(yīng)說明的是：以上實(shí)施例僅用以說明而非限制本發(fā)明的技術(shù)方案，盡管參照上述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該理解：依然可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明的精神和范圍的任何修改或局部替換，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。