本發(fā)明屬于一種植物多糖的提取方法，尤其涉及一種從中藥材枸杞中提取多糖的方法。
背景技術(shù)：
枸杞子(lycium chinense mill)為茄科植物，是我國(guó)傳統(tǒng)的藥食兼用的名貴中藥材，能滋補(bǔ)肝腎、益精明目。枸杞提取物主要活性成分為一種水溶性多糖，即枸杞多糖(LBP，Lycium barbarum polysaccharides)，該多糖是一種蛋白多糖，分子量為22～25kD，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6種單糖成分組成，具有增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、防衰老、降血壓、降血糖和抗疲勞方面的藥理作用，具有廣闊的開發(fā)前景。枸杞多糖既可以作為藥物使用，也可以作為食品加工。
現(xiàn)有提取純化枸杞多糖的方法有水提法，酶解法，微波法等，水提法提取過程需要多次浸提，操作時(shí)間長(zhǎng)，提取率低，并且費(fèi)時(shí)費(fèi)料。酶解法提取成本較高，不利于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。微波技術(shù)在提取時(shí)間方面不宜過長(zhǎng)，功率不宜太高，會(huì)降低反應(yīng)的活化能，使分子之間形成新的作用力，導(dǎo)致多糖分子溶出受阻。枸杞多糖進(jìn)一步純化大多應(yīng)用Sevage法除蛋白，柱層析等，但其工藝繁瑣，有機(jī)溶劑用量多，能耗大。
目前使用的枸杞多糖有效成分含量低，含色素、蛋白質(zhì)和小分子雜質(zhì)等，枸杞多糖含量不穩(wěn)定，因此急需找到一種有效成分含量高，工藝簡(jiǎn)單，枸杞多糖含量穩(wěn)定的枸杞多糖提取物的制備方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的問題是提供一種枸杞多糖提取物的制備方法，該方法克服目前制得的枸杞多糖含量低，枸杞多糖純化工藝長(zhǎng)、能耗高、污染大的缺點(diǎn)，制備得到的枸杞多糖提取物有效成分含量高，枸杞多糖含量穩(wěn)定、療效高。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案如下：一種枸杞多糖提取物的制備方法，所述方法包括以下步驟：
(1)堿提：取干燥枸杞，加入6～8倍干燥枸杞質(zhì)量的pH為10～12的堿水，75～85℃浸提2～3次，每次1～2小時(shí)，合并得到提取液，調(diào)pH至中性，將提取液濃縮成比重為1.08～1.10的浸膏；
(2)醇沉1：將步驟(1)所得浸膏加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90～95％乙醇進(jìn)行醇沉，上清濃縮回收乙醇；
(3)醇沉2：將步驟(2)所得沉淀加水復(fù)溶，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90～95％乙醇進(jìn)行醇沉，上清濃縮回收乙醇，沉淀待揮去乙醇，加水溶解，冷凍干燥，即得所述枸杞多糖提取物。
上述技術(shù)方案中，所述步驟(1)中，所述堿水為氫氧化鈉水溶液。
上述技術(shù)方案中，所述步驟(3)制得的枸杞多糖提取物枸杞多糖含量大于等于30％。
作為優(yōu)選，步驟(1)中，浸提溫度為75℃。
作為優(yōu)選，步驟(2)中，加入的乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)方案具有如下優(yōu)點(diǎn)：利用堿水浸提斷裂糖肽鍵的原理分離得到枸杞多糖，再通過兩次醇沉獲得高含量枸杞多糖，含量穩(wěn)定、療效高，制備工藝簡(jiǎn)單。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)描述。以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1
一種枸杞多糖提取物的制備方法，包括如下步驟：
(1)堿提1：取干燥枸杞200g，加入1600g的pH為12的NaOH水溶液，在75℃浸提2小時(shí)，過濾，得第一濾液和枸杞殘?jiān)?/p>
(2)堿提2：在步驟(1)所得枸杞殘?jiān)屑尤?200g的pH為12的NaOH水溶液，在75℃浸提1小時(shí)，過濾，得第二濾液；
(3)濾液濃縮：將步驟(1)所得第一濾液與步驟(2)所得第二濾液合并，得提取液，調(diào)pH至中性，濃縮成比重為1.08的浸膏；
(4)醇沉1：在步驟(3)所得浸膏中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％乙醇進(jìn)行醇沉，上清濃縮回收乙醇。
(5)醇沉2：將步驟(4)所得沉淀加水復(fù)溶，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％乙醇再次醇沉，上清濃縮回收乙醇，沉淀待揮去乙醇，加水溶解，冷凍干燥，制得的提取物枸杞多糖含量為31.1％。
本案例中枸杞多糖含量由下述公式計(jì)算得出：枸杞多糖含量(％)＝(提取物中枸杞多糖質(zhì)量)/(枸杞多糖提取物質(zhì)量)×100％。
本案例中枸杞多糖含量按照苯酚-硫酸法測(cè)定得出，具體如下：
(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確吸取D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml，置于25ml比色管中，補(bǔ)水至2.0ml，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％苯酚硫酸溶液1.0ml，在漩渦混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10ml，在漩渦混勻器上小心混勻，置沸水浴中加熱2分鐘，取出，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng)處以試劑空白為參比，1cm比色皿測(cè)定吸光值。以D-葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(2)樣品含量的測(cè)定：
a.樣品提取：稱取混合均勻的固體樣品1.0～2.0g，置于100ml容量瓶，加水80ml左右，于沸水浴中加熱1小時(shí)，冷卻至室溫后補(bǔ)水加水至刻度，混勻后過濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀粗多糖。
b.沉淀粗多糖：準(zhǔn)確吸取上述濾液5.0ml，置于50ml離心管中，加入無水乙醇20ml，混勻，于4℃冰箱靜止4小時(shí)以上，以4000r/min離心5min，棄去上清液，殘?jiān)脭?shù)毫升質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80％乙醇溶液洗滌，離心后棄去上清液，反復(fù)操作3次。殘?jiān)盟芙獠⒍ㄈ葜?0～25ml。
c.樣品測(cè)定：準(zhǔn)確吸取上液適量置于25ml比色管中，補(bǔ)水加至2.0ml，于485nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出枸杞多糖含量。
實(shí)施例2
一種枸杞多糖提取物的制備方法，包括如下步驟：
(1)堿提1：取干燥枸杞200g，加入1600g的pH為10的NaOH水溶液，在75℃浸提2小時(shí)，過濾，得第一濾液和枸杞殘?jiān)?/p>
(2)堿提2：在步驟(1)所得枸杞殘?jiān)屑尤?200g的pH為10的NaOH水溶液，在75℃浸提1小時(shí)，過濾，得第二濾液；
(3)濾液濃縮：將步驟(1)所得第一濾液與步驟(2)所得第二濾液合并，得提取液，調(diào)pH至中性，濃縮成比重為1.20的浸膏；
(4)醇沉1：在步驟(3)所得浸膏中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％乙醇進(jìn)行醇沉，上清濃縮回收乙醇。
(5)醇沉2：將步驟(4)所得沉淀加水復(fù)溶，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％乙醇再次醇沉，上清濃縮回收乙醇，沉淀待揮去乙醇，加水溶解，冷凍干燥，制得的提取物枸杞多糖含量為30.2％。
提取物中枸杞多糖含量計(jì)算方法同上一案例。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。