本發(fā)明涉及大蒜加工技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種大蒜多糖的提取純化方法。
背景技術(shù)：
大蒜又叫蒜頭、大蒜頭、胡蒜、葫、獨蒜、獨頭蒜，是蒜類植物的統(tǒng)稱。半年生草本植物，百合科蔥屬，以鱗莖入藥。春、夏采收，扎把，懸掛通風(fēng)處，陰干備用。農(nóng)諺說“種蒜不出九（月），出九長獨頭”，6月葉枯時采挖，除去泥沙，通風(fēng)晾干或烘烤至外皮干燥。
大蒜呈扁球形或短圓錐形，外面有灰白色或淡棕色膜質(zhì)鱗皮，剝?nèi)[葉，內(nèi)有6～10個蒜瓣，輪生于花莖的周圍，莖基部盤狀，生有多數(shù)須根。每一蒜瓣外包薄膜，剝?nèi)ケ∧ぃ匆姲咨?、肥厚多汁的鱗片。有濃烈的蒜辣氣，味辛辣。有刺激性氣味，可食用或供調(diào)味，亦可入藥。地下鱗莖分瓣，按皮色不同分為紫皮種和白皮種。大蒜是秦漢時從西域傳入中國，經(jīng)人工栽培繁育,具有抗癌功效，深受大眾喜食。
大蒜多糖是大蒜中含量最高的保健功能成分，占鮮蒜的15％～25％，具有增殖腸道益生菌，協(xié)助消化、增強免疫力、防止肝損傷、抗氧化和抗病毒等多種功效。大蒜多糖在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域具有較廣泛的實際應(yīng)用前景。目前，大蒜多糖額提取方法比較單一，提取出來的大蒜多糖純度也不能夠保證，因此，需要一種新的技術(shù)，來獲得更高純度的大蒜多糖。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種大蒜多糖的提取純化方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
一種大蒜多糖的提取純化方法，包括以下步驟：
A、鮮蒜去皮，清洗干凈，稱重后搗碎成大蒜泥；
B、向大蒜泥中加入質(zhì)量為大蒜泥質(zhì)量5倍的水，充分進(jìn)行大蒜泥與水的混合，然后進(jìn)行蒸煮，直至蒸汽基本無大蒜臭味，得蒸煮混合液；
C、將蒸煮混合液進(jìn)行充分發(fā)酵，發(fā)酵完成后進(jìn)行蒸餾，所得蒸餾液用正己烷進(jìn)行萃取，得萃取液；
D、將萃取液進(jìn)行加熱除蛋白，加熱溫度控制在85℃-105℃，加熱時間為20min-30min，冷卻后進(jìn)行抽濾，得大蒜多糖粗提取液；
E、大蒜多糖粗提液經(jīng)大孔樹脂處理：將濃縮液復(fù)溶上DA201極性大孔樹脂柱，上樣量為柱體積的10%，用水作淋洗液，濃縮流出液；
F、經(jīng)逆流色譜一步純化大蒜多糖：逆流色譜溶劑系統(tǒng)為MgSO4:PEG:H2O，硫酸鎂的百分含量為14～18%，PEG（聚乙二醇）分子量為1000～1500，含量為12%～15%；配置好的溶劑放入分液漏斗中，靜止過夜，取上相作為固定相，下相作為流動相；逆流色譜儀柱溫為25℃，轉(zhuǎn)速為800～1000r/min，轉(zhuǎn)向為正向；用上下相1：1的溶液對濃縮液進(jìn)行稀釋，使多糖含量為1～2mg/mL；上樣體積為柱體積的1/10～1/20；定時或定量進(jìn)行收集，對收集到的各管采用硫酸—苯酚法進(jìn)行多糖測定；
G、透析及干燥：將適量體積的上述收集液裝入截留分子量為3000的透析袋中，對水透析過夜，將透析過的溶液進(jìn)行冷凍干燥，得大蒜多糖精品。
作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述步驟B中進(jìn)行蒸煮的溫度為80℃-90℃。
作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述步驟C中發(fā)酵溫度為50℃-60℃，發(fā)酵時間為6h-8h。
作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述步驟C中加入的正己烷為步驟B中加入水的質(zhì)量的1/5。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法簡單，操作方便、效率高、價格低，優(yōu)化了制備高純度大蒜多糖的提取工藝，為規(guī)模分離純化大蒜多糖精品提供技術(shù)支持，具有很好的推廣應(yīng)用價值。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式對本專利的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。
實施例1
一種大蒜多糖的提取純化方法，包括以下步驟：
A、鮮蒜去皮，清洗干凈，稱重后搗碎成大蒜泥；
B、向大蒜泥中加入質(zhì)量為大蒜泥質(zhì)量5倍的水，充分進(jìn)行大蒜泥與水的混合，然后進(jìn)行蒸煮，直至蒸汽基本無大蒜臭味，得蒸煮混合液；進(jìn)行蒸煮的溫度為80℃；
C、將蒸煮混合液進(jìn)行充分發(fā)酵，發(fā)酵完成后進(jìn)行蒸餾，所得蒸餾液用正己烷進(jìn)行萃取，得萃取液；發(fā)酵溫度為50℃，發(fā)酵時間為6h；加入的正己烷為步驟B中加入水的質(zhì)量的1/5；
D、將萃取液進(jìn)行加熱除蛋白，加熱溫度控制在85℃，加熱時間為20min，冷卻后進(jìn)行抽濾，得大蒜多糖粗提取液；
E、大蒜多糖粗提液經(jīng)大孔樹脂處理：將濃縮液復(fù)溶上DA201極性大孔樹脂柱，上樣量為柱體積的10%，用水作淋洗液，濃縮流出液；
F、經(jīng)逆流色譜一步純化大蒜多糖：逆流色譜溶劑系統(tǒng)為MgSO4:PEG:H2O，硫酸鎂的百分含量為14%，PEG（聚乙二醇）分子量為1000，含量為12%；配置好的溶劑放入分液漏斗中，靜止過夜，取上相作為固定相，下相作為流動相；逆流色譜儀柱溫為25℃，轉(zhuǎn)速為800r/min，轉(zhuǎn)向為正向；用上下相1：1的溶液對濃縮液進(jìn)行稀釋，使多糖含量為1mg/mL；上樣體積為柱體積的1/10；定時或定量進(jìn)行收集，對收集到的各管采用硫酸—苯酚法進(jìn)行多糖測定；
G、透析及干燥：將適量體積的上述收集液裝入截留分子量為3000的透析袋中，對水透析過夜，將透析過的溶液進(jìn)行冷凍干燥，得大蒜多糖精品。
實施例2
一種大蒜多糖的提取純化方法，包括以下步驟：
A、鮮蒜去皮，清洗干凈，稱重后搗碎成大蒜泥；
B、向大蒜泥中加入質(zhì)量為大蒜泥質(zhì)量5倍的水，充分進(jìn)行大蒜泥與水的混合，然后進(jìn)行蒸煮，直至蒸汽基本無大蒜臭味，得蒸煮混合液；進(jìn)行蒸煮的溫度為90℃；
C、將蒸煮混合液進(jìn)行充分發(fā)酵，發(fā)酵完成后進(jìn)行蒸餾，所得蒸餾液用正己烷進(jìn)行萃取，得萃取液；發(fā)酵溫度為60℃，發(fā)酵時間為8h；加入的正己烷為步驟B中加入水的質(zhì)量的1/5；
D、將萃取液進(jìn)行加熱除蛋白，加熱溫度控制在105℃，加熱時間為30min，冷卻后進(jìn)行抽濾，得大蒜多糖粗提取液；
E、大蒜多糖粗提液經(jīng)大孔樹脂處理：將濃縮液復(fù)溶上DA201極性大孔樹脂柱，上樣量為柱體積的10%，用水作淋洗液，濃縮流出液；
F、經(jīng)逆流色譜一步純化大蒜多糖：逆流色譜溶劑系統(tǒng)為MgSO4:PEG:H2O，硫酸鎂的百分含量為18%，PEG（聚乙二醇）分子量為1500，含量為15%；配置好的溶劑放入分液漏斗中，靜止過夜，取上相作為固定相，下相作為流動相；逆流色譜儀柱溫為25℃，轉(zhuǎn)速為1000r/min，轉(zhuǎn)向為正向；用上下相1：1的溶液對濃縮液進(jìn)行稀釋，使多糖含量為2mg/mL；上樣體積為柱體積的1/20；定時或定量進(jìn)行收集，對收集到的各管采用硫酸—苯酚法進(jìn)行多糖測定；
G、透析及干燥：將適量體積的上述收集液裝入截留分子量為3000的透析袋中，對水透析過夜，將透析過的溶液進(jìn)行冷凍干燥，得大蒜多糖精品。
實施例3
一種大蒜多糖的提取純化方法，包括以下步驟：
A、鮮蒜去皮，清洗干凈，稱重后搗碎成大蒜泥；
B、向大蒜泥中加入質(zhì)量為大蒜泥質(zhì)量5倍的水，充分進(jìn)行大蒜泥與水的混合，然后進(jìn)行蒸煮，直至蒸汽基本無大蒜臭味，得蒸煮混合液；進(jìn)行蒸煮的溫度為85℃；
C、將蒸煮混合液進(jìn)行充分發(fā)酵，發(fā)酵完成后進(jìn)行蒸餾，所得蒸餾液用正己烷進(jìn)行萃取，得萃取液；發(fā)酵溫度為55℃，發(fā)酵時間為7h；加入的正己烷為步驟B中加入水的質(zhì)量的1/5；
D、將萃取液進(jìn)行加熱除蛋白，加熱溫度控制在95℃，加熱時間為25min，冷卻后進(jìn)行抽濾，得大蒜多糖粗提取液；
E、大蒜多糖粗提液經(jīng)大孔樹脂處理：將濃縮液復(fù)溶上DA201極性大孔樹脂柱，上樣量為柱體積的10%，用水作淋洗液，濃縮流出液；
F、經(jīng)逆流色譜一步純化大蒜多糖：逆流色譜溶劑系統(tǒng)為MgSO4:PEG:H2O，硫酸鎂的百分含量為16%，PEG（聚乙二醇）分子量為1300，含量為13%；配置好的溶劑放入分液漏斗中，靜止過夜，取上相作為固定相，下相作為流動相；逆流色譜儀柱溫為25℃，轉(zhuǎn)速為900r/min，轉(zhuǎn)向為正向；用上下相1：1的溶液對濃縮液進(jìn)行稀釋，使多糖含量為1.5mg/mL；上樣體積為柱體積的1/15；定時或定量進(jìn)行收集，對收集到的各管采用硫酸—苯酚法進(jìn)行多糖測定；
G、透析及干燥：將適量體積的上述收集液裝入截留分子量為3000的透析袋中，對水透析過夜，將透析過的溶液進(jìn)行冷凍干燥，得大蒜多糖精品。
本發(fā)明方法簡單，操作方便、效率高、價格低，優(yōu)化了制備高純度大蒜多糖的提取工藝，為規(guī)模分離純化大蒜多糖精品提供技術(shù)支持，具有很好的推廣應(yīng)用價值。
上面對本專利的較佳實施方式作了詳細(xì)說明，但是本專利并不限于上述實施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識范圍內(nèi)，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下做出各種變化。