本發(fā)明涉及一種枸杞多糖的制備方法，屬于食品加工
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：枸杞是我國傳統(tǒng)名貴的中藥材和滋補(bǔ)品，中醫(yī)很早就有“枸杞養(yǎng)生”的說法，素有“紅寶”美稱，富含植物多糖、蛋白質(zhì)、維生素等營養(yǎng)成分。人們?nèi)粘Ｊ秤煤退幱玫蔫坭蕉酁閷幭蔫坭降墓麑?shí)"枸杞子"，而且寧夏枸杞是唯一載入《2010年版中國藥典》的品種，與瓊珍靈芝、長白山人參，東阿阿膠并稱為中藥四寶。枸杞多糖(LBP，LyciumBar～barumPolysaccharides)是一種從枸杞中提取得到的水溶性多糖，是枸杞的有效成分之一，也是植物多糖中少有的含蛋白質(zhì)多糖。從枸杞中分離得到的枸杞多糖，由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖六種己碳糖組成的多糖側(cè)鏈和18種氨基酸組成的蛋白質(zhì)主鏈，并以Glycml—O—Der方式連接，這種糖蛋白具有生物活性，是一種高強(qiáng)度的免疫增強(qiáng)劑。枸杞多糖目前已成為一個研究的熱點(diǎn)，國內(nèi)對枸杞多糖的提取分離、化學(xué)分析、藥理作用及臨床應(yīng)用等進(jìn)行了大量的研究，藥理與臨床研究十分引人矚目。枸杞多糖具有廣泛的藥理學(xué)作用，具有促進(jìn)造血、降血脂、保肝及抗癌等作用，還能夠增強(qiáng)細(xì)胞活性，延緩衰老，改善老年人易疲勞、食欲不振和視力模糊等癥狀。臨床研究表明，枸杞多糖對高血脂兔的血脂有明顯影響，能顯著降低血清膽固醇(TC)及三酞甘油(TG)的含量，降脂有效率達(dá)100.0％，具有良好的降血脂作用。研究表明，枸杞多糖對正常及糖尿病模型動物均有降血糖作用；實(shí)驗結(jié)果表明，枸杞多糖對四氯化碳引起的肝損傷有修復(fù)作用，其機(jī)制可能是通過阻止內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的損傷，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成及解毒作用，恢復(fù)肝細(xì)胞的功能，并促進(jìn)肝細(xì)胞再生；體外試驗提示枸杞多糖能顯著的抑制人宮頸瘤Heal細(xì)胞和人胃腺癌MGC一8仍細(xì)胞的生長和繁殖，抑制癌細(xì)胞克隆的形成；枸杞多糖在體內(nèi)能提高D-半乳糖致衰老小鼠體內(nèi)GsH～Px和超氧化物歧化酶(SOD)活性，從而可以清除過量的自由基，降低MDA和脂褐素含量，起到延緩衰老的作用。鑒于枸杞多糖具有多種藥理作用和生理功能，對其提取分離方法及其最優(yōu)條件的研究顯得尤為重要。公開號為CN104530252A的發(fā)明專利公開了“一種枸杞多糖的提純工藝”，其具體步驟包括：將枸杞洗凈、瀝干并磨成粉末；加入乙醇溶液或無水乙醇并超聲一段時間；過濾，收集濾渣；加入水，超聲提取一段時間；過濾，收集濾液；蒸干，得到棕黃色塊狀固體即為枸杞多糖。本發(fā)明的提純工藝獲得的枸杞多糖純度高、操作簡單、成本低廉，適合大規(guī)模生產(chǎn)；且本發(fā)明的提純方法不僅適用于枸杞多糖的提純，還適用于其它難溶于乙醇但易溶液水的糖類的提純。公開號為CN103788228A的發(fā)明專利公開了“一種枸杞多糖的制備方法”，步驟包括：將枸杞加水浸泡，打漿，去籽，枸杞果漿置于循環(huán)超聲提取機(jī)中進(jìn)行超聲提取，固液分離，濾液濃縮，加一定量的乙醇沉淀多糖，多糖采用樹脂進(jìn)行純化，制成枸杞多糖成品。本發(fā)明利用循環(huán)超聲提取技術(shù)的優(yōu)勢解決了傳統(tǒng)的熱水提取枸杞多糖所帶來的耗時長、耗能高、產(chǎn)率低、高溫對多糖的降解作用以及多糖生物活性被破壞等問題，達(dá)到快速、高效生產(chǎn)枸杞多糖的目的。公開號為CN104311690A的發(fā)明專利公開了“一種枸杞多糖的提取方法”，主要包括下述的步驟：選擇曬干的枸杞，粉碎后過40-80目篩，得枸杞粉，在枸杞粉中加水并攪拌均勻，枸杞粉與水的重量比例為1：5-10，在水中浸泡8-16小時，加入活性炭脫色，加入纖維素酶酶解，再加入堿性蛋白酶和無花果蛋白酶，在微波條件下酶解，酶解后濃縮并脫色，離心，取上清液濃縮醇沉，再離心，采用乙醇清洗沉淀，冷凍干燥后并粉碎，得枸杞多糖。采用本發(fā)明的方法從枸杞中提取多糖，采用酶作用條件溫和，采用各種不同的酶將枸杞中的脂肪、纖維素酶解，將其中的多糖提取出來，提高了枸杞的利用率，采用本發(fā)明的方法得到多糖不僅得率高，而且純度也高。公開號為CN103030708的發(fā)明專利公開了“一種枸杞多糖的純化新方法”，該方法為：將枸杞果粉碎成粗粉，加15倍量85％的甲醇回流提取120分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1∶1的鹽酸∶水將濃縮液pH值調(diào)至2.5，放置20分鐘，濾過；濾液上廣譜型大孔樹脂吸附柱，收集洗脫液，回收甲醇，濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并以體積比3∶1的丙酮∶甲醇洗雜質(zhì)，繼用體積比7∶1的丙酮∶甲醇洗脫，收集洗脫液；將所收集到的多糖洗脫液進(jìn)行精制得枸杞多糖成品，其含量在70％以上。本發(fā)明方法的最大特點(diǎn)是利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合方便快捷、原料來源豐富、生產(chǎn)成本低廉、分離效果明顯、提取純度高。目前現(xiàn)有技術(shù)制備多糖常用的上述方法都存在著許多的問題，比如破壞了多糖結(jié)構(gòu)，多糖提取效率低下，提取時間過長，提取的過程復(fù)雜等。因此研究一種工藝簡單、可操作性強(qiáng)，適用于工業(yè)化生產(chǎn)以及回收率高、活性高、質(zhì)量穩(wěn)定的制備枸杞多糖的方法十分必要，且具有明顯的經(jīng)濟(jì)與社會效益。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種工藝簡單、可操作性強(qiáng)，適用于工業(yè)化生產(chǎn)以及回收率高、活性高、質(zhì)量穩(wěn)定的制備枸杞多糖的方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：一種枸杞多糖的制備方法，包括以下步驟：1)篩選除雜：將枸杞果進(jìn)行篩選，除去其中的雜質(zhì)及病果；優(yōu)選的，所述枸杞果為寧夏中寧產(chǎn)優(yōu)質(zhì)夏果；2)干燥：將分離后的枸杞果進(jìn)行熱風(fēng)干燥脫水，干燥后的枸杞水分<8％；3)粉碎、分離：將干燥后的枸杞果經(jīng)粗顆粒粉碎機(jī)破碎，然后經(jīng)三級篩分離出果肉粉和枸杞籽；粉碎、過篩在常溫條件進(jìn)行；4)萃?。簩⒐夥圻^20目篩后進(jìn)行超臨界CO2萃取；所述流體萃取壓力為26-28MPa，萃取溫度為50-55℃，萃取時間為2-3h；5)浸泡：將萃取后的果肉粉放入提取罐，然后加入純水進(jìn)行浸泡，浸泡時間為6h，浸提溫度為55—60℃；所述純水用量為果肉粉6-10倍；6)酶解、離心：將浸泡好的果肉粉降溫至45℃，加入酶進(jìn)行保溫1-2小時，再進(jìn)行離心分離，分離后的濾液和濾渣分別收集；所述酶的加入量為果肉粉質(zhì)量的1.5％；所述酶由果膠酶和纖維素酶按質(zhì)量比1：1組成；所述離心機(jī)內(nèi)襯有300目的濾布；7)脫鹽：將分離后的濾液用電滲析進(jìn)行脫鹽，脫鹽率＞90％即可；8)超濾、濃縮將脫鹽后的汁液進(jìn)行四級超濾，分別經(jīng)過20萬、10萬、3萬、1萬分子量的超濾膜，再將10萬以下，1萬以上得到的超濾液進(jìn)行反滲透濃縮；所述超濾膜采用聚砜膜，膜的截留分子量為1—20萬道爾頓，過濾壓力為0.1MPa。9)干燥、粉碎及包裝將濃縮濾液進(jìn)行冷凍升華干燥、低溫粉碎，經(jīng)包裝后即為成品枸杞多糖。進(jìn)一步地，步驟4)所述枸杞果萃取后的下腳料，包括枸杞籽油和枸杞色素。上述方法制備的枸杞多糖產(chǎn)品按照企業(yè)生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)檢驗合格后貼簽，合格產(chǎn)品各項理化指標(biāo)如下。1、感官指標(biāo)：產(chǎn)品感官指標(biāo)應(yīng)符合表1要求。表1項目指標(biāo)色澤灰白色滋味與氣味具有枸杞多糖應(yīng)有的滋味與氣味，無異味性狀粉末或顆粒狀，松散無結(jié)塊水分含量≤6.0％雜質(zhì)無肉眼可見的外來雜質(zhì)2、微生物及微量元素指標(biāo)：產(chǎn)品微生物指標(biāo)應(yīng)符合表2要求。表2有益效果：本發(fā)明所述的枸杞多糖的制備方法，具有工藝簡單、可操作性強(qiáng)，適用于工業(yè)化生產(chǎn)以及回收率高、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定等特點(diǎn)。采用該方法生產(chǎn)枸杞多糖的特點(diǎn)是，超臨界CO2萃取脫脂除蠟徹底，水溶出率高，經(jīng)脫鹽后不易返潮結(jié)塊，經(jīng)四級超濾處理，分離效果良好，產(chǎn)品純度高，多糖含量≥35％，反滲透濃縮能耗低，生產(chǎn)效率高，低溫粉碎防止了產(chǎn)品的結(jié)塊和熱劣化。本發(fā)明采用超濾和反滲透濃縮相結(jié)合的方式進(jìn)行提取枸杞多糖，其截留率可達(dá)到94.3％，枸杞多糖含量最高達(dá)到65％以上，而且本發(fā)明方法所制備的枸杞多糖，測定其抗氧化性指標(biāo)≥15萬，最高的達(dá)到16.3萬(每100克中含有ORAC-value)。經(jīng)100次以上的實(shí)驗研究，工藝技術(shù)參數(shù)趨于穩(wěn)定，操作簡便，產(chǎn)品質(zhì)量可靠，中試完成后，容易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)。附圖說明：圖1為枸杞多糖制備方法的流程圖；圖2為PS、PAN、PVDF膜的衰減曲線圖。具體實(shí)施方式：下面通過具體的實(shí)施方案，進(jìn)一步敘述本發(fā)明。除非特別說明，實(shí)施方式中未描述的技術(shù)手段均可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方式實(shí)現(xiàn)。另外，實(shí)施方案應(yīng)理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對這些實(shí)施方案中的物料成分、用量、尺寸、形狀進(jìn)行的各種修改、替換、改進(jìn)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，并且本發(fā)明所限定的具體參數(shù)應(yīng)有可允許的誤差范圍。實(shí)施例1一種枸杞多糖的制備方法，包括以下步驟：1)篩選除雜：將枸杞果進(jìn)行篩選，除去其中的雜質(zhì)及病果；優(yōu)選的，所述枸杞果為寧夏中寧產(chǎn)優(yōu)質(zhì)夏果；2)干燥；將分離后的枸杞果進(jìn)行熱風(fēng)干燥脫水，干燥后的枸杞水分6％；3)粉碎、分離：將干燥后的枸杞果經(jīng)粗顆粒粉碎機(jī)破碎，然后經(jīng)三級篩分離出果肉粉和枸杞籽；4)萃?。簩⒐夥圻^20目篩后進(jìn)行超臨界CO2萃取；所述流體萃取壓力為27MPa，萃取溫度為50℃，萃取時間為2.5h；5)浸泡：將萃取后的果肉粉放入提取罐，然后加入純水進(jìn)行浸泡，浸泡時間為6h，浸提溫度為57℃；所述純水用量為果肉粉8倍；6)酶解、離心：將浸泡好的果肉粉降溫至45℃，加入酶進(jìn)行保溫1.5小時，再進(jìn)行離心分離，分離后的濾液和濾渣分別收集；所述酶的加入量為果肉粉質(zhì)量的1.5％；所述酶由果膠酶和纖維素酶按質(zhì)量比1：1組成；所述離心機(jī)內(nèi)襯有300目的濾布；7)脫鹽：將分離后的濾液用電滲析進(jìn)行脫鹽，脫鹽率92％；8)超濾、濃縮將脫鹽后的汁液分別經(jīng)過20萬、10萬、3萬、1萬分子量的超濾膜，再將10萬以下，1萬以上得到的超濾液進(jìn)行反滲透濃縮；所述超濾膜采用聚砜膜，膜的截留分子量為1-20萬道爾頓，過濾壓力為0.1MPa。9)干燥、粉碎及包裝將濃縮濾液進(jìn)行冷凍升華干燥、低溫粉碎，經(jīng)包裝后即為成品枸杞多糖。實(shí)施例2一種枸杞多糖的制備方法，包括以下步驟：2)篩選除雜：將枸杞果進(jìn)行篩選，除去其中的雜質(zhì)及病果；優(yōu)選的，所述枸杞果為寧夏中寧產(chǎn)優(yōu)質(zhì)夏果；2)干燥；將分離后的枸杞果進(jìn)行熱風(fēng)干燥脫水，干燥后的枸杞水分7％；3)粉碎、分離：將干燥后的枸杞果經(jīng)粗顆粒粉碎機(jī)破碎，然后經(jīng)三級篩分離出果肉粉和枸杞籽；4)萃取：將果肉粉過20目篩后進(jìn)行超臨界CO2萃??；所述流體萃取壓力為26MPa，萃取溫度為50℃，萃取時間為2h；5)浸泡：將萃取后的果肉粉放入提取罐，然后加入純水進(jìn)行浸泡，浸泡時間為6h，浸提溫度為55℃；所述純水用量為果肉粉6倍；6)酶解、離心：將浸泡好的果肉粉降溫至45℃，加入酶進(jìn)行保溫1小時，再進(jìn)行離心分離，分離后的濾液和濾渣分別收集；所述酶的加入量為果肉粉質(zhì)量的1.5％；所述酶由果膠酶和纖維素酶按質(zhì)量比1：1組成；所述離心機(jī)內(nèi)襯有300目的濾布；7)脫鹽：將分離后的濾液用電滲析進(jìn)行脫鹽，脫鹽率95％；8)超濾、濃縮將脫鹽后的汁液分別經(jīng)過20萬、10萬、3萬、1萬分子量的超濾膜，再將10萬以下，1萬以上得到的超濾液進(jìn)行反滲透濃縮；所述超濾膜采用聚砜膜，膜的截留分子量為1-20萬道爾頓，過濾壓力為0.1MPa。9)干燥、粉碎及包裝將濃縮濾液進(jìn)行冷凍升華干燥、低溫粉碎，經(jīng)包裝后即為成品枸杞多糖。實(shí)施例3一種枸杞多糖的制備方法，包括以下步驟：3)篩選除雜：將枸杞果進(jìn)行篩選，除去其中的雜質(zhì)及病果；優(yōu)選的，所述枸杞果為寧夏中寧產(chǎn)優(yōu)質(zhì)夏果；2)干燥；將分離后的枸杞果進(jìn)行熱風(fēng)干燥脫水，干燥后的枸杞水分5％；3)粉碎、分離：將干燥后的枸杞果經(jīng)粗顆粒粉碎機(jī)破碎，然后經(jīng)三級篩分離出果肉粉和枸杞籽；4)萃?。簩⒐夥圻^20目篩后進(jìn)行超臨界CO2萃取；所述流體萃取壓力為28MPa，萃取溫度為55℃，萃取時間為3h；5)浸泡：將萃取后的果肉粉放入提取罐，然后加入純水進(jìn)行浸泡，浸泡時間為6h，浸提溫度為60℃；所述純水用量為果肉粉10倍；6)酶解、離心：將浸泡好的果肉粉降溫至45℃，加入酶進(jìn)行保溫2小時，再進(jìn)行離心分離，分離后的濾液和濾渣分別收集；所述酶的加入量為果肉粉質(zhì)量的1.5％；所述酶由果膠酶和纖維素酶按質(zhì)量比1：1組成；所述離心機(jī)內(nèi)襯有300目的濾布；7)脫鹽：將分離后的濾液用電滲析進(jìn)行脫鹽，脫鹽率91％；8)超濾、濃縮將脫鹽后的汁液分別經(jīng)過20萬、10萬、3萬、1萬分子量的超濾膜，再將10萬以下，1萬以上得到的超濾液進(jìn)行反滲透濃縮；所述超濾膜采用聚砜膜，膜的截留分子量為1-20萬道爾頓，過濾壓力為0.1MPa。9)干燥、粉碎及包裝將濃縮濾液進(jìn)行冷凍升華干燥、低溫粉碎，經(jīng)包裝后即為成品枸杞多糖。實(shí)驗例4工藝條件的優(yōu)化確定(1)過濾方法對多糖含量的影響分別用80目、100目、150目、250目、350目過濾布自然過濾及離心分離方法過濾，所得濾液中多糖含量如表1所示：表1不同過濾方法與多糖含量由上述表中結(jié)果可知：采用80目、100目、150目、250目、350目過濾布自然過濾的殘渣中含有多量水分和少量多糖，超濾液中多糖含量稍低；采用離心分離法過濾，超濾液中多糖含量較高；當(dāng)枸杞果肉粉中枸杞多糖含量達(dá)到5.4％時，經(jīng)離心分離、超濾處理后枸杞多糖得率為65-82％。(2)PS、PAN、PVDF、CMPS超濾效果比較選擇截留分子量為4萬的PS、PAN、PVDF膜和截留分子量為5萬CMPS膜，100kg料液超濾1h，測定超濾前和超濾后可溶性固性物含量，結(jié)果見表2。表2超濾效果比較由上述結(jié)果可知：采用PS膜進(jìn)行超濾后的濾液中可溶性固性物含量低于其他膜，可見PS膜的超濾效果優(yōu)于其他膜。(3)膜的衰減量的測定用4萬膜處理的多糖液，可溶性固形物含量為8％，用2萬膜進(jìn)行處理，工作壓力為0.1Mpa，測定PS、PAN、PVDF的衰減量，結(jié)果由圖2所示，PS膜穩(wěn)定性強(qiáng)、衰減較漫，PVDF膜衰減較快，實(shí)驗中我們較多的使用了PS膜。(4)膜材料性能恢復(fù)的測試選擇截留分子量為10萬的PS、PAN、PVDF和CMPS膜，采用以下清洗過程：自來水循環(huán)15-20min→0.2％的H2O2循環(huán)20-30min→自來水循環(huán)20-30min→純水循環(huán)10-15min→使用，對比清洗效果，結(jié)果見表3。表3清洗效果由表3結(jié)果可知，PS膜的穩(wěn)定性強(qiáng)，通透率恢復(fù)最好，抗污能力最強(qiáng)。當(dāng)前第1頁1 2 3