本發(fā)明屬于水產(chǎn)品深加工領(lǐng)域，特別涉及一種貽貝多糖的工業(yè)化提取方法。
背景技術(shù)：
貽貝(Mytilus sp.)屬于雙殼類的一種貝類，是海洋貝類養(yǎng)殖中的重要種類，又名海紅，俗稱“海中雞蛋”，味道鮮味，營養(yǎng)豐富。由于貽貝產(chǎn)量大，收獲后不易保存，歷來多煮熟后加工成干品——淡菜。淡菜營養(yǎng)價值很高，并有一定的藥用價值，在《本草綱目》、《本草拾遺》及《日華子本草》中均有記載?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，貽貝具有提高免疫力、抗腫瘤、清除氧自由基、抗動脈粥樣硬化、降血脂、抑制血栓的形成、改善心肌供氧及保護實驗性心肌缺血、改善微循環(huán)和降血壓等功效。其體內(nèi)的多糖成分在貽貝的藥用功效中起重要作用，貽貝多糖具有提高免疫力、抗腫瘤、降血脂、預(yù)防心腦血管疾病等多種功效，因此貽貝多糖在藥品和保健品領(lǐng)域具有巨大的市場前景。
現(xiàn)有貽貝多糖提取工藝多以新鮮貽貝為材料，經(jīng)勻漿或干燥粉碎后進行多糖提取，在多糖純化過程中大量應(yīng)用離心、萃取、冷凍干燥等操作，大量使用氯仿、正丁醇等毒性較大的有機試劑。具有原料易腐爛變質(zhì)、操作復(fù)雜、多糖收率低、能耗高、污染重等缺陷，不適于工業(yè)化放大。因此迫切需要對現(xiàn)有工藝進行改進，開發(fā)綠色高效的貽貝多糖提取方法。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為了克服上述不足，本發(fā)明提供一種貽貝多糖的工業(yè)化提取方法。采用凍煮貽貝干作為多糖提取材料，利用凍煮貽貝干可長期存放的優(yōu)點，有效解決了鮮貽貝不易存放導(dǎo)致的貽貝多糖無法量產(chǎn)的問題。同時，凍煮貽貝干在加工過程可大量除去貽貝肉中的脂肪成分，在貽貝多糖提取過程中不需要再去除脂肪，簡化了處理流程。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種貽貝多糖的工業(yè)化提取方法，包括：
將預(yù)處理后的凍煮貽貝干粉末高溫浸提、除渣，得多糖提取液；
將多糖提取液酶解、過濾Ⅰ、沉淀，得多糖沉淀；
將多糖沉淀脫水、過濾Ⅱ、干燥，即得。
本發(fā)明所述“高溫”是指：處理溫度為80～100℃。
現(xiàn)有的貽貝多糖實驗室提取方法浸提溫度一般為30～60℃，浸提時間10～30h，不適合工業(yè)化應(yīng)用。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)：80～100℃條件下提取貽貝多糖收率高、時間短(1-5h)，且貽貝多糖未發(fā)生降解。同時，高溫浸提可使大部分蛋白質(zhì)變性沉淀，簡化了后續(xù)除蛋白步驟。
優(yōu)選的，所述預(yù)處理的步驟為：用粉碎機對凍煮貽貝干進行粉碎，粉碎機篩網(wǎng)為20～40目。
優(yōu)選的，所述高溫浸提的條件為80～100℃下提取1～5小時。
優(yōu)選的，所述酶解處理采用堿性蛋白酶。為除蛋白，常規(guī)的貽貝多糖提取方法采用sevage法(氯仿/正丁醇＝5:1)或蛋白酶水解與sevage法聯(lián)用，所選蛋白酶包括胰蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶等等。本發(fā)明對比了貽貝多糖提取過程中不同蛋白酶除蛋白的效果，選擇不同廠家不同種類的蛋白酶進行實驗，發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶和堿性蛋白酶均可以單獨完全除去蛋白，其他蛋白酶除蛋白效果較差。胰蛋白酶雖然可以完全除去蛋白，但對多糖收率有影響，會使多糖收率降低50％以上。堿性蛋白酶不僅可完全除去蛋白，而且對多糖收率沒有影響。同時，由于前期的高溫浸提過程中大部分蛋白已變性沉淀，因此堿性蛋白酶可以完全除去蛋白，所以本發(fā)明中除蛋白僅采用酶解的方法，而不需要再加入sevage法這種使用有機溶劑的步驟，避免了氯仿等有機試劑的使用，不僅降低了成本，而且工藝更加綠色環(huán)保。
更優(yōu)選的，所述堿性蛋白酶的加入量為多糖提取液質(zhì)量的0.05％～0.5％。當(dāng)堿性蛋白酶的加入量小于0.05％時，蛋白質(zhì)的去除不完全，多糖純度下降；當(dāng)堿性蛋白酶的加入量大于0.5％時，多糖純度不變，硅藻土用量顯著增加。
優(yōu)選的，所述過濾Ⅰ處理的具體步驟為：以硅藻土為助濾劑，用板框過濾對酶解液進行過濾。
常規(guī)的貽貝多糖提取方法中固液分離普遍采用高速離心的方法，離心機尤其是高速離心機設(shè)備昂貴，樣品處理量小，工業(yè)上的固液分離多采用易于放大，成本低的過濾方法。因此，本發(fā)明中優(yōu)選的固液分離有3處，第一為除渣步驟，這一步的作用是除去貽貝肉蒸煮后剩余的肉渣(肉渣中主要成分為蛋白質(zhì))，若不去除將會影響后續(xù)的除蛋白效果，由于肉渣較大，采用孔徑較大的篩網(wǎng)便可以將肉渣濾出。第二為酶解除蛋白后，從貽貝干粉末蒸煮到除蛋白中間只除去了大塊的肉渣，提取液仍是渾濁的，其中包含貽貝肉中存在的細沙、灰塵、少量脂類、變性蛋白等多種不溶性雜質(zhì)。這一步驟要除去所有不溶性物質(zhì)，因此選用板框過濾，用顆粒較細的硅藻土作為助濾劑，可得到澄清的多糖提取液。第三為多糖沉淀后過濾，乙醇沉淀多糖后要將多糖沉淀分離出來，這一步驟需要選取合適孔徑的篩網(wǎng)或濾膜，孔徑太小的話過濾速度慢，孔徑太大則多糖沉淀能通過，經(jīng)試驗選擇400目篩網(wǎng)進行多糖沉淀過濾。
更優(yōu)選的，所述硅藻土用量為1～4公斤/平方米。
優(yōu)選的，所述沉淀處理為乙醇沉淀法。
本發(fā)明還提供了一種較優(yōu)的貽貝多糖的工業(yè)化提取方法，步驟如下：
(1)原料處理：以凍煮貽貝干為原料，粉碎機粉碎，過20～40目篩，得貽貝干粉；
(2)多糖提?。簩⒉襟E(1)制得的貽貝干粉投入提取罐中，加入4～10倍體積的水，在80～100℃提取1～5小時，攪拌槳轉(zhuǎn)速20～100轉(zhuǎn)/分鐘；
(3)除渣：用50～100目篩網(wǎng)分離貽貝肉渣與多糖提取液；
(4)酶解：將步驟(3)制得的多糖提取液用HCl調(diào)pH至8.0，加入質(zhì)量比為0.05％～0.5％的堿性蛋白酶，50℃酶解0.5～3小時，酶解完成后在80～100℃條件下滅活10～20分鐘，得酶解液；
(5)過濾：以硅藻土為助濾劑，用板框過濾對步驟(4)制得的酶解液進行過濾，得到澄清的多糖溶液；
(6)乙醇沉淀：在步驟(5)制得的多糖溶液中加入1.5～3倍體積質(zhì)量分數(shù)為90％～95％的酒精進行多糖沉淀，靜置3～10小時，抽出上清液，得到多糖沉淀；
(7)脫水：在步驟(6)制得的多糖沉淀中加入1倍體積質(zhì)量分數(shù)為90％～95％的酒精對多糖沉淀進行脫水；
(8)過濾干燥：用400目篩網(wǎng)對脫水后的多糖沉淀進行過濾，收集沉淀，60℃真空干燥，得到白色貽貝多糖成品。
其中，上述步驟(1)中的凍煮貽貝干又稱“淡菜干”，為鮮貽貝經(jīng)蒸煮、冷卻、去殼、漂洗、干燥等步驟加工而成的貽貝干品。
上述步驟(5)中的硅藻土用量為1～4公斤/平方米。
以上操作步驟、實驗條件及試劑如無特別說明，均采用本領(lǐng)域常規(guī)操作和常用試劑。
本發(fā)明還提供了任一上述的方法制備的貽貝多糖，采用上述方法生產(chǎn)貽貝多糖，其產(chǎn)量可達10噸/年以上。
本發(fā)明還提供了上述制備的貽貝多糖在制備調(diào)血脂藥物或食品中的應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果
1)本發(fā)明所述方法選用凍煮貽貝干為原料，凍煮貽貝干為干品，可長期存放，能有效解決鮮貽貝不易存放的問題。同時，凍煮貽貝干的加工過程可大量除去貽貝肉中的脂肪成分，在貽貝多糖提取過程中不需要再去除脂肪；
2)采用高溫提取多糖，可有效提高多糖得率，縮短提取時間，同時高溫使蛋白質(zhì)變性，可簡化蛋白去除步驟；
3)采用堿性蛋白酶水解蛋白，避免了氯仿等有機試劑的使用，不僅降低了成本，而且工藝更加綠色環(huán)保；
4)采用篩網(wǎng)過濾和板框過濾代替離心，使工藝更適于工業(yè)化放大。
5)本發(fā)明制備方法簡單、多糖收率高、實用性強，易于推廣。
附圖說明
圖1：利用本發(fā)明所述方法制備的貽貝多糖。
具體實施方式
以下通過實施例對本發(fā)明特征及其它相關(guān)特征作進一步詳細說明，以便于同行業(yè)技術(shù)人員的理解：
實施例1：厚殼貽貝多糖工業(yè)化提取
貽貝多糖提取：
(1)原料處理：以浙江省嵊泗縣產(chǎn)凍煮厚殼貽貝干為原料，粉碎機粉碎，過20目篩，得貽貝干粉；
(2)多糖提?。簩⒉襟E(1)制得的貽貝干粉投入提取罐中，加入6倍體積的水，在100℃提取2小時，攪拌槳轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分鐘；
(3)除渣：用50目篩網(wǎng)分離貽貝肉渣與多糖提取液；
(4)酶解：將步驟(3)制得的多糖提取液用NaOH調(diào)pH至8.0，加入質(zhì)量比為0.2％的堿性蛋白酶，50℃酶解2小時，酶解完成后在80℃條件下滅活15分鐘，得酶解液；
(5)過濾：以硅藻土為助濾劑，用板框過濾對步驟(4)制得的酶解液進行過濾，得到澄清的多糖溶液，硅藻土用量為2公斤/平方米；
(6)乙醇沉淀：在步驟(5)制得的多糖溶液中加入1.5倍體積質(zhì)量分數(shù)為93％的酒精進行多糖沉淀，靜置6小時，抽出上清液，得到多糖沉淀；
(7)脫水：在步驟(6)制得的多糖沉淀中加入1倍體積質(zhì)量分數(shù)為93％的酒精對多糖沉淀進行脫水；
(8)過濾干燥：用400目篩網(wǎng)對脫水后的多糖沉淀進行過濾，收集沉淀，60℃真空干燥，得到白色貽貝多糖成品(附圖1)，多糖得率12.4％，經(jīng)苯酚-硫酸法測定貽貝多糖含量為92％。
貽貝多糖調(diào)血脂實驗
選雄性Wistar大鼠60只(由山東魯抗醫(yī)藥集團有限公司提供，合格證號SCXK魯20130001)，體重180±20g，隨機分為5組，分別為空白組，模型組，高劑量組(400mg/kg)，中劑量組(200mg/kg)和低劑量組(100mg/kg)。全部大鼠喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料觀察1周，禁食12h后稱重，眼內(nèi)眥取血，室溫25℃靜置1h，3000rpm離心10min，取血清，用自動生化分析儀測定TC，TG，HDL-C和LDL-C水平。空白組始終基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，其余各組大鼠均用高脂飼料喂養(yǎng)(高脂飼料購于北京科澳協(xié)力飼料有限公司)，2周后眼內(nèi)眥取血(取血前禁食12h)，測定血清TC(總膽固醇)，TG(甘油三酯)，HDL-C(高密度脂蛋白膽固醇)和LDL-C(低密度脂蛋白膽固醇)水平，用高脂飼料喂養(yǎng)2周后各組大鼠血清總膽固醇水平和甘油三酯水平與空白組比較有顯著性差異(p<0.05)，表明脂代謝紊亂模型成功建立。
脂代謝紊亂模型建立成功后，空白組與模型組每日灌胃蒸餾水1mL，貽貝多糖高、中、低劑量組分別按照相應(yīng)的劑量每天灌胃給藥1次，連續(xù)6周。給藥6周后大鼠隔夜禁食12h，眼內(nèi)眥取血，測定血清TC，TG，HDL-C和LDL-C水平。
檢測結(jié)果均以表示，采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計，并進行組間差異性分析。
與模型組相比，貽貝多糖高、中、低劑量組給藥6周后均能降低大鼠血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇水平，且呈劑量相關(guān)性，劑量越高，降低程度越顯著，各劑量組對高密度脂蛋白膽固醇水平無明顯作用(表1)。其中，高、中劑量組能顯著降低大鼠血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇水平(p<0.05)；低劑量組能顯著降低大鼠血清中甘油三酯水平(p<0.05)。貽貝多糖能使脂代謝紊亂大鼠的總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇水平明顯降低，表明貽貝粗多糖有一定的調(diào)血脂功能。
表1 各組大鼠血清中血脂水平測定結(jié)果(n＝8-10)
*與空白組比較p<0.05,#與模型組比較p<0.05
實施例2：
(1)原料處理：以浙江省嵊泗縣產(chǎn)凍煮紫貽貝干為原料，粉碎機粉碎，過20目篩，得貽貝干粉；
(2)多糖提?。簩⒉襟E(1)制得的貽貝干粉投入提取罐中，加入6倍體積的水，在100℃提取2小時，攪拌槳轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分鐘；
(3)除渣：用50目篩網(wǎng)分離貽貝肉渣與多糖提取液；
(4)酶解：將步驟(3)制得的多糖提取液用HCl調(diào)pH至8.0，加入質(zhì)量比為0.2％的堿性蛋白酶，50℃酶解2小時，酶解完成后在80℃條件下滅活15分鐘，得酶解液；
(5)過濾：以硅藻土為助濾劑，用板框過濾對步驟(4)制得的酶解液進行過濾，得到澄清的多糖溶液，硅藻土用量為2公斤/平方米；
(6)乙醇沉淀：在步驟(5)制得的多糖溶液中加入1.5倍體積質(zhì)量分數(shù)為93％的酒精進行多糖沉淀，靜置6小時，抽出上清液，得到多糖沉淀；
(7)脫水：在步驟(6)制得的多糖沉淀中加入1倍體積質(zhì)量分數(shù)為93％的酒精對多糖沉淀進行脫水；
(8)過濾干燥：用400目篩網(wǎng)對脫水后的多糖沉淀進行過濾，收集沉淀，60℃真空干燥，得到白色貽貝多糖成品，多糖得率9.4％，經(jīng)苯酚-硫酸法測定貽貝多糖含量為87％。
實施例3：
(1)原料處理：以浙江省嵊泗縣產(chǎn)凍煮紫貽貝干為原料，粉碎機粉碎，過40目篩，得貽貝干粉；
(2)多糖提取：將步驟(1)制得的貽貝干粉投入提取罐中，加入5倍體積的水，在90℃提取4小時，攪拌槳轉(zhuǎn)速30轉(zhuǎn)/分鐘；
(3)除渣：用80目篩網(wǎng)分離貽貝肉渣與多糖提取液；
(4)酶解：將步驟(3)制得的多糖提取液用HCl調(diào)pH至8.0，加入質(zhì)量比為0.1％的堿性蛋白酶，50℃酶解3小時，酶解完成后在80℃條件下滅活20分鐘，得酶解液；
(5)過濾：以硅藻土為助濾劑，用板框過濾對步驟(4)制得的酶解液進行過濾，得到澄清的多糖溶液，硅藻土用量為3公斤/平方米；
(6)乙醇沉淀：在步驟(5)制得的多糖溶液中加入2倍體積質(zhì)量分數(shù)為90％的酒精進行多糖沉淀，靜置8小時，抽出上清液，得到多糖沉淀；
(7)脫水：在步驟(6)制得的多糖沉淀中加入1倍體積質(zhì)量分數(shù)為90％的酒精對多糖沉淀進行脫水；
(8)過濾干燥：用400目篩網(wǎng)對脫水后的多糖沉淀進行過濾，收集沉淀，60℃真空干燥，得到白色貽貝多糖成品，多糖得率10.1％，經(jīng)苯酚-硫酸法測定貽貝多糖含量為84％。
實施例4：
(1)原料處理：以浙江省嵊泗縣產(chǎn)凍煮紫貽貝干為原料，粉碎機粉碎，過40目篩，得貽貝干粉；
(2)多糖提?。簩⒉襟E(1)制得的貽貝干粉投入提取罐中，加入8倍體積的水，在100℃提取2小時，攪拌槳轉(zhuǎn)速100轉(zhuǎn)/分鐘；
(3)除渣：用50目篩網(wǎng)分離貽貝肉渣與多糖提取液；
(4)酶解：將步驟(3)制得的多糖提取液用HCl調(diào)pH至8.0，加入質(zhì)量比為0.2％的堿性蛋白酶，50℃酶解2小時，酶解完成后在80℃條件下滅活15分鐘，得酶解液；
(5)過濾：以硅藻土為助濾劑，用板框過濾對步驟(4)制得的酶解液進行過濾，得到澄清的多糖溶液，硅藻土用量為1公斤/平方米；
(6)乙醇沉淀：在步驟(5)制得的多糖溶液中加入1.5倍體積質(zhì)量分數(shù)為95％的酒精進行多糖沉淀，靜置6小時，抽出上清液，得到多糖沉淀；
(7)脫水：在步驟(6)制得的多糖沉淀中加入1倍體積質(zhì)量分數(shù)為95％的酒精對多糖沉淀進行脫水；
(8)過濾干燥：用400目篩網(wǎng)對脫水后的多糖沉淀進行過濾，收集沉淀，60℃真空干燥，得到白色貽貝多糖成品，多糖得率9.2％，經(jīng)苯酚-硫酸法測定貽貝多糖含量為89％。
實施例5：
(1)原料處理：以山東省煙臺市產(chǎn)凍煮紫貽貝干為原料，粉碎機粉碎，過20目篩，得貽貝干粉；
(2)多糖提?。簩⒉襟E(1)制得的貽貝干粉投入提取罐中，加入10倍體積的水，在100℃提取5小時，攪拌槳轉(zhuǎn)速20轉(zhuǎn)/分鐘；
(3)除渣：用50目篩網(wǎng)分離貽貝肉渣與多糖提取液；
(4)酶解：將步驟(3)制得的多糖提取液用HCl調(diào)pH至8.0，加入質(zhì)量比為0.05％的堿性蛋白酶，50℃酶解3小時，酶解完成后在80℃條件下滅活10分鐘，得酶解液；
(5)過濾：以硅藻土為助濾劑，用板框過濾對步驟(4)制得的酶解液進行過濾，得到澄清的多糖溶液，硅藻土用量為4公斤/平方米；
(6)乙醇沉淀：在步驟(5)制得的多糖溶液中加入1.5倍體積質(zhì)量分數(shù)為92％的酒精進行多糖沉淀，靜置6小時，抽出上清液，得到多糖沉淀；
(7)脫水：在步驟(6)制得的多糖沉淀中加入1倍體積質(zhì)量分數(shù)為92％的酒精對多糖沉淀進行脫水；
(8)過濾干燥：用400目篩網(wǎng)對脫水后的多糖沉淀進行過濾，收集沉淀，60℃真空干燥，得到白色貽貝多糖成品，多糖得率8.5％，經(jīng)苯酚-硫酸法測定貽貝多糖含量為82％。
實施例6：
(1)原料處理：以江蘇省連云港市產(chǎn)凍煮厚殼貽貝干為原料，粉碎機粉碎，過40目篩，得貽貝干粉；
(2)多糖提?。簩⒉襟E(1)制得的貽貝干粉投入提取罐中，加入4倍體積的水，在100℃提取2小時，攪拌槳轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分鐘；
(3)除渣：用80目篩網(wǎng)分離貽貝肉渣與多糖提取液；
(4)酶解：將步驟(3)制得的多糖提取液用HCl調(diào)pH至8.0，加入質(zhì)量比為0.5％的堿性蛋白酶，50℃酶解1小時，酶解完成后在80℃條件下滅活20分鐘，得酶解液；
(5)過濾：以硅藻土為助濾劑，用板框過濾對步驟(4)制得的酶解液進行過濾，得到澄清的多糖溶液，硅藻土用量為3公斤/平方米；
(6)乙醇沉淀：在步驟(5)制得的多糖溶液中加入1.5倍體積質(zhì)量分數(shù)為93％的酒精進行多糖沉淀，靜置6小時，抽出上清液，得到多糖沉淀；
(7)脫水：在步驟(6)制得的多糖沉淀中加入1倍體積質(zhì)量分數(shù)為93％的酒精對多糖沉淀進行脫水；
(8)過濾干燥：用400目篩網(wǎng)對脫水后的多糖沉淀進行過濾，收集沉淀，60℃真空干燥，得到白色貽貝多糖成品，多糖得率7.9％，經(jīng)苯酚-硫酸法測定貽貝多糖含量為86％。
對比例1：厚殼貽貝多糖常規(guī)方法提取(1)原料處理：以浙江省嵊泗縣產(chǎn)鮮厚殼貽貝為原料，洗凈后去殼、勻漿、脫脂，5000rpm離心10分鐘，取沉淀備用；
(2)多糖提?。簩⒉襟E(1)制得的沉淀投入提取罐中，加入6倍體積的水，在60℃提取10小時，攪拌槳轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分鐘，得多糖提取液；
(3)酶解：將步驟(2)制得的多糖提取液用NaOH調(diào)pH至8.0，加入質(zhì)量比為0.2％的堿性蛋白酶，50℃酶解2小時，酶解完成后在80℃條件下滅活15分鐘，得酶解液
(4)離心：步驟(3)制得的酶解液12000rpm離心15分鐘，棄沉淀，取上清液；
(5)除蛋白：采用sevage法脫蛋白，在步驟(3)得到的上清液中加入1/2體積的氯仿/異戊醇(5:1，v/v)，劇烈震蕩20分鐘，12000rpm離心10分鐘，取上層水相。該步驟重復(fù)2-5次至水相-有機相交界處無變性蛋白質(zhì)為止，得到多糖溶液；
(6)乙醇沉淀：在步驟(5)制得的多糖溶液中加入4倍體積質(zhì)量分數(shù)為95％的酒精進行多糖沉淀，靜置6小時，抽出上清液，得到多糖沉淀；
(7)脫水：在步驟(6)制得的多糖沉淀中加入1倍體積質(zhì)量分數(shù)為95％的酒精對多糖沉淀進行脫水，12000rpm離心10分鐘，收集沉淀；
(8)干燥：步驟(7)制得的多糖沉淀經(jīng)60℃真空干燥，得到白色貽貝多糖成品，多糖得率4.5％，經(jīng)苯酚-硫酸法測定貽貝多糖含量為72％。
最后應(yīng)該說明的是，以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對前述實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分進行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。上述雖然對本發(fā)明的具體實施方式進行了描述，但并非對本發(fā)明保護范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性勞動即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護范圍以內(nèi)。