1.一種用于培養(yǎng)心肌祖細(xì)胞的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒內(nèi)設(shè)有若干試劑瓶,若干所述試劑瓶內(nèi)分別盛裝有培養(yǎng)液I、培養(yǎng)液II、生長因子I、生長因子II、生長因子III、生長因子IV、消化液、清洗液、凍存液和細(xì)胞種子,所述凍存液主要是將DMEM/F12干粉培養(yǎng)基、人血白蛋白、果聚糖、大車前苷、苦杏仁甙用注射用水溶解而成,每L所述注射用水溶解所述DMEM/F12干粉培養(yǎng)基30-50g、所述人血白蛋白10-20g、所述果聚糖1-3g、所述大車前苷0.2-0.5g、所述苦杏仁甙0.05-0.08g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述凍存液中還含有海藻酸丙二醇酯、甘氨酸鈉和葡萄糖酸內(nèi)酯,每L所述注射用水溶解所述海藻酸丙二醇酯0.6-1.3g、所述甘氨酸鈉0.4-0.8g、所述葡萄糖酸內(nèi)酯0.1-0.3g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述凍存液中還含有二硫代甘醇酸和甲酸鈉,每L所述注射用水溶解所述二硫代甘醇酸0.3-0.5g、所述甲酸鈉0.08-0.2g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑瓶內(nèi)還盛裝有培養(yǎng)基添加劑,所述培養(yǎng)基添加劑包括如下重量份數(shù)的各成分:
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒,其特征在于,所述培養(yǎng)基添加劑中還包括如下重量份數(shù)的各成分:
葛根素 0.5-1
維生素E 0.2-0.6。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒,其特征在于,所述培養(yǎng)基添加劑中還包括如下重量份數(shù)的各成分:
酒石酸鉀鈉 0.8-1
聚乙烯醇 0.1-0.3。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒,其特征在于,所述培養(yǎng)基添加劑中還包括如下重量份數(shù)的各成分:
谷胱甘肽 0.3-0.7
對羥基苯甲酸甲酯 0.1-0.2。
8.一種培養(yǎng)心肌祖細(xì)胞的方法,其特征在于:所述方法包括如下步驟:
S1.將培養(yǎng)液I、培養(yǎng)液II、生長因子I、生長因子II、生長因子III、生長因子IV按照重量份數(shù)比為3:3:1:1:1:1的比例混合均勻,配置成為完全培養(yǎng)基放置在4℃的冰箱中保存;
S2.將細(xì)胞種子加入清洗液中,在4℃、1000rpm的條件下離心5min,然后收集細(xì)胞加入完全培養(yǎng)基重懸,再按照1-2×106個(gè)/ml的密度接種在培養(yǎng)瓶中,在37℃、5%C02的環(huán)境中,用標(biāo)準(zhǔn)的孵化器孵化細(xì)胞;
S3.當(dāng)細(xì)胞生長面積達(dá)到85-95%時(shí),先用清洗液清洗2次,然后加入5%的消化液,適當(dāng)震蕩搖晃培養(yǎng)瓶,使消化液與細(xì)胞充分接觸,再放入培養(yǎng)箱中消化1-2min,最后加入預(yù)熱至37℃的完全培養(yǎng)基終止消化,然后將獲得的細(xì)胞按照1:3的比例傳代;
S4.重復(fù)S3步驟1次,然后在4℃、1000rpm的條件下離心5min,重復(fù)離心2遍,然后收集細(xì)胞放入凍存液中進(jìn)行凍存,凍存密度為1-2×107個(gè)/ml凍存液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,用標(biāo)準(zhǔn)的孵化器孵化細(xì)胞的過程中,如果經(jīng)過24h的培養(yǎng),細(xì)胞生長面積未達(dá)到50%,則更換1次完全培養(yǎng)基。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,所述細(xì)胞種子的制備包括:從流產(chǎn)胚胎上采取心臟組織,倒入清洗液清洗后用眼科剪剪成1-2mm3大小的組織碎塊;將組織碎塊加入含1%膠原酶I型的PBS緩沖液中,水浴震蕩,每3min震蕩一次,震蕩5次后加入完全培養(yǎng)基終止分解;然后進(jìn)行反復(fù)吹打,混勻細(xì)胞漿,用300目的細(xì)胞篩過濾后收集懸液;將懸液離心后棄去上清液,即可獲得細(xì)胞種子。