本發(fā)明涉及PGB基因變體在增加宮頸癌藥物敏感度中的應(yīng)用，屬于基因工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康的高發(fā)病率和高致死率疾病。例如，膠質(zhì)瘤(glioma)是由神經(jīng)外胚層分化而來的膠質(zhì)細(xì)胞(星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和室管膜等)引發(fā)的腫瘤，在顱內(nèi)腫瘤中發(fā)病率位列第一，而且，因其呈浸潤性無限制增生、與正常腦組織無明顯界限并富含血管，還具有高復(fù)發(fā)率和低治愈率。

目前對惡性腫瘤的治療，主要采用手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療等相結(jié)合的綜合治療方式。盡管隨著細(xì)胞毒性藥物、分子靶向治療藥物、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、腫瘤血管生成抑制劑等的迅猛發(fā)展，部分惡性腫瘤已能通過化學(xué)治療治愈，但由于腫瘤耐藥以及抗腫瘤藥物本身毒副作用較大導(dǎo)致最大給藥濃度較低等問題，化學(xué)治療的療效至今仍難以令人滿意。其中，腫瘤耐藥是目前化學(xué)治療的主要障礙，也是困擾腫瘤臨床治療的關(guān)鍵性難題。因此，研究腫瘤耐藥的產(chǎn)生與調(diào)控機制、發(fā)展新的耐藥增敏劑是增強化療藥物療效、提高腫瘤患者生命質(zhì)量的重要策略。

白菜花粉壁發(fā)育相關(guān)基因PGB2是一種植物基因，已被現(xiàn)有技術(shù)公開(2008100605812)，但是現(xiàn)有技術(shù)僅僅公開了其與白菜花粉壁發(fā)育相關(guān)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)定點突變后的PGB基因可極大增強人或動物細(xì)胞對化療藥物的敏感性，其能夠用于制備腫瘤細(xì)胞化療增敏藥物，從而增強腫瘤的臨床治療效果、提高腫瘤患者的生命質(zhì)量。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

本發(fā)明通過高寬容PCR以及定點突變技術(shù)，獲得PGB基因突變庫，通過評估其在惡性腫瘤中的效果，發(fā)現(xiàn)一個PGB基因變體，可極大增強人或動物細(xì)胞對化療藥物的敏感性，尤其是對宮頸癌細(xì)胞有十分顯著的效果。

一種PGB基因，具核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述PGB基因在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明通過實驗證明，將PGB基因的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到人肝癌細(xì)胞HepG2、人肺癌細(xì)胞A549后，所述癌細(xì)胞的生長受到抑制，與對照相比，生長速度有明顯降低，同時，對化療藥物順鉑的敏感性大大增強，在較低的化療藥物濃度下(0.2μg/ml)就可達(dá)到癌細(xì)胞生長受抑制的效果。

所述PGB基因的重組表達(dá)載體，是將PGB突變基因可操作地連于載體的表達(dá)調(diào)控序列獲得。

所述載體可選用本領(lǐng)域已知的各種載體，如病毒載體(逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、單純皰疹病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體)、非病毒載體(質(zhì)粒、陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物)、細(xì)菌載體(大腸桿菌Escherichia coli，沙門氏菌Salmonella，耶爾森氏菌Yersinia，志賀菌Shigella，李氏桿菌Listeria等)，通常選用pcDNA3、pLNCX、pCMV、pEGFP、pSG5、pSV2中的一種。

所述的“可操作地連于”表示如下情況：即線性DNA序列的某些部分能夠影響同一線性DNA序列其他部分的活性。例如，如果信號肽DNA作為前體表達(dá)并參與多肽的分泌，那么信號肽(分泌前導(dǎo)序列)DNA就是可操作地連于多肽DNA；如果啟動子控制序列的轉(zhuǎn)錄，那么它是可操作地連于編碼序列；如果核糖體結(jié)合位點被置于能使其翻譯的位置時，那么它是可操作地連于編碼序列。一般，“可操作地連于”意味著相鄰，而對于分泌前導(dǎo)序列則意味著在閱讀框中相鄰。

本發(fā)明的有益之處在于：

本發(fā)明首次公開了PGB基因可以用于制備腫瘤細(xì)胞化療增敏藥物，有助于提高癌細(xì)胞對極低濃度的化療藥物順鉑的敏感性，增強化療藥物的療效，提高腫瘤患者的生命質(zhì)量，在腫瘤治療領(lǐng)域具有潛在、良好的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1是轉(zhuǎn)染子HepG2-PGB及其對照細(xì)胞在37℃下48hr時的生長情況示意圖。

圖2是轉(zhuǎn)染子HepG2-PGB及其對照細(xì)胞在37℃下的生長曲線，其中，A圖為無順鉑條件下的生長曲線；B圖為0.2μg/ml順鉑條件下的生長曲線。

圖3是轉(zhuǎn)染子A549-PGB及其對照細(xì)胞在37℃下48hr時的生長情況示意圖。

圖4是轉(zhuǎn)染子A549-PGB及其對照細(xì)胞在37℃下的生長曲線，其中，A圖為無順鉑條件下的生長曲線；B圖為0.2μg/ml順鉑條件下的生長曲線。

圖5是轉(zhuǎn)染子HepG2-PGB及其對照細(xì)胞在37℃下的生長情況示意圖。

具體實施方式

下述實施例中，凡未注明具體實驗條件的，均為按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)條件，例如Sambrook，Russell的分子克?。簩嶒炇沂謨?New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。

下述實施例中，人肝癌細(xì)胞HepG2，人肺癌細(xì)胞A549均購自美國模式培養(yǎng)物集存庫(ATCC)。所有試劑均為時購獲得。

實施例1獲得變體：

通過高寬容PCR，獲得PGB基因突變庫，通過評估其在惡性腫瘤中的效果，發(fā)現(xiàn)一個PGB基因變體，可極大增強人或動物細(xì)胞對化療藥物的敏感性。

一種PGB基因變體，具核苷酸序列如下所示：

實施例2構(gòu)建真核表達(dá)載體：

pcDNA.1(+)-Myc為在pcDNA 3.1(+)的NheI和HindIII位點之間插入了來自c-Myc的抗原決定族后構(gòu)建的質(zhì)粒，來自c-Myc的抗原決定族的序列見SEQ ID NO：2。

使用限制性內(nèi)切酶HindIII和EcoRI或其他內(nèi)切酶，消化純化后的PGB基因變體(根據(jù)內(nèi)切酶的酶切位點，可在兩側(cè)加入酶切位點，可用現(xiàn)有技術(shù)任意方法構(gòu)建重組載體)PCR擴增產(chǎn)物和真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Myc，消化產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳、凝膠照像、凝膠切割后，用凝膠純化試劑盒純化；純化后的PCR片段和pcDNA3.1(+)-Myc載體片段在T4連接酶作用下16℃連接時間過夜(連接位點HindIII和EcoRI)；之后將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌(E.coli)DH5α，將轉(zhuǎn)化細(xì)胞涂布于氨芐平板培養(yǎng)，挑取單菌落，進(jìn)行菌落PCR檢測；得到陽性菌落后，大量培養(yǎng)，提取質(zhì)粒，進(jìn)行載體測序檢驗。測序正確后，即得到真核重組表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Myc-PGB。

實施例3人宮頸癌細(xì)胞HeLa：

人宮頸癌細(xì)胞HeLa培養(yǎng)使用含有體積濃度10％的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，在37℃、體積濃度5％CO2及飽和濕度的條件下培養(yǎng)，常規(guī)傳代，實驗時取對數(shù)生長期細(xì)胞。

在24孔板的孔中按1×10⁵/孔的量接種細(xì)胞，將細(xì)胞用胰蛋白液消化、計數(shù)并鋪板；

培養(yǎng)24小時后，對于每孔細(xì)胞，制備轉(zhuǎn)染混合物：用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋2.0μl脂質(zhì)體Lipofectamine2000，室溫靜置5min；用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋0.8μg真核重組表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Myc-PGB；混合上述兩種溶液，室溫靜置30min，將得到的轉(zhuǎn)染混合物加入24孔板上的目標(biāo)孔，并依次按以下步驟操作：

(1)培養(yǎng)24小時后，1∶10傳代入新鮮培養(yǎng)基；

(2)在步驟(1)完成后培養(yǎng)24小時，然后往目標(biāo)孔中加入篩選抗生素G418至800μg/ml；

(3)在步驟(2)完成后加入篩選抗生素G418后培養(yǎng)4天，細(xì)胞開始大量死亡，僅剩零星細(xì)胞，換液，加G418至200μg/ml；

(4)在步驟(3)完成后培養(yǎng)7天，可見形成了細(xì)胞克隆，消化細(xì)胞，稀釋至2個細(xì)胞/200μl，在96孔板孔中接種稀釋的細(xì)胞，接種量為200μl/孔；

(5)在步驟(4)完成后培養(yǎng)8天，擴大培養(yǎng)規(guī)模，把96孔板中細(xì)胞接種到24孔板；

(6)在步驟(5)完成后培養(yǎng)5天，繼續(xù)擴大培養(yǎng)規(guī)模，把24孔板中細(xì)胞接種到6孔板；

(7)在步驟(6)完成后培養(yǎng)5天，收獲細(xì)胞，此即為穩(wěn)定表達(dá)PGB的細(xì)胞轉(zhuǎn)染子。

為進(jìn)行對照試驗，將未轉(zhuǎn)入PGB基因的真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Myc同樣以上述步驟穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞，獲得空載體對照細(xì)胞。

使用試劑RNAiso Plus提取穩(wěn)定表達(dá)PGB的細(xì)胞轉(zhuǎn)染子的RNA，提取步驟參見試劑RNAiso Plus的說明書。

RT-PCR采用兩步法，第一步為逆轉(zhuǎn)錄，第二步為PCR。

PCR擴增條件如下：

變性95℃35s，退火55℃35s，延伸70℃1min，30個循環(huán)。

將RT-PCR產(chǎn)物電泳照相，穩(wěn)定表達(dá)PGB的人宮頸癌細(xì)胞HeLa轉(zhuǎn)染子具有PGB和β-actin條帶，而人宮頸癌細(xì)胞HeLa對照和空載體對照僅有β-actin條帶，這說明轉(zhuǎn)染子HeLa-PGB構(gòu)建成功。

參照Bio-rad公司提供的Western Blotting操作程序進(jìn)行鑒定。轉(zhuǎn)染子HepG2-PGB具有PGB和β-actin條帶，而HepG2細(xì)胞對照和空載體對照僅有β-actin條帶，在翻譯水平上說明轉(zhuǎn)染子HepG2-PGB構(gòu)建成功。

細(xì)胞生長情況的測定

本發(fā)明選用MTT法檢測細(xì)胞生長，收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，向96孔板每孔加入100μl，將待測細(xì)胞密度調(diào)至約6000個/孔，將96孔板置于37℃、5％CO2條件下孵育24小時；加入5mg/ml的MTT試劑20μl/孔，將96孔板置于37℃、5％CO2條件下繼續(xù)孵育4小時；棄上清，加入DMSO 150μl/孔，至搖床上低速振蕩溶解藍(lán)色顆粒；選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔的光吸收值，記錄結(jié)果；連續(xù)測六天，以時間為橫坐標(biāo)、光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長曲線；對生長曲線添加趨勢線，得到擬合方程式和擬合度指標(biāo)R2，從擬合方程式中提取斜率；以每種類型細(xì)胞的斜率除以第一天的MTT數(shù)據(jù)，得到標(biāo)準(zhǔn)化生長速率。

轉(zhuǎn)染子人宮頸癌細(xì)胞HeLa-PGB的生長情況

選用MTT法測定了轉(zhuǎn)染子HeLa-PGB的生長情況及HepG2細(xì)胞對照、空載體對照的生長情況(測定方法如上所述)，測定結(jié)果見圖1。

從圖1可以看出，HeLa-PGB細(xì)胞對照，轉(zhuǎn)染子HepG2-PGB和空載體對照的A490nm的平均值(6孔平均)分別為：0.31，0.19，0.30。此結(jié)果表明，PGB穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞后，顯著抑制了該細(xì)胞生長。

轉(zhuǎn)染子HeLa-PGB對順鉑的敏感性檢測

順鉑是中心以二價鉑同兩個氯原子和兩個氨分子結(jié)合的重金屬絡(luò)合物，類似于雙功能烷化劑，可抑制DNA的復(fù)制過程。DDP細(xì)胞最敏感，高濃度時抑制RNA及蛋白質(zhì)合成。本品對乏氧細(xì)胞作用，進(jìn)入人體后可擴散通過帶電的細(xì)胞膜。目前認(rèn)為，DDP主要作用部位在DNA的嘌呤和嘧啶堿基。作用與用途：本品屬細(xì)胞周期非特異性藥物，具有細(xì)胞毒性，可抑制癌細(xì)胞的DNA復(fù)制過程，并損傷其細(xì)胞膜上結(jié)構(gòu)，有較強的廣譜抗癌作用。臨床用于卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、肺癌、鼻咽癌、食道癌、惡性淋巴瘤、頭頸部鱗癌、甲狀腺癌及成骨肉瘤等多種實體腫瘤均能顯示療效。

在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入0.2μg/ml順鉑，采用上述MTT法研究轉(zhuǎn)染子HeLa-PGB對順鉑的敏感性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PGB基因可增加HeLa細(xì)胞對順鉑的敏感性，實驗結(jié)果見圖2。圖2A為在37℃、無順鉑條件下，HeLa細(xì)胞對照、轉(zhuǎn)染子HeLa-PGB和空載體對照細(xì)胞的生長曲線。圖2B為在37℃、0.2μg/ml順鉑條件下，HeLa細(xì)胞對照、轉(zhuǎn)染子HeLa-PGB和空載體對照的生長曲線。

實驗結(jié)果表明，0.2μg/ml順鉑可顯著抑制轉(zhuǎn)染子HeLa-PGB的生長，而HepG2細(xì)胞對照和空載體對照的生長速率只有略微降低。以上結(jié)果說明PGB極大增加了HeLa細(xì)胞對順鉑的敏感性。

實施例4人肺癌細(xì)胞A549培養(yǎng)評估：

人肺癌細(xì)胞A549培養(yǎng)使用含有體積濃度10％的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，在37℃、體積濃度5％CO2及飽和濕度的條件下培養(yǎng)，常規(guī)傳代，實驗時取對數(shù)生長期細(xì)胞。

在24孔板的孔中按1×10⁵/孔的量接種細(xì)胞，將細(xì)胞用胰蛋白液消化、計數(shù)并鋪板；

培養(yǎng)24小時后，對于每孔細(xì)胞，制備轉(zhuǎn)染混合物：用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋2.0μl脂質(zhì)體Lipofectamine2000，室溫靜置5min；用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋0.8μg真核重組表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Myc-PGB；混合上述兩種溶液，室溫靜置30min，將得到的轉(zhuǎn)染混合物加入24孔板上的目標(biāo)孔，并依次按以下步驟操作：

(1)培養(yǎng)24小時后，1∶10傳代入新鮮培養(yǎng)基；

(2)在步驟(1)完成后培養(yǎng)24小時，然后往目標(biāo)孔中加入篩選抗生素G418至800μg/ml；

(3)在步驟(2)完成后加入篩選抗生素G418后培養(yǎng)4天，細(xì)胞開始大量死亡，僅剩零星細(xì)胞，換液，加G418至200μg/ml；

(4)在步驟(3)完成后培養(yǎng)7天，可見形成了細(xì)胞克隆，消化細(xì)胞，稀釋至2個細(xì)胞/200μl，在96孔板孔中接種稀釋的細(xì)胞，接種量為200μl/孔；

(5)在步驟(4)完成后培養(yǎng)8天，擴大培養(yǎng)規(guī)模，把96孔板中細(xì)胞接種到24孔板；

(6)在步驟(5)完成后培養(yǎng)5天，繼續(xù)擴大培養(yǎng)規(guī)模，把24孔板中細(xì)胞接種到6孔板；

(7)在步驟(6)完成后培養(yǎng)5天，收獲細(xì)胞，此即為穩(wěn)定表達(dá)PGB的細(xì)胞轉(zhuǎn)染子。

為進(jìn)行對照試驗，將未轉(zhuǎn)入PGB基因的真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Myc同樣以上述步驟穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞，獲得空載體對照細(xì)胞。

使用試劑RNAiso Plus提取穩(wěn)定表達(dá)PGB的細(xì)胞轉(zhuǎn)染子的RNA，提取步驟參見試劑RNAiso Plus的說明書。

RT-PCR采用兩步法，第一步為逆轉(zhuǎn)錄，第二步為PCR。

PCR擴增條件如下：

變性95℃35s，退火55℃35s，延伸70℃1min，30個循環(huán)。

將RT-PCR產(chǎn)物電泳照相，穩(wěn)定表達(dá)PGB的人肺癌細(xì)胞A549轉(zhuǎn)染子具有PGB和β-actin條帶，而人肺癌細(xì)胞A549對照和空載體對照僅有β-actin條帶，這說明轉(zhuǎn)染子A549構(gòu)建成功。

參照Bio-rad公司提供的Western Blotting操作程序進(jìn)行鑒定。轉(zhuǎn)染子A549-PGB具有PGB和β-actin條帶，而A549細(xì)胞對照和空載體對照僅有β-actin條帶，在翻譯水平上說明轉(zhuǎn)染子A549-PGB構(gòu)建成功。

細(xì)胞生長情況的測定

本發(fā)明選用MTT法檢測細(xì)胞生長，收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，向96孔板每孔加入100μl，將待測細(xì)胞密度調(diào)至約6000個/孔，將96孔板置于37℃、5％CO2條件下孵育24小時；加入5mg/ml的MTT試劑20μl/孔，將96孔板置于37℃、5％CO2條件下繼續(xù)孵育4小時；棄上清，加入DMSO 150μl/孔，至搖床上低速振蕩溶解藍(lán)色顆粒；選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔的光吸收值，記錄結(jié)果；連續(xù)測六天，以時間為橫坐標(biāo)、光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長曲線；對生長曲線添加趨勢線，得到擬合方程式和擬合度指標(biāo)R2，從擬合方程式中提取斜率；以每種類型細(xì)胞的斜率除以第一天的MTT數(shù)據(jù)，得到標(biāo)準(zhǔn)化生長速率。

轉(zhuǎn)染子人肺癌細(xì)胞A549-PGB的生長情況

選用MTT法測定了轉(zhuǎn)染子A549-PGB的生長情況及A549細(xì)胞對照、空載體對照的生長情況(測定方法如上所述)，測定結(jié)果見圖1。

從圖3可以看出，A549細(xì)胞對照，轉(zhuǎn)染子A549-PGB和空載體對照的A490nm的平均值(6孔平均)分別為：0.31，0.29，0.30。此結(jié)果表明，PGB穩(wěn)定轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后，輕微抑制了該細(xì)胞生長。

轉(zhuǎn)染子A549-PGB對順鉑的敏感性檢測

順鉑是中心以二價鉑同兩個氯原子和兩個氨分子結(jié)合的重金屬絡(luò)合物，類似于雙功能烷化劑，可抑制DNA的復(fù)制過程。DDP細(xì)胞最敏感，高濃度時抑制RNA及蛋白質(zhì)合成。本品對乏氧細(xì)胞作用，進(jìn)入人體后可擴散通過帶電的細(xì)胞膜。目前認(rèn)為，DDP主要作用部位在DNA的嘌呤和嘧啶堿基。作用與用途：本品屬細(xì)胞周期非特異性藥物，具有細(xì)胞毒性，可抑制癌細(xì)胞的DNA復(fù)制過程，并損傷其細(xì)胞膜上結(jié)構(gòu)，有較強的廣譜抗癌作用。臨床用于卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、肺癌、鼻咽癌、食道癌、惡性淋巴瘤、頭頸部鱗癌、甲狀腺癌及成骨肉瘤等多種實體腫瘤均能顯示療效。

在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入0.2μg/ml順鉑，采用上述MTT法研究轉(zhuǎn)染子A549-PGB對順鉑的敏感性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PGB基因可增加A549細(xì)胞對順鉑的敏感性，實驗結(jié)果見圖3。圖4A為在37℃、無順鉑條件下，A549細(xì)胞對照、轉(zhuǎn)染子A549-PGB和空載體對照細(xì)胞的生長曲線。圖4B為在37℃、0.2μg/ml順鉑條件下，A549細(xì)胞對照、轉(zhuǎn)染子A549-PGB和空載體對照的生長曲線。

實驗結(jié)果表明，0.2μg/ml順鉑顯著抑制轉(zhuǎn)染子A549-PGB的生長，而A549 細(xì)胞對照和空載體對照的生長速率幾乎不變。以上結(jié)果說明PGB顯著增加了A549細(xì)胞對順鉑的敏感性。

實施例5人肝癌細(xì)胞HepG2培養(yǎng)評估：

所用試驗方法同實施例3-4。

選用MTT法測定了轉(zhuǎn)染子HepG2-PGB的生長情況及HeLa細(xì)胞對照、空載體對照的生長情況(測定方法如上所述)，測定結(jié)果見圖5。

從圖5可以看出，HepG2細(xì)胞對照，轉(zhuǎn)染子HepG2-PGB和空載體對照的A490nm的平均值(6孔平均)分別為：0.28，0.21，0.27。此結(jié)果表明，PGB穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞后，顯著降低了細(xì)胞生長。

轉(zhuǎn)染子HepG2-PGB對順鉑的敏感性檢測：

在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入0.2μg/ml順鉑，采用同實施例3-4的MTT法研究轉(zhuǎn)染子HeLa-PGB對順鉑的敏感性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PGB基因并不能增加HepG2細(xì)胞對順鉑的敏感性，以上結(jié)果說明PGB并不能顯著增加HepG2細(xì)胞對順鉑的敏感性。這可能是腫瘤細(xì)胞不同所造成的效果差異，原因還有待進(jìn)一步的提高。對不同腫瘤細(xì)胞的效果也仍有待進(jìn)一步研究。

由此可見，本發(fā)明公開了一種PGB變體基因可以用于制備腫瘤細(xì)胞化療增敏藥物，有助于提高癌細(xì)胞對極低濃度的化療藥物順鉑的敏感性，增強化療藥物的療效，提高腫瘤患者的生命質(zhì)量，在腫瘤治療領(lǐng)域具有潛在、良好的應(yīng)用前景。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

SEQUENCE LISTING

<110>

<120> PGBc基因變體在在增加癌癥化療藥物敏感度中的應(yīng)用

<130>

<160> 2

<170> PatentIn version 3.4

<210> 1

<211> 250

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

taatcagatt atctattaaa gaatgggtgc atattatgga gctatatccg attttattat 60

ctgcttattg ggatattcag ccaatgctgt acacatcacc atttgcacct ctccaggctc 120

tgacacagct catgcacttc tgaaagcatt cacaacagca cgccaatctc cagcaccgag 180

cagagtggcg atcccaaaag gagagctcag gcttgggaga gatccagacg aggtgtccac 240

gcaaagctcc caccagtctg gtttagt 250

<210> 2

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> 來自c-Myc的抗原決定族的基因序列

<400> 5

ATGGCATCAA TGCAGAAGCT GATCTCAGAG GACCTG 36