本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及翻白草多糖提取方法。
背景技術(shù)：
翻白草，又名白頭翁，為薔薇科委陵菜屬植物(Potentilladiscolor Bunge)的帶根全草，全國各地均有分布，生于丘陵山地、路旁及洼埂上，為我國傳統(tǒng)中藥?！侗静菥V目》記載，翻白草有清熱、涼血、解毒、止血消腫的功能，多用于治療痢疾、瘧疾、癰腫及各種出血?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，翻白草具有止血、止痢、解毒、降血糖、降血脂的作用，是一種重要的中草藥植物。
翻白草富含有多糖，石竹造甙元、D-兒茶素，可水解鞣質(zhì)、沒食子酸、原兒茶酸、槲皮黃素、熊果酸及其它黃酮類物質(zhì)，坡模酸，3-O-乙酰坡模醇，齊墩果酸，2-羥基白樺酯酸，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖，山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖等三萜類化合物，延胡索酸、蘋果酸等9個單體化合物及Mg、Ca等微量元素。目前，從翻白草中提取多糖多采用水提醇沉法，多糖純度較低。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
有鑒于此，提出一種翻白草多糖的提取方法。該方法利用生物酶解技術(shù)從翻白草中提取多糖，獲得純度較高的翻白草多糖。獲得的翻白草多糖的純度在86.28～96.27％。
為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
本發(fā)明提供了一種翻白草多糖提取方法，包括：
步驟1：將翻白草干燥、粉碎后，以kg/L計，加入質(zhì)量體積比為1∶10～20的蒸餾水，浸泡30min，得到翻白草第一浸提液；
步驟2：向所述翻白草第一浸提液中加入酸調(diào)節(jié)pH值為3.0～4.0，將溫度加熱至45～55℃，每kg翻白草中分別加入1～15萬IU的纖維素酶和1～15萬IU的果膠酶，酶解1～4h后，酶滅活，超聲波處理后，在溫度為75～80℃的條件下提取3～6h，離心、過濾后，收集濾液，得到第一濾液；收集濾渣，以kg/L計，加入質(zhì)量體積比為1∶5～10的蒸餾水，得到翻白草第二浸提液；
步驟3：向所述翻白草第二浸提液中加入酸調(diào)節(jié)pH值為4.5～5.5，室溫下微波處理(10min)后，加熱至45～55℃，每kg翻白草中分別加入1～15萬IU的纖維素酶、1～15萬IU的果膠酶和1～15萬IU的木聚糖酶，酶解60～90min后，酶滅活，超聲波處理后，離心、過濾后，收集濾液，得到第二濾液；
步驟4：混合所述第一濾液和所述第二濾液，過截留分子量為10萬的中空纖維膜，收集透過液經(jīng)減壓濃縮，離心、過濾后，收集濾液，得到翻白草提取液；
步驟5：將所述翻白草提取液經(jīng)醇沉、加入堿后調(diào)節(jié)pH值為9.0～14.0后經(jīng)季胺鹽沉淀、醇沉精制或大孔樹脂柱精制后，獲得所述翻白草多糖。
本發(fā)明提供的提取方法中，超濾可以除去第一濾液和第二濾液中的小分子雜質(zhì)，醇沉可以使翻遍草多糖沉淀，從而與其他雜質(zhì)分離。作為優(yōu)選，醇沉后的最終體積濃度為30～90％。
作為優(yōu)選，酸選自磷酸、檸檬酸、鹽酸、硫酸中的一種或兩種以上的混合酸。
為了控制酶的持續(xù)降解作用，會在酶解后作酶滅活處理。作為優(yōu)選，本發(fā)明提供的提取方法中，酶滅活的條件為在溫度為95～100℃的條件下處理5～20min。
超聲波是頻率高于20000赫茲的聲波，它方向性好，穿透能力強，有助于破細(xì)胞壁，加速溶劑穿透組織作用。本發(fā)明提供的提取方法中，超聲波處理條件優(yōu)選為在500～5000W的條件下處理20～90min。
減壓濃縮，可以通過抽真空的方式降低水的沸點，使水蒸發(fā)干燥。作為優(yōu)選，本發(fā)明提供的提取方法中，減壓濃縮的條件為40～80℃，0.04～0.10MPa。
作為優(yōu)選，堿選自氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、氨水中的一種或兩種以上的混合堿。
作為優(yōu)選，季銨鹽選自十六烷基三甲銨溴化物或其氫氧化物、十六烷基吡啶、碘化N-三甲基殼聚糖季銨鹽、殼聚糖羥丙基三甲基氯化銨中的一種或兩種以上的混合物。
作為優(yōu)選，醇沉精制或大孔樹脂柱精制前，還包括鹽洗的步驟。
優(yōu)選地，鹽洗為加入氯化物后，調(diào)節(jié)pH值為3.0～7.0，離心、抽濾、收集濾液。
優(yōu)選地，氯化物為氯化鈉或氯化鉀。
作為優(yōu)選，大孔樹脂選自AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、HPD100型、HPD300型、HPD600型、M3型、ABD-4型、DM-130型、D101型、D201型、D301型、1300-66型、100型、500型、600型大孔樹脂。其中，樹脂的預(yù)處理過程可以為：以水或乙醇溶脹過夜，濕法裝柱，以乙醇或丙酮洗脫，至回收后無色沉淀或渾濁即可，然后用水洗至無乙醇味，交替洗脫2～3次。也可用酸、堿浸泡，然后再水洗至中性；樹脂再生方法可以為：非吸附性雜質(zhì)一般用水洗除去；吸附性雜質(zhì)可用一定濃度的酸或堿液除去(氫氧化鈉或鹽酸)。保存時加入一定量的乙醇。
本發(fā)明還提供了按照上述提取方法獲得的翻白草多糖。
此外，本發(fā)明還提供了按照上述提取方法獲得的翻白草多糖在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的翻白草多糖提取方法，利用生物酶解技術(shù)從翻白草中提取多糖，再加上超聲波處理、超濾、醇沉、季銨鹽沉淀、鹽洗、醇沉精制或大孔樹脂柱精制，獲得純度較高的翻白草多糖。獲得的翻白草多糖的純度在86.28～96.27％，多糖分子量為56308～68720D。獲得的翻白草多糖在動物藥效試驗中，能夠顯著降低血糖含量，具有降血糖作用。
具體實施方式
本發(fā)明公開了一種翻白草多糖提取方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：
實施例1本發(fā)明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草藥材，粉碎，得到翻白草粉。準(zhǔn)確稱取翻白草粉1.0kg，加入10.0L的水?dāng)嚢杈鶆?，浸?0min后，滴加質(zhì)量濃度為4.5％鹽酸調(diào)節(jié)pH值為3.8，加熱至55℃，維持pH至3.8，按每kg翻白草藥材加入4萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入4萬IU的果膠酶的比例加入4萬IU的纖維素酶和4萬IU的果膠酶，攪勻后，維持pH至3.8，55℃的條件下水解3h。酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，然后降溫至室溫，在2000w的條件下超聲波處理50min。超聲波處理后加熱至75℃提取3h后降至室溫，離心，過濾，得第一濾液8.0L；收集濾渣，加入5.0L的水，攪拌均勻，用質(zhì)量濃度為4.5％的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.8，按每kg翻白草藥材加入4萬IU的木聚糖酶、每kg翻白草藥材加入4萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入4萬IU的果膠酶的比例加入4萬IU的木聚糖酶、4萬IU的纖維素酶和4萬IU的果膠酶進(jìn)行酶解，維持pH至3.8，55℃的條件下水解90min，酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，降至室溫，在2000w的條件下超聲波處理50min，離心，過濾，得第二濾液4.0L。
合并第一濾液和第二濾液，得濾液12.0L，過截留分子量為10萬的中空纖維膜，得透過液11L，置于真空濃縮儀中，在60℃，0.05Mpa的條件下減壓濃縮至體積為2.8L，離心，過濾，收集濾液得2.5L，即為翻白草提取液。
取2.5L翻白草提取液，加入體積濃度為95％的乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到70％，靜置4h，離心，收集沉淀，用體積濃度為95％的乙醇和丙酮各洗兩次，真空干燥，得翻白草粗多糖212.31g。
將200.00g的翻白草粗多糖溶于2.0L的水，過濾，濾液用10.0mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至12.5，然后再向濾液加入質(zhì)量濃度為5％的十六烷基三甲基溴化銨溶液，使溶液中的十六烷基三甲基溴化銨的濃度達(dá)到1.5％，靜置，離心，得濾液2.2L。向濾液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到60％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用1.0L質(zhì)量濃度為5％的NaCl溶液溶解，再用質(zhì)量濃度為38％的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至5.5，靜置，離心，過濾，得濾液0.8L。將濾液上D301型大孔樹脂柱床，并用水洗脫至流出液無色透明，得流出液4.5L，濃縮至1.0L，過濾，得濾液0.8L。濾液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到70％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗滌兩次，真空干燥，得翻白草多糖4.25g。
檢驗結(jié)果：
多糖鑒別：苯酚-硫酸試劑反應(yīng)(陽性)
性狀：類白色粉末
多糖含量：90.12％(用苯酚-硫酸法測定)
多糖分子量測定：65022D(參考2005年藥典二部附錄VH)。
實施例2本發(fā)明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草藥材，粉碎，得到翻白草粉。準(zhǔn)確稱取翻白草粉1.0kg，加入10.0L的水?dāng)嚢杈鶆颍?0min后，滴加質(zhì)量濃度為4.5％檸檬酸調(diào)節(jié)pH值為3.5，加熱至45℃，維持pH至3.5，按每kg翻白草藥材加入4萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入4萬IU的果膠酶的比例加入4萬IU的纖維素酶和4萬IU的果膠酶，攪勻后，維持pH至3.5，45℃的條件下水解4h。酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，然后降溫至室溫，在5000w的條件下超聲波處理20min后加熱至80℃提取4h后降至室溫，離心，過濾，得第一濾液8.0L；收集濾渣，加入5.0L的水，攪拌均勻，用質(zhì)量濃度為4.5％的檸檬酸調(diào)節(jié)pH值至3.5，按每kg翻白草藥材加入4萬IU的木聚糖酶、每kg翻白草藥材加入4萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入4萬IU的果膠酶的比例加入4萬IU的木聚糖酶、4萬IU的纖維素酶和4萬IU的果膠酶進(jìn)行酶解，維持pH至3.5，45℃的條件下水解80min，酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，降至室溫，在5000w的條件下超聲波處理20min，離心，過濾，得第二濾液4.2L。
合并第一濾液和第二濾液，得濾液12.2L，過截留分子量為10萬的中空纖維膜，得透過液11.1L，置于真空濃縮儀中，在65℃，0.04Mpa的條件下減壓濃縮至體積為3.5L，離心，過濾，收集濾液得3.0L，即為翻白草提取液。
取3.0L翻白草提取液，加入體積濃度為95％的乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到60％，靜置4h，離心，收集沉淀，用體積濃度為95％的乙醇和丙酮各洗兩次，真空干燥，得翻白草粗多糖231.05g。
將200.00g的翻白草粗多糖溶于3.0L的水，過濾，濾液用10.0mol/L的Ca(OH)2溶液調(diào)節(jié)pH值至14.0，然后再向濾液加入質(zhì)量濃度為5％的十六烷基三甲基氫氧化銨溶液，使溶液中的十六烷基三甲基氫氧化銨的濃度達(dá)到1.5％，靜置，離心，得濾液2.7L。向濾液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到60％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用1.3L質(zhì)量濃度為5％的NaCl溶液溶解，再用質(zhì)量濃度為38％的檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.0，靜置，離心，過濾，得濾液1.0L。將濾液上SIP1400型大孔樹脂柱床，并用水洗脫至流出液無色透明，得流出液5.4L，濃縮至1.3L，過濾，得濾液1.0L。濾液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到60％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗滌兩次，真空干燥，得翻白草多糖4.42g。
檢驗結(jié)果：
多糖鑒別：苯酚-硫酸試劑反應(yīng)(陽性)
性狀：類白色粉末
多糖含量：91.23％(用苯酚-硫酸法測定)
多糖分子量測定：62154D(參考2005年藥典二部附錄VH)。
實施例3本發(fā)明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草藥材，粉碎，得到翻白草粉。準(zhǔn)確稱取翻白草粉1.0kg，加入20.0L的水?dāng)嚢杈鶆?，浸?0min后，滴加質(zhì)量濃度為4.5％磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.4，加熱至50℃，維持pH至3.4，按每kg翻白草藥材加入2萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入2萬IU的果膠酶的比例加入2萬IU的纖維素酶和2萬IU的果膠酶，攪勻后，維持pH至3.4，50℃的條件下水解4h。酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，然后降溫至室溫，在500w的條件下超聲波處理90min。超聲波處理后加熱至78℃提取5h后降至室溫，離心，過濾，得第一濾液16.0L；收集濾渣，加入10.0L的水，攪拌均勻，用質(zhì)量濃度為4.5％的磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.4，按每kg翻白草藥材加入2萬IU的木聚糖酶、每kg翻白草藥材加入2萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入2萬IU的果膠酶的比例加入2萬IU的木聚糖酶、2萬IU的纖維素酶和2萬IU的果膠酶進(jìn)行酶解，維持pH至3.4，50℃的條件下水解60min，酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，降至室溫，在500w的條件下超聲波處理90min，離心，過濾，得第二濾液8.0L。
合并第一濾液和第二濾液，得濾液24.0L，過截留分子量為10萬的中空纖維膜，得透過液22.5L，置于真空濃縮儀中，在70℃，0.10Mpa的條件下減壓濃縮至體積為6.5L，離心，過濾，收集濾液得6.0L，即為翻白草提取液。
取6.0L翻白草提取液，加入體積濃度為95％的乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到60％，靜置4h，離心，收集沉淀，用體積濃度為95％的乙醇和丙酮各洗兩次，真空干燥，得翻白草粗多糖215.45g。
將200.00g的翻白草粗多糖溶于2.0L的水，過濾，濾液用10.0mol/L的KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至14.0，然后再向濾液加入質(zhì)量濃度為5％的十六烷基吡啶溶液，使溶液中的十六烷基吡啶的濃度達(dá)到1.5％，靜置，離心，得濾液1.7L。向濾液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到60％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用1.0L質(zhì)量濃度為5％的NaCl溶液溶解，再用質(zhì)量濃度為38％的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.2，靜置，離心，過濾，得濾液0.8L。將濾液上D4020型大孔樹脂柱床，并用水洗脫至流出液無色透明，得流出液5.0L，濃縮至1.0L，過濾，得濾液0.85L。濾液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到60％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗滌兩次，真空干燥，得翻白草多糖4.37g。
檢驗結(jié)果：
多糖鑒別：苯酚-硫酸試劑反應(yīng)(陽性)
性狀：類白色粉末
多糖含量：90.87％(用苯酚-硫酸法測定)
多糖分子量測定：63586D(參考2005年藥典二部附錄VH)。
實施例4本發(fā)明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草藥材，粉碎，得到翻白草粉。準(zhǔn)確稱取翻白草粉1.0kg，加入15.0L的水?dāng)嚢杈鶆?，浸?0min后，滴加質(zhì)量濃度為4.5％硫酸調(diào)節(jié)pH值為3.0，加熱至48℃，維持pH至3.0，按每kg翻白草藥材加入15萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入15萬IU的果膠酶的比例加入15萬IU的纖維素酶和15萬IU的果膠酶，攪勻后，維持pH至3.0，48℃的條件下水解1h。酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，然后降溫至室溫，在2000w的條件下超聲波處理50min。超聲波處理后加熱至75℃±5℃提取3h后降至室溫，離心，過濾，得第一濾液12.0L；收集濾渣，加入8.0L的水，攪拌均勻，用質(zhì)量濃度為4.5％的硫酸調(diào)節(jié)pH值至3.0，按每kg翻白草藥材加入15萬IU的木聚糖酶、每kg翻白草藥材加入15萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入15萬IU的果膠酶的比例加入15萬IU的木聚糖酶、15萬IU的纖維素酶和15萬IU的果膠酶進(jìn)行酶解，維持pH至3.0，48℃的條件下水解90min，酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，降至室溫，在3000w的條件下超聲波處理40min，離心，過濾，得第二濾液6.0L。
合并第一濾液和第二濾液，得濾液18.0L，過截留分子量為10萬的中空纖維膜，得透過液16.5L，置于真空濃縮儀中，在40℃，0.08Mpa的條件下減壓濃縮至體積為5.7L，離心，過濾，收集濾液得5.5L，即為翻白草提取液。
取5.5L翻白草提取液，加入體積濃度為95％的乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到50％，靜置4h，離心，收集沉淀，用體積濃度為95％的乙醇和丙酮各洗兩次，真空干燥，得翻白草粗多糖221.5g。
將200.00g的翻白草粗多糖溶于2.0L的水，過濾，濾液用10.0mol/L的Na2CO3溶液調(diào)節(jié)pH值至10.0，然后再向濾液加入質(zhì)量濃度為5％的碘化N-三甲基殼聚糖季銨鹽溶液，使溶液中的碘化N-三甲基殼聚糖季銨鹽的濃度達(dá)到1.5％，靜置，離心，得濾液2.3L。向濾液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到30％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用1.0L質(zhì)量濃度為5％的NaCl溶液溶解，再用質(zhì)量濃度為38％的硫酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0，靜置，離心，過濾，得濾液0.8L。將濾液上AB-8型大孔樹脂柱床，并用水洗脫至流出液無色透明，得流出液4.5L，濃縮至1.0L，過濾，得濾液0.8L。濾液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到70％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗滌兩次，真空干燥，得翻白草多糖4.31g。
檢驗結(jié)果：
多糖鑒別：苯酚-硫酸試劑反應(yīng)(陽性)
性狀：類白色粉末
多糖含量：96.27％(用苯酚-硫酸法測定)
多糖分子量測定：68720D(參考2005年藥典二部附錄VH)。
實施例5本發(fā)明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草藥材，粉碎，得到翻白草粉。準(zhǔn)確稱取翻白草粉1.0kg，加入10.0L的水?dāng)嚢杈鶆?，浸?0min后，滴加質(zhì)量濃度為4.5％鹽酸調(diào)節(jié)pH值為3.2，加熱至52℃，維持pH至3.2，按每kg翻白草藥材加入8萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入8萬IU的果膠酶的比例加入8萬IU的纖維素酶和8萬IU的果膠酶，攪勻后，維持pH至3.2，52℃的條件下水解2h。酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，然后降溫至室溫，在1000w的條件下超聲波處理70min。超聲波處理后加熱至78℃提取3h后降至室溫，離心，過濾，得第一濾液8.0L；收集濾渣，加入5.0L的水，攪拌均勻，用質(zhì)量濃度為4.5％的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.2，按每kg翻白草藥材加入8萬IU的木聚糖酶、每kg翻白草藥材加入8萬IU的纖維素酶和每kg翻白草藥材加入8萬IU的果膠酶的比例加入8萬IU的木聚糖酶、8萬IU的纖維素酶和8萬IU的果膠酶進(jìn)行酶解，維持pH至3.2，52℃的條件下水解90min，酶解結(jié)束后加熱至100℃，加熱時間為10min進(jìn)行酶滅活，降至室溫，在1000w的條件下超聲波處理70min，離心，過濾，得第二濾液4.0L。
合并第一濾液和第二濾液，得濾液12.0L，過截留分子量為10萬的中空纖維膜，得透過液11L，置于真空濃縮儀中，在80℃，0.09Mpa的條件下減壓濃縮至體積為2.8L，離心，過濾，收集濾液得2.5L，即為翻白草提取液。
取2.5L翻白草提取液，加入體積濃度為95％的乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到90％，靜置4h，離心，收集沉淀，用體積濃度為95％的乙醇和丙酮各洗兩次，真空干燥，得翻白草粗多糖210.85g。
將200.00g的翻白草粗多糖溶于2.0L的水，過濾，濾液用1.0mol/L的氨水溶液調(diào)節(jié)pH值至9.0，然后再向濾液加入質(zhì)量濃度為5％的殼聚糖羥丙基三甲基氯化銨溶液，使溶液中的殼聚糖羥丙基三甲基氯化銨的濃度達(dá)到1.5％，靜置，離心，得濾液2.3L。向濾液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到80％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用1.0L質(zhì)量濃度為5％的KCl溶液溶解，再用質(zhì)量濃度為10％的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，靜置，離心，過濾，得濾液0.8L。將濾液上S-8型大孔樹脂柱床，并用水洗脫至流出液無色透明，得流出液4.5L，濃縮至1.0L，過濾，得濾液0.8L。濾液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇濃度達(dá)到70％，靜置，離心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗滌兩次，真空干燥，得翻白草多糖4.16g。
檢驗結(jié)果：
多糖鑒別：苯酚-硫酸試劑反應(yīng)(陽性)
性狀：類白色粉末
多糖含量：86.28％(用苯酚-硫酸法測定)
多糖分子量測定：56308D(參考2005年藥典二部附錄VH)。
實施例6本發(fā)明提供的提取方法獲得的翻白草多糖藥效試驗
實驗動物：昆明種小白鼠，50只，雌雄各25只，健康，體重18～22g。取上述小鼠按體重隨機分5組(空白對照組、模型組、陽性藥物對照組、翻白草多糖試驗組)，每組10只，雌雄各5只，各組動物均在同樣環(huán)境下飲水、攝食、保持自然光照(溫度25℃，濕度60～70％)。
實驗藥品：
翻白草多糖：本發(fā)明實施例1獲得的翻白草多糖；
陽性藥物對照：優(yōu)降糖，北京雙橋制藥廠生產(chǎn)；
模型制劑：葡萄糖氧化酶試劑盒，北京北化康泰臨床試劑有限公司生產(chǎn)。
實驗方法：試驗前，將上述小鼠禁食14h后給藥。翻白草多糖分別按50、100mg/Kg劑量灌胃給藥，優(yōu)降糖按50mg/Kg的劑量灌服。除空白對照組外，各組在給藥30min后，按0.2ml/Kg灌服20％葡萄糖溶液，并分別在給藥后30min、90min，從眶靜脈竇取血，以葡萄糖氧化酶法測定血糖。以血糖濃度為指標(biāo)，給藥各組與模型組間進(jìn)行t檢驗。結(jié)果見表1。
表1翻白草多糖降低小鼠血糖的作用
*P＜0.05，#P＜0.01
由表1試驗結(jié)果表明，小鼠口服葡萄糖溶液后，相同劑量的翻白草多糖組與模型組相比，在給藥30min后，血糖濃度由357.06±29.85mg·d/L降低至256.31±41.35mg·d/L，具有極顯著性差異(P＜0.01)，與陽性藥物優(yōu)降糖組相比，差異不顯著(P＞0.05)；給藥90min后，血糖濃度由304.36±75.98mg·d/L降低至247.11±54.36mg·d/L，具有極顯著性差異(P＜0.01)，與陽性藥物優(yōu)降糖組相比，差異不顯著(P＞0.05)。
小鼠口服葡萄糖溶液后，劑量為100mg/kg的翻白草多糖組與劑量為50mg/kg的模型組相比，在給藥30min后，血糖濃度由357.06±29.85mg·d/L降低至226.24±26.34mg·d/L，具有極顯著性差異(P＜0.01)；給藥90min后，血糖濃度由304.36±75.98mg·d/L降低至228.36±72.15mg·d/L，具有極顯著性差異(P＜0.01)。
按照上述試驗方法，對本發(fā)明實施例2至5提供的翻白草多糖進(jìn)行降血糖藥效試驗，結(jié)果與實施例1提供的翻白草多糖的降血糖效果相近，與模型組具有極顯著性差異(P＜0.01)，與陽性藥物優(yōu)降糖組相比，差異不顯著(P＞0.05)。
綜合上述試驗結(jié)果，本發(fā)明提供的翻白草多糖能夠有效降低血糖，可以用于制備治療糖尿病的藥物。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。