本發(fā)明屬于遺傳檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及一種用于檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒及其SNP標(biāo)志物。
背景技術(shù)：
肺癌是目前全球人數(shù)最多的惡性腫瘤。流行病學(xué)研究表明，80％以上的肺癌可以歸咎為煙草暴露，但僅有不到20％吸煙者發(fā)生肺癌，說(shuō)明在同等環(huán)境暴露下，具有不同遺傳背景的個(gè)體對(duì)肺癌的易感性不同，其中單核苷酸多態(tài)性起重要作用。
采用單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphsm，SNP)作為基因組標(biāo)志的關(guān)聯(lián)分析方法是目前最常用的疾病的遺傳易感基因檢測(cè)方法之一。SNP是指基因組水平上由單核苷酸變異引起的DNA序列多態(tài)性，在人群中的發(fā)生頻率大于1％，它是人類可遺傳的變異中最常見(jiàn)的一種。SNP遺傳穩(wěn)定性強(qiáng)，易于檢測(cè)，位于基因內(nèi)部的SNP能直接影響到蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平，進(jìn)而影響到組織、器官乃至生理功能。
對(duì)常見(jiàn)疾病相關(guān)多種遺傳標(biāo)識(shí)進(jìn)行早期檢測(cè)和系統(tǒng)評(píng)估將有助于對(duì)疾病的早期預(yù)防、診斷和治療。目前，研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)大量與各種常見(jiàn)疾病相關(guān)的遺傳學(xué)標(biāo)識(shí)，然而，由于缺乏有足夠的靈敏度和可以對(duì)多種疾病相關(guān)標(biāo)識(shí)進(jìn)行廣泛(高通量檢測(cè)位點(diǎn)、高通量檢測(cè)樣本)篩查和檢驗(yàn)的方法，使得這些常見(jiàn)疾病的遺傳學(xué)標(biāo)識(shí)無(wú)法廣泛應(yīng)用。此外，目前常見(jiàn)疾病遺傳標(biāo)識(shí)缺乏系統(tǒng)、有效的整合，大大制約了常見(jiàn)疾病早期預(yù)防、診斷和治療方面的發(fā)展?，F(xiàn)有檢測(cè)只有單一種疾病或一類疾病的遺傳標(biāo)識(shí)檢測(cè)，檢測(cè)范圍有限，且某些常見(jiàn)疾病尚無(wú)早期檢測(cè)的方法。
目前，一些傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)手段，如組織細(xì)胞檢測(cè)存在著其固有的缺陷，取材位置不當(dāng)、組織細(xì)胞標(biāo)本材料不足或認(rèn)為經(jīng)驗(yàn)不足等都將導(dǎo)致鼻咽癌誤診。其他技術(shù)例如影像學(xué)雖然已被廣泛應(yīng)用于鼻咽癌的檢查和診斷，但其在疾病鼻咽癌程度的定性上仍存在著很大的局限性。
綜上所述，研發(fā)一種用于通過(guò)多個(gè)易感位點(diǎn)檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒，對(duì)肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)、預(yù)防、診斷提供依據(jù)具有重要意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的是提出了一種用于檢測(cè)肺癌易感性的SNP標(biāo)志物、SNP標(biāo)志物的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸引物及其試劑盒，本發(fā)明的36個(gè)SNP位點(diǎn)為肺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、診斷提供重要依據(jù)。
本發(fā)明的目的將通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：
一種用于檢測(cè)肺癌易感性的SNP標(biāo)志物，所述SNP標(biāo)志物包括36個(gè)SNP位點(diǎn)，所述的36個(gè)SNP位點(diǎn)為rs3842、rs212090、rs1926203、rs8034191、rs2808630、rs2273535、rs3117582、rs7216064、rs2131877、rs3817963、rs1801270、rs1051730、rs402710、rs31489、rs9981861、rs1656402、rs1209950、rs1047840、rs11080466、rs4254535、rs2352028、rs1494961、rs7626795、rs16951095、rs2333227、rs1801133、rs36600、rs9303196、rs1530057、rs4324798、rs4975616、rs2853677、rs748404、rs753955、rs4488809和rs10937405。
上述的SNP標(biāo)志物的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸引物，其中
所述檢測(cè)rs3842的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：3；
所述檢測(cè)rs212090的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：6；
所述檢測(cè)rs1926203的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：9；
所述檢測(cè)rs8034191的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：12；
所述檢測(cè)rs2808630的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：15；
所述檢測(cè)rs2273535的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：18；
所述檢測(cè)rs3117582的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：21；
所述檢測(cè)rs7216064的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：23，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：24；
所述檢測(cè)rs2131877的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：27；
所述檢測(cè)rs3817963的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：28和SEQ ID NO：29，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：30；
所述檢測(cè)rs1801270的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：31和SEQ ID NO：32，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：33；
所述檢測(cè)rs1051730的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：35，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：36；
所述檢測(cè)rs402710的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：38，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：39；
所述檢測(cè)rs31489的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：40和SEQ ID NO：41，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：42；
所述檢測(cè)rs9981861的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：43和SEQ ID NO：44，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：45；
所述檢測(cè)rs1656402的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：46和SEQ ID NO：47，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：48；
所述檢測(cè)rs1209950的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：50，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：51；
所述檢測(cè)rs1047840的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：52和SEQ ID NO：53，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：54；
所述檢測(cè)rs11080466的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：56，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：57；
所述檢測(cè)rs4254535的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：59，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：60；
所述檢測(cè)rs2352028的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：61和SEQ ID NO：62，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：63；
所述檢測(cè)rs1494961的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：64和SEQ ID NO：65，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：66；
所述檢測(cè)rs7626795的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：67和SEQ ID NO：68，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：69；
所述檢測(cè)rs16951095的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：70和SEQ ID NO：71，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：72；
所述檢測(cè)rs2333227的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：73和SEQ ID NO：74，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：75；
所述檢測(cè)rs1801133的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：77，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：78；
所述檢測(cè)rs36600的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：79和SEQ ID NO：80，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：81；
所述檢測(cè)rs9303196的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：82和SEQ ID NO：83，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：84；
所述檢測(cè)rs1530057的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：85和SEQ ID NO：86，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：87；
所述檢測(cè)rs4324798的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：88和SEQ ID NO：89，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：90；
所述檢測(cè)rs4975616的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：91和SEQ ID NO：92，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：93；
所述檢測(cè)rs 2853677的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：94和SEQ ID NO：95，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：96；
所述檢測(cè)rs 748404的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：97和SEQ ID NO：98，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：99；
所述檢測(cè)rs 753955的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：100和SEQ ID NO：101，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：102；
所述檢測(cè)rs4488809的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：103和SEQ ID NO：104，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：105；
所述檢測(cè)rs10937405的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO：106和SEQ ID NO：107，以及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO：108。
一種用于檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求2所述SNP標(biāo)志物的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸引物，用于檢測(cè)外周血DNA中36個(gè)SNP位點(diǎn)為rs3842、rs212090、rs1926203、rs8034191、rs2808630、rs2273535、rs3117582、rs7216064、rs2131877、rs3817963、rs1801270、rs1051730、rs402710、rs31489、rs9981861、rs1656402、rs1209950、rs1047840、rs11080466、rs4254535、rs2352028、rs1494961、rs7626795、rs16951095、rs2333227、rs1801133、rs36600、rs9303196、rs1530057、rs4324798、rs4975616、rs2853677、rs748404、rs753955、rs4488809和rs10937405。
上述的一種用于檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒，其中，所述試劑盒還包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、PCR反應(yīng)緩沖液、酶切反應(yīng)緩沖液、去離子水。
本發(fā)明是以本發(fā)明人基于多個(gè)國(guó)際和國(guó)內(nèi)大樣本量的肺癌人群和正常人群肺癌易感基因篩查結(jié)果的前期研究為基礎(chǔ)，通過(guò)本發(fā)明人自主設(shè)計(jì)的肺癌SNP篩選流程，從NCBI-pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選符合條件的SNP位點(diǎn)：1)查找與肺癌相關(guān)的文獻(xiàn)，通過(guò)影響因子和發(fā)表年限進(jìn)行過(guò)濾；2)查看候選文獻(xiàn)的摘要，進(jìn)一步排除與肺癌SNP研究無(wú)關(guān)的文獻(xiàn)；3)閱讀文獻(xiàn)，找到肺癌對(duì)應(yīng)的SNP位點(diǎn)；4)以選取的SNP位點(diǎn)和肺癌為關(guān)鍵詞再一次查閱文獻(xiàn)；5)判斷選取的SNP位點(diǎn)是否與肺癌密切相關(guān)，選取與肺癌最密切相關(guān)的SNP位點(diǎn)、對(duì)應(yīng)OR值以及突變堿基；6)將上一步驟獲得的SNP位點(diǎn)，通過(guò)Sequenom公司軟件Typer 4.0進(jìn)行在線評(píng)估，獲得最終的36個(gè)SNP位點(diǎn)列表。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)肺癌易感性的檢測(cè)方法與試劑盒，還達(dá)到了以下效果：本發(fā)明的36個(gè)SNP位點(diǎn)經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)論證，具有較高的實(shí)用性，可用于肺癌的早期評(píng)估和大規(guī)模篩查，并且該36個(gè)位點(diǎn)檢出成功率高、技術(shù)重現(xiàn)性好、性價(jià)比高，為肺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、診斷參考提供重要依據(jù)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)肺癌疾病的早期評(píng)估。
以下便結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步的詳述，以使技術(shù)方案更易于理解、掌握。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；所述試劑和材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得，下面實(shí)施例并非用以限制本發(fā)明的專利范圍，凡未脫離本發(fā)明所為的等效實(shí)施或變更，均應(yīng)包含于本專利保護(hù)范圍中。
實(shí)施例1用于檢測(cè)肺癌易感性相關(guān)的SNP位點(diǎn)
其中，rs3842位于基因ABCB1區(qū)域，rs212090位于基因ABCC1區(qū)域，rs1926203位于基因ACTA2區(qū)域，rs8034191位于基因AGPHD1區(qū)域，rs2808630位于基因APCS區(qū)域，rs2273535位于基因AURKA區(qū)域，rs3117582位于基因BAG6區(qū)域，rs7216064位于基因BPTF區(qū)域，rs2131877位于基因C3orf21區(qū)域，rs3817963位于基因C6orf10區(qū)域，rs1801270位于基因CDKN1A區(qū)域，rs1051730位于基因CHRNA3區(qū)域，rs402710和rs31489位于基因CLPTM1L區(qū)域，rs9981861位于基因DSCAM區(qū)域，rs1656402位于基因EIF4E2區(qū)域，rs1209950位于基因ERG區(qū)域，rs1047840位于基因EXO1區(qū)域，rs11080466位于基因FAM38B區(qū)域，rs4254535位于基因GKN2區(qū)域，rs2352028位于基因GPC5區(qū)域，rs1494961位于基因HELQ區(qū)域，rs7626795位于基因IL1RAP區(qū)域，rs16951095位于基因LAMA1區(qū)域，rs2333227位于基因MPO區(qū)域，rs1801133位于基因MTHFR區(qū)域，rs36600位于基因MTMR3區(qū)域，rs9303196位于基因NLRP1區(qū)域，rs1530057位于基因RBMS3區(qū)域，rs4324798位于基因SCAND3區(qū)域，rs4975616和rs2853677位于基因TERT區(qū)域，rs748404位于基因TGM5區(qū)域，rs753955位于基因TNFRSF19區(qū)域，rs4488809和rs10937405位于基因TP63區(qū)域。
實(shí)施例2檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒
一、試劑盒的制備：
1、設(shè)計(jì)和合成所述36個(gè)SNP位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸引物。待測(cè)SNP位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增引物及單堿基延伸引物詳見(jiàn)表1
表1待測(cè)SNP位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增引物及單堿基延伸引物
2、試劑盒還包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、PCR反應(yīng)緩沖液、酶切反應(yīng)緩沖液、去離子水。
二、試劑盒的檢測(cè)方法：
1、DNA的提取
1.1口腔拭子DNA提取
1)將口腔拭子放在2ml離心管中，加入400μl PBS。
2)加入20μl QIAGEN Protease和400μlBuffer AL。立即渦旋15s混勻。為了保證有效的裂解，樣品和Buffer AL必須立即并充分混合。
3)56℃孵育10min。短暫離心。
4)加入400μl乙醇(96-100％)到樣品中，渦旋混勻。短暫離心以使管蓋上無(wú)液體。
5)將液體轉(zhuǎn)移至離心柱，8000rpm(6000×g)離心1min。
6)柱子放入新的2ml EP管，加500μl Buffer AW1,8000rpm離心1min，棄EP管和廢液。
7)柱子放入新的2mlEP管，加500μl Buffer AW2,14000rpm(20,000×g)離心3min，丟棄EP管和廢液。
8)將柱子放入新的2mlEP管，14000rpm空管離心1min，丟棄EP管。
9)將柱子放入新的1.5mlEP管，加120μl Buffer AE，室溫孵育5min，8000rpm離心1min，-20℃保存。
1.2全血DNA提取
1)向1.5ml EP管中加入20μl QIAGEN Protease。
2)向管中加200μl全血樣品。注：先加入酶的目的是保證酶與血液的混勻。
3)加200μl Buffer AL，渦旋混勻15s。
4)56℃孵育10min，短暫離心。注：延長(zhǎng)孵育時(shí)間不能增加產(chǎn)量或提高質(zhì)量。
5)加入200μl無(wú)水乙醇，渦旋15s后，短暫離心以使管蓋上無(wú)液體。
6)繼續(xù)口腔拭子5～10步驟。
2、PCR擴(kuò)增
2.1在一個(gè)新的1.5mlEP管中配制PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系(見(jiàn)表2)
表2 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系
以上試劑混勻后每孔各加2μl。
2.2每孔依次加入DNA 10ng/ul 1μl，0.25uM Primer Mix 2μl，總體積5μl。
2.3在兼容96孔板的PCR儀上設(shè)定PCR反應(yīng)條件為：94℃ 4min，94℃20s，56℃30min，72℃ 1min，45個(gè)循環(huán)；72℃ 3min；4℃保持。
將96孔 PCR反應(yīng)板放置于PCR儀上，啟動(dòng)PCR反應(yīng)。
3、PCR產(chǎn)物堿性磷酸酶處理
3.1在PCR反應(yīng)結(jié)束后，將PCR產(chǎn)物用SAP(shrimp alkaline phosphatase，蝦堿性磷酸酶)處理，以去除體系中游離的dNTPs。
3.2配制堿性磷酸酶處理反應(yīng)體系，見(jiàn)表3
表3堿性磷酸酶處理反應(yīng)體系
以上試劑混勻后每孔加2μl
3.3在兼容96孔板的PCR儀上段定PCR反應(yīng)條件：37℃ 40min；85℃ 5min；4℃保持，啟動(dòng)PCR儀進(jìn)行堿性磷酸酶處理。
4單堿基延伸
4.1在堿性磷酸酶處理結(jié)束后，進(jìn)行單堿基延伸反應(yīng)。
4.2配制單堿基延伸反應(yīng)體系，見(jiàn)表4
表4單堿基延伸反應(yīng)體系
以上試劑混勻后每孔加1.06μl
4.3每孔加入iPLEX Extend Primer Mix 0.94μl，總體積9μl。
4.4在兼容96孔板的PCR儀上，設(shè)定PCR反應(yīng)條件：94℃30s，94℃5s，52℃5s，80℃5s；52℃5s，80℃5s 4個(gè)循環(huán)；94℃5s，52℃5s，80℃5s 39個(gè)循環(huán)；72℃3min；4℃維持。啟動(dòng)PCR儀進(jìn)行單堿基延伸反應(yīng)。
5、樹(shù)脂純化
5.1將Clean Resin樹(shù)脂平鋪到6mg的樹(shù)脂板中；
5.2加16μl水到延伸產(chǎn)物的對(duì)應(yīng)孔內(nèi)；
5.3將干燥后的樹(shù)脂倒入延伸產(chǎn)物板中，封膜，低速垂直旋轉(zhuǎn)15min，使樹(shù)脂與反應(yīng)物充分接觸；
5.4 3000rpm 5min離心使樹(shù)脂沉入孔底部。
6、芯片點(diǎn)樣
啟動(dòng)MassARRAY Nanodispenser RS1000點(diǎn)樣儀，將樹(shù)脂純化后的延伸產(chǎn)物移至96孔固體支持物上，制作出芯片。
7、質(zhì)譜檢測(cè)
將芯片使用MALDI-TOF(matrix-assisted laser desorption/ionization-time offlight，基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜)分析，檢測(cè)結(jié)果使用TYPER4.0軟件(Sequenom)分型并輸出結(jié)果，分析受試者肺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的早期評(píng)估。
實(shí)施例3與肺癌密切相關(guān)的36個(gè)SNP位點(diǎn)引用的文獻(xiàn)，見(jiàn)表5
表5與肺癌密切相關(guān)的36個(gè)SNP位點(diǎn)引用的文獻(xiàn)
實(shí)施例4根據(jù)實(shí)施例3中引用的文獻(xiàn)得出36個(gè)SNP位點(diǎn)與肺癌的關(guān)聯(lián)，見(jiàn)表6
表6 36個(gè)SNP位點(diǎn)與肺癌的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果
實(shí)施例5 36個(gè)SNP位點(diǎn)的驗(yàn)證
采用上述實(shí)施例2中試劑盒的質(zhì)譜檢測(cè)方法分析36個(gè)SNP位點(diǎn)，檢測(cè)結(jié)果使用TYPER4.0軟件(Sequenom)分型并輸出結(jié)果，其OR值與實(shí)施例4中表5的36個(gè)SNP位點(diǎn)與肺癌的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果相同，說(shuō)明該36個(gè)位點(diǎn)具有較高的實(shí)用性，可用于肺癌的早期評(píng)估和大規(guī)模篩查，由于質(zhì)譜分析技術(shù)具有檢出成功率高、技術(shù)重現(xiàn)性好、性價(jià)比高，因此本發(fā)明采用的是質(zhì)譜檢測(cè)分析該36個(gè)位點(diǎn)檢出成功率高、技術(shù)重現(xiàn)性好、性價(jià)比高，為肺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、診斷參考提供重要依據(jù)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)肺癌疾病的早期評(píng)估。
上述說(shuō)明示出并描述了本發(fā)明的若干優(yōu)選實(shí)施例，但如前所述，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對(duì)其他實(shí)施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述發(fā)明構(gòu)想范圍內(nèi)，通過(guò)上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)進(jìn)行改動(dòng)。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動(dòng)和變化不脫離本發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳市核子基因科技有限公司
<120> 一種用于檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒及其SNP標(biāo)志物
<130>
<160> 108
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
acgttggatg ggaacagagt gagatacttc 30
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
acgttggatg atctactata attctgttac 30
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ttcatcaagt ggagagaagt c 21
<210> 4
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
acgttggatg catgaggcca tctccttaat 30
<210> 5
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
acgttggatg tccaggcttt cccttttttc 30
<210> 6
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
atatcaatca tggtggga 18
<210> 7
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
acgttggatg aacaagggct ctgatacctg 30
<210> 8
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
acgttggatg caatccacgt tacctaagcc 30
<210> 9
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
caagctgcgt tgca 14
<210> 10
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
acgttggatg gtagtggtta gagcccaatg 30
<210> 11
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
acgttggatg tcccctgatt tccacaagtc 30
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
atgtggtata agttttctgt t 21
<210> 13
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
acgttggatg tattaaggcc agaggctgtc 30
<210> 14
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
acgttggatg ctccccaggt atgtaggttg 30
<210> 15
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
gccagaggct gtctacaaga cta 23
<210> 16
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
acgttggatg tgagcctggc cactatttac 30
<210> 17
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
acgttggatg ccagttggag gtccaaaatg 30
<210> 18
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
tggattctga caaggaa 17
<210> 19
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
acgttggatg acacttaagc atcgccccac 30
<210> 20
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
acgttggatg ttacggtagc cacctcaatc 30
<210> 21
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
tctgtgcgcg cgct 14
<210> 22
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
acgttggatg ttcccccgac aaaaaactcc 30
<210> 23
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
acgttggatg acctacaatc acagggacac 30
<210> 24
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
ccggcttctt ctctccctc 19
<210> 25
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 25
acgttggatg caggacaaat tccttctggc 30
<210> 26
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 26
acgttggatg ttggtgctgt gaagccaaag 30
<210> 27
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 27
gaactctaca tttaacctct cc 22
<210> 28
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 28
acgttggatg gggttgtgtt tgttaccctg 30
<210> 29
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 29
acgttggatg gtccatgtgt gtgctttagg 30
<210> 30
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 30
ctgattttcc taaaaaactc ttt 23
<210> 31
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 31
acgttggatg ttgcagcccg ccattagtg 29
<210> 32
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 32
acgttggatg tgtccatcag aacccaaacg 30
<210> 33
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 33
tgcgtcacag tggcg 15
<210> 34
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 34
acgttggatg atgtcagggt agatctcctc 30
<210> 35
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 35
acgttggatg tcaaggacta ttgggagagc 30
<210> 36
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 36
ttgtacttga tgtcgtagtt 20
<210> 37
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 37
acgttggatg tctggtctac ctgtactagc 30
<210> 38
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 38
acgttggatg gtcattccat tcagcagcag 30
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<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 39
cggtggtgag tgc 13
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 40
acgttggatg tcgcattcca cctgtttacg 30
<210> 41
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 41
acgttggatg tacactttca gcgtggtgac 30
<210> 42
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 42
ttcttcttcc tctttaaaag t 21
<210> 43
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 43
acgttggatg ttgagctgca gttcagcttc 30
<210> 44
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 44
acgttggatg tctggcttgt ggccaatttc 30
<210> 45
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 45
ggaaggaaga tgtgatgata 20
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 46
acgttggatg ccgaaaggac ctcagaaatc 30
<210> 47
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 47
acgttggatg tgcttgaccc tcttggttag 30
<210> 48
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 48
acctcagaaa tcatgtca 18
<210> 49
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 49
acgttggatg cacagtgatg tgctttaggc 30
<210> 50
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 50
acgttggatg gtctgactca gttcagacac 30
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 51
gtctgaacaa ccaaaatagt aata 24
<210> 52
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 52
acgttggatg aagtgggtgg tgaaatggtc 30
<210> 53
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 53
acgttggatg tattccagac aaggcaacag 30
<210> 54
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 54
tccttgtaaa tttgctgctc t 21
<210> 55
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 55
acgttggatg tatgtgtcca gtgcaatccc 30
<210> 56
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 56
acgttggatg tcaactgacg ccaagaaagg 30
<210> 57
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 57
gcctggatgt gaagc 15
<210> 58
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 58
acgttggatg gcaaggagac tgaaatagag 30
<210> 59
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 59
acgttggatg aactggcctt ggtccatttg 30
<210> 60
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 60
gtctgcatga agggac 16
<210> 61
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 61
acgttggatg atgaccctga acagtagtgg 30
<210> 62
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
acgttggatg caatggaacg acttgaaggg 30
<210> 63
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
agggaaagtc catctttt 18
<210> 64
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
acgttggatg acagctcaaa gacactctcc 30
<210> 65
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
acgttggatg aggaccaagg tcatttgatg 30
<210> 66
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
ggaaattaat gttgctaaga aaata 25
<210> 67
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
acgttggatg ccagtcttcc agaagaaaac 30
<210> 68
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
acgttggatg cagtattagc aatctttgcc 30
<210> 69
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
cctttctaac ctgaatacct t 21
<210> 70
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
acgttggatg agcgagactc cgtctcaaaa 30
<210> 71
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 71
acgttggatg taaagcagct gtctcttgcc 30
<210> 72
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 72
aaaataaaaa ttaaaaaaaa aagattgc 28
<210> 73
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 73
acgttggatg acagggtttc accatgtagg 30
<210> 74
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
acgttggatg taatcccagc actttgggag 30
<210> 75
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
cctcaagtga tccacc 16
<210> 76
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 76
acgttggatg cttgaaggag aaggtgtctg 30
<210> 77
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 77
acgttggatg tgcacgcctt cacaaagcag 30
<210> 78
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 78
aaggtgtctg tgggag 16
<210> 79
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 79
acgttggatg tcaaatcagt catcagggag 30
<210> 80
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 80
acgttggatg ccaacatttg ctcttgccag 30
<210> 81
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 81
acccttttac atccactg 18
<210> 82
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 82
acgttggatg atgttgacag ctcttaagcg 30
<210> 83
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 83
acgttggatg taaccagctg tgtacctgag 30
<210> 84
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 84
aaacttttcc atggatgtt 19
<210> 85
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 85
acgttggatg tcaacattat gggccactcc 30
<210> 86
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 86
acgttggatg ctcttgtgtt tacatttcc 29
<210> 87
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 87
aagtgactcc taaaccc 17
<210> 88
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 88
acgttggatg atgtgtgagc acaagactgg 30
<210> 89
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 89
acgttggatg tagtgggctt atagcttccg 30
<210> 90
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 90
aaaagaacta cctcgct 17
<210> 91
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 91
acgttggatg tctgacagtc tgacttctgc 30
<210> 92
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 92
acgttggatg tgagatggat ctgcatgagg 30
<210> 93
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 93
cgtgcaaatg ggcagtgttt 20
<210> 94
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 94
acgttggatg atccagtctg acagtcgttg 30
<210> 95
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 95
acgttggatg gcaagtggag aatcagagtg 30
<210> 96
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 96
tgtcactaga gacccg 16
<210> 97
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 97
acgttggatg ctgattaccg agcagatcac 30
<210> 98
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 98
acgttggatg tgtgacagtt catcagcctc 30
<210> 99
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 99
aactggtttg ctcact 16
<210> 100
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 100
acgttggatg cctgtccaat catgtgaagg 30
<210> 101
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 101
acgttggatg cagataaagg caagaggcag 30
<210> 102
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 102
atcatgtgaa ggcttgaa 18
<210> 103
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 103
acgttggatg gatgcaacca tctgctcttg 30
<210> 104
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 104
acgttggatg ctgtgtaaaa gagtttgagg 30
<210> 105
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 105
tctgctcttg aggcagtaaa 20
<210> 106
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 106
acgttggatg gatcagcttc tgctattcac 30
<210> 107
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 107
acgttggatg aactaggacc tgatcctgac 30
<210> 108
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 108
ccctacttca acattataat ct 22