本發(fā)明涉及一種從動物表皮中提取膠原蛋白的方法，具體涉及一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法。
背景技術：
：膠原蛋白是一種細胞外蛋白質，由3條肽鏈擰成螺旋形的纖維狀蛋白質，膠原蛋白含有豐富的氨基酸，其中必需氨基酸占氨基酸總量的15.78％，蛋白質營養(yǎng)價值高，膠原蛋白制品已被廣泛應用于食品、保健食品、化妝品、醫(yī)藥等領域，市場需求急劇增加，因此膠原蛋白的提取工藝越來越受到關注；牛皮中富含膠原蛋白，但是牛皮一般用作皮鞋，皮包，皮帶等各類皮具，其中的膠原蛋白在皮具加工過程中被破壞掉，造成了資源的浪費，在膠原蛋白備受關注的當下，提取方法也是多種多樣，但是由于提取方法的不合理，導致后期對膠原蛋白提純率與純度較低，嚴重影響其應用價值，也浪費了資源，因此如何在傳統(tǒng)提取方法的基礎上進行改進來達到提高膠原蛋白的提取率和純度就顯得尤為重要。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明為解決上述技術問題，提供了一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法。具體是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.15～0.2％的生理鹽水將牛皮浸泡25～30min，用清水沖洗牛皮10～15min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡35～40min，過濾，加入濾渣質量的3～5倍的酒石酸浸泡20～25min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為6～7，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶1.7～2.2∶0.5～0.8∶5.5～6的質量比混合，在55～60℃下熬制45～55min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為5.5～7％，加水，在100℃下攪拌55～65min后，冷卻至40～50℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調節(jié)溶液PH值為4.5～5.5，恒溫攪拌2～3h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質量的60～70％的乙醇，在40～50℃下水浴浸提50～60min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液4～5倍的二氯甲烷，恒溫攪拌90～100min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調至100～120℃，繼續(xù)攪拌10～15min，即可。進一步，所述的脫脂酶，是磷酸酯酶、固醇酶、羧酸酯酶和枯草桿菌脂肪水解酶中的一種。綜上所述，本發(fā)明的有益效果在于：工藝簡單，操作容易，充分利用牛皮資源，避免傳統(tǒng)方法用來生產(chǎn)皮具的單一做法，經(jīng)過本發(fā)明方法明顯提高膠原蛋白的收率，高達75.6％，本發(fā)明方法對膠原蛋白的收率不受原材料的限制。具體實施方式下面對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細的說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施方式，任何在本實施例基本精神上的改進或代替，仍屬于本發(fā)明權利要求所要求保護的范圍。實施例1一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.15％的生理鹽水將牛皮浸泡25min，用清水沖洗牛皮10min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡35min，過濾，加入濾渣質量的3倍的酒石酸浸泡20min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為6，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶1.7∶0.5∶5.5的質量比混合，在55℃下熬制45min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為5.5％，加水，在100℃下攪拌55min后，冷卻至40℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調節(jié)溶液PH值為4.5，恒溫攪拌2h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質量的60％的乙醇，在40℃下水浴浸提50min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液4倍的二氯甲烷，恒溫攪拌90min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調至100℃，繼續(xù)攪拌10min，即可。所述的脫脂酶，是磷酸酯酶。實施例2一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.2％的生理鹽水將牛皮浸泡30min，用清水沖洗牛皮15min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡40min，過濾，加入濾渣質量的5倍的酒石酸浸泡25min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為7，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶2.2∶0.8∶6的質量比混合，在60℃下熬制55min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為7％，加水，在100℃下攪拌65min后，冷卻至50℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調節(jié)溶液PH值為5.5，恒溫攪拌3h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質量的70％的乙醇，在50℃下水浴浸提60min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液5倍的二氯甲烷，恒溫攪拌100min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調至120℃，繼續(xù)攪拌15min，即可。所述的脫脂酶，是固醇酶。實施例3一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.18％的生理鹽水將牛皮浸泡28min，用清水沖洗牛皮13min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡38min，過濾，加入濾渣質量的4倍的酒石酸浸泡23min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為6.5，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶2∶0.7∶5.8的質量比混合，在58℃下熬制50min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為6％，加水，在100℃下攪拌60min后，冷卻至45℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調節(jié)溶液PH值為5，恒溫攪拌2.5h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質量的65％的乙醇，在45℃下水浴浸提55min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液4.5倍的二氯甲烷，恒溫攪拌95min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調至110℃，繼續(xù)攪拌13min，即可。所述的脫脂酶，是羧酸酯酶。實施例4一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.2％的生理鹽水將牛皮浸泡25min，用清水沖洗牛皮15min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡35min，過濾，加入濾渣質量的3倍的酒石酸浸泡25min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為6，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶2.2∶0.5∶5.5的質量比混合，在55℃下熬制55min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為7％，加水，在100℃下攪拌55min后，冷卻至50℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調節(jié)溶液PH值為5.5，恒溫攪拌3h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質量的60％的乙醇，在40℃下水浴浸提60min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液4倍的二氯甲烷，恒溫攪拌90min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調至120℃，繼續(xù)攪拌15min，即可。所述的脫脂酶，是枯草桿菌脂肪水解酶。實施例5一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.2％的生理鹽水將牛皮浸泡25min，用清水沖洗牛皮10min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡35min，過濾，加入濾渣質量的3倍的酒石酸浸泡25min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為7，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶2.2∶0.5∶6的質量比混合，在55℃下熬制45min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為7％，加水，在100℃下攪拌55min后，冷卻至40℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調節(jié)溶液PH值為5.5，恒溫攪拌3h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質量的70％的乙醇，在50℃下水浴浸提50min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液5倍的二氯甲烷，恒溫攪拌90min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調至120℃，繼續(xù)攪拌10min，即可。所述的脫脂酶，是羧酸酯酶。實施例6操作方法同實施例1，不同之處在于將新鮮牛皮更換為保存3個月的干牛皮。實施例7操作方法同實施例1，不同之處在于在步驟(1)中不添加脫脂劑。實施例8操作方法同實施例1，不同之處在于在步驟(3)的精制步驟取消。實驗例對本發(fā)明的實施例1～8的膠原蛋白的收率進行統(tǒng)計，結果如表1所示：表1對比項膠原蛋白(％)實施例174.8實施例275.1實施例375.6實施例475.2實施例574.9實施例675.1實施例741.3實施例855.6說明：實施例1～5為本發(fā)明的膠原蛋白的收率，高達75.6％，實施例6不是新鮮的牛皮，收率和新鮮的牛皮的膠原蛋白的收率接近，說明本發(fā)明方法對膠原蛋白的收率不受原材料的限制，實施例7不添加脫脂劑，極大的減少了膠原蛋白的收率，實施例8沒有精制的步驟，減少了膠原蛋白的收率。實施例6～8均以實施例1為對照，若以實施2～5作為對照進行比較，結論不變。當前第1頁1 2 3