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一株高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12248520閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一株高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiella pneumoniae),其包含序列表中序列1所示的基因組序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiella pneumoniae),其特征在于,其微生物保藏號為CGMCC No.12540。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiella pneumoniae),其特征在于,其是革蘭氏陰性菌,桿狀,有大量黏性的多糖形成的莢膜包覆,有菌毛,無芽孢和鞭毛;其具有O抗原和K抗原,大小為(0.5-0.8)μm×(1-2)μm,兼性厭氧生長,生長溫度范圍:10℃-50℃,最適生長溫度:37℃;生長酸堿度范圍:pH 4-10,最適pH值為6.8。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiella pneumoniae),其特征在于,其常規(guī)生理生化鑒定結(jié)果為:半固體穿刺試驗(yàn)陰性、淀粉水解試驗(yàn)陽性、脂肪水解試驗(yàn)陰性、明膠水解試驗(yàn)陰性、H2S試驗(yàn)陽性、尿素試驗(yàn)陽性、吲哚試驗(yàn)陰性、甲基紅試驗(yàn)陽性、伏普試驗(yàn)陽性、檸檬酸鹽試驗(yàn)陽性、尿酶試驗(yàn)陽性、蔗糖試驗(yàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣、麥芽糖試驗(yàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣、D-山梨醇試驗(yàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣、鼠李糖試驗(yàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣、甘露醇試驗(yàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣、乳糖試驗(yàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣、海藻糖試驗(yàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣。

5.一種權(quán)利要求1-4任一所述高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiella pneumoniae)W14的體外培養(yǎng)方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)、LB-瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng):采集自動釀酒綜合癥患者的新鮮糞便樣品于LB-瓊脂培養(yǎng)基中在37℃下進(jìn)行培養(yǎng)13小時(shí);

(2)、LB-單糖培養(yǎng)基培養(yǎng):挑取步驟(1)得到的單克隆轉(zhuǎn)接至LB-單糖培養(yǎng)基中,37℃,搖床轉(zhuǎn)速120rpm下培養(yǎng)13小時(shí),培養(yǎng)結(jié)束后測定培養(yǎng)液中的酒精濃度,挑選出產(chǎn)酒精濃度最高的菌株,即為所述高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiella pneumoniae),基因組序列見序列表1,命名為W14。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述體外培養(yǎng)方法,其特征在于,LB-瓊脂培養(yǎng)基含胰蛋白胨(tryptone)10g/L,酵母提取物(yeast extract)5g/L,氯化鈉(NaCl)10g/L,瓊脂10g/L,pH 6.8;

LB-單糖培養(yǎng)基pH 6.8,含胰蛋白胨(tryptone)5-15g/L,葡萄糖或果糖2-20wt%,酵母提取物(yeast extract)3-10g/L,氯化鈉(NaCl)5-15g/L;優(yōu)選:胰蛋白胨(tryptone)8-12g/L,葡萄糖或果糖5-10wt%,酵母提取物(yeast extract)3-7g/L,氯化鈉(NaCl)8-12g/L;最優(yōu)選:胰蛋白胨(tryptone)10g/L,葡萄糖10wt%,酵母提取物(yeast extract)5g/L,氯化鈉(NaCl)10g/L,或胰蛋白胨(tryptone)10g/L,果糖8wt%,酵母提取物(yeast extract)5g/L,氯化鈉(NaCl)10g/L。

7.一種權(quán)利要求5或6所述體外培養(yǎng)方法中專用的培養(yǎng)基,其特征在于,含有胰蛋白胨(tryptone)5-15g/L,葡萄糖或果糖2-20wt%,酵母提取物(yeast extract)3-10g/L,氯化鈉(NaCl)5-15g/L;優(yōu)選:胰蛋白胨(tryptone)8-12g/L,葡萄糖或果糖2-10%,酵母提取物(yeast extract)3-7g/L,氯化鈉(NaCl)8-12g/L;最優(yōu)選:胰蛋白胨(tryptone)10g/L,葡萄糖10%,酵母提取物(yeast extract)5g/L,氯化鈉(NaCl)10g/L,或胰蛋白胨(tryptone)10g/L,果糖8%,酵母提取物(yeast extract)5g/L,氯化鈉(NaCl)10g/L。

8.一種制備權(quán)利要求7所述培養(yǎng)基的方法,其特征在于,將胰蛋白胨、葡萄糖或果糖、酵母提取物和氯化鈉置于容器中,加入適量去離子水溶解,用5mol/L NaOH調(diào)pH至7.0,然后用去離子水定容至1L,121℃滅菌15min即得。

9.一種用于篩查和診斷自動釀酒綜合癥的試劑盒,包括權(quán)利要求7所述培養(yǎng)基。

10.權(quán)利要求1-4任一所述高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiella pneumoniae)在篩選治療自動釀酒綜合癥藥物中的應(yīng)用。

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