本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)的領(lǐng)域，尤其涉及一種銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
目前世界范圍內(nèi)藍(lán)藻水華頻發(fā)，其中以微囊藻水華分布最廣、危害最大。其中銅綠微囊藻是形成水華最主要的藻類，并且它經(jīng)常產(chǎn)生微囊藻毒素，嚴(yán)重威脅到其他水生生物甚至是人類的健康，所以銅綠微囊藻也是藍(lán)藻中危害最大的藻類。為了有效防控藍(lán)藻水華，對銅綠微囊藻的深入了解顯得尤為重要。
為了探索行之有效的抑制藻類水華暴發(fā)的途徑，更好的了解藻類水華爆發(fā)的自然條件，就需要進(jìn)行大量的實(shí)驗(yàn)室模擬培養(yǎng)。但是作為水華爆發(fā)的主要藻類，微囊藻的實(shí)驗(yàn)室純培養(yǎng)比較困難，特別是現(xiàn)有的培養(yǎng)方法很難達(dá)到實(shí)驗(yàn)室純化培養(yǎng)銅綠微囊藻的要求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法，使得在培養(yǎng)銅綠微囊藻時(shí)具有存活率高，生長速率快的特點(diǎn)，培養(yǎng)過程中藻液不會變黃，而且不易被其他細(xì)菌污染。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供了一種銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法，包括以下具體步驟：
a、前期準(zhǔn)備：準(zhǔn)備藻種、培養(yǎng)箱以及培養(yǎng)過程中需要用到的玻璃器皿，培養(yǎng)箱需用紫外燈對其滅菌12 小時(shí)以上；玻璃器皿用清洗劑進(jìn)行刷洗，然后用自來水進(jìn)行沖洗，再用10%的稀鹽酸溶液浸泡12小時(shí)，接著用蒸餾水重復(fù)沖洗幾次，最后放置于烘箱中使其烘干；藻種放到高壓蒸汽滅菌鍋中于110 kPa、120℃條件下滅菌30分鐘，待其自然冷卻至室溫后方可使用；
b、銅綠微囊藻的預(yù)培養(yǎng)：在純化培養(yǎng)之前的兩三周內(nèi)，將藻種轉(zhuǎn)至玻璃器皿內(nèi)，玻璃器皿中加入的BG-11培養(yǎng)基，設(shè)置好溫度、光照及光暗比后將玻璃器皿放置于光照的培養(yǎng)箱中，開始馴化和擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)2周后觀察藻種生長狀況是否良好，當(dāng)藻種處于對數(shù)期后期時(shí)，將藻種轉(zhuǎn)接到新的BG-11培養(yǎng)基當(dāng)中，按上述方法進(jìn)行培養(yǎng)，并確保所用到的玻璃器皿在接種過程中是無菌的且未被二次污染，在連續(xù)如此培養(yǎng)2-3次后，用鏡檢觀察確認(rèn)在藻液中有無其他藻類或微生物，如沒有受到污染且藻種生長良好，則可作為待接種藻種液；
c、銅綠微囊藻的接種及培養(yǎng)：選取以上多次預(yù)培養(yǎng)的藻種，采用光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行操作，選用血小板細(xì)胞計(jì)數(shù)法，在400倍的條件下進(jìn)行觀察操作，由以上得出的結(jié)果轉(zhuǎn)換成藻種液的濃度，即每毫升的細(xì)胞數(shù)目；將選取的藻種置于玻璃器皿內(nèi)，玻璃器皿中加入的BG-11培養(yǎng)基，接種藻密度均為5×104cells mL-1，設(shè)置好溫度、光照及光暗比后將玻璃器皿放置于光照的培養(yǎng)箱中，開始純化培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中為防止藻種粘附在玻璃器皿的內(nèi)壁上，每天需間隔一段時(shí)間輕搖玻璃器皿三次。
在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的藻種采用銅綠微囊藻FACHB-1343。
在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的玻璃器皿包括但不限于燒杯、玻璃棒、容量瓶、錐形瓶和吸管。
在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的步驟b中的玻璃器皿采用250ml錐形瓶。
在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的BG-11培養(yǎng)基采用過0.45μm濾膜且高溫滅菌后的150ml BG-11培養(yǎng)基。
在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述的培養(yǎng)的溫度為25℃、光強(qiáng)為50 μE/(m2·s)，光暗比為12：12小時(shí)。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的一種銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法，在培養(yǎng)銅綠微囊藻時(shí)具有存活率高，生長速率快的特點(diǎn)，培養(yǎng)過程中藻液不會變黃，而且不易被其他細(xì)菌污染。
附圖說明
為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖，其中：
圖1 是本發(fā)明銅綠微囊藻是的生長曲線圖。
具體實(shí)施方式
下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
本發(fā)明實(shí)施例包括：
一種銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法，包括以下具體步驟：
a、前期準(zhǔn)備：準(zhǔn)備藻種、培養(yǎng)箱以及培養(yǎng)過程中需要用到的玻璃器皿，培養(yǎng)箱需用紫外燈對其滅菌12 小時(shí)以上；玻璃器皿用清洗劑進(jìn)行刷洗，然后用自來水進(jìn)行沖洗，再用10%的稀鹽酸溶液浸泡12小時(shí)，接著用蒸餾水重復(fù)沖洗幾次，最后放置于烘箱中使其烘干；藻種放到高壓蒸汽滅菌鍋中于110 kPa、120℃條件下滅菌30分鐘，待其自然冷卻至室溫后方可使用；
b、銅綠微囊藻的預(yù)培養(yǎng)：在純化培養(yǎng)之前的兩三周內(nèi)，將藻種轉(zhuǎn)至玻璃器皿內(nèi)，玻璃器皿中加入的BG-11培養(yǎng)基，設(shè)置好溫度、光照及光暗比后將玻璃器皿放置于光照的培養(yǎng)箱中，開始馴化和擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)2周后觀察藻種生長狀況是否良好，當(dāng)藻種處于對數(shù)期后期時(shí)，將藻種轉(zhuǎn)接到新的BG-11培養(yǎng)基當(dāng)中，按上述方法進(jìn)行培養(yǎng)，并確保所用到的玻璃器皿在接種過程中是無菌的且未被二次污染，在連續(xù)如此培養(yǎng)2-3次后，用鏡檢觀察確認(rèn)在藻液中有無其他藻類或微生物，如沒有受到污染且藻種生長良好，則可作為待接種藻種液；
c、銅綠微囊藻的接種及培養(yǎng)：選取以上多次預(yù)培養(yǎng)的藻種，采用光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行操作，選用血小板細(xì)胞計(jì)數(shù)法，在400倍的條件下進(jìn)行觀察操作，由以上得出的結(jié)果轉(zhuǎn)換成藻種液的濃度，即每毫升的細(xì)胞數(shù)目；將選取的藻種置于玻璃器皿內(nèi)，玻璃器皿中加入的BG-11培養(yǎng)基，接種藻密度均為5×104cells mL-1，設(shè)置好溫度、光照及光暗比后將玻璃器皿放置于光照的培養(yǎng)箱中，開始純化培養(yǎng)，純化培養(yǎng)過程中為防止藻種粘附在玻璃器皿的內(nèi)壁上，每天需間隔一段時(shí)間輕搖玻璃器皿三次。
上述中，所述的藻種采用銅綠微囊藻FACHB-1343。所述的玻璃器皿包括但不限于燒杯、玻璃棒、容量瓶、錐形瓶和吸管。其中，所述的步驟b中的玻璃器皿采用250ml錐形瓶。
進(jìn)一步的，所述的BG-11培養(yǎng)基采用過0.45μm濾膜且高溫滅菌后的150ml BG-11培養(yǎng)基。
再進(jìn)一步的，所述的培養(yǎng)的溫度為25℃、光強(qiáng)為50μE/(m2·s)，光暗比為12：12小時(shí)。
實(shí)施例 1
藻種準(zhǔn)備：藻種購買自中科院水生所的銅綠微囊藻FACHB-1343。
按上述培養(yǎng)方法進(jìn)行室內(nèi)純化培養(yǎng)，培養(yǎng)所用的培養(yǎng)箱為賽福恒溫光照培養(yǎng)箱，接種藻密度為5×104cells mL-1。每天在無菌條件下，取藻液，用血球計(jì)數(shù)板在Zeiss Axio Scope A1顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，計(jì)算藻細(xì)胞密度，繪制生長曲線，結(jié)果見圖 1。
從圖 1 可以看出，0-4d 為銅綠微囊藻生長的延滯期，4-12d 為對數(shù)生長期，12d之后進(jìn)入穩(wěn)定期。穩(wěn)定期時(shí)藻細(xì)胞數(shù)能夠達(dá)到2300×104cells mL-1，且培養(yǎng)過程中藻液不會變黃。
綜上所述，本發(fā)明的一種銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法，在培養(yǎng)銅綠微囊藻時(shí)具有存活率高，生長速率快的特點(diǎn)，培養(yǎng)過程中藻液不會變黃，而且不易被其他細(xì)菌污染。
以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其它相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。