本發(fā)明涉及一種藍(lán)藻的培育技術(shù)，尤其涉及一種葛仙米異形胞嵌懸育種方法。

背景技術(shù)：

葛仙米是念珠藻屬(Nostoc Vauch)中擬球狀念珠藻(Nostoc sphaeoides Kützing)的俗稱，它屬于藍(lán)藻門(Cyanophyta)，藍(lán)藻綱(Cyanophyceae)，念珠藻目(Nostocales)，念珠藻科(Nostocaceae)。比發(fā)菜還要珍貴稀有，葛仙米又稱綠色燕窩。不僅如此，葛仙米中含18種氨基酸，其中包括人體必需的八種氨基酸，干物質(zhì)總蛋白高達(dá)56％左右，粗脂肪8.11％，碳水化合物12.69％，灰分10.88％，葉綠素30.98mg/g，抗壞血酸5.50mg/g，維生素C含量接近鮮棗，比山楂高5倍多，比柑桔高5倍；維生素B1、B2高于一般菌藻類；富含礦物質(zhì)和微量元素，還有藻膽蛋白和多糖類生物活性成分，其含量分別可達(dá)10-20％(DW)和25-47％(DW)，葛仙米多糖也是一種重要的生物活性物質(zhì)，表現(xiàn)出了一定的提高機(jī)體免疫力、抗腫瘤的生物學(xué)功效。同時(shí)其含鈣量高于一般蔬菜，是一種極好的天然富鈣營(yíng)養(yǎng)保健食品。

葛仙米的藥用價(jià)值也彌足珍貴，是食藥兩用的佳品?！侗静菥V目》、《藥性考》、《全國(guó)中草藥匯編》等稱葛仙米的功效為：明目益氣、令人有子、解熱清隔、利腸胃、痰火能療。可美容養(yǎng)顏，強(qiáng)身健體，補(bǔ)鈣、抗癌、久食延年、消除疲勞、收斂、治夜盲癥等。

葛仙米藻絲中的異形胞處易發(fā)生斷裂，而產(chǎn)生單個(gè)的異形胞和多細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)藻絲，可有效地將異形胞和多細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)藻絲分離開來。在適宜的條件下異形胞能發(fā)育為新藻體；或在惡劣條件下，異形胞會(huì)形成孢子，而后在適宜的條件下發(fā)育為新藻體。異形胞相比多細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)藻絲而言，抗逆性更好。異形胞具有全套的基因，在一定條件的誘導(dǎo)下表達(dá)，重新萌發(fā)出新藻體。而多細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)藻絲在一定的條件下，形成藻殖段萌發(fā)新藻體。

與現(xiàn)有葛仙米育種技術(shù)的本質(zhì)區(qū)別在于，現(xiàn)有技術(shù)用直接誘導(dǎo)釋放藻殖段或由多細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)藻絲育種，而本發(fā)明用異形胞育種?，F(xiàn)有技術(shù)所用液體充氣懸浮培養(yǎng)，藻殖段動(dòng)態(tài)懸浮，消耗電能較多，不利于生產(chǎn)成本的控制，通氣會(huì)帶入空氣中的污染源，易染雜藻、細(xì)菌、水生動(dòng)物、塵埃、蚊子幼蟲而導(dǎo)致育種的失敗率較高，若對(duì)空氣進(jìn)行處理，增加育種成本。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有葛仙米育種技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種葛仙米單異形胞分離純化方法，把異形胞從營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞中分離純化出來；及利用單個(gè)異形胞繁育出微球體態(tài)的葛仙米藻種的育種方法，并建立異形胞發(fā)育的生活史圖譜。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種葛仙米異形胞嵌懸育種方法，包括以下步驟：

1)利用營(yíng)養(yǎng)液將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的葛仙米誘導(dǎo)形成多異形胞串聯(lián)藻體；

所述營(yíng)養(yǎng)液包括以下組分：氯化鎂0.05-0.08g；磷酸氫二鉀0.01-0.03g，氯化鐵0.003-0.008g，氯化鈣0.02-0.04g，碳酸氫鈉0.01-0.03g，葡萄糖0.005-0.02g，氯化鈉0.005-0.02g，蒸餾水0.5-1L；

所述誘導(dǎo)條件包括：光照強(qiáng)度10000-20000lux，溫度25-30℃，震蕩培養(yǎng)；

2)裂解所述多異形胞串聯(lián)藻體，分離獲得葛仙米單體異形胞；

3)培養(yǎng)所述葛仙米單體異形胞，獲得葛仙米藻體；

所用培養(yǎng)液包括以下組分：瓊脂粉0.1-0.5g，葛仙米多糖干粉0.1-0.8g，硫酸鎂0.035-0.075g，磷酸氫二鉀0.001-0.004g，氯化鈣0.003-0.006g，氯化鐵0.0003-0.0008g，玉米素0.0001-0.0005g，土壤浸提液20-80mL，蒸餾水0.5-1L；

所述培養(yǎng)條件包括：光照強(qiáng)度500-3000lux的紅光，溫度20-38℃，濕度60-90％，靜置培養(yǎng)。

上述育種方法步驟1)中，

優(yōu)選地，所述營(yíng)養(yǎng)液包括以下組分：氯化鎂0.075g；磷酸氫二鉀0.02g，氯化鐵0.006g，氯化鈣0.036g，碳酸氫鈉0.02g，葡萄糖0.01g，氯化鈉0.01g，蒸餾水1L。

優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)條件包括：光照強(qiáng)度12000lux，溫度28-30℃，震蕩培養(yǎng)。

優(yōu)選地，所述震蕩培養(yǎng)轉(zhuǎn)速為100-200rpm；進(jìn)一步優(yōu)選為120rpm。

優(yōu)選地，所述對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的葛仙米球徑為3mm左右。

一般地，震蕩培養(yǎng)15-20天即可誘導(dǎo)形成多異形胞串聯(lián)的藻體。

一般以誘導(dǎo)出現(xiàn)2-3個(gè)異形胞串聯(lián)的藻體為止，可通過以定時(shí)取樣鏡檢的方法判斷。

上述育種方法步驟2)中，因異形胞的抗逆性好于營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，通過一定的處理裂解營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，連同離心技術(shù)，將異形胞和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞分離開來，獲得純度高活性高的單體異形胞。

上述育種方法步驟2)具體包括如下步驟：

1)消毒：將所述多異形胞串聯(lián)藻體用酒精消毒后立即用無菌蒸餾水清洗去掉殘留酒精；優(yōu)選用70-75％酒精消毒。

2)破碎：將消毒后的所述多異形胞串聯(lián)藻體加適量無菌蒸餾水破碎，制成藻漿，用0.1mm的濾網(wǎng)過濾，得濾液和濾渣(即葛仙米濾渣)；優(yōu)選地，以g/mL計(jì)，葛仙米(即消毒后的所述多異形胞串聯(lián)藻體)濕重量與無菌蒸餾水體積比為1:5～1:10，進(jìn)一步優(yōu)選為1:8。過濾后所得濾渣(即葛仙米濾渣)可用作后續(xù)步驟制備葛仙米多糖干粉。

3)裂解營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞：將步驟2)制備的濾液離心，去上清，加入適量甘油溶解沉淀，置于-70～-80℃(例如超低溫冰箱中)下冷凍處理24-48h；一般地，可于1000rpm離心5min。優(yōu)選地，用10％(體積分?jǐn)?shù))的甘油溶液溶解沉淀；10％(體積分?jǐn)?shù))的甘油溶液體積與步驟2)制備的濾液的體積比為1:1。

4)紫外輻照：將步驟3)冷凍處理后的樣品于15-20℃下融化，離心(一般可于1000rpm離心5min)，去掉甘油，用適量無菌蒸餾水溶解，紫外輻照24-48h，進(jìn)一步滅活殘留的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞；

5)收集異形胞：收集步驟4)中的細(xì)胞液，離心(一般可于800-1000rpm離心5-10min)，去上清，收集沉淀即得葛仙米單體異形胞。

一般可將步驟4)中的細(xì)胞液均分到50mL離心管，用蒸餾水定容到50mL刻度后，再進(jìn)行離心。

上述育種方法步驟3)中，

優(yōu)選地，所用培養(yǎng)液包括以下組分：瓊脂粉0.3g，葛仙米多糖干粉0.45g，硫酸鎂0.05g，磷酸氫二鉀0.0025g，氯化鈣0.0045g，氯化鐵0.00055g，玉米素0.0003g，土壤浸提液50mL，蒸餾水1L。

優(yōu)選地，所述培養(yǎng)條件包括：光照強(qiáng)度2000lux的紅光，溫度28-30℃，濕度75％，靜置培養(yǎng)。

本發(fā)明紅光可采用LED作為光源，紅光的波長(zhǎng)為645nm。

本發(fā)明中葛仙米多糖干粉可選用市售的或按現(xiàn)有技術(shù)制備的產(chǎn)品。

優(yōu)選地，所述葛仙米多糖干粉的制備方法包括以下步驟：以葛仙米或上述步驟所得葛仙米濾渣為原料，加適量蒸餾水稀釋，置于0～-80℃(例如超低溫冰箱中)冷凍處理3次，每次24-48小時(shí)；取出融化，離心(一般可于6000-8000rpm離心5-10min)，去上清，收集沉淀，研磨成漿，濃縮，噴霧干燥(溫度60-80℃)，收集干粉過100-200目篩，即得葛仙米多糖干粉。

本發(fā)明中土壤浸提液可按現(xiàn)有技術(shù)方法制備。

優(yōu)選地，所述土壤浸提液的制備方法包括以下步驟：以g/L計(jì)，按照土壤重量與地下水體積比為100-200:1-2混勻，90-100℃水浴加熱3次，每次3-5小時(shí)；冷卻沉降，吸取上清液，抽濾，濾液滅菌，即得所述土壤浸提液?？芍糜?-4℃冰箱冷藏備用。所述滅菌可采用本領(lǐng)域常規(guī)方法，例如高壓蒸汽滅菌，121℃，1h。

上述育種方法步驟3)中，當(dāng)在培養(yǎng)液中能肉眼觀察綠色小顆粒藻體時(shí)，可定期取樣鏡檢觀察；當(dāng)葛仙米新藻體球徑長(zhǎng)到0.1-0.25mm，可用0.1mm分樣篩收集即得葛仙米藻體。

本發(fā)明還包括一種誘導(dǎo)葛仙米(尤其是對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的葛仙米)形成多異形胞串聯(lián)藻體的營(yíng)養(yǎng)液，所述營(yíng)養(yǎng)液包括以下組分：氯化鎂0.05-0.08g；磷酸氫二鉀0.01-0.03g，氯化鐵0.003-0.008g，氯化鈣0.02-0.04g，碳酸氫鈉0.01-0.03g，葡萄糖0.005-0.02g，氯化鈉0.005-0.02g，蒸餾水0.5-1L。

優(yōu)選地，所述營(yíng)養(yǎng)液包括以下組分：氯化鎂0.075g；磷酸氫二鉀0.02g，氯化鐵0.006g，氯化鈣0.036g，碳酸氫鈉0.02g，葡萄糖0.01g，氯化鈉0.01g，蒸餾水1L。

本發(fā)明還包括一種培養(yǎng)葛仙米單體異形胞形成葛仙米藻體的培養(yǎng)液，所述培養(yǎng)液包括以下組分：瓊脂粉0.1-0.5g，葛仙米多糖干粉0.1-0.8g，硫酸鎂0.035-0.075g，磷酸氫二鉀0.001-0.004g，氯化鈣0.003-0.006g，氯化鐵0.0003-0.0008g，玉米素0.0001-0.0005g，土壤浸提液20-80mL，蒸餾水0.5-1L。

優(yōu)選地，所用培養(yǎng)液包括以下組分：瓊脂粉0.3g，葛仙米多糖干粉0.45g，硫酸鎂0.05g，磷酸氫二鉀0.0025g，氯化鈣0.0045g，氯化鐵0.00055g，玉米素0.0003g，土壤浸提液50mL，蒸餾水1L。

本發(fā)明所述營(yíng)養(yǎng)液、培養(yǎng)液均可用本領(lǐng)域常規(guī)方法制備。

本發(fā)明還包括上述營(yíng)養(yǎng)液或上述培養(yǎng)液在葛仙米異形胞嵌懸育種上的應(yīng)用。

本發(fā)明利用瓊脂粉和葛仙米多糖干粉形成牢固的架橋作用，增大培養(yǎng)液的浮力，使得異形胞的重力與浮力達(dá)到平衡，一方面將營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)均勻分散，另一方面是一種將異形胞均勻分散且靜懸于培養(yǎng)液中的培養(yǎng)模式，無污染源，成功率高，無需消耗電能來進(jìn)行通氣培養(yǎng)，育種成本更低。

本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)：

1、葛仙米藻種由異形胞分化而來，而非藻殖段或營(yíng)養(yǎng)藻絲發(fā)育而來。

2、相比藻殖段而言，異形胞育種，可排除藻殖段內(nèi)細(xì)胞間的相互影響。

3、在葛仙米多糖干粉制備時(shí)，用超低溫和噴霧干燥時(shí)高溫破壞葛仙米多糖干粉中殘留的藻膽素，排除色素對(duì)光的遮擋作用，保證培養(yǎng)液透光性能，有利于異形胞的發(fā)育。

4、在培養(yǎng)液中，由瓊脂粉和葛仙米多糖干粉溶解后具有蠕動(dòng)性，中間具有間隙，便于與空氣進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)交換。

5、在培養(yǎng)液中加入玉米素、土壤浸提液來有效促進(jìn)異形胞的分化，縮短了制種周期。本發(fā)明采用LED紅光，促進(jìn)了發(fā)育，同時(shí)能耗較低。

6、利用葛仙米多糖及瓊脂粉對(duì)營(yíng)養(yǎng)的吸附作用，巧妙地將各營(yíng)養(yǎng)成分均勻分散，保證懸浮異形胞的發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)需求。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1培養(yǎng)裝置示意圖，其中，1為培養(yǎng)裝置殼體，2為嵌懸的葛仙米單異形胞；3為透明浮力較大的培養(yǎng)液；4為透明三角瓶；5為封口罩；6為波長(zhǎng)為645nm的LED紅光光源；7為培養(yǎng)裝置內(nèi)部空間殺菌裝置；8為培養(yǎng)裝置內(nèi)部濕度控制裝置；9為培養(yǎng)裝置內(nèi)部控溫系統(tǒng)。

圖2為葛仙米從單異形胞到微球體的發(fā)育過程(即生活史)，其中，A：透明的單體異形胞，如同句號(hào)，體積非常小；B：透明的雙環(huán)細(xì)胞，分成明顯的內(nèi)環(huán)和外環(huán)，且細(xì)胞體積顯著增大；C：細(xì)胞體積進(jìn)一步增大，外環(huán)增厚且顏色加深。內(nèi)環(huán)消失，變成折光性較強(qiáng)的塊狀，塊狀的邊緣出現(xiàn)一個(gè)內(nèi)陷口；D：內(nèi)層裂解成多塊，外環(huán)變薄分化成外層結(jié)構(gòu)；E：內(nèi)部出現(xiàn)球狀的藻細(xì)胞雛形，外層進(jìn)一步變薄，包裹飽滿；F：藻絲細(xì)胞雛形通過細(xì)胞分裂，內(nèi)部細(xì)胞數(shù)量增多，但排列紊亂，藻細(xì)胞間未串成念珠狀，外層增厚且透明；G：在內(nèi)部靠近外層的部位，分化出新的內(nèi)生異形胞；H：藻絲細(xì)胞進(jìn)一步增多，內(nèi)部藻絲細(xì)胞間無間隙，群體個(gè)頭變大、無外生端異形胞的微球體；I：細(xì)胞連成念珠狀，藻絲間隙明顯，透明層外凸形成芽體，且藻絲向芽體內(nèi)遷移；J：芽體內(nèi)藻絲數(shù)量增多，形成長(zhǎng)形雙球狀連體，外層內(nèi)陷，內(nèi)陷處的藻絲橫向排列；K：外層極度內(nèi)陷，分裂成2個(gè)球體；L：通過發(fā)育，藻體體積增大；通過不斷地出芽及群體二分裂，繁育出更多的小藻體。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件，或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可通過正規(guī)渠道商購買得到的常規(guī)產(chǎn)品。

以下實(shí)施例所用葛仙米多糖干粉的制備方法包括如下步驟

A、以實(shí)施例1步驟二所得葛仙米濾渣為原料。

B、加蒸餾水稀釋，放入超低溫冰箱-79℃處理24小時(shí)，重復(fù)3次。

C、取出融化，在6000rpm離心10min，去掉上清液的藻膽素，收集離心沉淀。

D、利用超細(xì)研磨機(jī)將沉淀物磨成漿，濃縮。

E、將步驟D中濃縮物在80℃下噴霧干燥，收集干粉過200目篩，即得葛仙米多糖干粉。

以下實(shí)施例所用土壤浸提液的制備方法包括如下步驟：

A、選土：選擇肥沃的新鮮土壤。

B、稱取土壤裝入2000mL的三角瓶中，加入地下水。

土水配比：土壤100-200g，地下水：1-2L

C、將三角瓶放在90-100℃下水浴加熱3次，每次3-5小時(shí)。

D、冷卻沉降，用虹吸法將上清液吸入2000mL三角瓶。

E、將收集的上清液進(jìn)行抽濾，收集濾液，裝入2000mL三角瓶，封口。

F、將抽濾液于高壓蒸汽滅菌(121℃，1h)，冷卻即得所制，置于1-4℃冰箱冷藏，備用。

實(shí)施例1用單體異形胞繁育葛仙米藻種

步驟一、誘導(dǎo)形成多異形胞串聯(lián)藻體；

挑選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的3mm葛仙米，按15g/L接入裝有無菌營(yíng)養(yǎng)液的2000mL三角瓶，在瓶口加上封口膜，而后置于恒溫?fù)u床上，120rmp，12000Lux，28℃，高密度搖晃培養(yǎng)18天，取樣鏡檢觀察到藻絲內(nèi)出現(xiàn)2-3個(gè)異形胞串聯(lián)為止。

所述營(yíng)養(yǎng)液組分為：氯化鎂0.075g；磷酸氫二鉀0.02g，氯化鐵0.006g，氯化鈣0.036g，碳酸氫鈉0.02g，葡萄糖0.01g，氯化鈉0.01g，蒸餾水1L。制備方法包括按配比稱取各原料，按常規(guī)方法混勻、滅菌。

步驟二、分離異形胞：異形胞的抗逆性好于營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，通過一定的處理裂解營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，連同離心技術(shù)，將異形胞和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞分離開來，獲得純度高活性高的葛仙米單體異形胞。

步驟三、配制異形胞培養(yǎng)液：按以下組分配制，于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，121℃，滅菌60min，冷卻即得。

培養(yǎng)液中的組分：瓊脂粉0.3g，葛仙米多糖干粉0.45g，硫酸鎂0.05g，磷酸氫二鉀0.0025g，氯化鈣0.0045g，氯化鐵0.00055g，玉米素0.0003g，土壤浸提液50mL，蒸餾水1L。

步驟四、接異形胞培養(yǎng)：將步驟二中分離的葛仙米異形胞接種于裝有無菌培養(yǎng)液的三角瓶中，搖晃使得異形胞均勻分散，嵌懸于培養(yǎng)液中，封閉瓶口。于光強(qiáng)2000lux的LED紅光、溫度30℃、濕度75％的培養(yǎng)空間靜置培養(yǎng)；可采用圖1所示的裝置培養(yǎng)；

步驟五、鏡檢及收集藻種：在培養(yǎng)液中能肉眼觀察綠色小顆粒藻體時(shí)，定期取樣鏡檢觀察，當(dāng)新藻體球徑到0.1mm，用0.1mm分樣篩收集即得。

其中，步驟二分離異形胞具體包括以下步驟：

1)消毒：選多異形胞串聯(lián)的葛仙米15g，加70-75％酒精浸泡5秒，取出立即用無菌蒸餾水清洗3次，去掉殘留酒精。

2)破碎及過濾：按葛仙米重量(濕重):無菌蒸餾水體積為1g/8mL的配比，倒入粉碎機(jī)中將葛仙米粉碎成藻漿，再用0.1mm的濾網(wǎng)過濾，分別收集濾液和濾渣(即葛仙米濾渣)。

3)裂解營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞：將濾液分裝入50mL的EP(eppendorf)管內(nèi)，1000rpm離心5分鐘，去掉上清液，每管加入50mL的10％(體積分?jǐn)?shù))的甘油溶液溶解沉淀，而后放入超低溫冰箱，-80℃下處理45h。

4)紫外輻照：取出于15-20℃下融化，于1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，去掉甘油，用少量無菌蒸餾水溶解，而后紫外輻照30h，進(jìn)一步滅活殘留的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。

5)收集異形胞：收集步驟4)中的細(xì)胞液，均分到50mL離心管，用蒸餾水定容到50mL刻度后，900rpm離心10min，去上清收集沉淀即得葛仙米單體異形胞。

培養(yǎng)結(jié)論：

異形胞育種的生活史與藻殖段育種的生活史(參見中國(guó)專利公布號(hào)CN104031865A)是具有本質(zhì)的區(qū)別。藻殖段發(fā)育為多細(xì)胞同時(shí)發(fā)育，而單個(gè)異形胞的發(fā)育為單細(xì)胞發(fā)育。藻殖段發(fā)育形成端異形胞，且外生的微群體，而異形胞發(fā)育形成內(nèi)生異形胞的微群體。發(fā)育后期是以出芽及群體二分裂的方式產(chǎn)生新藻體，從而增加細(xì)胞數(shù)量，達(dá)到育種的目的。由此可見，葛仙米異形胞具有全能性，在適宜條件下，可以發(fā)育出新的葛仙米藻體。

對(duì)比例1

與實(shí)施例1的區(qū)別僅在于：步驟一對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的葛仙米群體，不經(jīng)營(yíng)養(yǎng)液誘導(dǎo)產(chǎn)生多異形胞串聯(lián)藻體，直接裂解分離純化得到異形胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，得到的單體異形胞極少，發(fā)育的密度急劇下降。所以實(shí)施例1中的營(yíng)養(yǎng)液的誘導(dǎo)產(chǎn)生多異形胞串聯(lián)藻體是必要的，提高分離純化異形胞得率及具有顯著提高異形胞存活率的效應(yīng)。

對(duì)比例2

與實(shí)施例1的區(qū)別僅在于：步驟三所選用的光源為日光燈，相比紅光源而言，異形胞的育種周期延長(zhǎng)了5天，結(jié)果延長(zhǎng)了異形胞從雙環(huán)細(xì)胞發(fā)育出藻絲細(xì)胞雛形的(生活史：A-D)周期。

對(duì)比例3

與對(duì)比例2的區(qū)別僅在于：步驟三中異形胞培養(yǎng)液不加玉米素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)異形胞停滯不發(fā)育。

對(duì)比例4

與實(shí)施例1的區(qū)別僅在于：步驟三中異形胞培養(yǎng)液分別加入10mL和100mL的土壤浸提液。當(dāng)加10mL土壤浸提液時(shí)，異形胞發(fā)育受阻；當(dāng)加100mL土壤浸提液時(shí)，異形胞雖能發(fā)育，但發(fā)育密度下降。表現(xiàn)出營(yíng)養(yǎng)不良阻礙發(fā)育及營(yíng)養(yǎng)過剩降低存活率的趨勢(shì)。

綜上所述，實(shí)施例1與對(duì)比例比較而言，誘導(dǎo)產(chǎn)生多異形胞串聯(lián)藻體、紅光、玉米素、適量的土壤浸提液對(duì)異形胞的發(fā)育是必要的。由對(duì)比例的結(jié)果看，對(duì)比例的培養(yǎng)效果都差于實(shí)施例1。主要表現(xiàn)出降低異形胞存活率，發(fā)育遲緩，降低異形胞分離純化得率，延長(zhǎng)發(fā)育周期。因而實(shí)施例1的培養(yǎng)條件及培養(yǎng)方法、培養(yǎng)液最有利于異形胞發(fā)育。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。