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一種葛仙米異形胞嵌懸育種方法與流程

文檔序號:12248485閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種葛仙米異形胞嵌懸育種方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)利用營養(yǎng)液將對數(shù)生長期的葛仙米誘導形成多異形胞串聯(lián)藻體;

所述營養(yǎng)液包括以下組分:氯化鎂0.05-0.08g;磷酸氫二鉀0.01-0.03g,氯化鐵0.003-0.008g,氯化鈣0.02-0.04g,碳酸氫鈉0.01-0.03g,葡萄糖0.005-0.02g,氯化鈉0.005-0.02g,蒸餾水0.5-1L;

所述誘導條件包括:光照強度10000-20000lux,溫度25-30℃,震蕩培養(yǎng);

2)裂解所述多異形胞串聯(lián)藻體,分離獲得葛仙米單體異形胞;

3)培養(yǎng)所述葛仙米單體異形胞,獲得葛仙米藻體;

所用培養(yǎng)液包括以下組分:瓊脂粉0.1-0.5g,葛仙米多糖干粉0.1-0.8g,硫酸鎂0.035-0.075g,磷酸氫二鉀0.001-0.004g,氯化鈣0.003-0.006g,氯化鐵0.0003-0.0008g,玉米素0.0001-0.0005g,土壤浸提液20-80mL,蒸餾水0.5-1L;

所述培養(yǎng)條件包括:光照強度500-3000lux的紅光,溫度20-38℃,濕度60-90%,靜置培養(yǎng)。

2.根據(jù)權利要求1所述的育種方法,其特征在于,

步驟1)所述營養(yǎng)液包括以下組分:氯化鎂0.075g;磷酸氫二鉀0.02g,氯化鐵0.006g,氯化鈣0.036g,碳酸氫鈉0.02g,葡萄糖0.01g,氯化鈉0.01g,蒸餾水1L;和/或,

步驟1)所述誘導條件包括:光照強度12000lux,溫度28-30℃,震蕩培養(yǎng)。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的育種方法,其特征在于,步驟2)包括如下步驟:

1)消毒:將所述多異形胞串聯(lián)藻體用酒精消毒后立即用無菌蒸餾水清洗去掉殘留酒精;

2)破碎:將消毒后的所述多異形胞串聯(lián)藻體加適量無菌蒸餾水后破碎,制成藻漿,用0.1mm的濾網(wǎng)過濾,得濾液和濾渣;

3)裂解營養(yǎng)細胞:將步驟2)制備的濾液離心,去上清,加入適量甘油溶解沉淀,置于-70~-80℃下冷凍處理24-48h;

4)紫外輻照:將步驟3)冷凍處理后的樣品于15-20℃下融化,離心,去掉甘油,用適量無菌蒸餾水溶解,紫外輻照24-48h,進一步滅活殘留的營養(yǎng)細胞;

5)收集異形胞:收集步驟4)中的細胞液,離心,去上清,收集沉淀即得葛仙米單體異形胞。

4.根據(jù)權利要求1或2所述的育種方法,其特征在于,

步驟3)所用培養(yǎng)液包括以下組分:瓊脂粉0.3g,葛仙米多糖干粉0.45g,硫酸鎂0.05g,磷酸氫二鉀0.0025g,氯化鈣0.0045g,氯化鐵0.00055g,玉米素0.0003g,土壤浸提液50mL,蒸餾水1L;和/或,

步驟3)所述培養(yǎng)條件包括:光照強度2000lux的紅光,溫度28-30℃,濕度75%,靜置培養(yǎng)。

5.根據(jù)權利要求1或2所述的育種方法,其特征在于,

所述葛仙米多糖干粉的制備方法包括以下步驟:以葛仙米或權利要求3所述方法所得葛仙米濾渣為原料,加適量蒸餾水稀釋,置于0~-80℃冷凍處理3次,每次24-48小時;取出融化,離心,去上清,收集沉淀,研磨成漿,濃縮,噴霧干燥,收集干粉過100-200目篩,即得葛仙米多糖干粉。

6.根據(jù)權利要求1或2所述的育種方法,其特征在于,所述土壤浸提液的制備方法包括以下步驟:以g/L計,按照土壤重量與地下水體積比為100-200:1-2混勻,90-100℃水浴加熱3次,每次3-5小時;冷卻沉降,吸取上清液,抽濾,濾液滅菌,即得所述土壤浸提液。

7.一種誘導葛仙米形成多異形胞串聯(lián)藻體的營養(yǎng)液,其特征在于,所述營養(yǎng)液包括以下組分:氯化鎂0.05-0.08g;磷酸氫二鉀0.01-0.03g,氯化鐵0.003-0.008g,氯化鈣0.02-0.04g,碳酸氫鈉0.01-0.03g,葡萄糖0.005-0.02g,氯化鈉0.005-0.02g,蒸餾水0.5-1L;

優(yōu)選地,所述營養(yǎng)液包括以下組分:氯化鎂0.075g;磷酸氫二鉀0.02g,氯化鐵0.006g,氯化鈣0.036g,碳酸氫鈉0.02g,葡萄糖0.01g,氯化鈉0.01g,蒸餾水1L。

8.一種培養(yǎng)葛仙米單體異形胞形成葛仙米藻體的培養(yǎng)液,其特征在于,所述培養(yǎng)液包括以下組分:瓊脂粉0.1-0.5g,葛仙米多糖干粉0.1-0.8g,硫酸鎂0.035-0.075g,磷酸氫二鉀0.001-0.004g,氯化鈣0.003-0.006g,氯化鐵0.0003-0.0008g,玉米素0.0001-0.0005g,土壤浸提液20-80mL,蒸餾水0.5-1L;

優(yōu)選地,所用培養(yǎng)液包括以下組分:瓊脂粉0.3g,葛仙米多糖干粉0.45g,硫酸鎂0.05g,磷酸氫二鉀0.0025g,氯化鈣0.0045g,氯化鐵0.00055g,玉米素0.0003g,土壤浸提液50mL,蒸餾水1L。

9.權利要求7所述營養(yǎng)液或權利要求8所述培養(yǎng)液在葛仙米異形胞嵌懸育種上的應用。

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