本發(fā)明涉及微生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一株高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株，及其在篩選治療自動釀酒綜合癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：腸道微生態(tài)菌群是一個復(fù)雜的環(huán)境，由數(shù)以百萬億的細菌、真菌、病毒組成，是人體自身細胞的十倍。寄居在腸道中的微生物與機體的生理和代謝有重要的相互作用。腸道微生物幫助機體從食物中攝取能量，促進營養(yǎng)物質(zhì)的氧化和吸收。腸道微生態(tài)菌群與機體健康和疾病之間的相互作用已經(jīng)引起越來越廣泛的關(guān)注。Sarkola(SarkolaT,ErikssonCJ.Effectof4-methylpyrazoleonendogenousplasmaethanolandmethanollevelsinhumans.AlcoholClinExpRes2001；25(4):513-516)研究顯示，在正常情況下，人體自身細胞會產(chǎn)生酒精，機體攝入不含酒精的食物后，血酒精水平會增高，說明腸道微生物是內(nèi)源性酒精的主要來源。內(nèi)源性酒精在肝臟乙醇脫氫酶、過氧化氫酶、微粒體乙醇氧化系統(tǒng)等的作用下，迅速通過門靜脈排出體外。然而，腸道菌群失調(diào)或者真菌過度生長時，則會在飲食中碳水化合物的誘導(dǎo)下，機體酒精水平顯著升高，引發(fā)自動釀酒綜合癥。自動釀酒綜合癥是指病人在沒有攝入酒精的情況下出現(xiàn)醉酒狀態(tài)。1948年，Ladkin(LadkinRG,DavisJNP.RuptureofthestomachinanAfricanchild.BMJ.1948；I:644.)首次報道了人體胃腸道內(nèi)源性酒精的產(chǎn)生。IwataK.A的研究顯示，在1972年之前，共12例自動釀酒綜合癥病例被報道，并且是由于胃腸道酵母發(fā)酵所致。1976年，Kaji(KajiH,AsanumaY,IdeH,SaitoN,HisamuraM,MuraoM,YoshidaT,TakahashiK.Theauto-brewerysyndrome--therepeatedattacksofalcoholicintoxicationduetotheovergrowthofCandida(albicans)inthegastrointestinaltract.MaterMedPol1976；8:429-435.)報道了一名女性在食用碳水化合物之后出現(xiàn)醉酒，研究人員取其糞便樣品進行體外培養(yǎng)，培養(yǎng)出白色念珠菌和假絲酵母菌，并確定其為致病菌，最終這位女士通過服用殺真菌藥物同時限制碳水化合物的攝入使癥狀得到緩解。2013年，Cordell(CordellB,McCarthyJ.ACaseStudyofGutFermentationSyndrome(Auto-Brewery)withSaccharomycescerevisiaeastheCausativeOrganism.IntJClinMed2013；4:309-312)報道了一例61歲的男性自動釀酒綜合癥患者，該病例最終鑒定為釀酒酵母菌所致。至今，所有已報道的自動釀酒綜合癥均歸因于腸道真菌發(fā)酵碳水化合物而產(chǎn)生過量酒精所致。目前，針對自動釀酒綜合癥的患者，臨床上采用采集其消化道內(nèi)的樣品(腸液或者糞便)進行體外的真菌培養(yǎng)及鑒定，得到的致病菌多為釀酒酵母菌，白色念珠菌，假絲酵母菌等真菌，然后選擇抗真菌藥物對患者進行治療，患者的癥狀可以得到緩解。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)缺陷，第一方面，提供一種可用于篩選治療自動釀酒綜合癥藥物的一株高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiellapneumoniae)，其包含序列表中序列1所示的基因組序列。即肺炎克雷伯氏菌，其微生物保藏號為CGMCCNo.12540。其是革蘭氏陰性菌，桿狀，有大量黏性的多糖形成的莢膜包覆，有菌毛，無芽孢和鞭毛；其具有O抗原和K抗原，大小為(0.5-0.8)μm×(1-2)μm，兼性厭氧生長，生長溫度范圍：10℃-50℃，最適生長溫度：37℃；生長酸堿度范圍：pH4-10，最適pH值為6.8。其常規(guī)生理生化鑒定結(jié)果為：半固體穿刺試驗陰性、淀粉水解試驗陽性、脂肪水解試驗陰性、明膠水解試驗陰性、H2S試驗陽性、尿素試驗陽性、吲哚試驗陰性、甲基紅試驗陽性、伏普試驗陽性、檸檬酸鹽試驗陽性、尿酶試驗陽性、蔗糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、麥芽糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、D-山梨醇試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、鼠李糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、甘露醇試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、乳糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、海藻糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣。第二方面，本發(fā)明提供一種上述高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiellapneumoniae)W14的體外培養(yǎng)方法，包括以下步驟：(1)、LB-瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)：采集自動釀酒綜合癥患者的新鮮糞便樣品于LB-瓊脂培養(yǎng)基中在37℃下進行培養(yǎng)13小時；(2)、LB-單糖培養(yǎng)基培養(yǎng)：挑取步驟(1)得到的單克隆轉(zhuǎn)接至LB-單糖培養(yǎng)基中，37℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm下培養(yǎng)13小時，培養(yǎng)結(jié)束后測定培養(yǎng)液中的酒精濃度，挑選出產(chǎn)酒精濃度最高的菌株，即為所述高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiellapneumoniae)，基因組序列見序列表1，命名為W14。LB-瓊脂培養(yǎng)基含胰蛋白胨(tryptone)10g/L，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L，瓊脂10g/L，pH6.8；LB-單糖培養(yǎng)基pH6.8，含胰蛋白胨(tryptone)5-15g/L，葡萄糖或果糖2-20wt％，酵母提取物(yeastextract)3-10g/L，氯化鈉(NaCl)5-15g/L；優(yōu)選：胰蛋白胨(tryptone)8-12g/L，葡萄糖或果糖5-10wt％，酵母提取物(yeastextract)3-7g/L，氯化鈉(NaCl)8-12g/L；最優(yōu)選：胰蛋白胨(tryptone)10g/L，葡萄糖10wt％，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L，或胰蛋白胨(tryptone)10g/L，果糖8wt％，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L。第三方面，本發(fā)明提供一種上述體外培養(yǎng)方法中專用的培養(yǎng)基，含有胰蛋白胨(tryptone)5-15g/L，葡萄糖或果糖2-20wt％，酵母提取物(yeastextract)3-10g/L，氯化鈉(NaCl)5-15g/L；優(yōu)選：胰蛋白胨(tryptone)8-12g/L，葡萄糖或果糖2-10％，酵母提取物(yeastextract)3-7g/L，氯化鈉(NaCl)8-12g/L；最優(yōu)選：胰蛋白胨(tryptone)10g/L，葡萄糖10％，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L，或胰蛋白胨(tryptone)10g/L，果糖8％，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L。第四方面，本發(fā)明提供一種制備上述培養(yǎng)基的方法，將胰蛋白胨、葡萄糖或果糖、酵母提取物和氯化鈉置于容器中，加入適量去離子水溶解，用5mol/LNaOH調(diào)pH至7.0，然后用去離子水定容至1L，121℃滅菌15min即得。第五方面，本發(fā)明提供一種用于篩查和診斷自動釀酒綜合癥的試劑盒，包括上述培養(yǎng)基。第六方面，本發(fā)明提供上述高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株(Klebsiellapneumoniae)在篩選治療自動釀酒綜合癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的一株肺炎克雷伯桿菌(Klebsiellapneumoniae)是自動釀酒綜合癥患者體內(nèi)分離得到的，本發(fā)明確認其是一株能夠引起自動釀酒綜合癥的細菌，該肺炎克雷伯桿菌不僅生長速率較快，在葡萄糖、果糖的誘導(dǎo)下具有很高的產(chǎn)酒能力，可作為需考察的標準菌，可用于對于臨床自動釀酒綜合癥疾病用藥的篩選中。附圖說明圖1所示為W14在不同培養(yǎng)基中的生長速率圖；圖2所示為W14在不同濃度葡萄糖和培養(yǎng)條件下的產(chǎn)酒能力圖；圖3所示為W14在不同濃度果糖和培養(yǎng)條件下的產(chǎn)酒能力圖。具體實施方式2014年6月，發(fā)明人對一名27歲的自釀酒綜合征男性患者進行了研究，該患者周期性發(fā)作，其血液酒精濃度最高可到400mmol/L。該患者腸道微生態(tài)菌群顯著失調(diào)，測序及微生物培養(yǎng)均未檢測到真菌存在。該患者腸道中腸桿菌科過度富集，尤其在其發(fā)病階段，腸桿菌科(后來驗證其主要為肺炎克雷伯桿菌)豐度顯著升高。通過體外發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，證實了單糖和多糖是其發(fā)病的飲食誘因。同時，亞胺培南被篩選出作為敏感藥物，可以有效抑制產(chǎn)酒細菌的增殖，最終通過抗生素治療配合低糖飲食，該患者癥狀得到明顯緩解，并且其腸道菌群結(jié)構(gòu)趨于正常。發(fā)明人通過微生物體外培養(yǎng)技術(shù)，獲得一株具有高產(chǎn)酒能力的肺炎克雷伯桿菌，該菌株不僅生長速率較快，而且在葡萄糖、果糖的誘導(dǎo)下具有很高的產(chǎn)酒能力，用于篩選治療自動釀酒綜合癥的藥物具有很高的價值。根據(jù)最新的分類規(guī)則，肺炎克雷伯桿菌(Klebsiellapneumoniae)屬于克雷伯菌屬，屬于人和動物腸道中的正常菌群。本發(fā)明提供的肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)的名稱為W14，該菌株已于2016年5月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCCNo.12540。肺炎克雷伯桿菌(Klebsiellapneumoniae)W14是革蘭氏陰性菌，桿狀，有大量黏性的多糖形成的莢膜包覆，有菌毛，無芽孢和鞭毛；其具有O抗原和K抗原，大小為(0.5-0.8)μm×(1-2)μm，兼性厭氧生長，生長溫度范圍：10℃-50℃，最適生長溫度：37℃；生長酸堿度范圍：pH4-10，最適pH值為6.8。生物材料說明：本發(fā)明肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)的名稱為W14，該菌株已于2016年5月24日保藏于地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏編號為CGMCCNo.12540。以下結(jié)合具體實施例，更具體地說明本發(fā)明的內(nèi)容，并對本發(fā)明作進一步闡述，但這些實施例絕非對本發(fā)明進行限制。下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法。實施例一：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)W14的分離、鑒定及保藏一、肺炎克雷伯桿菌(Klebsiellapneumoniae)W14的分離LB-瓊脂培養(yǎng)基：胰蛋白胨(tryptone)10g/L，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L，瓊脂10g/L，pH6.8。LB-單糖培養(yǎng)基：胰蛋白胨(tryptone)10g/L，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L，葡萄糖10wt％，pH6.8。采集自釀酒綜合征患者的新鮮糞便樣品，使用LB-瓊脂培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，37℃，13小時。挑取單克隆轉(zhuǎn)接至LB-單糖培養(yǎng)基，37℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，13小時。結(jié)束后測定培養(yǎng)液中的酒精濃度，挑選出產(chǎn)酒精濃度最高的菌株，命名為W14(采集地點：北京,采集人：魏曉)。二、W14的生理生化鑒定對采集的W14菌株進行生理生化鑒定，該菌株是革蘭氏陰性菌，桿狀，有大量黏性的多糖形成的莢膜包覆。有菌毛，無芽孢和鞭毛。具有O抗原和K抗原。大小為0.5-0.8μm×1-2μm。兼性厭氧生長，生長溫度范圍：10℃-50℃，最適生長溫度：37℃；生長酸堿度范圍：pH4-10，最適pH值為6.8。依據(jù)《伯杰氏細菌學鑒定手冊》(第八版)和《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》對其進行常規(guī)生理生化鑒定，實驗結(jié)果為：半固體穿刺試驗陰性、淀粉水解試驗陽性、脂肪水解試驗陰性、明膠水解試驗陰性、H2S試驗陽性、尿素試驗陽性、吲哚試驗陰性、甲基紅試驗陽性、伏普試驗陽性、檸檬酸鹽試驗陽性、尿酶試驗陽性、蔗糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、麥芽糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、D-山梨醇試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、鼠李糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、甘露醇試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、乳糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣、海藻糖試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣，確定為肺炎克雷伯桿菌(Klebsiellapneumoniae)。三、W14菌株的全基因組測序LB培養(yǎng)基配方：胰蛋白胨(tryptone)10g/L，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L。將W14菌株接種于LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)13小時，搖床轉(zhuǎn)速120rpm。收集W14菌體，提取全基因組DNA，并隨機打斷，電泳回收所需長度的DNA片斷，并加上接頭進行cluster制備，進行Hiseq4000測序，對測序結(jié)果進行SOAPdenovo組裝，基于組裝結(jié)果進行基因信息分析，基因組序列見序列表中序列1。四、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)W14保藏肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)W14菌株于2016年5月24日保藏于地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏編號為CGMCCNo.12540。實施例二：適合W14生長的培養(yǎng)基配方該培養(yǎng)基的配方為：胰蛋白胨(tryptone)5-15g/L，葡萄糖或果糖2-20wt％，酵母提取物(yeastextract)3-10g/L，氯化鈉(NaCl)5-15g/L；優(yōu)選：胰蛋白胨(tryptone)8-12g/L，葡萄糖或果糖2-10wt％，酵母提取物(yeastextract)3-7g/L，氯化鈉(NaCl)8-12g/L；最優(yōu)選：胰蛋白胨(tryptone)10g/L，葡萄糖10wt％，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L，即實施例一中的LB-單糖培養(yǎng)基，或胰蛋白胨(tryptone)10g/L，果糖8wt％，酵母提取物(yeastextract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L。制備培養(yǎng)基時，將胰蛋白胨、葡萄糖或果糖、酵母提取物和氯化鈉置于容器中，加入適量去離子水溶解，用5mol/LNaOH調(diào)pH至7.0，然后用去離子水定容至1L，121℃滅菌15min即得。實施例三：W14的產(chǎn)酒能力分析1、葡萄糖濃度的篩選：分別用六組培養(yǎng)基培養(yǎng)本發(fā)明的菌株W14，培養(yǎng)溫度37℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，需氧培養(yǎng)8小時，培養(yǎng)過程中每隔一小時檢測菌株W14的生長速率，結(jié)果見圖1；五組培養(yǎng)基均按實施例二中的配方配置得到，僅是培養(yǎng)基中的葡萄糖濃度不同，分別為2wt％，4wt％，6wt％，8wt％，10wt％。圖1的結(jié)果顯示：本發(fā)明的菌株W14分別在葡萄糖濃度為2wt％、4wt％、6wt％、8wt％、10wt％的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至穩(wěn)定期時，OD值分別為1.220、1.303、1.33、1.38、1.47；說明菌株W14在葡萄糖濃度為10wt％的培養(yǎng)基中具有最快的生長速率。2、葡萄糖濃度和培養(yǎng)條件的篩選：分別用實施例二的培養(yǎng)基(葡萄糖濃度分別為2wt％，4wt％，6wt％，8wt％，10wt％)培養(yǎng)本發(fā)明的菌株W14，培養(yǎng)溫度37℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)條件分別為：需氧培養(yǎng)8小時，厭氧培養(yǎng)8h，厭氧培養(yǎng)12h，培養(yǎng)完畢后檢測培養(yǎng)液上清中的酒精濃度，檢測結(jié)果見表1和圖2。表1不同培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)液上清中的酒精濃度需氧8小時厭氧8小時厭氧12小時2％葡萄糖35.3mmol/L20.3mmol/L24.9mmol/L4％葡萄糖62.3mmol/L25.5mmol/L31.6mmol/L6％葡萄糖63.2mmol/L35.6mmol/L51.2mmol/L8％葡萄糖62.6mmol/L29.3mmol/L36.7mmol/L10％葡萄糖54.5mmol/L26.9mmol/L52.4mmol/L表1和圖2結(jié)果表明：菌株W14在需氧條件下比厭氧條件具有更高的產(chǎn)酒精能力；尤其當在葡萄糖濃度為6wt％，需氧培養(yǎng)8小時，該菌株的產(chǎn)酒能力達到峰值，為63.2mmol/L(如圖3所示)。3、果糖濃度的篩選：用實施例二的培養(yǎng)基(果糖濃度分別為2wt％，4wt％，6wt％，8wt％，10wt％)培養(yǎng)本發(fā)明的菌株W14，培養(yǎng)溫度37℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)條件分別為：需氧培養(yǎng)8小時，厭氧培養(yǎng)8h，培養(yǎng)完畢后檢測培養(yǎng)液上清中的酒精濃度，檢測結(jié)果見表2和圖3。表2不同培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)液上清中的酒精濃度需氧8小時厭氧8小時2wt％果糖43.2mmol/L30.0mmol/L4wt％果糖60.6mmol/L32.8mmol/L6wt％果糖61.6mmol/L27.6mmol/L8wt％果糖63.6mmol/L31.8mmol/L10wt％果糖53.0mmol/L25.3mmol/L表2和圖3的結(jié)果表明：菌株W14在需氧條件下比厭氧條件具有更高的產(chǎn)酒精能力；尤其當果糖濃度為8wt％，需氧培養(yǎng)8小時，該菌株的產(chǎn)酒能力達到峰值，為64.6mmol/L(如圖3所示)，說明實施例二中的葡萄糖也可用果糖替換，且菌株W14在果糖中可比在葡萄糖中具有更高的產(chǎn)酒能力。實施例四：W14在篩選治療自動釀酒綜合癥藥物中的應(yīng)用發(fā)明人從自動釀酒綜合癥患者的糞便中分離得到一株高產(chǎn)酒肺炎克雷伯桿菌，并確定其是該病的致病菌，說明針對自動釀酒綜合癥的診斷不能僅局限于是否存在真菌。采集自動釀酒綜合癥患者的糞便樣品進行體外培養(yǎng)，培養(yǎng)基為實施例二的培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度37℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，需氧培養(yǎng)8h。培養(yǎng)完畢后將得到的菌液進行菌種的鑒定以及產(chǎn)酒量的檢測。若培養(yǎng)得到的菌種為肺炎克雷伯桿菌(Klebsiellapneumoniae)且符合本發(fā)明菌株W14的性狀特征，則判定該患者為該菌株所致的自動釀酒綜合癥，然后使用亞胺培南靜脈滴注治療，每天1克，分3次滴注，靜脈滴注時間應(yīng)不少于20～30分鐘，滴注7天。經(jīng)診斷為菌株W14所致的自動釀酒綜合癥的患者，經(jīng)亞胺培南治療后康復(fù)，自動釀酒綜合癥的癥狀再無發(fā)作。對上述患有菌株W14所致的自動釀酒綜合癥的患者使用抗真菌藥物氟康唑，沒有治療效果；用抗真菌藥物氟康唑在體外作用菌株W14，也沒有抑菌效果。同時將目前報道的引起自動釀酒綜合癥的真菌釀酒酵母菌，白色念珠菌，假絲酵母菌均接種在本發(fā)明實施例二的培養(yǎng)基中進行體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)該真菌不能生長，更不具有產(chǎn)酒能力。以上共同說明自動釀酒綜合癥并不是由真菌引起的，而是本發(fā)明的菌株引起的。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出的是，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的內(nèi)容。序列表<110>中國人民解放軍疾病預(yù)防控制所<120>一株高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株及其應(yīng)用<130>CGCNB165173W<160>1<210>1<211>1554<212>rDNA<213>高產(chǎn)酒肺炎克雷伯菌株（Klebsiellapneumoniae）W14的16SrDNA序列<400>1ttctttaaggtaaggaggtgatccaaccgcaggttcccctacggttaccttgttacgact60tcaccccagtcatgaatcacaaagtggtaagcgccctcccgaaggttaagctacctactt120cttttgcaacccactcccatggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattc180accgtagcattctgatctacgattactagcgattccgacttcatggagtcgagttgcaga240ctccaatccggactacgacatactttatgaggtccgcttgctctcgcgaggtcgcttctc300tttgtatatgccattgtagcacgtgtgtagccctggtcgtaagggccatgatgacttgac360gtcatccccaccttcctccagtttatcactggcagtctcctttgagttcccggccggacc420gctggcaacaaaggataagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatttcacaaca480cgagctgacgacagccatgcagcacctgtctcacagttcccgaaggcaccaatccatctc540tggaaagttctgtggatgtcaagaccaggtaaggttcttcgcgttgcatcgaattaaacc600acatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcatttgagttttaaccttgcggccg660tactccccaggcggtcgatttaacgcgttagctccggaagccacgcctcaagggcacaac720ctccaaatcgacatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgtttgctcccc780acgctttcgcacctgagcgtcagtctttgtccagggggccgccttcgccaccggtattcc840tccagatctctacgcatttcaccgctacacctggaattctacccccctctacaagactct900agcctgccagtttcgaatgcagttcccaggttgagcccggggatttcacatccgacttga960cagaccgcctgcgtgcgctttacgcccagtaattccgattaacgcttgcaccctccgtat1020taccgcggctgctggcacggagttagccggtgcttcttctgcgggtaacgtcaatcgatg1080aggttattaaccttatcgccttcctccccgctgaaagtgctttacaacccgaaggccttc1140ttcacacacgcggcatggctgcatcaggcttgcgcccattgtgcaatattccccactgct1200gcctcccgtaggagtctggaccgtgtctcagttccagtgtggctggtcatcctctcagac1260cagctagggatcgtcgcctaggtgagccgttaccccacctactagctaatcccatctggg1320cacatctgatggcatgaggcccgaaggtcccccactttggtcttgcgacgttatgcggta1380ttagctaccgtttccagtagttatccccctccatcaggcagtttcccagacattactcac1440ccgtccgccgctcgtcacccgagagcaagctctctgtgctaccgctcgacttgcatgtgt1500taggcctgccgccagcgttcaatctgagccatgatcaaactcttcaatttaagt1554當前第1頁1 2 3