本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一類新型羥嗪衍生物及其制備方法、其在抗腫瘤藥物中的用途和制劑。

技術(shù)背景

前列腺癌已成為威脅老年男性健康的重要疾病。前列腺癌是西方國(guó)家男性發(fā)病率最高、死亡率居第二位的實(shí)體腫瘤(J.Radiat.Res,2011,52,743-751)。在美國(guó)，前列腺癌的發(fā)病率已經(jīng)超過肺癌，成為第一位危害男性健康的腫瘤。據(jù)美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)估計(jì)，2013年美國(guó)大約有238590例新發(fā)前列腺癌，有29720例將死于此病(CACancer J.Clin.2013,63,11-30)。在歐洲，每年得到確診的新發(fā)前列腺癌病例大約有416700人，前列腺癌占全部男性癌癥的22.8％，占全部男性癌癥死亡人數(shù)的9.5％(Eur.J.Cancer,2013,49,1374-1403)。2012年我國(guó)腫瘤登記地區(qū)前列腺癌發(fā)病率為9.92/10萬(wàn)，列男性惡性腫瘤發(fā)病率的第6位。

羥嗪是第一代抗組胺藥，毒性低，具有松馳橫紋肌的作用、抗組胺作用和膽堿作用，具有鎮(zhèn)靜、弱安定及肌肉松弛作用，并有抗組胺作用。適用于輕度的焦慮、緊張、情緒激動(dòng)狀態(tài)以及絕經(jīng)期的焦慮和不安等精神和神經(jīng)癥狀；亦用于失眠、麻醉前鎮(zhèn)靜、急慢性蕁麻疹以及其它過敏性疾思、神經(jīng)性皮炎等。

發(fā)明人長(zhǎng)期從事抗腫瘤的研發(fā)，設(shè)計(jì)、篩選并合成了如式(I)結(jié)構(gòu)的新型羥嗪衍生物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一是提出一種新型羥嗪衍生物，體外抗腫瘤細(xì)胞測(cè)試證明這類化合物對(duì)人前列腺癌細(xì)胞具有明顯抑制活性。

本發(fā)明的目的之二是提供一種上述新型羥嗪衍生物的制備方法。

本發(fā)明的目的之三是提供一種上述新型羥嗪衍生物在抗腫瘤藥物中的用途。

本發(fā)明的目的之四是提供一種包含上述新型羥嗪衍生物的藥物制劑。

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，式(I)的化合物或其互變異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、外消旋體、代謝物、前藥、水合物、溶劑化物及其鹽，及其季銨化的氮類似物針對(duì)三種常見的人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3、LNCaP和DU145具有顯著抑制作用。與現(xiàn)有技術(shù)已知的抗腫瘤藥物Naftopidil相比，IC₅₀值顯著降低。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，一方面，本發(fā)明提供了一種新型羥嗪衍生物，其為式(I)的化合物，或其互變異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、外消旋體、代謝物、前藥、水合物、溶劑化物、鹽，及其季銨化的氮類似物，

其中，

R₁和R₂各自獨(dú)立地為氫、鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、羧基、1至20個(gè)碳原子的烷基、1至20個(gè)碳原子的烷氧基、2至20個(gè)碳原子的烯基、2至20個(gè)碳原子的烯氧基、5至14個(gè)碳原子的環(huán)烷基、5至14個(gè)碳原子的雜環(huán)烷基、5至14個(gè)碳原子的環(huán)烯氧基、5至14個(gè)碳原子的雜環(huán)烯氧基、5至14個(gè)碳原子的環(huán)烷基烷基、5至14個(gè)碳原子的雜環(huán)烷基烷基、5至14個(gè)碳原子的環(huán)烯氧基烷基、5至14個(gè)碳原子的雜環(huán)烯氧基烷基、1至20個(gè)碳原子的氨烷基、1至20個(gè)碳原子的烷氨基、2至20個(gè)碳原子的?；?、2至20個(gè)碳原子的酰氨基、1至20個(gè)碳原子的烷氧基?；?至20個(gè)碳原子的硫代烷基、1至20個(gè)碳原子的鹵代烷基、1至20個(gè)碳原子的鹵代烷氧基；

m和n各自獨(dú)立地為1-10的整數(shù)；

條件是，R₁和R₂至少其中之一為鹵素。

當(dāng)描述本發(fā)明的化合物時(shí)，除非上下文另有說明，否則，術(shù)語(yǔ)按照下述定義解釋：術(shù)語(yǔ)“鹵素”本身或作為其它取代基的一部分是指氟、氯、溴和碘。

術(shù)語(yǔ)“烷基”本身或作為其它取代基的一部分是指式C_xH_2x+1的完全飽和的烴(基)，其中x是大于或等于1的數(shù)字。一般地，本發(fā)明的烷基包含1至20個(gè)碳原子。烷基可以是直鏈或支鏈的，并且可以是如本文指出的被取代的。當(dāng)本文使用的下標(biāo)在碳原子后時(shí)，所述下標(biāo)是指命名的基團(tuán)可以含有的碳原子數(shù)目。例如，“C₁-C₁₀”等同于C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀?！癈₁-C₂₀”等同于C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、C₁₂、C₁₃、C₁₄、C₁₅、C₁₆、C₁₇、C₁₈、C₁₉、C₂₀?！癈₂-C₁₀”、“C₃-C₁₀”等定義類似，不再贅述。優(yōu)選，烷基是C₁-C₂₀烷基，C₁-C₁₀烷基，C₁-C₈烷基，C₁-C₆烷基，或C₁-C₄烷基。進(jìn)一步地，例如，C₁-C₆烷基包括所有具有1至6個(gè)碳原子的直鏈，支鏈的烷基，從而包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，丁基和其異構(gòu)體(例如正丁基，異丁基和叔丁基)，戊基和其異構(gòu)體，己基和其異構(gòu)體。

術(shù)語(yǔ)“烷氧基”表示具有式-OR^b的殘基，其中R^b是烷基。優(yōu)選，烷氧基是C₁-C₂₀烷氧基，C₁-C₁₀烷氧基，C₁-C₈烷氧基，C₁-C₆烷氧基，或C₁-C₄烷氧基。烷氧基的非限制性實(shí)例包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基，異丁氧基，仲-丁氧基，叔-丁氧基，戊氧基和己氧基。

術(shù)語(yǔ)“烯基”本身或作為其它取代基的一部分是指式C_xH_2x+1中的任意一個(gè)或多個(gè)CH₂-CH₂被C＝C雙鍵替代的不飽和烴(基)，其中x是大于或等于2的數(shù)字。一般地，本發(fā)明的烯基包含2至20個(gè)碳原子。烯基可以是直鏈或支鏈的，并且可以是如本文指出的被取代的。當(dāng)本文使用的下標(biāo)在碳原子后時(shí)，所述下標(biāo)是指命名的基團(tuán)可以含有的碳原子數(shù)目。例如，“C₂-C₁₀”等同于C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀。“C₂-C₂₀”等同于C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、C₁₂、C₁₃、C₁₄、C₁₅、C₁₆、C₁₇、C₁₈、C₁₉、C₂₀?！癈₂-C₁₀”、“C₃-C₁₀”等定義類似，不再贅述。優(yōu)選，烷基是C₂-C₂₀烯基，C₂-C₁₀烯基，C₂-C₈烯基，C₂-C₆烯基，或C₂-C₄烯基。進(jìn)一步地，例如，C₂-C₆烯基包括所有具有2至6個(gè)碳原子的直鏈，支鏈的烯基，從而包括乙烯基，正丙烯基，異丙烯基，丁烯基和其異構(gòu)體(例如正丁烯基，異丁烯基和叔丁烯基)，戊烯基和其異構(gòu)體，己烯基和其異構(gòu)體。

術(shù)語(yǔ)“烯氧基”表示具有式-OR^c的殘基，其中R^c是烯基。優(yōu)選，烯氧基是C₂-C₂₀烯氧基，C₂-C₁₀烯氧基，C₂-C₈烯氧基，C₂-C₆烯氧基，或C₂-C₄烯氧基。烯氧基的非限制性實(shí)例包括乙烯氧基，丙烯氧基，異丙烯氧基，丁烯氧基，異丁烯氧基，仲-丁烯氧基，叔-丁烯氧基，戊烯氧基和己烯氧基。

術(shù)語(yǔ)“氨烷基”表示烷基中的一個(gè)或多個(gè)CH₂中的H原子被氨基或取代氨基(即胺基)的烷基。優(yōu)選，氨烷基是C₁-C₂₀氨烷基，C₁-C₁₀氨烷基，C₁-C₈氨烷基，C₁-C₆氨烷基，或C₁-C₄氨烷基。氨烷基的非限制性實(shí)例包括氨甲基，氨乙基，氨丙基，氨異丙基，氨丁基，氨異丁基，氨仲-丁基，氨叔-丁基，氨戊基和氨己基。

術(shù)語(yǔ)“烷氨基”表示氨基中的一個(gè)或兩個(gè)H原子被烷基或取代的烷基所進(jìn)一步取代的氨基。優(yōu)選，烷氨基是C₁-C₂₀烷氨基，C₁-C₁₀烷氨基，C₁-C₈烷氨基，C₁-C₆烷氨基，或C₁-C₄烷氨基。烷氨基的非限制性實(shí)例包括甲氨基，二甲氨基，乙氨基，二乙氨基，丙氨基，二丙氨基，異丙氨基，二異丙氨基，丁氨基，二丁氨基，異丁氨基，二異丁氨基，仲-丁氨基，二仲-丁氨基，叔-丁氨基，二叔-丁氨基，戊氨基，二叔-丁氨基，己氨基和二己氨基。

術(shù)語(yǔ)“烷基?；北旧砘蜃鳛槠渌〈囊徊糠质侵?C(＝O)R^c，其中R^c是如前文針對(duì)烷基所定義。優(yōu)選，烷基?；荂₁-C₂₀烷基酰基，C₁-C₁₀烷基?；?，C₁-C₈烷基酰基，C₁-C₆烷基酰基，或C₁-C₄烷基?；?。烷基?；姆窍拗菩詫?shí)例包括甲烷基酰基，乙烷基酰基，丙烷基酰基，異丙烷基?；⊥榛；?，異丁烷基?；?，仲-丁烷基?；?，叔-丁烷基?；?，戊烷基?；图和榛；?。

術(shù)語(yǔ)“烷基酰胺基”本身或作為其它取代基的一部分是指-NHC(＝O)R^d，其中R^d是如前文針對(duì)烷基所定義。優(yōu)選，烷基酰胺基是C₁-C₂₀烷基酰胺基，C₁-C₁₀烷基酰胺基，C₁-C₈烷基酰胺基，C₁-C₆烷基酰胺基，或C₁-C₄烷基酰胺基。烷基酰胺基的非限制性實(shí)例包括甲烷基酰胺基，乙烷基酰胺基，丙烷基酰胺基，異丙烷基酰胺基，丁烷基酰胺基，異丁烷基酰胺基，仲-丁烷基酰胺基，叔-丁烷基酰胺基，戊烷基酰胺基和己烷基酰胺基。

術(shù)語(yǔ)“烷氧基酰基”本身或作為其它取代基的一部分是指-C(＝O)OR^e，其中R^e是如前文針對(duì)烷基所定義。優(yōu)選，烷氧基酰基是C₁-C₂₀烷氧基?；?，C₁-C₁₀烷氧基?；?，C₁-C₈烷氧基?；珻₁-C₆烷氧基?；?，或C₁-C₄烷氧基酰基。烷氧基?；姆窍拗菩詫?shí)例包括甲烷氧基酰基，乙烷氧基?；?，丙烷氧基?；?，異丙烷氧基酰基，丁烷氧基酰基，異丁烷氧基酰基，仲-丁烷氧基?；?，叔-丁烷氧基?；?，戊烷氧基酰基和己烷氧基?；?。

術(shù)語(yǔ)“硫代烷基”表示烷基中的一個(gè)或多個(gè)CH₂中的H原子被巰基(-SH)或取代巰基(即烷硫基)的烷基。優(yōu)選，硫代烷基是C₁-C₂₀硫代烷基，C₁-C₁₀硫代烷基，C₁-C₈硫代烷基，C₁-C₆硫代烷基，或C₁-C₄硫代烷基。硫代烷基的非限制性實(shí)例包括甲硫代烷基，乙硫代烷基，丙硫代烷基，異丙硫代烷基，丁硫代烷基，異丁硫代烷基，仲-丁硫代烷基，叔-丁硫代烷基，戊硫代烷基和己硫代烷基。

術(shù)語(yǔ)“烷硫基”表示巰基(-SH)中的H原子被烷基或取代的烷基所進(jìn)一步取代的巰基。優(yōu)選，烷硫基是C₁-C₂₀烷硫基，C₁-C₁₀烷硫基，C₁-C₈烷硫基，C₁-C₆烷硫基，或C₁-C₄烷硫基。烷硫基的非限制性實(shí)例包括甲烷硫基，乙烷硫基，丙烷硫基，異丙烷硫基，丁烷硫基，異丁烷硫基，仲-丁烷硫基，叔-丁烷硫基，戊烷硫基，和己烷硫基。

術(shù)語(yǔ)“鹵代烷(氧)基”表示烷基中的一個(gè)或多個(gè)CH₂中的H原子被鹵素取代的烷(氧)基。鹵素選自氟，氯，溴和碘。優(yōu)選，鹵代烷(氧)基是C₁-C₂₀鹵代烷(氧)基，C₁-C₁₀鹵代烷(氧)基，C₁-C₈鹵代烷(氧)基，C₁-C₆鹵代烷(氧)基，或C₁-C₄鹵代烷(氧)基。鹵代烷(氧)基的非限制性實(shí)例包括鹵代甲烷(氧)基，鹵代乙烷(氧)基，鹵代丙烷(氧)基，鹵代異丙烷(氧)基，鹵代丁烷(氧)基，鹵代異丁烷(氧)基，鹵代仲-丁烷(氧)基，鹵代叔-丁烷(氧)基，鹵代戊烷(氧)基，和鹵代己烷(氧)基。進(jìn)一步地，例如鹵代烷基的非限制性實(shí)例包括氯代甲(氧)基，1-溴代乙(氧)基，氟代甲(氧)基，二氟甲(氧)基，三氟甲(氧)基，1,1,1-三氟乙(氧)基，等等。

術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”指的是飽和且環(huán)狀的烷基，其本身或作為另一基團(tuán)的部分表示但不限于5至14個(gè)碳-原子脂肪環(huán)或環(huán)系。環(huán)烷基一般地含有5至14個(gè)環(huán)原子，更優(yōu)選5-12，更加優(yōu)選5-10個(gè)；以及最優(yōu)選5-8個(gè)。環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括環(huán)戊基，環(huán)己基，2-，或3-甲基環(huán)戊基，環(huán)庚基，和2-，3-，或4-甲基環(huán)己基。

術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)烷基”指的是飽和且環(huán)狀的烷基，其本身或作為另一基團(tuán)的部分表示但不限于5至14個(gè)碳-原子脂肪環(huán)或環(huán)系。一般地含有5至14個(gè)環(huán)原子，更優(yōu)選5-12，更加優(yōu)選5-10個(gè)；以及最優(yōu)選5-8個(gè)；其中這些環(huán)的一個(gè)或多個(gè)中的一個(gè)或多個(gè)碳原子被O，N或S原子取代，其中氮和硫雜原子可以任選地被氧化，并且氮雜原子可以任選地被季銨化。雜環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括2-，或3-氧雜環(huán)戊基，1，2-，或3-氮雜環(huán)戊基，2-，或3-硫雜環(huán)戊基，2-，3-，或4-氧雜環(huán)己基，1-，2-，3-，或4-氮雜環(huán)己基，2-，3-，或4-硫雜環(huán)己基，等等。

術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”、“雜環(huán)烯基”、“環(huán)烷基烷基”、“雜環(huán)烷基烷基”、“環(huán)烯氧基烷基”、“雜環(huán)烯氧基烷基”與上述“烷基”和“(雜)環(huán)烷(烯)基”類似，可以具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但同時(shí)不具備芳香性，不再贅述。

術(shù)語(yǔ)“1-10的整數(shù)”指的是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。此外，術(shù)語(yǔ)“1-10的整數(shù)”還包括其任意子范圍，例如“1-6的整數(shù)”、“1-4的整數(shù)”和“2-8的整數(shù)”。這些子范圍同樣表示所述范圍內(nèi)的任意整數(shù)。例如，“1-6的整數(shù)”指的是1、2、3、4、5、6?！?-4的整數(shù)”指的是1、2、3、4。

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了一種新型羥嗪衍生物，其為式(I)的化合物，或其互變異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、外消旋體、代謝物、前藥、水合物、溶劑化物、鹽，及其季銨化的氮類似物，

其中，

R₁和R₂各自獨(dú)立地為氫、鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、羧基、1至6個(gè)碳原子的烷基、1至6個(gè)碳原子的烷氧基、2至6個(gè)碳原子的烯基、2至6個(gè)碳原子的烯氧基、1至6個(gè)碳原子的氨烷基、1至6個(gè)碳原子的烷氨基、2至6個(gè)碳原子的?；?至6個(gè)碳原子的酰氨基、1至6個(gè)碳原子的烷氧基酰基、1至6個(gè)碳原子的硫代烷基、1至6個(gè)碳原子的鹵代烷基、1至6個(gè)碳原子的鹵代烷氧基；

m和n各自獨(dú)立地為1-6的整數(shù)；

條件是，R₁和R₂至少其中之一為鹵素。

更進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了一種新型羥嗪衍生物，其為式(I)的化合物，或其互變異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、外消旋體、代謝物、前藥、水合物、溶劑化物、鹽，及其季銨化的氮類似物，

其中，

R₁和R₂各自獨(dú)立地為氫、鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、羧基、1至6個(gè)碳原子的烷基、1至6個(gè)碳原子的烷氧基、1至6個(gè)碳原子的鹵代烷基、1至6個(gè)碳原子的鹵代烷氧基；

m和n各自獨(dú)立地為1-4的整數(shù)；

條件是，R₁和R₂至少其中之一為氟或氯原子。

在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明新型羥嗪衍生物，其選自式(II)或式(III)的化合物：

除非上下文另有說明，術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明化合物”可以寬泛地表示包括式(I)化合物和任意衍生物。術(shù)語(yǔ)“衍生物”表示本發(fā)明化合物的互變異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、外消旋體、代謝物、N-氧化物、前藥、水合物、溶劑化物及其鹽，以及它們的季銨化的氮類似物，等等。

例如，本發(fā)明化合物可以以不同的互變異構(gòu)體的形式存在，所述互變異構(gòu)體包括但不限于幾何異構(gòu)體，構(gòu)象異構(gòu)體，E/Z-異構(gòu)體，立體化學(xué)異構(gòu)體，和相應(yīng)于在本發(fā)明的化合物中存在的環(huán)不同的位置上存在的相同取代基的異構(gòu)體。全部這種可能的互變異構(gòu)體和其混合物包括在本發(fā)明的范圍中。

本發(fā)明化合物可以含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子，所述不對(duì)稱碳原子充當(dāng)手性中心，其可以導(dǎo)致不同的旋光形式(例如對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體和外消旋體)。本發(fā)明包含全部可能構(gòu)型的全部這種旋光形式，以及其混合物。

本發(fā)明化合物的季銨化的氮類似物表示其中一個(gè)或幾個(gè)N原子被季銨化的本發(fā)明化合物。

本發(fā)明化合物的水合物和溶劑化物表示水分子或溶劑分子以結(jié)晶或非結(jié)晶形式參與形成本發(fā)明化合物固體形式的物質(zhì)。

本發(fā)明化合物的鹽包括式(I)所示的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽包括，其中可應(yīng)用的、衍生自可藥用無(wú)機(jī)以及有機(jī)酸的酸性加成鹽如氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、4-甲氧基苯甲酸鹽、2-或4-羥基苯甲酸鹽、4-氯苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、煙酸鹽、甲磺酸鹽、抗壞血酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、戊二酸鹽、葡糖酸鹽、羥基萘羧酸鹽、油酸鹽及氨基酸鹽，常用的氨基酸鹽是指甘氨酸鹽、丙氨酸鹽、苯丙氨酸鹽、天冬氨酸鹽、門冬氨酸鹽、蛋氨酸鹽、賴氨酸鹽、色氨酸鹽、谷氨酸鹽和蘇氨酸鹽等；以及從可藥用無(wú)機(jī)以及有機(jī)堿制備的鹽，衍生自無(wú)機(jī)堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳、亞錳、鉀、鈉、鋅以及鉍鹽，特別優(yōu)選的為銨、鈣、鎂、鉀、鈉鹽。衍生自可藥用有機(jī)堿的鹽包括伯、仲以及叔胺、環(huán)狀胺如精氨酸甜菜堿、膽堿等的鹽。

本發(fā)明化合物的衍生物還可以進(jìn)一步涉及其代謝物和前藥。這些形式均是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。

另一方面，本發(fā)明還提供了一種上述新型羥嗪衍生物的制備方法，其特征在于，分別制備下列式(III)中間體和式(IV)中間體，

其中，

R₁、R₂、m和n如上定義，X為離去基團(tuán)；

然后，式(III)中間體和式(IV)中間體反應(yīng)得到產(chǎn)物。

如上所述的制備方法，其中，式(IV)中間體由相應(yīng)的羧酸及其衍生物在硼烷二甲基硫醚絡(luò)合物還原下制備得到。

如上所述的制備方法，其中，式(III)中間體和式(IV)中間體在堿性條件下回流反應(yīng)得到產(chǎn)物。

如上所述的制備方法，其中，所述堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、乙醇鈉、乙醇鉀、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀、氨基鈉、三乙胺、三丁胺或N-甲基嗎啉。優(yōu)選地，所述堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀。更優(yōu)選地，所述堿選自碳酸鈉、碳酸鉀。最優(yōu)選地，所述堿選自碳酸鉀。

如上所述的制備方法，其中，反應(yīng)所用溶劑選自甲醇、乙醇、乙醚、乙腈、丙醇、丁醇、四氫呋喃、苯、甲苯、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、甲基叔丁基醚、二氧六環(huán)、DMF、DMSO中的一種或其中幾種的混合溶劑。

在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)本發(fā)明新型羥嗪衍生物選自式(II)或式(III)的化合物時(shí)，制備方法如下：

首先制備下列式(III)中間體，

然后按照下列反應(yīng)路線制備式(II)或式(III)的化合物：

最后，本發(fā)明還提供了一種所述羥嗪衍生物在制備抗腫瘤藥物中的用途。

如上所述的用途，其中，所述腫瘤是前列腺癌。

對(duì)于藥物用途，本發(fā)明的羥嗪衍生物可以配制為藥物制劑或藥物組合物的形式，所述藥物制劑或藥物組合物包含至少一種本發(fā)明的羥嗪衍生物和至少一種藥學(xué)上可接受的載體，稀釋劑或賦形劑和/或助劑，以及任選地包含一種或多種其他藥學(xué)活性的化合物。

例如，本發(fā)明的藥物制劑可以是適于經(jīng)口給藥的形式，適于用于局部給藥(包括眼的)的形式，適于用于通過吸入，通過皮膚貼劑，通過植入物，通過栓劑，等給藥的形式。這種適宜的給藥形式(例如固體，半固體或液體，取決于給藥方式)以及用于其制備的方法和載體，稀釋劑和賦形劑。

本發(fā)明的藥物制劑包括片劑，丸劑，粉末，糖錠，小袋，扁囊劑，懸浮液，乳液，溶液，糖漿劑，氣霧劑，軟膏劑，霜?jiǎng)磩?，軟和硬明膠膠囊，栓劑，滴劑，無(wú)菌可注射的溶液和無(wú)菌包裝粉末。用于藥丸形式的給藥和/或用于連續(xù)的給藥，其可以采用載體，賦形劑，和稀釋劑配制，所述載體，賦形劑，和稀釋劑本身是適用于這種配制劑，比如乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨醇，甘露醇，淀粉，阿拉伯樹膠，磷酸鈣，藻酸鹽，黃蓍膠，明膠，硅酸鈣，微晶纖維素，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙二醇，纖維素，無(wú)菌水，甲基纖維素，甲基-和丙基羥基苯甲酸酯，滑石，硬脂酸鎂，可食用油，植物油和礦物油或其適宜的混合物。所述配制劑能夠任選地含有其它藥學(xué)活性的物質(zhì)和在藥物配制劑中一般使用的其它物質(zhì)，比如潤(rùn)滑劑，潤(rùn)濕劑，乳化和助懸劑，分散劑，崩解劑，填充劑，填料，防腐劑，甜味劑，矯味劑，流動(dòng)調(diào)節(jié)劑，脫模劑，等。所述組合物還可以被配制以，提供其中含有的活性的化合物的快速的，持續(xù)的或延緩的釋放，例如采用基于天然凝膠或合成的聚合物的脂質(zhì)體或親水高分子基質(zhì)。為了增強(qiáng)根據(jù)本發(fā)明藥物組合物的化合物的溶解度和/或穩(wěn)定性，能夠有利的是采用α-，β-或γ-環(huán)糊精或它們的衍生物。

此外，共溶劑例如醇類溶劑可以改善化合物的溶解度和/或穩(wěn)定性。在含水組合物的制劑中，加入本發(fā)明羥嗪衍生物的鹽能夠是更適宜的，其原因在于鹽有利于增加的水溶解度。

藥物制劑可以是以本領(lǐng)域已知的方式制備，通常涉及混合至少一種根據(jù)本發(fā)明的羥嗪衍生物和一個(gè)或多個(gè)藥學(xué)上可接受的載體，優(yōu)選在無(wú)菌的條件下進(jìn)行。

本發(fā)明還提供了一種藥用制劑，所述制劑由本發(fā)明的羥嗪衍生物以及藥用載體輔料或稀釋劑所組成；其中，所述藥用制劑的給藥途徑選自以乳劑、溶液、混懸劑、氣霧劑以及干粉制劑的形式進(jìn)行局部給藥，或以片劑、膠囊、糖漿、散劑或顆?？诜苿┙o藥，或以溶液或混懸液的形式進(jìn)行腸胃外給藥，或進(jìn)行皮下給藥；或以栓劑的形式經(jīng)直腸給藥，或透皮給藥。

本發(fā)明的羥嗪衍生物具有明顯的前列腺癌腫瘤細(xì)胞抑制活性。

本發(fā)明的羥嗪衍生物的劑量可以隨給藥方式和病人的年齡、體重和病情而變化。例如，當(dāng)以針劑形式給藥時(shí)，劑量通常在大約0.001-100mg/kg/天的范圍，優(yōu)選在大約0.1-10mg/kg/天的范圍。當(dāng)以口服制劑形式給藥時(shí)，劑量通常在大約0.1-200mg/kg/天的范圍，優(yōu)選在大約0.1-80mg/kg/天的范圍。

與現(xiàn)有技術(shù)已知的抗腫瘤藥物Naftopidil相比，針對(duì)三種常見的人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3、LNCaP和DU145，本發(fā)明羥嗪衍生物的IC₅₀值顯著降低。因此，可望成為一種更加高效的抗前列腺癌藥物。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。

通過下述實(shí)施例將有助于理解本發(fā)明，但不能限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1：中間體(IV)的制備

在250mL圓底燒瓶中加入5g(0.021mol)4-(溴乙烷)苯乙酸，100mL四氫呋喃，在0℃下緩慢加入21.9mL硼烷二甲基硫醚絡(luò)合物(BMS，2M in THF)。反應(yīng)混合物在0℃下反應(yīng)1h后，然后逐漸恢復(fù)常溫。反應(yīng)結(jié)束后緩慢加入水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有機(jī)相，有機(jī)相分別用水和飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。粗產(chǎn)物沒有純化直接用于下一步反應(yīng)。

實(shí)施例2：式(II)化合物的制備

在250mL圓底燒瓶中加入4g(18.7mmol)中間體2，5.34g(18.7mmol)1-((4-chlorophenyl)(phenyl)methyl)piperazine，10.32g(74.8mmol)碳酸鉀，150mL乙腈，在65℃下反應(yīng)16h。TLC顯示原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，過濾，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，洗脫劑：V(乙酸乙酯):V(石油醚)＝1:10，得5.89g白色固體，收率：75％(以原料4-(溴乙烷)苯乙酸計(jì)算)。

M.p.:130-131℃；MS(ESI,m/z):421.1[M+1]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.89–7.13(m,13H),4.29(s,2H),3.66(br s,10H),3.57(t,J＝6.9Hz,2H),2.71(t,J＝6.9Hz,2H)。

熔點(diǎn)測(cè)定用a Fisher Johns hot-stage測(cè)定儀(溫度計(jì)未校正)。衍生物的¹HNMR用瑞士Bruker AVANCE AV-400NB測(cè)定，TMS做內(nèi)標(biāo)。ESI質(zhì)譜用Thremo DSQ質(zhì)譜儀測(cè)定。以下測(cè)定條件相同。

實(shí)施例3：式(III)化合物的制備

在250mL圓底燒瓶中加入4g(18.7mmol)中間體2，5.38g(18.7mmol)1-(bis(4-fluorophenyl)methyl)piperazine，10.32g(74.8mmol)碳酸鉀，150mL乙腈，在65℃下反應(yīng)16h。TLC顯示原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，過濾，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，洗脫劑：V(乙酸乙酯):V(石油醚)＝1:10，得5.52g白色固體，收率：70％(以原料4-(溴乙烷)苯乙酸計(jì)算)。M.p.:133-134℃；MS(ESI,m/z):423.2[M+1]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.70(br s,4H),7.46(d,J＝8.0Hz,2H),7.22(d,J＝8.0Hz,2H),7.18(t,J＝8.2Hz,4H),4.27(s,2H),3.66(br s,10H),3.55(t,J＝6.9Hz,2H),2.68(t,J＝6.9Hz,2H)。

實(shí)施例4：體外抗腫瘤細(xì)胞活性測(cè)試

(1)材料：

(1.1)CCK-8試劑盒購(gòu)于日本同仁化學(xué)研究所。

(1.2)靶細(xì)胞的制備：人前列腺癌細(xì)胞系PC-3、LNCaP、DU145以及正常的前

列腺上皮細(xì)胞WPMY-1的復(fù)蘇與培養(yǎng)。

a.分別從液氮罐中取出人前列腺癌細(xì)胞系PC-3、LNCaP、DU145以及正常的前列腺上皮細(xì)胞WPMY-1的冷存管，迅速置入37℃水浴箱中，不停搖動(dòng)使之迅速溶化，無(wú)菌操作移入離心管中；

b.分別加DMEM完全培養(yǎng)液到PC-3細(xì)胞及WPMY-1細(xì)胞的離心管至10mL，F(xiàn)12完全培養(yǎng)基到LNCaP細(xì)胞的離心管至10mL，1640完全培養(yǎng)基到DU145細(xì)胞的離心管至10mL，1000rmp離心5min，棄上清。

c.PC-3、WPMY-1細(xì)胞分別加DMEM完全培養(yǎng)基3-4mL吹打使細(xì)胞混勻后移入培養(yǎng)瓶中，LNCaP細(xì)胞加3-4mL的F12完全培養(yǎng)基吹打使細(xì)胞混勻后移入培養(yǎng)瓶中，DU145細(xì)胞加3-4mL的1640完全培養(yǎng)基吹打使細(xì)胞混勻后移入培養(yǎng)瓶中，5％CO₂，37℃培養(yǎng)；

d.觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，及時(shí)更換培養(yǎng)液，分瓶。

(1.3)細(xì)胞計(jì)數(shù)：

a.選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，胰酶消化，分別對(duì)應(yīng)的完全培養(yǎng)基終止，移入離心管中，加相應(yīng)的完全培養(yǎng)基至10mL；

b.取10μL細(xì)胞懸液滴入計(jì)數(shù)板一側(cè)凹槽中，顯微鏡下計(jì)數(shù)四個(gè)大格的細(xì)胞總數(shù)、除以4，乘10⁴，即為每毫升培養(yǎng)液所含細(xì)胞數(shù)；

c.調(diào)整細(xì)胞數(shù)至1×10⁵cells/mL。

(1.4)醚類芳基哌嗪衍生物溶液配置：

取醚類芳基哌嗪衍生物加入DMSO溶劑，調(diào)整初濃度為10mmol，配置濃度為1mmol待用，4℃保存。

(2)試驗(yàn)方法

(2.1)96孔板各孔加入人前列腺癌細(xì)胞系PC-3、LNCaP、DU145以及正常的前列腺上皮細(xì)胞WPMY-1100μL(1×10⁵cells/mL)，37℃培養(yǎng)過夜。

(2.2)棄液，加入不同濃度的受試對(duì)象100μL，對(duì)照加DMEM完全培養(yǎng)基100μL，繼續(xù)培養(yǎng)24h。.

(2.3)各孔加入CCK-8檢測(cè)試劑10μL，繼續(xù)培養(yǎng)20min至1h。

(2.4)酶標(biāo)儀450nm下測(cè)定每孔OD值。

(2.5)計(jì)算抑制率：

腫瘤細(xì)胞抑制率％＝[(對(duì)照組測(cè)定的平均OD值—加藥組測(cè)定的平均OD值)/對(duì)照組測(cè)定的平均OD值]×100％。

(2.6)以抑制率對(duì)藥物濃度的對(duì)數(shù)作圖，求得IC₅₀值：

以lgc為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)，求得IC₅₀值。

表1是本發(fā)明化合物的體外抗腫瘤細(xì)胞活性結(jié)果。

表1

與現(xiàn)有技術(shù)已知的抗腫瘤藥物Naftopidil相比，針對(duì)三種常見的人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3、LNCaP和DU145，本發(fā)明羥嗪衍生物的IC₅₀值顯著降低。因此，可望成為一種更加高效的抗前列腺癌藥物。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。