1.一種熒光生物探針,由三種核酸片段H1、H2和H3組成,其中H1、H2和H3的5’端標(biāo)記熒光基團FAM,H1的堿基序列為5’-FAM-ATGTGCCATTCACTCAACTTCATCACACATTCAACTGATGAAGTTGAGTG-3’、H2的堿基序列為5’-FAM-CACTCAACTTCATCAGTTGAATGTGGAGTGAATGGCACATTCAACTGATG-3’、H3的的堿基序列為5’-FAM-CATCAGTTGAATGTGCCATTCACTCTGATGAAGTTGAGTGAATGGCACAT-3’。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光生物探針,H1、H2和H3在游離狀態(tài)下各自形成莖環(huán)的發(fā)卡結(jié)構(gòu),H1、H2、H3環(huán)部10個堿基,莖部15對互補堿基,末端單鏈10個堿基。
3.一種熒光生物檢測系統(tǒng),其包括權(quán)利要求1或2所述的熒光生物探針,輔助DNA和氧化石墨烯,所述輔助DNA的堿基序列為5’-TGTTGTTGTTGTGTGTTTGG-3’。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的熒光生物檢測系統(tǒng),其中所述的熒光生物探針為濃度30-200nmol/L的H1、H2和H3Tris-HCl緩沖溶液;優(yōu)選地,所述的熒光生物探針為濃度50-200nmol/L的H1、H2和H3Tris-HCl緩沖溶液;進一步優(yōu)選地,所述的熒光生物探針為濃度50nmol/L的H1、H2和H3Tris-HCl緩沖溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的熒光生物檢測系統(tǒng),其中所述的輔助DNA為濃度20-500nmol/L的輔助DNA Tris-HCl緩沖溶液;優(yōu)選地,所述的輔助DNA為濃度100-500nmol/L的輔助DNA Tris-HCl緩沖溶液;進一步優(yōu)選地,所述的輔助DNA為濃度100nmol/L的輔助DNA Tris-HCl緩沖溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的熒光生物檢測系統(tǒng),其中所述的氧化石墨烯采用修飾的Hummer方法制備,濃度為99μg/mL。
7.一種Hg2+濃度的生物檢測方法,所述方法包括如下步驟:
(1)室溫下,將待測品、熒光生物探針的Tris-HCl緩沖溶液以及輔助DNA的Tris-HCl緩沖溶液混合,攪拌時間T1后,加入氧化石墨烯繼續(xù)攪拌時間T2;
(2)測定步驟(1)所得物的熒光發(fā)射光譜強度,根據(jù)熒光強度-Hg2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測樣品的Hg2+濃度值。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的Hg2+濃度的生物檢測方法,所述方法包括如下步驟:
(1)室溫下,將一系列濃度的Hg2+溶液標(biāo)準(zhǔn)品、熒光生物探針的Tris-HCl緩沖溶液以及輔助DNA的Tris-HCl緩沖溶液混合,攪拌時間T1后,加入氧化石墨烯繼續(xù)攪拌時間T2;
(2)測定步驟(1)所得物的熒光發(fā)射光譜強度,制備熒光強度-Hg2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(3)室溫下,取待測樣品,重復(fù)步驟(1);
(4)測定步驟(3)所得物的熒光發(fā)射光譜強度,根據(jù)熒光強度-Hg2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測樣品的Hg2+濃度值。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8的生物檢測方法,其中:
步驟(1)中的攪拌時間T1為0.2-5h;優(yōu)選地,步驟(1)中的攪拌時間T1為1-5h;進一步優(yōu)選地,步驟(1)中的攪拌時間T1為1h;
步驟(1)中所述的熒光生物探針為濃度30-200nmol/L的H1、H2和H3Tris-HCl緩沖溶液;優(yōu)選地,步驟(1)中所述的熒光生物探針為濃度50-200nmol/L的H1、H2和H3Tris-HCl緩沖溶液;進一步優(yōu)選地,步驟(1)中所述的熒光生物探針為濃度50nmol/L的H1、H2和H3Tris-HCl緩沖溶液;
步驟(1)中所述的輔助DNA為濃度20-500nmol/L的輔助DNA Tris-HCl緩沖溶液;優(yōu)選地,步驟(1)中所述的輔助DNA為濃度100-500nmol/L的輔助DNA Tris-HCl緩沖溶液;進一步優(yōu)選地,步驟(1)中所述的輔助DNA為濃度100nmol/L的輔助DNA Tris-HCl緩沖溶液;
步驟(1)中所述的Tris-HCl緩沖溶液為50mmol/L,pH 8.0,含50mmol/L MgCl2;
步驟(1)中所述的氧化石墨烯采用修飾的Hummer方法制備,濃度為99μg/mL;
步驟(1)中的攪拌時間T2為5-30min;優(yōu)選地,步驟(1)中的攪拌時間T2為5-10min;進一步優(yōu)選地,步驟(1)中的攪拌時間T2為5min。
10.根據(jù)權(quán)利要求7-9任一項所述的生物檢測方法,其中步驟(2)中的熒光檢測條件為FAM的激發(fā)波長和發(fā)射波長分別設(shè)定為492nm和517nm,狹縫寬度為10nm,樣品的熒光發(fā)射光譜用492nm的光激發(fā),掃描范圍505-600nm,掃描步長為1nm。