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用于擴(kuò)增熒光假單胞菌基因的PCR引物、熒光假單胞菌的檢測(cè)方法及試劑盒與流程

文檔序號(hào):12109135閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一組用于擴(kuò)增熒光假單胞菌基因的PCR引物,其特征在于,正向引物為:5’-ATGTGGCGTGAAACCAAAAT-3’,反向引物為:5’-TCAATCATCCGCCTGTTCA-3’,所述PCR引物用于擴(kuò)增熒光假單胞菌的生物膜形成調(diào)控基因。

2.一種檢測(cè)熒光假單胞菌的試劑盒,其特征在于,包括正向引物5’-ATGTGGCGTGAAACCAAAAT-3’、反向引物5’-TCAATCATCCGCCTGTTCA-3’、PCR緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸和Taq酶。

3.一種檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,包括以下步驟:

(a)培養(yǎng)待測(cè)菌株;

(b)提取待測(cè)菌株的DNA,獲得模板DNA:

(c)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR反應(yīng)體系包括:權(quán)利要求1所述的正向引物和反向引物、PCR緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸、Taq酶、模板DNA以及ddH2O;

(d)將步驟(c)擴(kuò)增得到的產(chǎn)物進(jìn)行電泳。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(c)中,反應(yīng)體系中正向引物和反向引物的最終濃度均為1μM。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(c)中,反應(yīng)體系中Taq酶的最終濃度為0.2-0.5U/μl。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(c)中,PCR緩沖液包括KCl、Tris-HCl和MgCl2,三者在反應(yīng)體系中的最終濃度分別為50mM、10mM和1.5mM。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(c)中,反應(yīng)體系中脫氧核糖核苷三磷酸最終濃度為0.25μM。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(c)中,PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件包括:94℃,預(yù)變性5min;94℃變性15s,57℃退火30s,72℃延伸1min50s,循環(huán)40次;72℃延伸10min。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(a)中,培養(yǎng)待測(cè)菌株采用LB培養(yǎng)基。

10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述待檢測(cè)DNA的長(zhǎng)度為1.5kb。

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