本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株熒光假單胞菌pf27及其在植物促生中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

集約化生產(chǎn)帶來的連作障礙問題已經(jīng)嚴重影響到農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)、植株生理特征和土壤微生物群落結(jié)構(gòu)以及植物病蟲害猖獗等一系列問題，嚴重影響到農(nóng)業(yè)的種植效益和健康發(fā)展?；瘜W(xué)肥料的大范圍的過量施用對環(huán)境和人體健康造成了極大傷害，已成為影響環(huán)境、人類健康及社會發(fā)展的重要因素。近年來，由于化學(xué)農(nóng)藥和化學(xué)肥料大規(guī)模的生產(chǎn)和無限制的大量使用，對人類生活環(huán)境和農(nóng)林牧產(chǎn)品造成污染，危害了人畜健康和水土等環(huán)境資源，制約了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展，己成為當前嚴重的社會問題之一。為此，利用農(nóng)業(yè)生態(tài)系中有益微生物，防治植物蟲害、病害，提高作物生長、增加作物產(chǎn)量日益成為人們研究的熱點。植物的生長發(fā)育與周圍環(huán)境中的微生物有著密切關(guān)系，植物的生長勢常取決于植物與微生物之間的互作結(jié)果。在植物--微生物系統(tǒng)中，微生物既與植物的地上部分(如葉圍)又與地下部分相聯(lián)系，從而影響著土壤的結(jié)構(gòu)、土壤中養(yǎng)分的可利用性及產(chǎn)生一些對植物有益或有害的代謝產(chǎn)物。

過多地偏施單一性質(zhì)的幾種化肥容易導(dǎo)致作物的營養(yǎng)失調(diào)，化肥大多是含有各種不同的鹽類，其中氮、磷、鉀等化學(xué)物質(zhì)極易被土壤固結(jié)，在土壤中積累，土質(zhì)鹽堿化，造成土壤養(yǎng)分失衡，影響和阻礙農(nóng)作物對所吸收養(yǎng)分物質(zhì)的轉(zhuǎn)化吸收，使果蔬生長性狀低劣，作物口感和品質(zhì)變差，質(zhì)量下降，如蔬菜吃起來不香、瓜果吃起來不甜、口感差，且易腐爛，不宜存放。土壤中一類微生物如熒光假單胞菌、木霉、芽孢桿菌等可以借助其代謝過程或代謝產(chǎn)物改善植物生長條件，如增加養(yǎng)分，分泌激素，刺激植物根系發(fā)育等，誘導(dǎo)植物產(chǎn)生對植物病害如晚疫病、鐮刀菌引起的根腐病害的防御反應(yīng)。微生物所產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物中，含有對植物生長發(fā)育具有刺激作用的物質(zhì)。馬鈴薯根際熒光假單胞菌(pseudomonasfluorescens)的群落動力學(xué)以及優(yōu)勢菌株的數(shù)量及其對馬鈴薯生長的影響，為把溫室試驗所取得的促進植物生長的效果應(yīng)用于田間提供了基礎(chǔ)和依據(jù)。微生物體產(chǎn)生的聚合物具有抗干旱、降低水分脅迫、改善土壤結(jié)構(gòu)、供應(yīng)植物有機營養(yǎng)和調(diào)節(jié)離子活性的能力，微生物在其生命活動期間能溶解土壤中植物難以利用的礦物元素，并把它們轉(zhuǎn)化成具促生活性作用的物質(zhì)，從而幫助植物吸收各種礦質(zhì)元素。土壤中含有很多鉀細菌和磷細菌，它們能夠?qū)⑼寥赖V物無效態(tài)的鉀和磷釋放出來，供植物生長發(fā)育用。微生物能促使根系周圍的有機物形成腐殖酸，提供植物的抗逆性，降解土壤中污染物，減少對植物的毒性，增加土壤中腐殖酸含量，促進植物生長發(fā)育。因此，人們迫切需要更安全有效的代替產(chǎn)品。近年來，微生物制劑因具有環(huán)境友好、促生增產(chǎn)、防病等特點而備受關(guān)注。利用土壤中有益微生物開發(fā)成微生物肥料是近年來的研發(fā)熱點。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個目的是提供一株熒光假單胞菌pseudomonasfluorescenspf27。

本發(fā)明提供的熒光假單胞菌pseudomonasfluorescenspf27的保藏編號為cgmccno.14105。

本發(fā)明的熒光假單胞菌pseudomonasfluorescenspf27的分類命名為熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens，該菌株已于2017年5月8日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱cgmcc，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏號為cgmccno.14105。

本發(fā)明的另一個目的是提供熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑的新用途。

本發(fā)明提供了熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在促進植株生長中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在制備促進植株生長的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在增加植物鮮重和/或鮮重生物量中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在制備增加植物鮮重和/或鮮重生物量的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在提高植物株高和/或莖粗和/或根數(shù)量和/或葉片數(shù)量和/或葉片面積和/或最高葉片生長高度中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在制備提高植物株高和/或莖粗和/或根數(shù)量和/或葉片數(shù)量和/或葉片面積和/或最高葉片生長高度的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

上述應(yīng)用中，所述熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens具體可為熒光假單胞菌pseudomonasfluorescenspf27。

本發(fā)明還有一個目的是提供一種產(chǎn)品。

本發(fā)明提供的產(chǎn)品的活性成分為上述熒光假單胞菌pseudomonasfluorescenspf27或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑；

所述產(chǎn)品具有如下1)-3)中任一種功能：

1)促進植株生長；

2)增加植物鮮重和/或鮮重生物量；

3)提高植物株高和/或莖粗和/或根數(shù)量和/或葉片數(shù)量和/或葉片面積和/或最高葉片生長高度。

本發(fā)明的最后一個目的是提供一種促進植物生長的方法。

本發(fā)明提供的促進植物生長的方法包括如下步驟：用上述熒光假單胞菌pseudomonasfluorescenspf27或其菌劑處理植物幼苗。

上述方法中，所述處理植物幼苗的菌劑濃度為1×10⁵cfu/ml。

上述應(yīng)用或上述產(chǎn)品或上述方法中，所述菌劑的具體制備方法如下：將熒光假單胞菌pf27在kb培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，得到pf27菌液，將pf27菌液離心，收集沉淀；用滅菌水將所述沉淀稀釋至濃度為1×10⁹-1×10¹⁰cfu/ml，得到所述菌劑。

上述應(yīng)用或上述產(chǎn)品或上述方法中，所述植物為茄科植物或十字花科植物或禾本科植物。所述茄科植物具體可為番茄和馬鈴薯；所述十字花科植物具體可為甘藍、快菜和大白菜；所述禾本科植物具體可為小麥和玉米。

本發(fā)明通過對已有菌株的再次開發(fā)，篩選到熒光假單胞菌pf27，并制備得到微生物菌劑pf27。通過實驗證明微生物菌劑pf27處理后對植物的株高、根長等有明顯地提高，對植株具有一定的促生作用，經(jīng)pf27處理的作物與對照組相比，促生效果超21.55％，最高可達829.14％，具有廣譜、高效促進植物生長的作用，尤其能夠促進茄科蔬菜類農(nóng)作物生長、提高其品質(zhì)。本發(fā)明解決了化學(xué)肥料等其它方法效果不佳或者有殘留等問題，而且有助于促進農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，具有較好的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為基于16srdna序列構(gòu)建的pf27系統(tǒng)發(fā)育樹。

圖2為微生物菌劑pf27對茄科作物番茄的促生效果。a.左圖對照組茄科作物番茄中雜9號植株生長的狀態(tài)，右圖pf27菌劑處理下番茄植株的生長狀態(tài)，圖片為植株移植后21天拍攝；b.pf27菌劑處理下番茄的植株株高與對照組數(shù)據(jù)統(tǒng)計；c.pf27菌劑處理下番茄的植株葉片總數(shù)與對照組植株葉片總數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計；d.pf27菌劑處理下番茄植株鮮重與對照植株鮮重數(shù)據(jù)統(tǒng)計；e.pf27菌劑處理下番茄植株直徑(莖粗)與對照組植株直徑(莖粗)數(shù)據(jù)統(tǒng)計；f.pf27菌劑處理下番茄植株頂端2片新葉面積與對照組數(shù)據(jù)統(tǒng)計，所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計植株移栽后33天，n＝9，3次重復(fù)，注：*表示在0.05水平上差異顯著，**表示在0.01水平上差異顯著，***表示在0.001水平上差異顯著，同下。

圖3為微生物菌劑pf27對茄科作物馬鈴薯的促生效果。a.左圖對照組茄科作物馬鈴薯植株生長的狀態(tài)，右圖pf27菌劑處理下馬鈴薯植株的生長狀態(tài)，圖片為移栽后4周拍攝；b.pf27菌劑處理下馬鈴薯的植株株高與對照組植株數(shù)據(jù)統(tǒng)計；c.pf27菌劑處理下馬鈴薯植株葉片總數(shù)與對照組數(shù)據(jù)統(tǒng)計；d.pf27菌劑處理下馬鈴薯植株生根數(shù)目與對照組植株生根數(shù)目數(shù)據(jù)統(tǒng)計；e.pf27菌劑處理下馬鈴薯的植株根長度與對照組植株根長度數(shù)據(jù)統(tǒng)計；f.pf27菌劑處理下馬鈴薯和對照組植株產(chǎn)薯情況比較；g.pf27處理下馬鈴薯和對照組植株產(chǎn)薯總重量數(shù)據(jù)統(tǒng)計，n＝6，3次重復(fù)。

圖4為微生物菌劑pf27對十字花科作物甘藍的促生效果。a.左圖對照組十字花科甘藍植株，右圖pf27菌劑處理下甘藍植株的生長狀態(tài)，圖片拍攝于植株移植后33天；b.pf27菌劑處理下甘藍植株頂端2片新葉面積與對照組植株面積數(shù)據(jù)統(tǒng)計，每株植株統(tǒng)計2片頂端新葉；c.pf27菌劑處理下甘藍與對照組植株葉片總數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計；d.pf27處理下甘藍植株鮮重與對照組植株鮮重數(shù)據(jù)統(tǒng)計；e.pf27菌劑處理下甘藍植株直徑(莖粗)與對照組植株直徑(莖粗)比較，n＝9，3次重復(fù)。

圖5為微生物菌劑pf27對十字花科作物四季青快菜的促生效果。a.左圖對照組四季青快菜植株生長的狀態(tài)，右圖pf27菌劑處理下四季青快菜植株的生長狀態(tài)，圖片拍攝于植株移植后22天；b.pf27菌劑處理四季青快菜與對照組植株葉片總數(shù)目數(shù)據(jù)統(tǒng)計；c.pf27菌劑處理下四季青快菜植株鮮重與對照組植株鮮重；d.pf27處理下四季青快菜植株頂端2片新葉面積與對照組植株面積，每株統(tǒng)計2片頂端新葉，n＝9，3次重復(fù)。

圖6為微生物菌劑pf27對十字花科作物大白菜的促生效果的影響。a.左圖為對照組大白菜北京新3號植株生長狀態(tài)，右圖為pf27菌劑處理下大白菜植株的生長狀態(tài)，圖片拍攝于植株移植后22天；b.pf27菌劑處理下大白菜與對照組植株葉片總數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計；c.pf27菌劑處理下大白菜植株鮮重與對照組植株鮮重；d.pf27菌劑處理下大白菜植株頂端2片新葉面積與對照組植株面積，每株統(tǒng)計2片頂端新葉，n＝8，3次重復(fù)。

圖7為微生物菌劑pf27對十字花科作物的促生效果的影響。a.右圖pf27菌劑處理下十字花科作物甘藍植株總量，左圖為對照組甘藍植株總量，n＝9；b.右圖pf27菌劑處理下十字花科四季青快菜植株總量，左圖對照甘藍植株總量，n＝9；c.右圖pf27菌劑處理下十字花科大白菜北京新3號植株總量，左圖對照甘藍植株總量，n＝8；d.甘藍，四季青快菜和大白菜北京新3號生物量變化統(tǒng)計。

圖8為微生物菌劑pf27對禾本科作物小麥的促生效果的影響。a.左圖對照組禾本科小麥jn17植株生長狀態(tài)比較，右圖pf27菌劑處理下小麥植株生長狀態(tài)，n＝9；b.pf27菌劑處理下和對照組禾本科植株小麥jn17植株葉片最低高度(low)和最高高度(high)差異的統(tǒng)計，n＝9，圖片拍攝于播種后27天后。

圖9為微生物菌劑pf27對禾本科作物玉米的促生效果的影響。a.左圖對照組禾本科植物玉米mo17植株生長趨勢圖，右圖pf27菌劑處理下禾本科植物玉米mo17植株，圖片拍攝移栽后22天，n＝9，3次重復(fù)；b.pf27菌劑處理下和對照組禾本科植株玉米mo17植株莖粗的比較；c.pf27菌劑處理下和對照組禾本科植株玉米mo17植株莖的比較；d.pf27菌劑處理下禾本科植物玉米mo17和對照組玉米植株株高的比較；e.pf27菌劑處理下禾本科植物玉米mo17和對照組玉米植株莖粗的比較。

保藏說明

菌種名稱：熒光假單胞菌

拉丁名：pseudomonasfluorescens

菌株編號：pf27

保藏機構(gòu)：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心

保藏機構(gòu)簡稱：cgmcc

地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號

保藏日期：2017年5月8日

保藏中心登記入冊編號：cgmccno.14105

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

下述實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。

下述實施例中的用到的細菌分離培養(yǎng)基如下：

mea培養(yǎng)基：maltextract30g，mycologicalpeptone5g，瓊脂粉15g，ph5.4；

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂粉12g，水1000ml，ph7.2-7.4；

lb培養(yǎng)基：氯化鈉10g，蛋白胨10g，酵母提取物5g，瓊脂粉12g，水1000ml，ph7.0；

kb培養(yǎng)基：蛋白胨20g，k2hpo41.5g，甘油8ml，mgso40.74g，h2o補足到1l，ph7.0；固體培養(yǎng)基加瓊脂粉12g。

實施例1、pf27菌株的分離與鑒定

一、pf27菌株的分離

pf27分離自云南省普洱市疣粒野生稻區(qū)根際土壤(北緯22^。33’56”，100^。35’12”，海拔737米)。具體分離方法如下：將采自疣粒野生稻區(qū)的根際土壤，挑取根系，刮取根際土，稱量5g，無菌條件下放進已準備好的滅菌三角瓶中，用滅菌水梯度稀釋到10^-6倍，設(shè)置3個重復(fù)。將梯度稀釋的土壤樣品取200μl分別涂到mea培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、lb培養(yǎng)基和kb培養(yǎng)基平板上，分別在28℃，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察菌落的生長狀態(tài)，結(jié)果顯示稀釋為10^-5、10^-6倍時平板上基本上沒有菌落長出，而稀釋為10^-4倍時，平板上能長出單一的菌落，并挑取在kb培養(yǎng)基上長出單一的菌落，將其命名為pf27菌株，然后在kb液體培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)，做進一步的菌株鑒定。

二、pf27菌株的鑒定

1、pf27菌株的形態(tài)鑒定

pf27菌株在kb培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h～48h后可形成橙色菌落，菌落狀態(tài)呈圓形，表面光滑有凸起邊緣整齊，較粘稠，易挑起。

2、pf27菌株的分子鑒定

提取pf27菌株的dna，采用通用引物eubac27f/eubac1492r進行pcr擴增，得到含有pf27菌株16srdna保守區(qū)的pcr產(chǎn)物。引物序列如下：

eubac27f：5’-agagtttgatcctggctcag-3’；

eubac1492r：5’-ggttaccttgttacgactt-3’。

將pcr產(chǎn)物經(jīng)ta克隆連接到peasy-t3(購買自北京全式金生物有限公司)，以通用引物在英濰捷基公司測序。

測序結(jié)果表明：pcr產(chǎn)物的核苷酸序列如序列1所示。將測序所得序列與ncbi數(shù)據(jù)庫進行blast比對后，通過mega5.1軟件對pf27和其他代表22種不同假單胞菌種的熒光假單胞模式菌株進行系統(tǒng)發(fā)育分析，系統(tǒng)發(fā)育樹如圖1所示。

綜合上述鑒定結(jié)果，確定pf27菌株名稱為熒光假單胞菌，其分類命名為熒光假單胞菌pseudomonasfluorescens，該菌株已于2017年5月8日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱cgmcc，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏號為cgmccno.14105。

實施例2、微生物菌劑pf27的制備

將實施例1中獲得的熒光假單胞菌pf27在kb培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，在28℃，200rpm條件下振蕩培養(yǎng)12-16h，然后4000rpm離心20min，棄上清液，收集菌體菌體沉淀，再用滅菌水將菌體沉淀進行稀釋，制成微生物菌劑pf27(菌劑pf27)，微生物菌劑pf27成品中pf27活菌總濃度為1×10⁹-1×10¹⁰cfu/ml。

實施例3、微生物菌劑pf27對茄科作物番茄幼苗的促生效果

一、實驗方法

將中雜9號番茄種子(中蔬種業(yè)科技(北京)有限公司生產(chǎn))用3％naclo溶液消毒10min后用，ddh2o清洗6次，得到消毒后種子。然后將消毒后種子均勻鋪在滅菌的蛭石泥炭土基質(zhì)(蛭石和泥炭土按照1:1的比例混勻，121℃高壓滅菌，20min)發(fā)苗，在26℃，12h:12h光照：黑暗條件下培養(yǎng)種子萌發(fā)，待種子萌發(fā)生長到兩片真葉時，分別移栽到均勻添加菌劑pf27(使用濃度為每kg蛭石泥炭土基質(zhì)混合物為添加50mlod值為1的菌液，菌液使用終濃度在1×10⁵cfu/ml)和對照的營養(yǎng)穴中，番茄苗移栽到育苗穴盤中(穴盤規(guī)格上口直徑9厘米，下口直徑6厘米，高度8厘米)，放置在溫室中生長(條件：光照時間12h，溫度26℃，相對濕度50％)。繼續(xù)放置上述條件下培養(yǎng)，每個培養(yǎng)盆中移栽1株幼苗，每個處理27個重復(fù)。以不添加任何菌劑作為對照(control)。移栽33天后統(tǒng)計每一株植物的株高、葉片數(shù)、番茄植株鮮重、番茄植株莖粗、番茄頂端2片新葉葉面積，并計算生物量增加。生物量增加(％)＝(處理組植株鮮重–對照組植株鮮重)/對照組植株鮮重×100％。

二、促生效果統(tǒng)計

結(jié)果如圖2所示。微生物菌劑pf27對番茄幼苗能夠產(chǎn)生明顯的促生效果，與對照組相比，微生物菌劑pf27處理后番茄植株的平均株高增加了18％、葉片數(shù)增加23％、植物直徑(莖粗)是對照組的2.5倍，而pf27處理的葉片面積增加達到5倍之多，番茄植株的生物量增加達到771.16％。

實施例4、微生物菌劑pf27對茄科作物馬鈴薯幼苗的促生效果

一、實驗方法

將購買自北京首航超市內(nèi)的土豆挑選后放置在潮濕黑暗的環(huán)境中，經(jīng)過一周后，挑選出芽一致的健康土豆的芽，用70％的酒精滅菌消毒刀片將其切下。然后將幼芽移栽到均勻添加菌劑pf27(50ml/kg，菌液終濃度在10⁵cfu/ml)的塑料花盆(規(guī)格上口直徑:14厘米，下口直徑9.5厘米，高度12.5厘米)和滅菌的蛭石基質(zhì)(按照1:1比例混勻，121℃高壓滅菌，20min)中，表面覆蓋一層保鮮膜保濕，待其長出子葉后將其去掉，放置在溫室中生長(條件：光照時間12h，溫度26℃，相對濕度50％)。以不添加任何菌劑作為對照(control)，每個處理16株苗，3次重復(fù)。移栽28天后統(tǒng)計馬鈴薯的株高、葉片數(shù)、根的長度，根數(shù)目以及馬鈴薯結(jié)薯情況，并計算生物量增加。生物量增加(％)＝(處理組植株鮮重–對照組植株鮮重)/對照組植株鮮重×100％。

二、促生效果統(tǒng)計

結(jié)果如圖3所示，微生物菌劑pf27能夠顯著促進馬鈴薯幼苗的生長，表現(xiàn)在馬鈴薯的株高增加多達4倍，與對照相比，葉片數(shù)和根數(shù)目分別增加114％和50％。在無化學(xué)肥料的使用情況下，微生物菌劑pf27處理的馬鈴薯產(chǎn)薯量顯著增加，統(tǒng)計結(jié)果表明微生物菌劑pf27對馬鈴薯的生物量增加達到1115.15％。

實施例5、微生物菌劑pf27對十字花科作物甘藍的促生效果

一、實驗方法

按照實施例3中的實驗方法對甘藍品種京豐一號(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所)的種子進行催芽，直到長出2片真葉將幼苗移栽到育苗穴盤中(穴盤規(guī)格上口直徑9厘米，下口直徑6厘米，高度8厘米)，繼續(xù)放置上述條件下培養(yǎng)，每個培養(yǎng)盆中移栽1株幼苗，每個處理9個重復(fù)，重復(fù)3次，以不添加任何菌劑作為對照(control)。移栽33天后統(tǒng)計每一株植物的葉片數(shù)、植株鮮重、甘藍植株莖粗、甘藍頂端2片新葉葉面積，并計算生物量增加。生物量增加(％)＝(處理組植株鮮重–對照組植株鮮重)/對照組植株鮮重×100％。

二、促生效果統(tǒng)計

結(jié)果如圖4所示，微生物菌劑pf27能夠顯著促進甘藍幼苗的生長，主要體現(xiàn)在甘藍的葉片數(shù)、莖粗和鮮重與對照相比，都有顯著的增加，葉面積與對照相比極顯著性的增加。在無化學(xué)肥料的使用情況下，微生物菌劑pf27處理的甘藍的鮮重生物量的統(tǒng)計結(jié)果顯示微生物菌劑pf27對甘藍的生物量增加達到400.00％。

實施例6微生物菌劑pf27對十字花科作物快菜的促生效果

一、實驗方法

按照實施例3中的實驗方法對快菜品種四季快菜1號(國家蔬菜工程技術(shù)研發(fā)中心)的種子進行催芽，直到長出2片真葉將幼苗移栽到育苗穴盤中(穴盤規(guī)格上口直徑9厘米，下口直徑6厘米，高度8厘米)，繼續(xù)放置上述條件下培養(yǎng)，每個培養(yǎng)盆中移栽1株幼苗，每個處理9個重復(fù)，重復(fù)3次，以不加任何菌液作為對照。移栽22天后統(tǒng)計每一株植物的葉片數(shù)、植株鮮重、快菜頂端2片新葉葉面積，并計算生物量增加。生物量增加(％)＝(處理組植株鮮重–對照組植株鮮重)/對照組植株鮮重×100％。

二、促生效果統(tǒng)計

結(jié)果如圖5所示，微生物菌劑pf27能夠顯著促進快菜幼苗的生長，主要體現(xiàn)在快菜的葉片數(shù)、鮮重和葉面積，與未做任何處理的對照組相比，都有顯著的增加。在無化學(xué)肥料的使用情況下，微生物菌劑pf27處理的四季青快菜的鮮重生物量的統(tǒng)計結(jié)果顯示微生物菌劑pf27對快菜的生物量增加達到137.27％。

實施例7、微生物菌劑pf27對十字花科作物大白菜的促生效果影響

一、實驗方法

按照實施例3中的實驗方法對大白菜品種北京新3號(國家蔬菜工程技術(shù)研發(fā)中心)的種子進行催芽，直到長出2片真葉將幼苗移栽到育苗穴盤中(穴盤規(guī)格上口直徑9厘米，下口直徑6厘米，高度8厘米)，繼續(xù)放置上述條件下培養(yǎng)，每個培養(yǎng)盆中移栽1株幼苗，每個處理9個重復(fù)，重復(fù)3次，以不加任何菌液作為對照。移栽22天后統(tǒng)計每一株植物的葉片數(shù)、植株鮮重、大白菜頂端2片新葉葉面積，并計算生物量增加。生物量增加(％)＝(處理組植株鮮重–對照組植株鮮重)/對照組植株鮮重×100％。

二、促生效果統(tǒng)計

結(jié)果如圖6所示，微生物菌劑pf27能夠促進大白菜幼苗的生長，主要體現(xiàn)在大白菜的葉片數(shù)與未做任何處理的對照組相比顯著性增加，鮮重和葉面積在短期內(nèi)暫時無顯著性的差異。在無化學(xué)肥料的使用情況下，微生物菌劑pf27處理的大白菜的鮮重生物量的統(tǒng)計結(jié)果顯示微生物菌劑pf27對大白菜的生物量增加達到9.72％。

十字花科的甘藍、四季青快菜和大白菜的促生效果比較結(jié)果如圖7所示，微生物菌劑pf27對十字花科的甘藍、四季青快菜有顯著的促生的效果，但是對大白菜北京新3號的的促生效果確并不明顯，說明此pf27菌劑只適合部分十字花科作物。

實施例8、微生物菌劑pf27對禾本科作物小麥促生的效果

一、實驗方法

首先將小麥種子濟南17(jn17)用3％naclo溶液消毒10min后用，ddh2o清洗6次，得到消毒后種子，然后將消毒后的種子均勻鋪在放有一層無菌濾層的大平板上，滅菌的ddh2o濾紙保持濕潤，放置在37℃培養(yǎng)箱過夜催芽，待小麥種子的胚萌發(fā)后，按照實施例3中的實驗方法，將其移栽到育苗穴盤中(穴盤規(guī)格上口直徑9厘米，下口直徑6厘米，高度8厘米)，繼續(xù)放置在室溫條件下培養(yǎng)，每個培養(yǎng)盆中均勻移栽數(shù)株種子，每個處理9個重復(fù)，重復(fù)3次，以不加任何菌液作為對照。移栽27天后觀察小麥生長趨勢，統(tǒng)計小麥幼苗的最低葉片和最高葉片的高度趨勢變化。

二、促生效果統(tǒng)計

結(jié)果如圖8所示，微生物菌劑pf27能夠促進小麥幼苗早期的生長，主要體現(xiàn)在與未做任何處理的對照組相比，小麥幼苗葉片的最低生長高度不存在顯著的差異，但是最高葉片的生長高度明顯高于對照組。

實施例9、微生物菌劑pf27對禾本科作物玉米的促生效果

一、實驗方法

首先將玉米種子mo17(自交玉米系，由中國科學(xué)院動物研究所張曉明研究員惠贈)用3％naclo溶液消毒10min后用，ddh2o清洗6次，得到消毒后種子，然后將消毒后種子均勻鋪在放有一層無菌濾層的大平板上，滅菌的ddh2o濾紙保持濕潤，放置在37℃培養(yǎng)箱過夜催芽，待玉米種子的胚和根萌發(fā)后，按照實施例3中的實驗方法，將其移栽到育苗穴盤中(穴盤規(guī)格上口直徑9厘米，下口直徑6厘米，高度8厘米)，繼續(xù)放置在室溫條件下培養(yǎng)，每個培養(yǎng)盆中均勻移栽1株發(fā)育無差異的玉米種子，每個處理9個重復(fù)，重復(fù)3次，以不加任何菌液作為對照。

移栽22天后統(tǒng)計每一玉米植株的莖粗和株高。

二、促生效果統(tǒng)計

結(jié)果如圖9所示，微生物菌劑pf27能夠顯著促進玉米幼苗的生長，主要體現(xiàn)在玉米植株的高度和直徑(莖粗)，與未做任何處理的對照組相比，微生物菌劑pf27處理的莖粗有極顯著性差異。微生物菌劑pf27處理的玉米植株的莖粗是對照組的1.6倍。

序列表

<110>中國科學(xué)院微生物研究所

<120>一株熒光假單胞菌pf27及其在植物促生中的應(yīng)用

<160>1

<210>1

<211>1508bp

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>1

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