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特異探測(cè)膀胱癌細(xì)胞的分子遺傳裝置的制作方法

文檔序號(hào):12097487閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種特異探測(cè)膀胱癌細(xì)胞的分子遺傳裝置,其特征在于,包括:

質(zhì)粒hUPII-pSpCas9 ;

質(zhì)粒hTERT-gRNA-BAM;

質(zhì)粒pRL-SV40-LacI;

質(zhì)粒pcDNA3-LacO-hRluc;

質(zhì)粒pcDNA3-LacO-E-cadherin;

將hUPII啟動(dòng)子片段插入質(zhì)粒Cbh-3X-FLAG-NLS-SpCas9-NLS的XbaI /AgeI位點(diǎn),而構(gòu)建所述質(zhì)粒hUPII-pSpCas9 ;

將hTERT啟動(dòng)子和核酸酶序列圍繞的引導(dǎo)RNA分子分別插入質(zhì)粒 pCMVp-NEO-BAM的XbaI/ Sal I 和 Sal I/ BamH I位點(diǎn),而構(gòu)建所述質(zhì)粒hTERT-gRNA-BAM;

將lacI基因序列插入質(zhì)粒pRL-SV40的NheI / XbaI位點(diǎn),而構(gòu)建所述質(zhì)粒pRL-SV40-LacI;

將lac 操縱子序列和 hRluc基因分別插入質(zhì)粒pcDNA3 的Hind III/ Kpn I 和 BamH I / EcoR I位點(diǎn),而構(gòu)建所述質(zhì)粒pcDNA3-LacO-hRluc;

將人E-cadherin cDNA 序列插入pcDNA3-LacO-hRluc的BamH I / EcoR I位 點(diǎn),而構(gòu)建所述質(zhì)粒pcDNA3-LacO-E-cadherin。

2. 如權(quán)利要求1所述的分子遺傳裝置,其特征在于,所述lacI基因序列如SEQ ID NO:1所示。

3. 如權(quán)利要求1所述的分子遺傳裝置,其特征在于,所述膀胱癌細(xì)胞如T24、5637、 J82或 SW-780。

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