本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領域，涉及呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃類化合物及其抗乳腺癌的用途。
背景技術(shù)：
臨床研究表明，乳腺癌是一種惡性腫瘤，大約三分之二的乳腺癌屬于雌激素受體陽性乳腺癌，其發(fā)生、發(fā)展與雌激素和雌激素受體密切相關(Katzenellenbogen BS,Frasor J.Semin Oncol,2004,31(Suppl 3):28-38.)。典型的雌激素受體包括ERα和ERβ兩種亞型，多數(shù)乳腺腫瘤表達ERα和ERβ兩種受體，ERα和ERβ的比值在良性和惡性乳腺腫瘤中不同，在良性組織中以ERβ表達為主，而在惡性組織中ERα占優(yōu)勢。在乳腺腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中ERα升高而ERβ降低，ERα和ERβ的比值升高(Balf PJ,McCann AH,Welch HM,et al.European Journal of Surgical Oncology,2004,30(10):1043.)。目前在乳腺癌的臨床治療中，使用選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMs)是主要治療方法之一。SERMs是一種類似于雌激素的非雌激素藥物，屬于非甾類化合物，只對某一種ER亞型ERα或ERβ有激動作用而對另一亞型無作用或有拮抗作用的藥物。其“選擇性”是指SERMs在某些組織如骨、肝、心血管系統(tǒng)ERβ集中區(qū)中表現(xiàn)為激動劑，而在另外一些組織如乳腺中表現(xiàn)為拮抗劑，在子宮(ERα較顯著區(qū))中可以是激動劑，也可以是拮抗劑(Katzenellenbogen B S,Katzenenllenbogen J A.Science,2002,295(5564):2380-2381.Pennisi E.Science,1997,277(5331):1439.)。SERMs是一類結(jié)構(gòu)多樣的分子家族，根據(jù)其母核結(jié)構(gòu)和非甾體雌激素拮抗劑的化學分類方法，可將SERMs分為三苯乙烯類(triphenylethylenes,TPE)，苯并噻吩類(benzotriophenes)，苯并吡喃類(benzopyrans)，萘類(naphthalenes)，吲哚類(indoles)及其他類共6類(Miquel JF,Gilbert J.J S teroid Biochem,1988,31(4B):525-544.)。但臨床上常用的SERMs生物利用度低，易產(chǎn)生耐藥性，具有毒副作用大等缺點，因此尋找治療效果更好，生物利用度高，毒副作用小的SERMs是當今研究方向。
苯并噻吩類SERMs的代表藥物是雷洛昔芬(raloxifene)，是第二代SERMs，通過與ER結(jié)合在乳腺組織中表現(xiàn)為拮抗作用，能抑制雌激素誘發(fā)的乳腺增生(Liu H,Lee ES,Gajdos C,et al.Journal of the National Cancer Institute,2003,95:1586-1597.)，并且在動物體內(nèi)能抑制腫瘤生長(Clemens JA,Bennett DR,Black LJ,Jones CD.Life Science,1983,32:2869-2875.，可降低乳腺腫瘤細胞的增殖活性(Lopes-Costa PV，dos Santos AR，dos Santos LG，et a1.Cell Proliferation,2010,43(2):124-129.)，并且能降低血脂、預防及治療骨質(zhì)疏松，在治療劑量下不升高子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率(范忠林,李海平,呈祥德.中華現(xiàn)代外科學雜志,2004,1(1):51-54.)。但其臨床效果并不是非常顯著，有效率僅為33％(Gradishar W,G1usIllan J Y,et a1.Cancer,2000,88(9):2047.)，也可導致熱潮紅和小腿痛性痙攣等不良反應(Davies G C,Huster W J,Lu Y,et al.Obstetrics&Gynecology,1999,93(4):558-565.)。
我們根據(jù)電子等排原理對苯并噻吩類化合物進行結(jié)構(gòu)改造，設計并合成了一系列呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃類化合物，以克服現(xiàn)有的SERMs上述缺點。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個目的是提供新的抗雌激素受體陽性乳腺癌藥物。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種藥用組合物，該組合物包含有效量的所述新的抗雌激素受體陽性乳腺癌化合物或其藥學上可接受的鹽及其藥學上可接受的載體。
本發(fā)明的另外一個目的是提供一種在受治療者體內(nèi)產(chǎn)生抗雌激素受體陽性乳腺癌效應的方法，該方法是給予受治療者足以產(chǎn)生所述效應量的，所述新的抗雌激素受體陽性乳腺癌化合物或其非毒性的藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明涉及以下通式的化合物：
其中X可以選自H2或者O；
R可以任意選擇1個、2個或3個H，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，鹵素，-OH，-NO2。
R1、R2可以獨立的選自H，C1-C4烷基，未取代或C1-C4烷基或鹵素取代的苯基，未取代或C1-C4烷基或鹵素取代的芐基，或與它們相連的氮原子一起組成1-哌啶基，1-吡咯烷基，4-嗎啉基，4-未取代或C1-C4烷基取代的-1-哌嗪基，N-未取代或C1-C4烷基或鹵素取代的苯基-1-哌嗪基，或六亞甲基亞胺基環(huán)。
進一步地，本發(fā)明優(yōu)選具有如下結(jié)構(gòu)的呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃類化合物及其藥學上可接受的鹽，
其中X可以選自H2或者O；
R可以任意選擇地由1個、2個或3個獨立地選自H，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，鹵素，-OH，-NO2。
R1、R2可以獨立的選自H，C1-C4烷基，或與它們相連的氮原子一起組成1-哌啶基，1-吡咯烷基，4-嗎啉基，4-甲基-1-哌嗪基，4-苯基-1-哌嗪基，4-(4-氯苯基)-1-哌嗪基，4-(4-甲基苯基)-1-哌嗪基，4-(4-甲氧基苯基)-1-哌嗪基，4-芐基-1-哌嗪基，芐胺基，4-氯苯胺基，4-甲基苯胺基，4-甲氧基苯胺基，或六亞甲基亞胺基環(huán)。
本發(fā)明所述的化合物可以與藥學上可接受的載體組合制備臨床上可接受的藥物組合物。
本發(fā)明的這類化合物的合成方法簡單，適應工業(yè)化生產(chǎn)，相對于現(xiàn)有的藥物活性更強，生物活性測試顯示此類化合物具有抗ER陽性乳腺癌細胞株T-47D活性，是一種抗雌激素受體陽性乳腺癌藥物。
具體實施方式
下列實施例闡述而非限制本發(fā)明的方法和組合物。不同條件和參數(shù)的其他適當修改和調(diào)整也是正常的，對本領域技術(shù)人員來說，顯然也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
如下反應式概括了制備本發(fā)明化合物的合成步驟。
通過下述實施例將有助于理解本發(fā)明，但并不影響本發(fā)明的內(nèi)容。
實施例1：2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-{4-[(2-二乙氨基)乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
將2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃1mmol溶于30ml丙酮中，依次加入2-氯-N,N-二乙胺鹽酸鹽1.1mmol、碘化鉀0.1mmol、無水碳酸鉀10mmol，于40-45℃的油浴加熱回流12h，TLC檢測至反應完全，冷卻至室溫，抽濾，濾液旋蒸除去溶劑，柱層析分離(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)，得黃色固體，收率71.8％，m.p:185.1-187.0℃；EI-MS:572.1([M+H]+)；IR:2966.4,2924.5,2803.8,1635.5,1596.5,1549.6,1448.5,1371.5,1254.4,1165.7；1H-NMR(600MHz,DMSO)δ8.05(1H,d,J＝8.8Hz),7.95(2H,d,J＝7.6Hz),7.88-7.82(3H,m),7.66(3H,dd,J＝17.0,7.6Hz),7.50(2H,t,J＝7.5Hz),7.36(3H,dt,J＝26.2,6.9Hz,),6.97(2H,d,J＝8.4Hz,),4.09(2H,s),2.78(2H,s),2.71(3H,s),2.56(4H,s),0.97(6H,t,J＝6.7Hz)。
實施例2：2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(1-四氫吡咯基)乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲酰基)呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、1-(2-氯乙基)四氫吡咯鹽酸鹽反應，得白色固體，收率66.3％，m.p:185.8-189.4℃；EI-MS:570.5([M+H]+)；IR:3070.9,2925.2,1633.4,1597.6,1550.1,1448.0,1379.7,1250.3,1165.6；1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ8.03–7.96(2H,m),7.93(2H,d,J＝8.8Hz),7.81(1H,d,J＝8.8Hz,),7.61-7.67(3H,m),7.56(1H,t),7.29-7.40(5H,m),6.87(2H,d,J＝8.8Hz),4.63-4.57(2H,m),3.93-3.83(2H,m),3.48-3.52(2H,m),2.91-3.00(2H,m),2.78(3H,s),2.34-2.19(2H,m),2.11-2.14(2H,m)。
實施例3：2-苯甲酰基-3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、1-(2-氯乙基)哌啶鹽酸鹽反應，得白色固體，收率72.3％，m.p:208.2-210.2℃；EI-MS:584.2([M+H]+)；IR:3071.8,2920.5,2844.2,1650.8,1632.6,1597.6,1549.9,1446.3,1347.0,1250.0,1188.8；1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ8.02-7.96(2H,m),7.96-7.88(2H,m),7.80(1H,d,J＝8.8Hz),7.69-7.50(4H,m),7.41-7.27(5H,m),6.85(2H,d,J＝8.9Hz),4.38(2H,s),3.08(6H,s),2.85(3H,s),1.86(4H,s),1.57(2H,s)。
實施例4：2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽反應，得黃色固體，收率61.7％，m.p:183.0-185.8℃；EI-MS:586.3([M+H]+),608.4([M+Na]+),624.3([M+K]+)；IR:2922.7,2853.0,1637.2,1597.9,1551.1,1448.6,1347.7,1251.9,1165.0；1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.06(1H,d,J＝8.8Hz),7.95(2H,d,J＝7.2Hz),7.88-7.82(3H,m),7.66(3H,dd,J＝11.3,7.0Hz),7.50(2H,t,J＝7.8Hz),7.40-7.31(3H,m),6.99(2H,d,J＝8.9Hz),4.17(2H,t,J＝5.7Hz),3.62-3.54(4H,m),2.74-2.67(5H,m),2.49-2.44(4H,m)。
實施例5：2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-{4-[(2-二乙氨基)-2-氧代乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲酰基)呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、N,N-二乙基-2-氯乙酰胺反應，得白色固體，收率74.2％，m.p:183.7-184.7℃；EI-MS:586.4([M+H]+),608.3([M+Na]+),624.4([M+K]+)；IR:2930.1,1448,1378,1596.2,1576.2,1644,1252.7,1166.9；1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ7.99(2H,d,J＝7.8Hz),7.93(2H,d,J＝8.7Hz),7.80(1H,d,J＝9.3Hz),7.5(4H,dt,J＝14.2,8.7Hz,),7.43–7.28(5H,m),6.91(2H,d,J＝7.6Hz),4.72(2H,s),3.42-3.47(4H,m),1.13-1.24(6H,m)。
實施例6：2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(1-四氫吡咯基)-2-氧代乙氧基]苯甲酰基}呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、1-氯乙酰四氫吡咯反應，得淺黃色固體，收率60.6％，m.p:217.2-219.6℃；EI-MS:584.4([M+H]+),606.4([M+Na]+),622.1([M+K]+)；IR:2923.0,2853.4,1639.6,1599.2,1550.1,1490.7,1448.3,1347.6,1252.5,1165.3；1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ8.02-7.88(4H,m),7.81(1H,d,J＝8.8Hz),7.69-7.51(4H,m),7.41-7.28(5H,m),6.91(2H,d,J＝8.8Hz),4.67(2H,s),3.52(4H,q),2.78(3H,s),1.98(2H,q),1.89(2H,q)。
實施例7：2-苯甲酰基-3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(1-哌啶基)-2-氧代乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、1-氯乙酰哌啶反應，得淺黃色固體，收率73.2％，m.p:190.1-192.4℃；EI-MS:598.2([M+H]+),620.2([M+Na]+),636.2([M+K]+)；IR:2923.0,2852.2,1662.6,1639.9,1598.9,1444.1,1383.4,1251.2,1117.6；1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ7.96(4H,dd,J＝19.3,8.2Hz),7.81(1H,d,J＝8.9Hz),7.70-7.49(4H,m),7.41-7.27(5H,m),6.92(2H,d,J＝8.8Hz),4.73(2H,s),3.57(2H,s),3.49(2H,s),2.78(3H,s),1.49-1.75(6H,m)。
實施例8：2-苯甲?；?3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-苯甲酰基-3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、4-氯乙酰嗎啉反應，得白色固體，收率78.4％，m.p:210.7-211.8℃；EI-MS:600.2([M+H]+),622.2([M+Na]+),638.2([M+K]+)；IR:3058.7,2920.8,2853.5,1669.2,1637.4,1598.8,1443.6,1382.8,1251.6,1115.2；1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ7.96(4H,dd,J＝16.5,8.0Hz,),7.81(1H,d,J＝8.8Hz),7.69-7.51(4H,m),7.29-7.39(5H,m),6.91(2H,d,J＝8.9Hz),4.75(2H,s),3.62(8H,m),2.78(3H,s)。
實施例9：2-(4-甲基苯甲?；?-3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-(4-甲基苯甲?；?-3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲酰基)呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、1-(2-氯乙基)哌啶鹽酸鹽反應，得黃色固體，收率67.7％，m.p:182.8-186.6℃；EI-MS:598.1([M+H]+)；IR:2931.8,2852.3,1445.6,1380.2,1599.0,1639.8,1251.1,1118.1；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ7.92(4H,m),7.79(1H,d,J＝8.8Hz,),7.67-7.62(3H,m),7.38(1H,t,J＝7.4Hz),7.31(2H,t,J＝7.5Hz,),7.16(2H,d,J＝7.9Hz,),6.85(2H,d,J＝8.9Hz,),4.14(2H,t,J＝5.9Hz),2.77(4H,m),2.51(4H,s),2.45(3H,s),1.60-1.64(7H,m)。
實施例10：2-(4-甲基苯甲?；?-3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]苯甲酰基}呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-(4-甲基苯甲酰基)-3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽反應，得黃色固體，收率65.8％，m.p:196.3-199.1℃；EI-MS:600.1([M+H]+),622.2([M+Na]+)；IR:2954.8,2853.9,1644.5,1599.6,1573.7,1448.5,1373.0,1253.0；1H-NMR(600MHz,DMSO)δ7.85(2H,d,J＝8.6Hz),7.80(1H,d,J＝7.5Hz),7.75-7.61(5H,m),7.60-7.55(1H,m),7.43(2H,dd,J＝14.4,7.1Hz),7.38(2H,d,J＝7.8Hz),7.00(2H,d,J＝8.7Hz),4.17(2H,s),3.58(5H,s),2.70(2H,s),2.48-2.32(9H,m)。
實施例11：2-(4-甲基苯甲酰基)-3-甲基-8-苯基-7-{4-[(2-二乙氨基)-2-氧代乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-(4-甲基苯甲?；?-3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、N,N-二乙基-2-氯乙酰胺反應，得黃色固體，收率72.6％，m.p:200.4-202.4℃；EI-MS:600.1([M+H]+),622.0([M+Na]+)；IR:2924.8,1644.9,1598.5,1436.5,1382.0,1240.8,1117.6；1H-NMR(600MHz,DMSO)δ7.87(2H d,J＝8.7Hz),7.80(1H,d,J＝7.3Hz),7.74-7.67(4H,m),7.64(1H,d,J＝8.9Hz),7.58(1H,t,J＝7.6Hz,),7.44(2H,dd,J＝14.3,7.0Hz),7.38(2H,d,J＝7.5Hz),6.97(2H,d,J＝8.6Hz),2.42(3H,s),2.35-2.38(4H,m),1.16(3H,t,J＝6.9Hz),1.04(3H,t,J＝6.8Hz)。
實施例12：2-(4-甲基苯甲酰基)-3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(1-四氫吡咯基)-2-氧代乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-(4-甲基苯甲?；?-3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、1-氯乙酰四氫吡咯反應，得黃色固體，收率67.3％，m.p:191.4-197.7℃；EI-MS:598.2([M+H]+),620.1([M+Na]+),636.3([M+K]+)；IR:2922.2,2871.7,1664.6,1640.7,1599.7,1548.9,1451.7,1345.9,1313.1,1250.6,1168.1；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99-7.90(4H,m),7.78(1H,d,J＝8.7Hz),7.63(3H,d,J＝8.3Hz),7.40-7.29(3H,m),7.15(2H,d,J＝7.7Hz),6.91(d,J＝8.6Hz,2H),4.66(s,2H),3.54-3.48(4H,m),2.75(3H,s),2.44(3H,s),2.01-1.93(2H,m),1.90-1.81(2H,m)。
實施例13：2-(4-甲基苯甲酰基)-3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(1-哌啶基)-2-氧代乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-(4-甲基苯甲?；?-3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲?；?呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、1-氯乙酰哌啶反應，得淺黃色固體，收率73.5％，m.p:176.4-180.1℃；EI-MS:612.1([M+H]+),634.1([M+Na]+),640.2([M+K]+)；IR:2923.9,2853.0,1639.8,1600.1,1546.7,1442.8,1383.1,1181.5,1117.2；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.01-7.96(1H,m),7.95-7.90(3H,m),7.80(1H,d,J＝8.8Hz),7.69-7.61(3H,m),7.41-7.28(3H,m),7.16(2H,d,J＝8.0Hz),6.92(2H,d,J＝7.1Hz),4.73(2H,s),3.63-3.53(2H,m),3.50-3.43(2H,m),2.77(3H,s),2.45(3H,s),1.73-1.62(4H,m),1.28(2H,m)。
實施例14：2-(4-甲基苯甲?；?-3-甲基-8-苯基-7-{4-[2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙氧基]苯甲?；鶀呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃
按照實施例1方法，由2-(4-甲基苯甲?；?-3-甲基-8-苯基-7-(4-羥基苯甲酰基)呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃、4-氯乙酰嗎啉反應，得黃色固體，收率68.3％，m.p:186.7-189.2℃；EI-MS:614.1([M+H]+),636.2([M+Na]+)；IR:2921.4,2853.6,1643.8,1599.1,1551.5,1438.9,1346.6,1251.3,1167.7；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26-6.81(16H,m),4.72(2H,s),3.66-3.55(8H,m),2.72(3H,s),2.43(3H,s)。
實施例15：對ER陽性乳腺癌細胞株T-47D的抑制作用
細胞株：人乳腺癌細胞T-47D，ER陽性。
儀器：高壓滅菌鍋SN510C(日本YAMATO)；CO2培養(yǎng)箱(日本SANYO)、倒置顯微鏡(CKX31，日本OLYMPUS)、酶標光度計(MULTISKAN MC，England)。
藥品配置方法：用DMEM/L-15將受試藥物(原液濃度為4mM)分裝成濃度為0.4mM的儲存液。再配制成終濃度為8uM的加藥培養(yǎng)基。
陽性對照：他莫昔芬也用標準溶液配成如上濃度。
實驗方法：待細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期后，貼壁細胞用0.25％的胰酶消化液消化約2min，加入10％胎牛血清DMEM/L-15培養(yǎng)基終止消化，吹打成細胞懸液，移入15ml離心管，1000轉(zhuǎn)，離心5min棄上清，加入10％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基，吹打混勻，制備成單細胞懸液，調(diào)整細胞懸液濃度為5.0×104個/ml，將上述細胞懸液鋪于96孔板中，每孔200ul，每組設3個孔；另留3個孔，各加入10％胎牛血清DMEM/L-15培養(yǎng)基200ul作為空白對照孔。繼續(xù)培養(yǎng)24h后，吸棄各孔培養(yǎng)基，再加入配置好的不同濃度的含待測藥物的培養(yǎng)基180ul,使各組待測藥物終濃度分別為0.03、0.1、0.3、1、3、10、30、100uM；對照組加入普通培養(yǎng)基180ul；繼續(xù)培養(yǎng)48h后取出培養(yǎng)板，每孔加入5mg/ml的MTT 20ul，避光孵育4h，吸棄培養(yǎng)基，每孔加入DMSO 150ul，震蕩搖勻，在酶標儀上以570nm的波長測定吸光度值。重復3次。計算生長抑制率。細胞生長抑制率＝[1-(實驗組吸光度平均值﹣空白對照吸光度平均值)/(對照組吸光度平均值﹣空白對照吸光度平均值)]×100％。應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，計算IC50值。
樣品抑制率列表如下：
本發(fā)明的化合物進行該實驗時，結(jié)果表明有抑制人乳腺癌細胞T-47D的作用。
在下述實施例中，“活性成分”是指式Ⅰ化合物，或其鹽或其溶劑化物。
實施例16：片劑配方
生產(chǎn)工藝：(1).將項目1，2和3在合適的混合器中混合15min。(2).將步驟1的粉末混合物用20％Povidone K30溶液制粒。(3).在50℃干燥步驟2的顆粒。(4).將步驟3的顆粒通過合適的整粒裝置。(5).將項目5加入磨碎后的步驟4的顆粒中，并混合3min。(6).將步驟5的顆粒在合適的壓片機上壓片。
實施例17：膠囊配方
生產(chǎn)工藝：(1).將項目1，2和3在合適的混合器中混合15min。(2).加入項目4和5并混合3min。(3).填充到膠囊內(nèi)。
實施例18：注射液/乳劑
生產(chǎn)工藝：(1).將項目1溶于項目2中。(2).將項目3、4和5加入項目6并混合至分散，然后均化。(3).將步驟1的溶液加入步驟2的混合物中，并均化至分散液透明。(4).無菌濾過0.2μm濾紙并填充到小瓶內(nèi)。
實施例19：注射液/乳劑
生產(chǎn)工藝：(1).將項目1溶于項目2中。(2).將項目3、4和5加入項目6并混合至分散，然后均化。(3).將步驟1的溶液加入步驟2的混合物中，并均化至分散液透明。(4).無菌濾過0.2μm濾紙并填充到小瓶內(nèi)。
實施例20：含有脂質(zhì)體的配方配方
A.滴注配方的制備
在一玻璃管中混合合成的二棕櫚?；蚜字?45mg)，二肉豆蔻?；蚜字?7mg)，二棕櫚酰基磷脂酰甘油(1mg)和活性化合物(5mg)，將所有組份溶解在氯仿中，用N2蒸發(fā)掉大部分溶劑，然后減壓，由此，在玻璃管表面形成脂質(zhì)薄膜.在該脂質(zhì)中加入水溶液(0.9％NaCl)，在高于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)相溫度下形成脂質(zhì)體，所得懸液含有大小范圍為極小囊泡至2μm的脂質(zhì)體。
B.吸入用配方的制備
按實施例A制備脂質(zhì)體，其中的水溶液含有10％乳糖，乳糖與脂質(zhì)之比為7:3。將該脂質(zhì)體懸液用干冰冷凍，并且進行冷凍干燥，將干燥產(chǎn)物微粉化，所得顆粒的質(zhì)均空氣動力學直徑(MMAD)約為2μm。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護范圍。