1.一種猴嗜T淋巴細(xì)胞病毒I型的RT-LAMP檢測引物組,包括一對外引物、一對內(nèi)引物和一對環(huán)引物,其核苷酸序列分別如下所示:
外引物:
STLV-F3:5’-GTGCCAATCATGGACCTG-3’(SEQ ID NO:1);
STLV-B3:5’-GAGGATGTGGTCTAGGTTAGA-3’(SEQ ID NO:2);
內(nèi)引物:
STLV-FIP:5’-AGTGAGGCGTGAAACTTCCTGCTATACAGGAGCCATCTCCA-3’(SEQ ID NO:3);
STLV-BIP:5’-ATGCGGTTTTCCCTTCTCCCTTCGGTATTAAGGAACCAGATG-3’(SEQ ID NO:4);
環(huán)引物:
STLV-LF:5’-TTGCTGAAATTTCCAGTAAGGG-3’(SEQ ID NO:5)
STLV-LB:5’-CGACGCTCCAGGATATGAC-3’(SEQ ID NO:6)。
2.一種猴嗜T淋巴細(xì)胞病毒I型的RT-LAMP檢測試劑盒,其特征在于:該檢測試劑盒包括權(quán)利要求1所述的檢測引物組。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的猴嗜T淋巴細(xì)胞病毒I型的RT-LAMP檢測試劑盒,其特征在于:該檢測試劑盒還包含DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、RT-LAMP反應(yīng)液、陽性對照和陰性對照。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的猴嗜T淋巴細(xì)胞病毒I型的RT-LAMP檢測試劑盒,其特征在于:外引物、環(huán)引物、內(nèi)引物的摩爾比為1:4:8。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的猴嗜T淋巴細(xì)胞病毒I型的RT-LAMP檢測試劑盒,其特征在于:所述DNA聚合酶為Bst DNA聚合酶,所述逆轉(zhuǎn)錄酶為AMV逆轉(zhuǎn)錄酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的猴嗜T淋巴細(xì)胞病毒I型的RT-LAMP檢測試劑盒,其特征在于:所述RT-LAMP反應(yīng)液含有10mM dNTP、10×ThermoPol反應(yīng)緩沖液、150mM MgSO4水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的猴嗜T淋巴細(xì)胞病毒I型的RT-LAMP檢測試劑盒,其特征在于:所述陽性對照為含有目的基因片段的質(zhì)粒DNA,陰性對照為DEPC水。
8.一種猴嗜T淋巴細(xì)胞病毒I型的RT-LAMP檢測方法,包括如下步驟:
1)提取待檢樣品RNA;
2)反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng):配制25μl反應(yīng)體系,含有STLV-F3 0.2μM,STLV-B3 0.2μM,STLV-FIP 1.6μM,STLV-BIP 1.6μM,STLV-LF 0.8μM,STLV-LB 0.8μM,RT-LAMP反應(yīng)液12.5μl,DNA聚合酶8U,逆轉(zhuǎn)錄酶2.5U,待檢RNA 1~100ng,用DEPC水補(bǔ)齊到25μl;然后于63~65℃反應(yīng)45~60min;
3)結(jié)果分析:通過肉眼觀察反應(yīng)管中溶液是否變渾濁或通過瓊脂糖凝膠電泳分析是否出現(xiàn)梯狀條帶判定結(jié)果;如反應(yīng)管中溶液變渾濁或電泳出現(xiàn)梯狀條帶即為陽性,否則,為陰性;
上述檢測方法所用的檢測試劑盒為權(quán)利要求2~7任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的檢測試劑盒。