本發(fā)明涉及免疫促進(jìn)技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種生物多肽的提取方法。
背景技術(shù)：
當(dāng)今社會(huì)，科學(xué)技術(shù)發(fā)展飛速，所以人們的生活水平逐步提高，生活質(zhì)量也變得更好。但是與此同時(shí)，激烈的行業(yè)競爭，越來越快的生活節(jié)奏使得人類面對的生活和工作等方面的壓力也越來越大，而壓力與疾病是緊緊相連的。有研究顯示，人的壓力與免疫系統(tǒng)息息相關(guān)。當(dāng)人們長時(shí)間處于壓力狀態(tài)，免疫功能就會(huì)下降，人體對疾病的敏感程度增大，容易導(dǎo)致疾病的易感和易發(fā)。還有報(bào)道顯示，吸煙對人體有多方面的害處，其中一個(gè)就是會(huì)使得人體的免疫功能受損，使得人體免疫力下降。一個(gè)人的精神狀態(tài)可能與身體的抵抗力有關(guān)，還有一個(gè)與免疫效應(yīng)有關(guān)的環(huán)節(jié)。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，一定程度的心理壓力會(huì)使得免疫系統(tǒng)受到傷害和功能減弱，故適當(dāng)放松及對行為壓力的調(diào)控身心健康有所幫助。當(dāng)人體免疫功能紊亂，或者是免疫系統(tǒng)不完善時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致某些疾病的反復(fù)發(fā)作。當(dāng)人的身體處于免疫力低下狀態(tài)時(shí)，就會(huì)很容易受到感染或者患上癌癥；而當(dāng)人體處于免疫力超常時(shí)也會(huì)有不好的情況發(fā)生，如有過敏反應(yīng)的發(fā)生或想著容易引發(fā)自身免疫疾病。
隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，我們逐漸認(rèn)識(shí)到很多疾病的發(fā)生與發(fā)展和免疫系統(tǒng)功能的紊亂有著緊密的聯(lián)系。影響免疫系統(tǒng)功能的因素有很多：①先天因素，主要為遺傳因素和原發(fā)性免疫缺陷?。虎诤筇煲蛩?，相對較為復(fù)雜，包含疾病因素、心理因素、神經(jīng)內(nèi)分泌因素、營養(yǎng)因素、某些藥物治療方法和年齡因素等。
免疫調(diào)節(jié)劑是一類能夠增強(qiáng)、促進(jìn)或調(diào)節(jié)免疫功能的生物制品，它對治某些繼發(fā)性免疫缺陷癥、某些惡性腫瘤免疫功能低下和等疾病有一定的作用，但對免疫功能正常的人及動(dòng)物卻不起什么作用。它的主要機(jī)制首先是通過非特異性的方式增強(qiáng)T、B淋巴細(xì)胞的反應(yīng)性，或是提高了巨噬細(xì)胞的活性，也可以誘導(dǎo)干擾素或激活補(bǔ)體的產(chǎn)生。
脾臟生物多肽就是免疫調(diào)節(jié)劑中的一種，脾臟多肽存在于脾臟中。脾臟是人體免疫器官中最大的一個(gè)，它占全身所以淋巴細(xì)胞總量的25％，富含巨噬細(xì)胞和各種淋巴細(xì)胞，是人體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心。脾臟是T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞定居的部位，也是各種免疫反應(yīng)發(fā)生的場所。脾臟多肽是一種可透析的小分子多肽和核苷酸的復(fù)合物，由具有免疫活性的T淋巴細(xì)胞釋放出的，存在于人或動(dòng)物白細(xì)胞中，能夠調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。多年來，脾臟多肽在治療各種免疫疾病，腫瘤等都有一定的療效。脾臟多肽可以作為一種良好的醫(yī)藥化工原料和功能性食品，據(jù)報(bào)道，脾臟多肽具有天然的生物活性，能夠抑制腫瘤的生長，提高機(jī)體的免疫能力，還具有抗氧化，促進(jìn)凝血等功能。
惡性腫瘤患者在接受放化療的同時(shí),機(jī)體的健康細(xì)胞便無可避免的遭受各種暫時(shí)性和長期性損害，如何提高惡性腫瘤患者的生存質(zhì)量已成為近年十分重要的發(fā)展方向。
環(huán)磷酰胺是一種經(jīng)典的抗癌藥，在醫(yī)學(xué)上常用于癌癥的治療，同時(shí)它也是一種療效很好的免疫抑制劑，可抑制各類動(dòng)物的體液免疫與細(xì)胞免疫應(yīng)答。利用環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)小鼠致免疫抑制模型，其機(jī)體免疫功能低下可從諸多方面看出。本實(shí)驗(yàn)選擇測定抗體生成量、TNF-α和IL-2的水平和臟器系數(shù)這四個(gè)指標(biāo)以觀察脾臟多肽對小鼠機(jī)體免疫功能的影響。
目前，脾臟多肽可以用酶解法，凍融法等方法來制備。酶解法是采用DNA酶，RNA酶和胰蛋白酶對動(dòng)物脾臟等器官組織進(jìn)行消化處理，將水解產(chǎn)物透析之后得到的溶液，該方法對生產(chǎn)條件的要求較為嚴(yán)格，需要確定最佳的生產(chǎn)條件，故目前在生產(chǎn)中應(yīng)用較少。凍融法則在生產(chǎn)過程中需要反復(fù)冷凍，這是一個(gè)相對耗時(shí)和耗能的環(huán)節(jié)，且需要確定最佳的凍融次數(shù)，所以生產(chǎn)成本相對較高。
因此，尋找一種新的提取制備工藝并檢驗(yàn)其藥物療效顯得非常必要，且由于近幾年養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達(dá)，生豬養(yǎng)殖數(shù)量較多，但是豬脾臟卻通常被作為廢棄物來處理，如能將其用于生產(chǎn)脾臟多肽，那么就能夠變廢為寶，能夠?yàn)槠⑴K多肽的生產(chǎn)開辟廣闊的藥用資源，具有很好的市場前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題，就是提出一種生物多肽的提取方法。本方法分析了近幾年海洋生物、大腦、肝臟、胸腺、脾臟多肽的制備工藝技術(shù)的科學(xué)成果，對以往的工藝進(jìn)行改進(jìn)，改進(jìn)后的提取方法，制得的生物多肽產(chǎn)物活性強(qiáng)，工藝產(chǎn)量相對前者有所提高，成本低，大大提高了其經(jīng)濟(jì)效益。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
一種生物多肽的提取方法，包括如下步驟：
(1)將新鮮海洋生物或健康動(dòng)物的大腦、肝臟、脾臟或胸腺剪去脂肪和外包膜后，用絞肉機(jī)絞碎、稱重，以料液比為1:10，在冰浴中用高速勻質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)處理，勻漿用8層紗布進(jìn)行粗過濾，然后再用連續(xù)流離心機(jī)離心處理，收集上清液，使獲得多肽的粒徑在0.5μm-50μm之間；
(2)將獲得的上清液用微波提取機(jī)提取處理，然后迅速置于4℃冰水中，使獲得多肽的粒徑在0.05μm-10μm之間；
(3)提取液在4℃冰水中進(jìn)行超聲處理，使獲得多肽的粒徑在0.01μm-5μm之間；
(4)超聲后的提取液用截留分子量為1000-12500doltons的側(cè)向超濾膜進(jìn)行超濾；
(5)將獲得的超濾液冷凍干燥后得到生物多肽干粉，低溫儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>
作為優(yōu)選地，所述步驟(1)中的新鮮海洋生物為蠔或蝦或蟹或海參，健康動(dòng)物為豬或馬或?；蜓蚧蝙Z。
作為優(yōu)選地，所述步驟(1)中勻漿處理為使用15000-25000rpm的高速勻質(zhì)機(jī)處理15-30分鐘。
作為優(yōu)選地，所述步驟(1)中離心處理為使用12000×g連續(xù)流離心機(jī)，4℃條件下離心20分鐘。
作為優(yōu)選地，所述步驟(2)中提取處理為使用500-2500W的微波提取機(jī)處理15-45分鐘。
作為優(yōu)選地，所述步驟(3)中超聲處理為使用聲波強(qiáng)度在0.5-15W/cm2的超聲波處理30-60分鐘。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的有益效果為：本發(fā)明的方法能提高生物多肽產(chǎn)量230％-450％，從而提高了動(dòng)物內(nèi)臟的提取生物多肽的得率，且制得產(chǎn)物活性強(qiáng)，成本低，大大提高了其經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施方式
為讓本領(lǐng)域的技術(shù)人員更加清晰直觀的了解本發(fā)明，對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
一種生物多肽的提取方法，包括如下步驟：
(1)將新鮮健康動(dòng)物脾臟剪去脂肪、外包膜后，用絞肉機(jī)絞碎、稱重，料液比為1:10，在冰浴中用15000-25000rpm的高速勻質(zhì)機(jī)進(jìn)行勻漿15-30分鐘，用8層紗布進(jìn)行粗過濾，用連續(xù)流離心機(jī)在12000×g，4℃條件下離心20分鐘，收集上清液，使獲得多肽的粒徑大約為0.5μm-50μm；
(2)將得到的上清液用500-2500W微波提取機(jī)處理15-45分鐘，然后迅速置于4℃冰水中，使獲得多肽的粒徑大約為0.05μm-10μm；
(3)將得到的提取液置于4℃冰水中用聲波強(qiáng)度在0.5-15W/cm2的超聲波進(jìn)行超聲處理30-60分鐘，使獲得多肽的粒徑大約為0.01μm-5μm；
(4)將經(jīng)超聲處理的提取液用截留分子量為1000-12500doltons的側(cè)向超濾膜進(jìn)行超濾；
(5)將超濾液冷凍干燥后得到生物多肽干粉，低溫儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>
將本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比，生物多肽的產(chǎn)量提高230％-450％，而且制備過程用時(shí)短，效率高，成本低。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。